Zoptymalizowana hodowla ex-ovo zarodków piskląt do zaawansowanych etapów rozwoju

Ogólnym celem tej metody jest przedstawienie zoptymalizowanej techniki hodowli zarodków kurcząt metodą X ovo, która umożliwia obserwację rozwoju embrionalnego od etapu 19 hamburgera i Hamiltona do późnych etapów rozwoju aż do stadium 40. Metoda ta jest przydatna dla studentów w laboratorium biologii rozwojowej, a także dla badaczy, którzy chcą użyć zarodka kurczaka jako organizmu modelowego do opracowania tej metody hodowli X ovo. Najpierw przygotowuje się jajka.

Jaja były inkubowane w temperaturze 37 stopni Celsjusza przy wilgotności 40% przez około trzy i pół dnia, co w przybliżeniu koreluje z hamburgerem i etapem 19. Jaja przygotowuje się poprzez spryskanie ich 70% etanolem, tak aby po pęknięciu skorupki zarodek nie został zanieczyszczony. Po spryskaniu jaj pozostawia się je na chwilę do wyschnięcia.

Podczas przygotowywania komory wilgotnościowej komora wilgotności jest wykonana z pojemnika Ziploc. Pierwszym krokiem w budowie komory wilgotnościowej jest dodanie od jednego do dwóch centymetrów warstwy chłonnej wyściółki. W takim przypadku chusteczka Kim, chociaż można również użyć warstw bawełnianej wyściółki.

Ta warstwa chłonnej wyściółki pasuje do podstawy pokazanego tutaj pojemnika Ziploc. Po umieszczeniu warstwy chłonnej na dnie pojemnika wlewa się około 150 mililitrów wody destylowanej. Większość tej wody powinna zostać wchłonięta przez wyściółkę.

Komora wilgotnościowa jest teraz kompletna i można ją odłożyć na bok. Mała, sterylna łódka służy do kołysania zarodka po wyjęciu go ze skorupy. Sposób, w jaki łódź mierzy 8,8 centymetra do kwadratu ze względu na orientację jaj w inkubatorze, zarodek znajduje się na górnej powierzchni jaja, dlatego skorupka powinna być pęknięta po przeciwnej stronie.

Skorupka jest następnie delikatnie pękana, a jajko umieszcza się bardzo blisko łodzi drogowej. Jednym płynnym ruchem jajo jest rozsuwane, delikatnie uwalniając zarodek do łodzi. Zarodek jest następnie sprawdzany, aby upewnić się, że jarzmo jest nadal nienaruszone i że zarodek jest zdolny do życia, jak pokazano tutaj, z widocznym biciem serca i bez widocznych nieprawidłowości.

Następnie dodajemy antybiotyk do zarodka, aby pomóc w walce z infekcją. Penicylina streptomycyna w stężeniu 5 000 jednostek penicyliny i pięć miligramów streptomycyny na promil jest przeznaczona w celu zminimalizowania częstotliwości rozmrażania i rozmrażania. Zdarzenia. Z podwielokrotności pobiera się 40 mikrolitrów i dodaje do otaczającej albuminy za pomocą pipety.

Teraz zarodek jest gotowy do ostrożnego umieszczenia w komorze wilgotnościowej. Po umieszczeniu w komorze wilgotnościowej zarodek otrzymuje pokrywkę, aby zapobiec zanieczyszczeniu. Kwadratowa pokrywka szalki Petriego o wymiarach dziewięciu i pół centymetra kwadratowego jest umieszczona nad łodzią drogową.

Ważne jest, aby upewnić się, że na krawędzi łodzi nie ma wilgoci, aby między szalką Petriego a łodzią nie powstała uszczelka, która ograniczyłaby dopływ tlenu do zarodka. Następnie, aby uzupełnić komorę wilgotności, na pojemniku Ziploc nakłada się pokrywkę. Jednak tylko dwa rogi pokrywy są wciskane na miejsce, pozostawiając pozostałe rogi otwarte i umożliwiając przepływ powietrza do zarodka.

Gdy komora wilgotnościowa jest gotowa, umieszcza się ją w inkubatorze o temperaturze 37 stopni, aby zarodek mógł kontynuować rozwój po czterech i pół dniach. Komorę wilgotnościową można wyjąć z inkubatora, a zarodek można obserwować w około 34 stadium. W tym momencie uczniowie mogą łatwo obserwować zarodek, w tym naczynia krwionośne, duże oko i zawiązki kończyn.

Zarodek można dalej obserwować pod mikroskopem preparacyjnym, a także przeprowadzać bardziej zaawansowane badania, takie jak manipulacje embrionalne. Po zaobserwowaniu zarodka na tym etapie, można go ponownie umieścić w inkubatorze pod kątem 37 stopni i będzie się rozwijał co najmniej do 40 etapu, czyli 14 dni inkubacji. Podsumowując, metoda ta pokazuje optymalizację hodowli zarodków piskląt poza skorupką jaja.

Daje uczniom możliwość obserwowania rozwoju zarodków piskląt w ruchliwym środowisku laboratoryjnym, a ponadto zapewnia naukowcom dostęp do zarodków, jeśli dokonują manipulacji.