Sondy GFP TIRFM i pH do oceny dynamiki pęcherzyków neuroprzekaźników w komórkach nerwiaka zarodkowego SH-SY5Y: obrazowanie komórek i analiza danych

Ogólnym celem tej procedury jest zbadanie dynamiki pęcherzyków neuroprzekaźników w komórkach nerwiaka zarodkowego przy użyciu sond czułych na pH i mikroskopii fluorescencyjnej z całkowitym wewnętrznym odbiciem lub ziemi darniowej. Osiąga się to poprzez najpierw posiew komórek na szklanych szkiełkach nakrywkowych i transektowanie ich za pomocą genetycznie kodowanych, wrażliwych na pH sond fluorescencyjnych fuzji pęcherzyków i recyklingu, które są selektywnie ukierunkowane na pęcherzyki synaptyczne. Oczekuje się, że ekspresja białka nastąpi w ciągu 24 do 48 godzin.

Drugim krokiem jest zarejestrowanie dynamiki pęcherzyków za pomocą całkowitej mikroskopii wewnętrznego odbicia. Ten krok jest szczególnie ważny dla powodzenia eksperymentu i zawiera opis krok po kroku, jak uzyskać konfigurację murawy. Następny. Po osiągnięciu prawidłowej konfiguracji murawy, sekwencyjne obrazy mogą być automatycznie rejestrowane przez oprogramowanie w warunkach podstawowych lub stymulowanych.