Test wypływu na podstawie proteoliposomów w celu określenia właściwości pojedynczych cząsteczek kanałów i transporterów Cl

Ogólnym celem tej procedury jest ilościowe określenie aktywności transportowej odtworzonych kanałów chlorkowych lub transporterów. Osiąga się to poprzez najpierw odtworzenie czystego oczyszczonego transportera do liposomów o niskiej gęstości, tak aby każdy liposom zawierał zero lub jedną kopię aktywnego kompleksu po usunięciu zewnętrznych jonów chlorkowych, tak aby wystąpił gradient jonowy skierowany na zewnątrz, liposomy dodaje się do komory rejestracyjnej, w której stężenie chlorku jest monitorowane za pomocą elektrody wrażliwej na chlorki. Następnie chlorek flx z liposomów jest inicjowany przez dodanie Val Mycin, jonoforu potasu, który zwiększa potencjał błonowy.

Gdy sygnał osiągnie stan ustalony, eksperyment zostaje zakończony przez dodanie detergentu w celu rozpuszczenia liposomów. Ostatecznie, mierząc szybkość wypływu chlorków z liposomów protei, odtworzonych za pomocą oczyszczonego kanału lub transportera, możliwe jest ilościowe określenie jednostkowej szybkości transportu i stechiometrii aktywnego kompleksu białkowego. Główną przewagą tej techniki nad innymi istniejącymi podejściami, takimi jak pomiary strumienia na podstawie fluorescencji, jest to, że dzięki tej technice możliwe jest ilościowe określenie kluczowych parametrów odtworzonego transportera, takich jak jednostkowy współczynnik obrotu i geometria kompleksu.