Name: Kwantyfikacja ochrony nerwowo-naczyniowej po powtarzającym się kondycjonowaniu wstępnym hipoksyjnym i przejściowym zamknięciu tętnicy środkowej mózgu u myszy (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-04T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 48 s
Description: Poznaj metodę kwantyfikacji ochrony nerwowo-naczyniowej po powtarzającym się kondycjonowaniu wstępnym hipoksyjnym u myszy. Technika umożliwia jednoczesne pomiar objętości zawału i integralności bariery krew-mózg.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Specjalne podziękowania dla laboratorium Gidday za ich pracę nad opracowaniem protokołu RHP, a także dla Neuro-Models Facility (UTSW) za pomoc w operacjach tMCAo. Praca ta była wspierana przez granty z American Heart Association (AMS), The Haggerty Center for Brain Injury and Repair (UTSW; AMS) oraz Fundacja Badań nad Paraliżem Spatycznym Dystryktu Illinois-Eastern Iowa of Kiwanis International (JMG).

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Pojedyncza ekspozycja na niedotlenienie ogólnoustrojowe (tj. 2 godziny 11%O2) u myszy "przejściowo" chroni mózg przed tMCAo,29 co oznacza, że odpowiedź epigenetyczna na wyzwanie związane z kondycjonowaniem wstępnym jest krótkotrwała, a wyjściowy fenotyp zostaje przywrócony w ciągu kilku dni. Powtarzające się prezentacje bodźca kondycjonowania wstępnego hipoksyjnego dramatycznie wydłużają czas trwania fenotypu neuroprotekcyjnego. 6 Wiele badań wykazało, że częstotliwość, wielkość ...

Jako główna przyczyna niepełnosprawności dorosłych i czwarta najczęstsza przyczyna śmierci, udar mózgu jest jednym z najbardziej wyniszczających stanów chorobowych, z jakimi boryka się dorosła populacja Stanów Zjednoczonych. 1 Zwierzęce modele udaru pozwalają na eksperymentalne badanie nowych metod zmniejszania uszkodzeń niedokrwiennych i poprawy rekonwalescencji po udarze. Jedną z nowatorskich ścieżek dla takich badań translacyjnych jest warunkowanie wstępne. Kondycjonowanie wstępne to celowe użycie bodźca, który nie uszkadza w celu zmniejszenia uszkodzeń spowodowanych kolejnym i poważniejszym urazem. 2 Wykazano, że wstępne kondycjonowanie hipoksyjne powoduje plejotropowe zmiany w mózgu, które zapewniają ochronę przed udarem zarówno w badaniach in vivo, jak i in vitro. 3 Jednak pojedyncza ekspozycja na niedotlenienie zapewnia tylko krótkotrwałą neuroprotekcję, wywołując mniej niż 72 godziny tolerancji na niedokrwienie u dorosłych myszy. Nawet po czterech tygodniach 14-godzinnej codziennej ekspozycji na hipoksję hipobaryczną, Lin i in. stwierdzili, że neuroprotekcja utrzymywała się tylko przez tydzień. 5 Powtarzalne kondycjonowanie wstępne hipoksyjności (RHP) charakteryzuje się stochastycznymi zmianami częstotliwości, czasu trwania i intensywności ekspozycji na hipoksyjność. W przeciwieństwie do pojedynczego wyzwania kondycjonowania wstępnego, RHP indukuje fenotyp mózgoprotekcyjny, który utrzymuje się do ośmiu tygodni u myszy. 6 RHP zmniejszyło objętość zawału, zaburzenie bariery krew-mózg (BBB), zapalenie naczyń krwionośnych i diapedezę leukocytów przez kilka tygodni po ostatecznej ekspozycji na niedotlenienie. RHP specyficznie zmniejszył stan zapalny w niedokrwionym mózgu poprzez zmniejszenie populacji limfocytów T, monocytów i makrofagów, przy jednoczesnym utrzymaniu populacji komórek B w półkuli niedokrwiennej. 7 W rzeczywistości RHP indukował fenotyp immunosupresyjny u myszy przed jakimkolwiek uszkodzeniem OUN, w tym udarem. Limfocyty B leczone RHP wyizolowane od zdrowych myszy leczonych RHP wykazywały unikalny fenotyp przeciwzapalny, z regulacją w dół zarówno prezentacji antygenu, jak i produkcji przeciwciał. Ogólne zmniejszenie prozapalnych adaptacyjnych mechanizmów immunologicznych sprawia, że RHP jest doskonałą metodologią indukowania endogennej immunosupresji nie tylko w chorobach zapalnych specyficznych dla OUN, ale także w urazach ogólnoustrojowych lub modelach chorób, które obejmują patologię prozapalną.
RHP zmniejsza zarówno objętość zawału, jak i zaburzenie BBB po przejściowym zamknięciu tętnicy środkowej mózgu (tMCAo). Zwierzęce modele udaru, takie jak powszechnie stosowany tMCAo, znacznie poprawiają zrozumienie patofizjologii udaru, a także projektowanie skuteczniejszych neuroterapii. Po raz pierwszy opracowana przez Koizumi i wsp. w 1986 r.8 procedura tMCAo jest szeroko stosowaną metodą wywoływania udaru u gryzoni i jedną z preferowanych metod badania stanu zapalnego po reperfuzji. Wraz z ewolucją metod tMCAo, nowsze zastosowanie włókien powlekanych silikonem jeszcze bardziej zmniejsza ryzyko krwotoku podpajęczynówkowego w porównaniu z innymi modelami9,10 i poprawia niezawodność, chociaż niestety tMCAo często powoduje duże różnice w objętości zawału. 11-13 Większość z tych badań wyznacza obszary zawału w koronalnych odcinkach mózgu poprzez barwienie chlorkiem 2,3,5-trifenylotetrazolu (TTC), uważanym za złoty standard w oznaczaniu ilościowym zawału, ponieważ jest to prosty i niedrogi sposób na uzyskanie żywych, powtarzalnych wyników. TTC służy jako substrat dehydrogenaz obecnych w mitochondriach. Kiedy wycinki mózgu są wystawione na działanie roztworu TTC, TTC jest selektywnie pobierany do żywych komórek, gdzie jego nierozpuszczalny produkt redukcyjny, formazan, wytrąca się do głębokiego czerwonego koloru w żywotnych mitochondriach. Ze względu na dysfunkcję mitochondriów w tkance niedokrwiennej, tkanka ta pozostaje biała, co pozwala na różnicowanie uszkodzonej i zdrowej tkanki. 14
RHP również zmniejsza zakłócenia BBB w półkuli niedokrwiennej. 6 W związku z tym podwójna kwantyfikacja integralności BBB w tych samych mózgach, co oznaczenia objętości zawału na podstawie TTC15 dostarczyłaby użytecznych informacji na temat pełnej skuteczności ochrony endogennej i potencjalnych związków przyczynowych między zaburzeniem BBB a zawałem u zwierząt nieleczonych i leczonych. Napływ krwi obwodowej przez zaburzoną barierę krew-mózg, wtórny do udaru, zwiększa populacje leukocytów, cytokiny prozapalne, stres oksydacyjny, obrzęk naczyniopochodny i transformację krwotoczną w półkuli niedokrwiennej, ostatecznie zwiększając wskaźniki infekcji i śmiertelności u pacjentów z udarem niedokrwiennym. 16,17 Powszechną metodą pomiaru zaburzeń bariery krew-mózg w modelach zwierzęcych jest ilościowe oznaczanie wycieku niebieskiego barwnika Evansa (EB) do mózgu. 15,18-21 EB selektywnie wiąże się z albuminą surowicy, białkiem globularnym (MW = 65 kDa), które nie przekracza bariery krew-mózg u zwierząt zdrowych. 22 Po udarze niedokrwiennym EB nacieka mózg i fluoryzuje przy długości fali 620 nm, co pozwala na pomiar gęstości optycznej w uszkodzonym miąższu perfundowanym. 22 Gęstość optyczna jest wprost proporcjonalna do przepuszczalności bariery krew-mózg, gdy EB została wypłukana z pośmiertnego naczynia korowego przez perfuzję przezsercową. Dzięki natychmiastowemu przetwarzaniu mózgów barwionych TTC u zwierząt, którym podawano EB, można skutecznie określić ilościowo zarówno objętość zawału, jak i zaburzenie bariery krew-mózg. Należy jednak zauważyć, że uszkodzenie neuronów i zaburzenie bariery krew-mózg nie są procesami towarzyszącymi w mózgu po udarze,23,24 więc wybór czasu poświęcenia jest ważnym czynnikiem.
Następujący protokół szczegółowo opisuje metodę RHP, metodę tMCAo do wywoływania tymczasowej niedrożności tętnic, która modeluje niedrożność tętnicy środkowej mózgu u pacjentów ludzkich, oraz podwójne metody histologiczne do określania punktów końcowych uszkodzeń udaru nerwowego i naczyniowego. TTC mierzy śmierć komórek i skumulowane uszkodzenia tkanek, co pozwala na ilościowe określenie całkowitej objętości zawału, podczas gdy EB zapewnia ilościowe określenie uszkodzenia BBB w półkuli.

<table><tbody><tr><td>Przepływomierze, regulatory</td><td>VetEquip, Inc</td><td>Zamówienie specjalistyczne</td><td>Cztery przepływomierze są przymocowane do elastycznej rurki PVC o średnicy 6,0 mm, która łączy się z portem wlotowym w każdej komorze indukcyjnej za pomocą plastikowego złącza żeńskiego. Te przepływomierze są przykręcone do metalowego pręta o wymiarach 6,5" x 1" x 1". Ten metalowy pręt jest przykręcony do manometru MI-246-P z wylotem DISS. Ten manometr i przepływomierz można przymocować do każdej nowej butli z gazem za pomocą klucza.</td></tr><tr><td>21% zbiornik O2</td><td>zbiornik AirGas</td><td>OX USP200</td><td></td></tr><tr><td>11% O2 tank</td><td></td><td>AirGas Specjalne zamówienie</td><td></td></tr><tr><td>8% zbiornika O2 tank&nbsp;</td><td>AirGas</td><td>Specjalistyczne zamówienie</td><td></td></tr><tr><td>15 L komory indukcyjne</td><td>VetEquip</td><td>941454</td><td></td></tr><tr><td>Moor Laber Dopper Flow&nbsp;</td><td>Instrumenty wrzosowiskowe&nbsp;</td><td>moorVMS-LDF1-HP</td><td>Sonda o średnicy 0,8 mm&nbsp;</td></tr><tr><td>Oświetlacz o wysokiej intensywności&nbsp;</td>Mikroskop stereoskopowy <td>Nikon</td><td>NI-150</td><td></td></tr><tr><td>z zoomem&nbsp;</td><td>NIkon</td><td>SMZ800</td><td>Można stosować inne mikroskopy chirurgiczne.&nbsp;</td></tr><tr><td>Kent Scientific Right Temperature CODA</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>Wycofane z produkcji</td><td>Zalecanym zamiennikiem jest PhysioSuite z monitorowaniem temperatury RightTemp i kontrolą homeotermiczną (Kent Scientific, #PS-RT).</td></tr><tr><td>Inkubator Hovabator</td><td>Stromberg's</td><td>2362-E</td><td>Nasz model to 2362N. 2362E to nowszy model i zawiera elektroniczny termostat.</td></tr><tr><td>V010 System anestezjologiczny&nbsp;</td><td>VetEquip</td><td>901807</td><td>Zawiera: wysokociśnieniowy wąż tlenowy o długości dziesięciu stóp, ramę, przepływomierz, zespół spłukiwacza tlenowego, parownik, obwód oddechowy, komorę, noski, rurkę odprowadzającą gazy odlotowe i dwa filtry VapoGuard</td></tr><tr><td>250 ml izofluranu&nbsp;</td><td>Butler Schein</td><td>NDC-11695</td><td></td></tr><tr><td>D-6 Vet Trim Akumulatorowa podkaszarka dla zwierząt&nbsp;</td><td>Andis&nbsp;</td><td>#23905</td><td>Wymienne ostrza są dostępne w Andis (#23995)</td></tr><tr><td>Betadine&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-898-867&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Q-tips</td><td>Wielu sprzedawców&nbsp;</td><td>Numer katalogowy niedostępny&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Płatki z gazy</td><td>Fisher Scientific</td><td>67622</td><td></td></tr><tr><td>Serweta chirurgiczna</td><td>Fisher Scientific</td><td>GM300&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Szwy jedwabne&nbsp;</td><td>Look/Div Specjalizacje Chirurgiczne</td><td>SP115</td><td></td></tr><tr><td>Nici nylonowe</td><td>Look/Div Specjalizacje Chirurgiczne</td><td>SP185</td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze Durmont #5 (2)&nbsp;</td><td>Narzędzia naukowe&nbsp;</td><td>11251-35</td><td>Kąt 45&deg;</td></tr><tr><td>Nożyczki chirurgiczne</td><td>Narzędzia do nauki pięknej&nbsp;</td><td>14028-10</td><td></td></tr><tr><td>3 mm Vannas</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>INS600177</td><td>Ostrze proste</td></tr><tr><td>Hartman Hemostats&nbsp;</td><td>Fine Scientific Tools</td><td>13002-10</td><td></td></tr><tr><td>Zamykanie filamentów</td><td>Zamówienie specjalistyczne</td><td>Uniwersytetu Waszyngtońskiego</td><td>Filamenty są powlekane silikonem na Uniwersytecie Waszyngtońskim i dostarczane do obiektów UTSW za opłatą.</td></tr>Bibuła filtracyjna <tr><td>Evans Blue</td><td>Sigma Aldritch</td><td>E2129-10G</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Sigma Aldritch</td><td>WHA1001150</td><td>150 mm, koła, Grade 1&nbsp;</td></tr><tr><td>Łodzie wagowe</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-202-101</td><td>Średnica 2,5 cala</td></tr><tr><td>0,9% Wtrysk chlorku sodu USP&nbsp;</td><td>Baxter Pharmaceutics&nbsp;</td><td>2B1321</td><td></td></tr><tr><td>Strzykawka insulinowa 0,3 cc z igłą o rozmiarze 29 Becton</td><td>Dickinson Labware</td><td>309301</td><td></td></tr><tr><td>Ogranicznik z płaskim dnem&nbsp;</td><td>Braintree Naukowe&nbsp;</td><td>FB&nbsp; M</td><td>Średnica 2,0"</td></tr><tr><td>TTC</td><td>Sigma</td><td>T8877</td><td></td></tr><tr><td>10x PBS, pH 7,4</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP399-20</td><td></td></tr><tr><td>Łaźnia wodna</td><td>Wielu sprzedawców&nbsp;</td><td>Numer katalogowy niedostępny&nbsp;</td><td>Rurki scyntylacyjne z TTC mogą być ręcznie trzymane pod bieżącą ciepłą wodą jako alternatywa dla kąpieli wodnej.</td></tr><tr><td>Płyta styropianowa</td><td>Wielu sprzedawców&nbsp;</td><td>Numer katalogowy niedostępny&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Duży zestaw strzykawek</td><td>PumpSystems Inc</td><td>P-SYRKIT-LG</td><td></td></tr><tr><td>Pompa perfuzyjna</td><td>PumpSystems Inc</td><td>NE-300&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Strzykawka 60 cc</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9203256</td><td></td></tr><tr><td>27 zestaw do infuzji ze skrzydłami</td><td>Kawasumi Laboratories, Inc</td><td>D3K1-25G 1</td><td></td></tr><tr><td>fiolka scyntylacyjna o pojemności 20 ml</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-367-126</td><td></td></tr><tr><td>Szpatułka ze stali nierdzewnej</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-373-25A</td><td></td></tr><tr><td>Alto akrylowy 1,0 mm mózg myszy, koronalny</td><td>CellPoint Naukowe&nbsp;</td><td>Numer katalogowy niedostępny&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Ostrza ze stali nierdzewnej 0,21 mm, 25 pk</td><td>CellPoint Scientific&nbsp;</td><td>Numer katalogowy niedostępny&nbsp;</td><td>Ostrza kriostatu wielokrotnego użytku to niedroga alternatywa.</td></tr><tr><td>4% paraformaldehyd</td><td>Santa Cruz Biotechnologia&nbsp;</td><td>SC-281692</td><td></td></tr><tr><td>Szkiełka mikroskopowe Superfrost&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>HP Scanjet G4050</td><td>Wielu sprzedawców&nbsp;</td><td>Numer katalogowy niedostępny&nbsp;</td><td>Inne komercyjne skanery są odpowiednie do tego kroku w protokole.</td></tr><tr><td>Obraz J&nbsp;</td>Numer <td>katalogowy Narodowego Instytutu Zdrowia</td><td>niedostępny&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Waga analityczna</td><td>METTLER TOLEDO&nbsp;</td>Kompaktowy piekarnik <td>precyzyjny XSE 205U</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>Thermo Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>PR305225M</tr><tr><td>Probówki do mikrowirówek 1,7 ml (Eppendorfs)</td><td>Denville Scientific&nbsp;</td><td>C2170</td><td></td></tr><tr><td>Formamid</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP228-100</td><td></td></tr><tr><td>96-dołkowe płytki</td><td>Fisher Scientific</td><td>07-200-9</td><td></td></tr><tr><td>Epokowy spektrofotometr mikropłytkowy&nbsp;</td><td>BioTek&nbsp;</td><td>Numer katalogowy niedostępny&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

kwantyfikacja ochrony nerwowo-naczyniowej po powtarzającym się kondycjonowaniu wstępnym hipoksyjnym i przejściowym zamknięciu tętnicy środkowej mózgu u myszy

Quantification of Neurovascular Protection Following Repetitive Hypoxic Preconditioning and Transient Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Eksperymentalne modele zwierzęce udaru są nieocenionymi narzędziami do zrozumienia patologii udaru i opracowania bardziej skutecznych strategii leczenia. 2-tygodniowy protokół powtarzającego się kondycjonowania wstępnego hipoksyjnego (RHP) indukuje długotrwałą ochronę przed uszkodzeniem ośrodkowego układu nerwowego (OUN) w mysim modelu ogniskowego udaru niedokrwiennego. RHP składa się z 9 stochastycznych ekspozycji na niedotlenienie, które różnią się zarówno czasem trwania (2 lub 4 godziny), jak i intensywnością (8% i 11%O2). RHP zmniejsza objętość zawału, zaburzenie bariery krew-mózg (BBB) i odpowiedź zapalną po udarze przez kilka tygodni po ostatniej ekspozycji na niedotlenienie, co sugeruje długotrwałą indukcję endogennego fenotypu chroniącego OUN. Metodologia podwójnej kwantyfikacji objętości zawału i zaburzenia bariery krew-mózg jest skuteczna w ocenie ochrony nerwowo-naczyniowej u myszy z RHP lub innymi przypuszczalnymi neuroprotektantami. Dorosłe samce szwajcarskich myszy Webster były wstępnie kondycjonowane przez RHP lub równoważną ekspozycji na 21%O2 (tj. powietrze w pomieszczeniu). 60-minutowe przejściowe zamknięcie tętnicy środkowej mózgu (tMCAo) zostało wywołane 2 tygodnie po ostatniej ekspozycji na niedotlenienie. Zarówno okluzję, jak i reperfuzję potwierdzono za pomocą przezczaszkowego laserowego dopplerowskiego flowmetrii. Dwadzieścia dwie godziny po reperfuzji Evans Blue (EB) został podany dożylnie poprzez wstrzyknięcie do żyły ogonowej. 2 godziny później zwierzęta uśmiercono z powodu przedawkowania izofluranu, a skrawki mózgu zabarwiono chlorkiem 2,3,5-trifenylotetrazolu (TTC). Objętość zawałów została następnie oznaczona ilościowo. Następnie EB ekstrahowano z tkanki przez 48 godzin w celu określenia przerwania BBB po tMCAo. Podsumowując, RHP jest prostym protokołem, który można powielić przy minimalnych kosztach w celu wywołania długotrwałej endogennej ochrony nerwowo-naczyniowej przed udarem mózgu u myszy, z potencjałem translacyjnym dla innych stanów prozapalnych opartych na OUN i ogólnoustrojowych.

W badaniu wzięło udział 25 samców myszy rasy Swiss Webster, które w momencie randomizacji do grupy RHP (n = 10) lub grupy 21% O2 (n = 15) miały 10 tygodni. Procedury chirurgiczne przeprowadzono dwa tygodnie po ostatniej ekspozycji na RHP, przy zastosowaniu metody ślepej próby oraz zrównoważeniem grup w poszczególnych dniach. Po tMCAo jedna mysz padła podczas rekonwalescencji pooperacyjnej, a jedna mysz została wykluczona z badania z powodu niespełnienia kryterium CBF dla reperfuzji. Obie wykluczone myszy należ...

Ten protokół opisuje powtarzające się wstępne kondycjonowanie hipoksyjne, czyli krótkie ekspozycje na niedotlenienie ogólnoustrojowe, które zmniejszają objętość zawału i zaburzenie bariery krew-mózg po przejściowym zamknięciu tętnicy środkowej mózgu u myszy. Szczegółowo opisano również podwójną kwantyfikację objętości zawału i przerwania bariery krew-mózg po udarze, aby ocenić skuteczność ochrony nerwowo-naczyniowej.

Kwantyfikacja ochrony nerwowo-naczyniowej po powtarzającym się kondycjonowaniu wstępnym hipoksyjnym i przejściowym zamknięciu tętnicy środkowej mózgu u myszy

Experimental animal models of stroke are invaluable tools for understanding stroke pathology and developing more effective treatment strategies. A 2 week ...

Ogólnym celem następnego eksperymentu jest ilościowe określenie neuroprotekcji po powtarzalnym prekondycjonowaniu hipoksją (RHP) poprzez jednoczesny pomiar objętości zawału oraz integralności bariery krew-mózg. Osiąga się to poprzez poddanie myszy dziewięciu stochastycznym ekspozycjom na hipoksję, zróżnicowanym pod względem czasu trwania i intensywności, aby zapewnić ochronę naczyniowo-nerwową przed udarem. Następnie u myszy indukuje się udar, po czym wykonuje się wstrzyknięcie błękitu Evansa.Błękit Evansa selektywnie wiąże albuminę, co pozwala na ilościowe określenie stopnia przerwania bariery krew-mózg po uśpieniu zwierzęcia po wstrzyknięciu preparatu. Mózg zostaje wyjęty i zabarwiony TTC w celu określenia objętości zawału. Wyniki wykazują działanie neuroprotekcyjne powtarzalnego prekondycjonowania hipoksją u myszy po udarze niedokrwiennym.Główną zaletą tej techniki w porównaniu z istniejącymi metodami, takimi jak jednorazowe warunkowanie hipoksyjne, jest fakt, że RHP zapewnia neuroprotekcję u myszy przez co najmniej osiem tygodni. Ta podwójna metoda ilościowa pozwala odpowiedzieć na kluczowe pytania w badaniach nad udarem, takie jak jednoczesny pomiar objętości zawału oraz stopn

quantification-neurovascular-protection-following-repetitive-hypoxic

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Okreslanie ochrony naczyń krwionośnych i układu nerwowego po wielokrotnym hipoksycznym prekondycjonowaniu i przejściowym zatorze tętnicy mózgowej w środkowej linii u myszy

Przybywa dowodów na to, że przeciwwarunkowanie niedokrwienne (PC) – nieuszkadzający bodziec niedokrwienny dla mózgu – zapewnia przejściową ochronę przed następującym po nim uszkadzającym niedokrwieniem. Zastosowaliśmy obustronną okluzję wspólnej tętnicy szyjnej (BCCAO) jako bodziec przeciwwarunkujący w celu wywołania wczesnej tolerancji na niedokrwienie (IT) w odpowiedzi na przejściowe ogniskowe niedokrwienie mózgu (wywołane okluzją środkowej tętnicy mózgowej, MCAO) u myszy C57Bl6/J.

Dwustronne zamknięcie wspólnych tętnic szyjnych jako odpowiedni bodziec prekondycjonujący w celu indukcji wczesnej tolerancji niedokrwiennej na ogniskowe niedokrwienie mózgu

Źródło: Zheng, Y., et al. Modele eksperymentalne do badania neuroprotekcji kwaśnego kondycjonowania końcowego przed niedokrwieniem mózgu. J. Vis. Exp. (2017)Ten film przedstawia zastosowanie kwaśnego kondycjonowania końcowego (APC) w celu oceny jego neuroprotekcyjnego działania przeciwko uszkodzeniu niedokrwiennemu w mysim modelu niedrożności tętnicy środkowej mózgu (MCAO). Przedstawiono w nim etapy związane z reperfuzją w modelu MCAO i zastosowaniem APC podczas reperfuzji w celu złagodzenia...

 Ocena neuroprotekcyjnego wpływu kwaśnego kondycjonowania końcowego w mysim modelu niedokrwienia mózgu

Źródło: Poinsatte, K., et al., K. Quantification of Neurovascular Protection Following Repetitive Hypoxic Preconditioning and Transient Middle Cerebral Artery Ocluzion in Mys. J. Vis. Exp. (2015)Ten film pokazuje metodę powtarzalnego kondycjonowania wstępnego hipoksyjnego (RHP) poprzez wystawienie myszy na kontrolowane cykle hipoksji przed wywołaniem udaru niedokrwiennego. Eksperyment ocenia jego wpływ na stabilność bariery krew-mózg, adaptację neuronów i stan zapalny.

Adaptacja neuronalna do powtarzającego się kondycjonowania wstępnego hipoksyjnego u myszy

Źródło: Lee, S. E., et al. Ocena neuroprotekcyjnego działania ekstraktu z Glycyrrhizae radix et rhizoma przy użyciu mysiego modelu przejściowej niedrożności tętnicy środkowej mózgu. J. Vis. Exp. (2018)Ten film przedstawia procedurę oceny neuroprotekcyjnego działania badanego związku w mysim modelu niedrożności tętnicy środkowej mózgu. Związek dostaje się do mózgu, zapobiega śmierci neuronów i zmniejsza objętość zawału, potwierdzając jego działanie neuroprotekcyjne w porównaniu z nieleczoną...

Ocena neuroprotekcyjnego działania badanego związku w mysim modelu niedrożności tętnicy środkowej mózgu

Aby zrozumieć patofizjologię udaru, ważne jest korzystanie z wiarygodnych modeli. W artykule opisano jeden z najczęściej stosowanych modeli udaru u myszy, określany jako model niedrożności tętnicy środkowej mózgu (MCAo) (określany również jako model włókna śródświetlnego lub szewu) z reperfuzją.

Podejście chirurgiczne do niedrożności tętnicy środkowej mózgu i udaru wywołanego reperfuzją u myszy

Chirurgiczne zamknięcie dystalnej gałęzi środkowej tętnicy mózgowej (MCAo) jest często używanym modelem w eksperymentalnych badaniach nad udarem. Manuskrypt ten opisuje podstawową technikę stałego MCAo, połączoną z wstawieniem bocznego okna czaszki, które daje możliwość podłużnej mikroskopii przyżyciowej u myszy.

Przygotowanie bocznego przewlekłego okna czaszki umożliwia obserwację in vivo po niedrożności dystalnej tętnicy środkowej mózgu u myszy

Opisujemy mysi model udaru wywołanego przez zamknięcie środkowej tętnicy mózgowej za pomocą szwu pokrytego silikonem. Protokół może być stosowany w celu wywołania trwałej okluzji lub tymczasowego niedokrwienia, a następnie reperfuzji.

Indukcja udaru niedokrwiennego i reperfuzji niedokrwiennej u myszy przy użyciu techniki niedrożności tętnicy środkowej i wizualizacji obszaru zawału

Kwaśne kondycjonowanie końcowe chroni przed niedokrwieniem mózgu. Poniżej przedstawiamy dwa modele do uruchamiania APC. Osiąga się je odpowiednio poprzez przeniesienie wycinków korowo-prążkowych do buforu kwaśnego po deprywacji tlenu i glukozy in vitro oraz przez wdychanie 20% CO2 po niedrożności tętnicy środkowej mózgu in vivo.

Modele eksperymentalne do badania neuroprotekcji kwaśnego kondycjonowania końcowego przeciwko niedokrwieniu mózgu

Mysi model niedokrwienia i reperfuzji mózgu został stworzony w celu zbadania patofizjologii udaru. Podwiązujemy dystalnie prawą środkową tętnicę mózgową i prawą tętnicę szyjną wspólną i przywracamy przepływ krwi po 10 lub 40 minutach niedokrwienia.

Mysi model zamknięcia dwóch naczyń niedokrwienia mózgu-reperfuzji

Ten protokół opisuje model przejściowego ogniskowego niedokrwienia mózgu u myszy poprzez śródświetlne zamknięcie środkowej tętnicy mózgowej. Dodatkowo przedstawiono przykłady oceny wyników z wykorzystaniem rezonansu magnetycznego i testów behawioralnych.

Przejściowy model niedrożności tętnicy środkowej mózgu

Tutaj prezentujemy protokół do ustalenia modelu dystalnej niedrożności tętnicy środkowej mózgu (dMCAO) poprzez przezczaszkową elektrokoagulację u myszy C57BL/6J i oceny późniejszego zachowania neurologicznego i cech histopatologicznych.

Indukcja ostrego udaru niedokrwiennego u myszy przy użyciu techniki niedrożności dystalnej tętnicy środkowej

Poznaj metodę kwantyfikacji ochrony nerwowo-naczyniowej po powtarzającym się kondycjonowaniu wstępnym hipoksyjnym u myszy. Technika umożliwia jednoczesne pomiar objętości zawału i integralności bariery krew-mózg.

Kwantyfikacja ochrony nerwowo-naczyniowej po powtarzającym się kondycjonowaniu wstępnym hipoksyjnym i przejściowym zamknięciu tętnicy środkowej mózgu u myszy (Wideo) | JoVE Journal

Kwantyfikacja ochrony nerwowo-naczyniowej po powtarzającym się kondycjonowaniu wstępnym hipoksyjnym i przejściowym zamknięciu tętnicy środkowej mózgu u myszy

Przeglądaj więcej filmów