Name: Prosta i niedroga metoda określania wrażliwości na zimno i adaptacji u myszy (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-17T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 35 s
Description: Poznaj metodę Cold Plantar Assay do pomiaru wrażliwości na zimno i adaptacji u myszy. Protokół wykorzystuje suchy lód do oceny reakcji bólowej w neurobiologii.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy chcieliby podziękować całemu Laboratorium Gereau za redakcję manuskryptu. Prace te są wspierane przez fundusze NINDS 1F31NS078852 dla DSB oraz fundusz NINDS NS42595 dla RWG.

Wszystkie protokoły dotyczące myszy były zgodne z wytycznymi National Institutes of Health i zostały zatwierdzone przez Komitet Badań nad Zwierzętami Washington University School of Medicine (St. Louis, MO).
1. Przygotowanie płytki testowej i obudów
<ol>
	<li>Oczyść szklaną powierzchnię.</li>
	<li>Przymocuj sondę termopary z żarnikiem typu T do powierzchni pośrodku szklanej płytki za pomocą taśmy laboratoryjnej.</li>
	<li>Umieść pomieszczenia dla zwierząt na szklanej płycie w jednej linii wzdłuż środka płytki.</li>
	<li>Przełóż sondę termopary przez środkową obudowę dla zwierząt i podłącz do rejestratora danych. Włącz rejestrator danych podczas dezaktywacji funkcji automatycznego wyłączania i podłącz rejestrator danych do komputera za pomocą dostarczonego.
	<ol>
		<li>Jeśli rejestrujesz temperaturę płyty podczas eksperymentu, otwórz oprogramowanie rejestratora danych, aby rozpocząć rejestrowanie temperatury płyty.</li>
		<li>W razie potrzeby dostosuj oprogramowanie tak, aby rejestrowało temperaturę płyty raz na sekundę.</li>
		<li>Rozpocznij rejestrację temperatury za pomocą oprogramowania dołączonego do rejestratora danych termicznych.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Oddziel obudowę czarnymi wkładkami, aby zapobiec wizualnej interakcji między myszami.</li>
	<li>Lusterka należy umieścić pod szkłem w taki sposób, aby spód obudów był widoczny z wygodnej pozycji siedzącej.</li>
</ol>
2. Podgrzewanie/chłodzenie szklanej płyty
<ol>
	<li>Napełnij aluminiowe pudełka podgrzaną wodą, mokrym lodem lub suchym lodem i umieść je odpowiednio na szklanej płycie (saszetki z folii aluminiowej wypełnione suchym lodem mogą być również używane do chłodzenia szkła; Rysunek 1)Rozdział 2.
	<ol>
		<li>W przypadku badania w temperaturze 30 °C należy umieścić aluminiowe pudełka w odległości około 0,25 cala od pomieszczeń dla zwierząt (rysunek 2B)2.
		<ol>
			<li>Ustaw podgrzewany cyrkulator wody po obu stronach szklanej płyty. Ustaw cyrkulator na 45 - 60 °C i użyj go do napełnienia aluminiowych pojemników stałym strumieniem gorącej wody (Rysunek 1C)2.</li>
			<li>Ustawić pompy cyrkulacyjne w taki sposób, aby gorąca woda z aluminiowych skrzynek spływała bezpośrednio z powrotem do zbiornika pompy cyrkulacyjnej z każdej strony (Rysunek 1C)2.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>W przypadku badania w RT pozostaw pola puste (Rysunek 2)2.</li>
		<li>W przypadku badania w temperaturze 17 °C należy umieścić pudełka w odległości około 0,25 cala od pomieszczeń dla zwierząt po obu stronach i napełnić je mokrym lodem (rysunek 2)2.</li>
		<li>W celu przeprowadzenia badania w temperaturze 12 °C należy umieścić pudełka w odległości około 1,25 cala od obudów po obu stronach i napełnić suchym lodem (rysunek 2)2.</li>
		<li>W celu przeprowadzenia badania w temperaturze 5 °C należy umieścić pudełka w odległości około 0,25 cala od obudów po obu stronach i napełnić je suchym lodem (rysunek 2)2.
		<ol>
			<li>Podczas schładzania szkła suchym lodem należy upewnić się, że jest wystarczająca wentylacja, aby zapobiec gromadzeniu się CO2 w pomieszczeniu.</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Poczekaj, aż szkło osiągnie żądany zakres temperatur.</li>
	<li>Dodaj myszy do obudów na tabliczce. 
	UWAGA: W celu zmniejszenia zakłóceń hałasu można użyć generatora białego szumu.</li>
	<li>Poczekaj, aż myszy się zaaklimatyzują. 
	UWAGA: W naszym obiekcie zajmuje to około 2,5 godziny, ale może się to znacznie różnić w zależności od warunków przetrzymywania zwierząt i obchodzenia się z nimi.</li>
	<li>Utrzymuj szklankę w żądanym zakresie temperatur, upewniając się, że pudełka są wypełnione podgrzaną wodą, mokrym lodem lub suchym lodem. 
	UWAGA: W naszym urządzeniu pudełka muszą być napełniane lodem mniej więcej co 90 min. 
	UWAGA: W przypadku 17 °C pomocne jest opróżnienie większości wody z aluminiowych skrzynek przez otwory spustowe przed ponownym napełnieniem ich lodem. To lepiej ustabilizuje temperaturę i zapobiegnie przepełnieniu 
	UWAGA: Dokładna ilość suchego lodu będzie się zmieniać sezonowo, ale ogólnie rzecz biorąc, utrzymywanie pudełek wypełnionych więcej niż w 1/4 na całej długości pudełka utrzyma stałą temperaturę.</li>
</ol>
3. Testowanie myszy w stałych temperaturach
<ol>
	<li>Na zewnątrz pomieszczenia behawioralnego napełnij wiadro z lodem wypełnione suchym lodem mniej więcej do połowy.</li>
	<li>Za pomocą młotka lub młotka zmiażdż suchy lód na drobny proszek. 
	UWAGA: Przepełnienie wiadra utrudni pełne rozdrobnienie suchego lodu na proszek.</li>
	<li>Za pomocą prostej żyletki lub nożyczek odetnij górną część strzykawki o pojemności 3 ml.</li>
	<li>Za pomocą igły 21 G zrobić 3 otwory po przeciwnych stronach strzykawki (w sumie 6 otworów). 
	UWAGA: Otwory te zmniejszą ciśnienie wytwarzane przez sublimację podczas ściskania suchego lodu. Odcięta strzykawka może być ponownie użyta do wielu eksperymentów.</li>
	<li>Zabierz strzykawkę, suchy lód w proszku i ręczny stoper do pokoju behawioralnego.</li>
	<li>Napełnij komorę strzykawki do połowy suchym lodem w proszku. Przytrzymać odcięty koniec strzykawki przy płaskim przedmiocie i mocno ścisnąć proszek za pomocą tłoka. Ostrożnie; Plastikowy tłok może się wygiąć lub pęknąć pod wpływem nacisku. W takim przypadku należy wymienić tłok z nowej strzykawki.</li>
	<li>Wysunąć końcówkę sprasowanego granulatu suchego lodu poza krawędź strzykawki.</li>
	<li>Przetestuj myszy, które są w pełni w spoczynku.
	<ol>
		<li>W temperaturze 30 °C, 23 °C i 17 °C testuj myszy, które mają wszystkie 4 łapy na szkle i nie poruszają się, ale nie śpią w pełni19.</li>
		<li>W temperaturze 12 °C i 5 °C testuj myszy, które są na 2 łapach lub 4 łapach i nie poruszają się ani nie skaczą.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Używając lusterek do celowania, delikatnie, ale stanowczo dociśnij płaską kulkę równo z szklaną powierzchnią pod tylną łapą myszy (Rysunek 1A)2. Uruchom stoper czasowy.</li>
	<li>Zatrzymaj minutnik i wyjmij granulkę, gdy mysz odsunie się od schłodzonej szklanki. 
	UWAGA: Ruch wypłaty może być pionowy lub poziomy.
	<ol>
		<li>Jeśli mysz bardzo krótko poruszy łapą, a następnie zwróci ją na powierzchnię chłodzącą, kontynuuj odmierzanie czasu i stymulację, aż mysz wykona trwały ruch. 
		UWAGA: W większości przypadków nasze laboratorium stosuje maksymalny czas bodźca wynoszący 20 sekund dla myszy.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Powtarzaj tę procedurę testową, aż do uzyskania co najmniej 3 wartości na każdej łapie każdego zwierzęcia. Oddzielne próby testujące przeciwległe łapy na tej samej myszy przez co najmniej 7 minut i oddzielne kolejne próby na dowolnej pojedynczej łapie przez co najmniej 15 minut.</li>
	<li>W razie potrzeby użyj różnych grubości szkła, aby wygenerować różne szybkości chłodzenia (Rysunek 3)1. 
	UWAGA: Szybkość chłodzenia jest odwrotnie skorelowana z grubością szkła.</li>
</ol>
4. Testowanie myszy podczas adaptacji do zimna
UWAGA: To jest alternatywny protokół, który pozwala na testowanie podczas stygnięcia szklanej płytki, a nie gdy płyta się ustabilizowała, a myszy w pełni przystosowały się do zimnego środowiska.
<ol>
	<li>Postępuj zgodnie z instrukcjami wymienionymi w rozdziale 1, aby skonfigurować urządzenie.</li>
	<li>Postępuj zgodnie z instrukcjami podanymi w sekcji 3, aby wykonać pomiary podstawowe w RT (rysunek 7A)2.</li>
	<li>Wstępnie schłodzić aluminiowe pudełka suchym lodem.</li>
	<li>Po zmierzeniu podstawowych opóźnień odsysania umieść wstępnie schłodzone pudełka na płycie w odległości około 1.25 cala od obudów po obu stronach (Rysunek 7A, strzałka oznaczona "Dodano suchy lód") 2.</li>
	<li>Postępuj zgodnie z instrukcjami wymienionymi w sekcji 3, aby wykonać pomiary, gdy szklana płytka stygnie, wykonując pomiary tak często, jak to możliwe.</li>
</ol>

<ol><li>Brenner, D. S., Golden, J. P., Gereau, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Behavioral+Assay+for+Measuring+Cold+Sensation+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+ONE%22%5BJournal%5D)">A Novel Behavioral Assay for Measuring Cold Sensation in Mice.</a> Plos ONE. 7 (6), 8(2012).</li>
<li>Brenner, D. S., Vogt, S. K., Gereau, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+to+measure+cold+adaptation+in+freely+behaving+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">A technique to measure cold adaptation in freely behaving mice.</a> Journal of Neuroscience Methods. , (2014).</li>
<li>Choi, Y., Yoon, T. W., Na, H. S., Kim, S. H., Chung, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+signs+of+ongoing+pain+and+cold+allodynia+in+a+rat+model+of+neuropathic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Behavioral signs of ongoing pain and cold allodynia in a rat model of neuropathic pain.</a> Pain. 59 (3), 369-376 (1994).</li>
<li>Gauchan, P., Andoh, T., Kato, A., Kuraishi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+increased+expression+of+transient+receptor+potential+melastatin+8+in+oxaliplatin-induced+cold+allodynia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+letters%22%5BJournal%5D)">Involvement of increased expression of transient receptor potential melastatin 8 in oxaliplatin-induced cold allodynia in mice.</a> Neuroscience letters. 458 (2), 93-95 (2009).</li>
<li>Carlton, S. M., Lekan, H. A., Kim, S. H., Chung, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+manifestations+of+an+experimental+model+for+peripheral+neuropathy+produced+by+spinal+nerve+ligation+in+the+primate%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Behavioral manifestations of an experimental model for peripheral neuropathy produced by spinal nerve ligation in the primate.</a> Pain. 56 (2), 155-166 (1994).</li>
<li>Pizziketti, R. J., Pressman, N. S., Geller, E. B., Cowan, A., Adler, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+cold+water+tail-flick%3A+A+novel+analgesic+test+that+distinguishes+opioid+agonists+from+mixed+agonist-antagonists%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Rat cold water tail-flick: A novel analgesic test that distinguishes opioid agonists from mixed agonist-antagonists.</a> European Journal of Pharmacology. 119 (1-2), 23-29 (1985).</li>
<li>Pinto-Ribeiro, F., Almeida, A., Pego, J. M., Cerqueira, J., Sousa, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+unpredictable+stress+inhibits+nociception+in+male+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+letters%22%5BJournal%5D)">Chronic unpredictable stress inhibits nociception in male rats.</a> Neuroscience letters. 359 (1-2), 73-76 (2004).</li>
<li>Karashima, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRPA1+acts+as+a+cold+sensor+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">TRPA1 acts as a cold sensor in vitro and in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (4), 1273-1278 (2009).</li>
<li>Knowlton, W. M., Bifolck-Fisher, A., Bautista, D. M., McKemy, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRPM8%2C+but+not+TRPA1%2C+is+required+for+neural+and+behavioral+responses+to+acute+noxious+cold+temperatures+and+cold-mimetics+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">TRPM8, but not TRPA1, is required for neural and behavioral responses to acute noxious cold temperatures and cold-mimetics in vivo.</a> Pain. 150 (2), 340-350 (2010).</li>
<li>Allchorne, A. J., Broom, D. C., Woolf, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+cold+pain%2C+cold+allodynia+and+cold+hyperalgesia+in+freely+behaving+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+pain%22%5BJournal%5D)">Detection of cold pain, cold allodynia and cold hyperalgesia in freely behaving rats.</a> Molecular pain. 1, 36(2005).</li>
<li>Colburn, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attenuated+cold+sensitivity+in+TRPM8+null+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Attenuated cold sensitivity in TRPM8 null mice.</a> Neuron. 54 (3), 379-386 (2007).</li>
<li>Dhaka, A., Murray, A. N., Mathur, J., Earley, T. J., Petrus, M. J., Patapoutian, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRPM8+is+required+for+cold+sensation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">TRPM8 is required for cold sensation in mice.</a> Neuron. 54 (3), 371-378 (2007).</li>
<li>Bautista, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+menthol+receptor+TRPM8+is+the+principal+detector+of+environmental+cold%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The menthol receptor TRPM8 is the principal detector of environmental cold.</a> Nature. 448 (7150), 204-208 (2007).</li>
<li>Obata, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TrpA1+induced+in+sensory+neurons+contributes+to+cold+hyperalgesia+after+inflammation+and+nerve+injury%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">TrpA1 induced in sensory neurons contributes to cold hyperalgesia after inflammation and nerve injury.</a> The Journal of Clinical Investigation. 115 (9), 2393-2401 (2005).</li>
<li>Tang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pirt+functions+as+an+endogenous+regulator+of+TRPM8%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+communications%22%5BJournal%5D)">Pirt functions as an endogenous regulator of TRPM8.</a> Nature communications. 4, 2179(2013).</li>
<li>Lee, H., Iida, T., Mizuno, A., Suzuki, M., Caterina, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+thermal+selection+behavior+in+mice+lacking+transient+receptor+potential+vanilloid+4%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Altered thermal selection behavior in mice lacking transient receptor potential vanilloid 4.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 25 (5), 1304-1310 (2005).</li>
<li>Pogorzala, L. A., Mishra, S. K., Hoon, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cellular+code+for+Mammalian+thermosensation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The cellular code for Mammalian thermosensation.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 33 (13), 5533-5541 (2013).</li>
<li>Yalcin, I., Charlet, A., Freund-Mercier, M. -J., Barrot, M., Poisbeau, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiating+thermal+allodynia+and+hyperalgesia+using+dynamic+hot+and+cold+plate+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22The+journal+of+pain+official+journal+of+the+American+Pain+Society%22%5BJournal%5D)">Differentiating thermal allodynia and hyperalgesia using dynamic hot and cold plate in rodents.</a> The journal of pain official journal of the American Pain Society. 10 (7), 767-773 (2009).</li>
<li>Callahan, B. L., Gil, A. S., Levesque, A., Mogil, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+mechanical+and+thermal+nociceptive+sensitivity+in+the+laboratory+mouse+by+behavioral+state%5BTitle%5D)+AND+%22The+journal+of+pain%3A+official+journal+of+the+American+Pain+Society%22%5BJournal%5D)">Modulation of mechanical and thermal nociceptive sensitivity in the laboratory mouse by behavioral state.</a> The journal of pain: official journal of the American Pain Society. 9 (2), 174-184 (2008).</li>
<li>Brenner, D. S., Golden, J. P., Vogt, S. K., Dhaka, A., Story, G. M., Gereau, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dynamic+set+point+for+thermal+adaptation+requires+phospholipase+C-mediated+regulation+of+TRPM8+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">A dynamic set point for thermal adaptation requires phospholipase C-mediated regulation of TRPM8 in vivo.</a> Pain. , (2014).</li>
<li>Patwardhan, A. M., Scotland, P. E., Akopian, A. N., Hargreaves, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+TRPV1+in+the+spinal+cord+by+oxidized+linoleic+acid+metabolites+contributes+to+inflammatory+hyperalgesia%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Activation of TRPV1 in the spinal cord by oxidized linoleic acid metabolites contributes to inflammatory hyperalgesia.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (44), 18820-18824 (2009).</li>
<li>Fujita, F., Uchida, K., Takaishi, M., Sokabe, T., Tominaga, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ambient+Temperature+Affects+the+Temperature+Threshold+for+TRPM8+Activation+through+Interaction+of+Phosphatidylinositol+4%2C5-Bisphosphate%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Ambient Temperature Affects the Temperature Threshold for TRPM8 Activation through Interaction of Phosphatidylinositol 4,5-Bisphosphate.</a> Journal of Neuroscience. 33 (14), 6154-6159 (2013).</li>
<li>Rohacs, T., Lopes, C. M., Michailidis, I., Logothetis, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PI%284%2C5%29P2+regulates+the+activation+and+desensitization+of+TRPM8+channels+through+the+TRP+domain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+neuroscience%22%5BJournal%5D)">PI(4,5)P2 regulates the activation and desensitization of TRPM8 channels through the TRP domain.</a> Nature neuroscience. 8 (5), 626-634 (2005).</li>
<li>Daniels, R. L., Takashima, Y., McKemy, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity+of+the+neuronal+cold+sensor+TRPM8+is+regulated+by+phospholipase+C+via+the+phospholipid+phosphoinositol+4%2C5-bisphosphate%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+biological+chemistry%22%5BJournal%5D)">Activity of the neuronal cold sensor TRPM8 is regulated by phospholipase C via the phospholipid phosphoinositol 4,5-bisphosphate.</a> The Journal of biological chemistry. 284 (3), 1570-1582 (2009).</li>
<li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurokinin-1+receptor+enhances+TRPV1+activity+in+primary+sensory+neurons+via+PKCepsilon%3A+a+novel+pathway+for+heat+hyperalgesia%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Neurokinin-1 receptor enhances TRPV1 activity in primary sensory neurons via PKCepsilon: a novel pathway for heat hyperalgesia.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (44), 12067-12077 (2007).</li>
<li>Wang, H., Zylka, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mrgprd-expressing+polymodal+nociceptive+neurons+innervate+most+known+classes+of+substantia+gelatinosa+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Mrgprd-expressing polymodal nociceptive neurons innervate most known classes of substantia gelatinosa neurons.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 29 (42), 13202-13209 (2009).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia

CPA można wykorzystać do oceny wrażliwości na zimno i adaptacji do zimna u myszy. Zapewnia niedrogi i skuteczny sposób pomiaru reakcji na zimno u nieskrępowanych, zaaklimatyzowanych zwierząt w szerokim zakresie temperatur. Zapewnia również jednoznaczną odpowiedź behawioralną z łatwą do określenia ilościowego i przeanalizowania zmienną wyjściową. Został już wykorzystany do oceny zmian wrażliwości na zimno wywołanych stanem zapalnym1, uszkodzeniem neuropatycznym1, lekami przeciwbólowymi1</sup...

Pomiar reakcji na zimno u gryzoni jest ważny dla lepszego zrozumienia potencjalnych mechanizmów wrażliwości na zimno u ludzi zarówno w warunkach normalnych, jak i patologicznych. Test Cold Plantar Assay (CPA), pierwotnie opracowany kilkalat temu1, ma na celu generowanie powtarzalnych, jednoznacznych mysich reakcji behawioralnych na zimny bodziec dostarczony w RT. Nowsze udoskonalenia tego testu umożliwiły powtarzalny pomiar wrażliwości na zimno w szerokim zakresie temperatur2. Obie wersje są również zaprojektowane tak, aby były stosunkowo wydajne i niedrogie w użyciu.
Duży postęp został osiągnięty w zrozumieniu mechanizmów wrażliwości na zimno przy użyciu innych metod behawioralnych. Jedną z metod jest test parowania acetonu, który polega na nałożeniu lub rozpyleniu acetonu na łapę myszy i zmierzeniu czasu, jaki mysz spędza na pstrykaniu łapą3,4. Niestety, reakcje na parowanie acetonu są zakłócone przez uczucie wilgoci i zapach acetonu. Ponadto bodziec zimny, który jest stosowany w teście parowania acetonu, może się różnić w zależności od ilości zastosowanego acetonu i jest trudny do oszacowania. Wreszcie, nieuszkodzone myszy mają minimalne reakcje na aceton na początku badania, co uniemożliwia zmierzenie analgezji przy braku nadwrażliwości tą metodą.
Innym klasycznym testem na zimne reakcje jest test ruchu ogona, gdzie opóźnienie do wycofania jest mierzone po zanurzeniu ogona w zimnej wodzie5,6. Chociaż reakcje behawioralne w tym teście są jednoznaczne, a test mierzy reakcje na określoną temperaturę, zwierzęta muszą być skrępowane podczas testowania, co może zmienić reakcję na zimno poprzez dobrze opisane mechanizmy przeciwbólowe wywołane stresem7.
Innym często używanym narzędziem jest test zimnej płyty, który mierzy reakcje behawioralne myszy po umieszczeniu ich na płytce chłodzonej peltierem8-10. Chociaż narzędzie to dostarcza informacji o reakcjach zwierząt w określonych temperaturach, jest również niekonsekwentnie stosowane; Różne grupy mierzyły różne typy odpowiedzi, w tym liczbę skoków8,11, opóźnienie do pierwszej odpowiedzi8,11-13 i liczbę uniesień łap11,13,14 z bardzo różnymi wynikami. Test na zimnej płytce jest również stosunkowo mało wydajny, ponieważ tylko jedno zwierzę może być testowane na raz i wymaga drogiego i delikatnego urządzenia Peltiera.
Test preferencji temperatury na 2 płytkach jest powszechnie używaną pochodną testu zimnej płyty, który mierzy względną ilość czasu, jaką zwierzęta spędzają na dwóch połączonych płytkach o różnych temperaturach9,15-17. Innym podobnym, powszechnie stosowanym testem jest test gradientu termicznego, w którym mierzy się czas, jaki myszy spędzają w różnych strefach temperaturowych w zakresie od 5 °C do 45 °C na długiej metalowej płytce16. Chociaż testy te pozwalają na porównanie temperatur, nie jest jasne, czy zachowanie to reprezentuje awersję do temperatury, czy preferencję temperaturową.
Na koniec, dynamiczny test zimnej płytki został użyty do zmierzenia, jak myszy reagują na zmieniające się temperatury otoczenia18. Metoda ta polega na umieszczeniu myszy na urządzeniu ogniwa ogniwa Peltiera RT i obniżeniu go do 1 °C, jednocześnie mierząc, jak bardzo myszy skaczą lub liżą łapy przy różnych temperaturach płytki. Chociaż testuje to, jak myszy przystosowują się do chłodnego środowiska, nie zapewnia sposobu na sprawdzenie, jak myszy reagują na zimny bodziec w otoczeniu niższej temperatury otoczenia. Ponadto wymaga drogiego sprzętu do wykonania i nie zapewnia sposobu na przyzwyczajenie myszy do sprzętu testowego przed pomiarem ich wrażliwości na zimno.
Aby uzupełnić te testy, CPA testuje zaaklimatyzowane reakcje na dobrze zdefiniowany bodziec zimny w różnych zakresach temperatur lub podczas procesu adaptacji do niskich temperatur otoczenia. Za pomocą naszej obecnej aparatury może testować do 14 myszy jednocześnie, z potencjałem do niedrogiego zwiększenia do testów o wysokiej przepustowości.

<table><tbody><tr><td>Sonda termopary typu T</td><td>Physitemp</td><td>IT-24p</td><td>Służy do pomiaru temperatury powierzchni szkła (http://www.physitemp.com/products/probesandwire/)</td></tr><tr><td>Płyta szklana</td><td>Lokalna firma szklarska (w St. Louis, Stemmerich Inc)</td><td></td><td>Używamy szkła pyrexowego (pływak borokrzemianowy). Nasze laboratorium zazwyczaj używa 1/4 '', ale przydatne są również 3/16 '' i 1/8 ''</td></tr><tr><td>Rejestrator danych termicznych</td><td>Extech</td><td>EA15</td><td>Termolog do śledzenia temperatury szkła (http://www.extech.com/instruments/product.asp?catid=64&prodid=408)</td></tr><tr><td>3 ml Strzykawka</td><td>BD</td><td>309657</td><td>Górna część jest odcinana, a suchy lód jest ściskany w strzykawce w celu wygenerowania zimnej sondy</td></tr><tr><td>Komputer</td><td>Jeśli używasz rejestratora Extech, każdy komputer będzie działał</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pudełka aluminiowe</td> Washington <td>University w St. Louis Pudełka warsztatowe</td><td></td><td>mają 3 'długości, 4,5 '' szerokości i 3 '' wysokości z uszczelnioną pokrywą. W jednym krótkim boku każdego pudełka, w pobliżu dna, znajduje się otwór o średnicy 1/2 cala. Otwory te są wypełnione gumowymi zaworami odcinającymi, gdy pudełka są wypełnione mokrym lodem lub gorącą wodą.</td></tr><tr><td>Podgrzewany cyrkulator wody</td><td>VWR</td><td></td><td>Będzie działał każdy model cyrkulatora wody z pompą</td></tr><tr><td>Igła 21 G</td><td>BD</td><td>305165</td><td>Dokładny rozmiar igły nie jest ważny</td></tr><tr><td>Zegar</td><td></td><td></td> ręczny <td>Każdy minutnik ręczny będzie działał</td></tr><tr><td>Lustro</td><td></td><td></td><td>Każde płaskie lustro będzie działać</td></tr></tbody></table>

prosta i niedroga metoda określania wrażliwości na zimno i adaptacji u myszy

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

Nadwrażliwość na zimno jest poważnym problemem klinicznym, dotykającym szeroką grupę pacjentów i powodującym znaczne obniżenie jakości życia. Test zimnej podeszwy pozwala na obiektywną i niedrogą ocenę wrażliwości na zimno u myszy i może określić ilościowo zarówno analgezję, jak i nadwrażliwość. Myszy aklimatyzują się na szklanej płytce, a sprasowane granulki suchego lodu są przytrzymywane na szklanej powierzchni pod tylną łapą. Opóźnienie do wyjęcia ze szkła chłodzącego jest używane jako miara wrażliwości na zimno.
Odczucie zimna jest również ważne dla przetrwania w regionach z sezonowymi zmianami temperatury, a aby zachować wrażliwość, zwierzęta muszą być w stanie dostosować swoje progi reakcji termicznej do temperatury otoczenia. Test Cold Plantar Assay (CPA) umożliwia również badanie adaptacji do zmian temperatury otoczenia poprzez testowanie wrażliwości myszy na zimno w temperaturach w zakresie od 30 °C do 5 °C. Myszy są aklimatyzowane zgodnie z powyższym opisem, ale szklana płyta jest schładzana do żądanej temperatury początkowej za pomocą aluminiowych pudełek (lub opakowań z folii aluminiowej) wypełnionych gorącą wodą, mokrym lodem lub suchym lodem. Temperatura płytki jest mierzona w środku za pomocą sondy termopary typu T z żarnikiem. Gdy płytka osiągnie żądaną temperaturę początkową, zwierzęta są badane w sposób opisany powyżej.
Ten test pozwala na testowanie myszy w temperaturach od nieszkodliwych do szkodliwych. CPA daje jednoznaczne i spójne reakcje behawioralne u zdrowych myszy i może być stosowany do ilościowego określania zarówno nadwrażliwości, jak i analgezji. Protokół ten opisuje, jak używać CPA do pomiaru nadwrażliwości na zimno, analgezji i adaptacji u myszy.

Reakcje behawioralne wywołane u myszy w temperaturach 30 °C, 23 °C, 17 °C oraz 12 °C są wysoce powtarzalne (Rycina 4A)20. Aby zmierzyć bodziec zimna generowany pod tylną łapą, myszy znieczulono koktajlem ketamina/ksylazyna/acepromazyna, a ich łapy przymocowano do szkła umieszczonego na termoparze z drutu typu T (Rycina 4B)20. Szkło chłodzono lub ogrzewano do pożądanego zakresu testowego. Chociaż płyta jest chłodzona równomiernie wzdłuż swojej długości (Rycin...

Test Cold Plantar (CPA) mierzy reakcję na zimno w zakresie od 30 °C do 5 °C, a także może mierzyć adaptację do zimna. Protokół ten opisuje, jak używać CPA do pomiaru nadwrażliwości na zimno, analgezji i adaptacji u myszy.

Prosta i niedroga metoda określania wrażliwości na zimno i adaptacji u myszy

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Ogólnym celem niniejszej procedury jest pomiar reakcji myszy na zimno. Osiąga się to poprzez wstępne schłodzenie lub ogrzanie szkła do pożądanej temperatury. Drugim krokiem jest aklimatyzacja myszy aż do momentu, gdy znajdą się one w spoczynku.Trzecim krokiem jest sprasowanie proszku z suchego lodu w granulkę w strzykawce. Ostatnim etapem jest przetestowanie myszy przy użyciu granulki z suchego lodu oraz stopera w celu pomiaru czasu latencji wycofania. Ostatecznie test zimnej płytki służy do pomiaru reaktywności na zimno oraz adaptacji u myszy w warunkach swobodnego zachowania.Główną zaletą naszego testu w porównaniu z obecnie stosowanymi metodami, takimi jak test acetonowy i test zimnej płyty, jest możliwość badania zarówno nadwrażliwości, jak i analgezji w stanie spoczynkowym w różnych warunkach środowiskowych. Choć metoda ta pozwala uzyskać wgląd w reakcję myszy na zimno, może być ona również stosowana w innych układach, takich jak małpy, szczury oraz ludzie. Procedurę zademonstruje Daniel Brenner, doktorant w moim laboratorium.Po oczyszczeniu szklanej powierzchni przymocuj sondę termopary typu T do środka szklanej płyty za pomocą taśmy laboratoryjnej. Ustaw klatki dla zwierząt na szklanej płycie w jednej linii wzdłuż środka. Następnie przeprowadź sondę termopary przez środkową klatkę dla zwierząt i podłącz ją do rejestratora danych.Włącz rejestrator danych i dezaktywuj funkcję automatycznego wyłączania. Podłącz rejestrator danych do komputera za pomocą dołączonego kabla. Oddziel klatki dla zwierząt czarnymi wkładkami, aby zapobiec interakcjom wizualnym między myszami, a pod szkłem umieść lustra, aby umożliwić obserwację spodu klatek.Aby rozpocząć testy, umieść aluminiowe pojemniki na szklanej płycie po obu stronach zwierzęcia, w stałej odległości od klatek. W przypadku przeprowadzania testów w temperaturze 30 °C, podłącz cyrkulatory wody grzejącej do aluminiowych pojemników umieszczonych w odległości 0,25 cala od klatki ze zwierzęciem. Wypełnij pojemniki wodą do połowy, upewniając się, że otwory odpływowe są zatkane.Ustaw cyrkulatory w taki sposób, aby gorąca woda z aluminiowych pojemników spływała bezpośrednio z powrotem do zbiornika cyrkulatora po każdej ze stron. Należy dolać wody do każdego z cyrkulatorów. Po napełnieniu metalowych pojemników ustaw cyrkulatory na temperaturę od 45 do 60 °C i napełnij aluminiowe pojemniki ciągłym strumieniem gorącej wody.Gdy szkiełka osiągną pożądany zakres temperatur, umieść myszy w komorach na płytce. Pozostaw myszy do aklimatyzacji do aparatury i temperatury. Czas aklimatyzacji myszy wynosi 2,5 godziny.Pod koniec okresu aklimatyzacji napełnij wiadro z lodem w połowie suchym lodem, a następnie za pomocą młotka lub pobijaka rozkrusz go na proszek. Czynność tę należy przeprowadzić poza pomieszczeniem behawioralnym, aby nie płoszyć myszy. Następnie, używając żyletki lub nożyczek, odetnij górną część strzykawki o pojemności 3 ml.Następnie za pomocą igły 21 G wykonaj dwa zestawy po trzy otwory po przeciwległych stronach strzykawki, aby zmniejszyć ciśnienie powstające w wyniku sublimacji podczas ponownego zagęszczania suchego lodu w pomieszczeniu behawioralnym, i wypełnij komorę strzykawki w połowie proszkiem z suchego lodu. Przyciśnij odcięty koniec strzykawki do płaskiego przedmiotu i mocno zagęść proszek za pomocą tłoka. Wypchnij czubek zagęszczonego pelletu z suchego lodu poza krawędź strzykawki.Następnie należy przetestować te myszy, które mają wszystkie cztery łapy w szkle i nie poruszają się, ale nie są w pełni uśpione. Wykorzystując lustra do celowania, delikatnie, lecz stanowczo, dociśnij płaski pelet do powierzchni szkła pod tylną łapą myszy. Jednocześnie uruchom stoper.Gdy mysz odsunie się od schłodzonego szkła, w pionie lub w poziomie, należy zatrzymać stoper i usunąć pellet suchego lodu. Jeśli jednak mysz jedynie krótko poruszy łapą, a następnie ponownie przyłoży ją do chłodzącej powierzchni, należy kontynuować pomiar czasu i stymulację do momentu, aż mysz trwale odsunie łapę. Jeśli mysz nie odsunie się od schłodzonego szkła, należy przerwać stymulację po 20 sekundach.Powtarzaj tę procedurę testową, aż zostanie zebranych co najmniej trzy wartości z każdej łapy zwierzęcia, aby przetestować myszy w temperaturze 17 °C. Powtórz eksperyment w sposób przedstawiony powyżej, jednak zamiast napełniać aluminiowe pojemniki podgrzaną wodą, użyj kruszonego lodu i ustaw pojemniki w odległości około 0,25 cala od klatek, aby przetestować myszy. W temperaturze 12 °C stosuje się suchy lód, przy czym pojemniki są umieszczone w odległości 1,25 cala od klatek.Ten alternatywny protokół polega na badaniu myszy w trakcie obniżania temperatury płytki, a nie po jej ustabilizowaniu. Pozwala to na badanie adaptacji myszy w czasie rzeczywistym, po przygotowaniu aparatury. Podobnie jak wcześniej, należy przeprowadzić eksperyment zgodnie z wcześniejszym opisem, aby dokonać pomiarów w temperaturze pokojowej.Po zmierzeniu bazowych opóźnień w temperaturze pokojowej, korzystając z wcześniej przedstawionej procedury, należy wypełnić puste aluminiowe pojemniki suchym lodem i umieścić je w odległości 1,25 cala od obudów po obu stronach. Na koniec należy powtórzyć eksperyment, aby dokonać pomiarów opóźnień podczas chłodzenia szklanej płytki.Wykonywanie pomiarów tak często, jak to możliwe. Wykres ten przedstawia średni czas utajenia odruchu wycofania u myszy rozpoczynających pomiar w temperaturze 12 °C, 17 °C, 23 °C lub 30 °C. Czas utajenia wycofania jest spójny dla wszystkich temperatur.Efekty przeciwbólowe można zmierzyć za pomocą testu zimnej płytki, jak pokazano tutaj. Podskórny wtrysk morfiny w dawce 1,5 mg/kg zwiększa czas latencji odruchu wycofania u myszy 30 minut po iniekcji, co zmierzono za pomocą dwuczynnikowej analizy wariancji z testem post-hoc Bonferroniego 60 minut po iniekcji. Nie ma istotnej różnicy między grupą otrzymującą morfinę a grupą otrzymującą roztwór soli fizjologicznej.Tutaj można również zmierzyć nadwrażliwość myszy. Iniekcja podeszwowa 10 µL pełnego adiuwantka Freunda znacząco skraca czas latencji wycofania u myszy dwie i trzy godziny po iniekcji, co wykazano za pomocą dwuczynnikowej analizy wariancji ANOVA z testem post-hoc Bonferroniego. Tym samym myszom podano podskórne iniekcje morfiny w czwartej godzinie, a wszystkie czasy latencji wycofania w 4,5 godzinie były znacząco wyższe w porównaniu z trzecią godziną, co wykazano za pomocą jednoczynnikowej analizy wariancji ANOVA z testem post-hoc Dunnetta.Po zmetabolizowaniu morfiny w 5,5 godziny po wstrzyknięciu, myszy, którym podano CFA, nadal wykazywały krótszy czas latencji wycofania niż myszy wstrzyknięte solą fizjologiczną, co wykazano za pomocą dwuczynnikowej analizy wariancji (ANOVA) z post-hoc testem Bonferroniego. Adaptacja do zmian ochłodzenia środowiska może być mierzona w czasie rzeczywistym za pomocą tego testu. Myszy typu dzikiego wykazują taki sam czas latencji wycofania w miarę ochładzania się szklanej płyty, co sugeruje, że adaptują one do obniżających się temperatur szybciej, niż można to zmierzyć za pomocą CPA, w którym nie stwierdzono istotnych różnic pomiędzy żadną z grup.Jednakże, gdy myszy zostaną wstrzyknięte związkiem U 7 3 1 2 2 w celu zablokowania hydrolizy PIP two, ich czas latencji ulega skróceniu wraz ze spadkiem temperatury płytki, co sugeruje upośledzenie adaptacji. Po opanowaniu technika ta może zostać wykonana w ciągu pięciu godzin, wliczając w to czas aklimatyzacji. Po obejrzeniu tego filmu powinni Państwo posiadać dobrą wiedzę na temat sposobu pomiaru odczuwania zimna i adaptacji u budzących się myszy zachowujących swobodną aktywność. Należy pamiętać, że praca z suchym lodem może być wyjątkowo niebezpieczna i konieczne jest zapewnienie odpowiedniej wentylacji oraz cyrkulacji powietrza podczas stosowania tej metody.

a-simple-inexpensive-method-for-determining-cold-sensitivity

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neuronauka

Prosty i niedrogi sposób na określenie wrażliwości na zimno i adaptacji u myszy

W niniejszym opracowaniu opisujemy szybką, niezawodną i prostą procedurę określania najniższej temperatury, przy której szczury lub myszy wykazują zachowania nocyfencyjne, t. j. na próg termicznej nocycepcji (TNT). Metoda ta wykorzystuje powoli zwiększający się bodziec termiczny, co pozwala na precyzyjną i powtarzalną ocenę TNT przy minimalnym lub żadnym stresie dla zwierząt.

Szybkie oznaczanie progu termicznej nocycepcji u szczurów z cukrzycą

Elektroniczne pomiary von Freya są skuteczną i ulepszoną alternatywą dla klasycznych filamentów von Freya, ponieważ pozwalają na szybki i precyzyjny pomiar zmian w progach mechanicznego wycofywania gryzoni do stale stosowanych bodźców ciśnieniowych przed i po zdarzeniu zapalnym.

Pomiar zmian wrażliwości dotykowej w tylnej łapie myszy za pomocą elektronicznego aparatu von Freya

Reakcje alergiczne, charakteryzujące się aktywacją komórek tucznych i bazofilów, są napędzane przez sieciowanie IgE i uwalnianie mediatorów prozapalnych. Ilościową ocenę reakcji alergicznych można uzyskać, stosując barwnik Evans Blue do monitorowania zmian przepuszczalności naczyń krwionośnych po prowokacji alergenem.

Pomiar miejscowej anafilaksji u myszy

Ten manuskrypt opisuje protokół badania układu węchowego gryzoni. Test przyzwyczajenia/dezhabituacji węchowej pozwoli badaczom określić, czy mysz przyzwyczaja się do wielokrotnie prezentowanego zapachu i czy mysz wykazuje nieprzyzwyczajenie, gdy przedstawia się jej nowy zapach.

Badanie dyskryminacji i habituacji zapachowej u myszy

Przedstawiamy prosty i bezstronny test węchowy na myszach. Dzięki temu protokołowi dyskryminacja węchowa, preferencje, unikanie i wrażliwość na nowy zapach w porównaniu z wodą mogą być oceniane w pojedynczych sesjach behawioralnych. Ta metoda jest wskazana dla pojedynczego eksperymentatora, a analiza opiera się na komputerowym przetwarzaniu wideo.

Proste i wspomagane komputerowo testy węchowe dla myszy

Tutaj demonstrujemy nowatorski test do badania zimnej nocycepcji u larw Drosophila. Test ten wykorzystuje specjalnie skonstruowaną sondę Peltiera, zdolną do zastosowania ogniskowego szkodliwego bodźca zimna i skutkuje wymiernymi zachowaniami specyficznymi dla zimna. Technika ta pozwoli na dalszą komórkową i molekularną sekcję zimnej nocycepcji.

Nowy test na zimną nocycepcję u larw Drosophila

W tym artykule podajemy szczegóły dotyczące metod produkcji i kontroli jakości rekombinowanego białka fuzyjnego IL4-10. Pokazujemy również, jak przetestować skuteczność tego białka w rozwiązywaniu bólu w mysim modelu bólu zapalnego.

Opracowanie białek rekombinowanych w leczeniu bólu przewlekłego

Tutaj prezentujemy nową metodę dokładnego pomiaru różnic temperatur ciała w modelach myszy z pasywną anafilaksją układową (PSA) i alergią pokarmową za pomocą termometru na podczerwień. Procedura ta została dokładnie odwzorowana w poprzednich wynikach PSA.

Pomiar temperatury ciała myszy za pomocą termometru na podczerwień podczas pasywnej ogólnoustrojowej anafilaksji i oceny alergii pokarmowej

Myszy i szczury są chirurgicznie wszczepiane za pomocą zdalnych transponderów temperatury, a następnie przyzwyczajane do środowiska testowego i procedury. Zmiany temperatury mięśni są mierzone w odpowiedzi na bodźce farmakologiczne lub kontekstowe w klatce domowej lub podczas zalecanej aktywności fizycznej (np. chodzenie na bieżni ze stałą prędkością).

Pomiar termogenezy mięśni szkieletowych u myszy i szczurów

Nadwrażliwość kontaktowa (CHS) to mysi eksperymentalny model alergicznego kontaktowego zapalenia skóry (ACD). CHS opiera się na uczuleniu na reaktywny hapten poprzez malowanie ogolonej skóry klatki piersiowej i brzucha, a następnie prowokację skóry ucha rozcieńczonym haptenem, powodując reakcję obrzęku, która jest oceniana na różne sposoby.

Nadwrażliwość kontaktowa jako mysi model alergicznego kontaktowego zapalenia skóry

Poznaj metodę Cold Plantar Assay do pomiaru wrażliwości na zimno i adaptacji u myszy. Protokół wykorzystuje suchy lód do oceny reakcji bólowej w neurobiologii.

Prosta i niedroga metoda określania wrażliwości na zimno i adaptacji u myszy

Przeglądaj więcej filmów