Name: Izolacja komórek jednojądrzastych z ośrodkowego układu nerwowego szczurów za pomocą EAE (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-12-04T04:23:00.000+00:00
Duration: 20 min 51 s
Description: Naucz się izolować komórki jednojądrzaste z ośrodkowego układu nerwowego szczurów z wykorzystaniem perfuzji sercowej i gradientu Percolla. Ta metoda umożliwia uzyskanie żywych komórek do analiz cytometrii przepływowej i hodowli.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol>
<li> Głęboko znieczul szczury. Spryskaj 70% etanolem i przeprowadź perfuzję serca PBS przez 10 min w celu usunięcia komórek z naczyń krwionośnych (przetnij prawy przedsionek i wykonaj perfuzję przez lewą komorę).</li>
<li>Wyjmij mózg oraz rdzeń kręgowy i umieść je w probówce 50 ml zawierającej schłodzony PBS. Rozdrobnij mózg i rdzeń kręgowy w sitku komórkowym 70 mm umieszczonym w szalce Petriego 10 cm zawierającej 10 ml schłodzonego PBS. Przeciskaj każdy fragment organu przez sitko komórkowe, używając tłoka sterylnej strzykawki 1 ml. Zbierz zawiesinę pojedynczych komórek do probówki 50 ml na lodzie. Przepłucz sitko komórkowe PBS i dodaj płuczynkę do probówki, aż roztwór będzie klarowny.</li>
<li>Wiruj przez 8-10 min przy 390 g.</li>
<li>Resuspenduj komórki w 20 ml PBS + 30% Percoll i nałóż warstwą na 10 ml PBS + 70% Percoll.</li>
<li>Wiruj przy 390 g przez 20 min w temperaturze pokojowej.</li>
<li>Usuń warstwę tłuszczu z góry probówki. Zbierz komórki z interfejsu i przemyj je dwukrotnie PBS. Wykonaj pomiar liczby komórek.</li>
</ol>

<ol><li>Beeton, C., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+and+clinical+scoring+of+chronic-relapsing+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Induction and clinical scoring of chronic-relapsing experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Journal of Visualized Experiments. 5, Forthcoming.</li>
</ol>

Niniejsza procedura, podobnie jak wszystkie procedury z udziałem żywych zwierząt, musi zostać zatwierdzona przez komisję ds. etyki i opieki nad zwierzętami w Twojej instytucji. Zalecamy, aby podczas przeprowadzania pierwszych perfuzji serca obecny był lekarz weterynarii lub technik weterynaryjny, aby zapewnić zwierzęciu odpowiedni poziom znieczulenia przed i w trakcie procedury oraz uniknąć niepotrzebnego bólu lub stresu zwierząt.

<table><tbody><tr><td>PBS, 1x, sterylny</td><td>Odczynnik</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>14190-250</td><td></td></tr><tr><td>Sito do komórek, 70 um</td><td>Narzędzie</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-771-2</td><td></td></tr><tr><td>Percoll</td><td>Odczynnik</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1644</td><td></td></tr></tbody></table>

izolacja komórek mononuklearnych z ośrodkowego układu nerwowego szczurów z eae

Isolation of Mononuclear Cells from the Central Nervous System of Rats with EAE

Niezależnie od tego, czy bada się chorobę autoimmunologiczną skierowaną przeciwko ośrodkowemu układowi nerwowemu (OUN), taką jak eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia (EAE, 1), czy odpowiedź immunologiczną na infekcję OUN, taką jak poliomyelitis, neuroborelioza z Lyme lub neurosyfilis, często konieczne jest wyizolowanie naciekających OUN komórek odpornościowych.
W tym protokole wideo demonstrujemy, jak izolować komórki mononuklearne (MNCs) z ośrodkowego układu nerwowego (OUN) szczura z EAE. Pierwszy krok tej procedury wymaga perfuzji serca gryzonia roztworem soli fizjologicznej, aby upewnić się, że w naczyniach krwionośnych ukrwiających OUN nie pozostała krew. Jakiekolwiek zanieczyszczenie krwią sztucznie zwiększy liczbę pozornych MNCs infiltrujących OUN i może zmienić pozorny skład nacieku odpornościowego. Następnie pokazujemy, jak usunąć mózg i rdzeń kręgowy szczura w celu ich późniejszego rozdrobnienia w celu przygotowania zawiesiny pojedynczych komórek. Zawiesina ta jest rozdzielana na dwuwarstwowym gradiencie Percoll w celu izolacji MNCs. Po przemyciu komórki te są gotowe do przeprowadzenia dowolnej wymaganej procedury.
Komórki mononuklearne wyizolowane za pomocą tej procedury są żywotne i mogą być wykorzystane do elektrofizjologii, cytometrii przepływowej (FACS) lub biochemii. Jeśli technika ta jest przeprowadzana w warunkach sterylnych (przy użyciu sterylnych narzędzi w komorze do hodowli tkanek), komórki można również hodować w medium do hodowli tkanek. Daną populację komórek można dodatkowo oczyścić, stosując procedury separacji magnetycznej lub FACS.

W tym filmie demonstrujemy, jak izolować komórki mononuklearne z ośrodkowego układu nerwowego szczurów z eksperymentalnym autoimmunologicznym zapaleniem mózgu i rdzenia kręgowego.

Izolacja komórek mononuklearnych z ośrodkowego układu nerwowego szczurów z EAE

Niezależnie od tego, czy bada się chorobę autoimmunologiczną ukierunkowaną na ośrodkowy układ nerwowy (OUN), taką jak eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia (EAE, 1), czy...

Dzień dobry. Nazywam się Christine Beaton i jestem asystentką badawczą w laboratorium George'a Chen w Katedrze Fizjologii i Biofizyki na Uniwersytecie Kalifornijskim w Irvine. Dzisiaj pokażę Państwu, jak izolować komórki mononuklearne z ośrodkowego układu nerwowego szczurów.Niniejsza procedura polega na głębokim znieczuleniu szczura w celu przeprowadzenia perfuzji serca, aby wyeliminować zanieczyszczenie ośrodkowego układu nerwowego krwią. Po zakończeniu tego etapu pobierzemy mózg oraz rdzeń kręgowy, a następnie przygotujemy zawiesinę pojedynczych komórek przy użyciu sitka komórkowego. Następnie, wykorzystując dwuwarstwową gradientową separację w Percollu, wyizolujemy komórki mononuklearne. Przejdźmy zatem do realizacji.Jestem teraz gotowy do przeprowadzenia perfuzji serca, więc przedstawię wszystkie materiały, których do tego potrzebuję. Pierwszą rzeczą, której potrzebujemy, jest dzwonek szklany, a tutaj na dole umieściliśmy ręczniki papierowe nasączone lotnym środkiem anestetycznym. Można użyć halotanu lub izofluranu.W następnej kolejności potrzebujemy czegoś do unieruchomienia szczura oraz naczynia do zbierania krwi. Przygotowaliśmy zatem tymczasową instalację do perfuzji szczur

isolation-mononuclear-cells-from-central-nervous-system-rats-with

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Izolacja komórek jednojądrowych z otoczenia nerwowego szczurów z EAE

Niniejszy artykuł opisuje szybki protokół wydajnej izolacji komórek mononuklearnych z tkanek mózgu i rdzenia kręgowego, które mogą być skutecznie wykorzystane w analizach cytometrycznych.

Izolacja mononuklearnych komórek mózgu i rdzenia kręgowego z wykorzystaniem gradientów Percollu

W tym filmie przeprowadzamy izolację komórek jednojądrzastych z mózgu myszy za pomocą wirowania gradientu gęstości. Wyizolowaną zawiesinę komórek jednojądrzastych można wykorzystać do dalszej analizy.

Izolacja komórek jednojądrzastych z mózgu myszy: technika wirowania w gradimencie gęstości do izolowania komórek jednojądrzastych rezydujących w mózgu

Ten film pokazuje proces izolowania mikronaczyń mózgowych od szczurów poddanych eutanazji. Obejmuje preparację mózgu, oczyszczanie tkanki i trawienie mechaniczne, a następnie wielokrotne wirowanie w celu wyizolowania czystej frakcji mikronaczyń.

Metoda izolacji jednostek nerwowo-naczyniowych z mózgu szczura

Ten manuskrypt opisuje metody indukcji i oceny eksperymentalnego modelu autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia kręgowego (EAE), wraz z oceną rozmieszczenia komórek odpornościowych i poziomów cytokin mRNA w węzłach chłonnych, śledzionie, krwi i rdzeniu kręgowym za pomocą cytometrii przepływowej i ilościowego PCR, odpowiednio, w różnych fazach choroby.

Indukcja eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia kręgowego u myszy i ocena zależnej od choroby dystrybucji komórek odpornościowych w różnych tkankach

Wysiłki zmierzające do szczegółowego zrozumienia funkcji mikrogleju zostały utrudnione przez brak modeli hodowli mikrogleju, które podsumowują właściwości dojrzałego mikrogleju in vivo. Protokół ten opisuje podejście oparte na izolacji i hodowli, mające na celu utrzymanie solidnego przetrwania wysoce rozgałęzionego dojrzałego mikrogleju szczurów w warunkach o zdefiniowanej pożywce.

Izolacja i hodowla mikrogleju gryzoni w celu promowania dynamicznej, rozgałęzionej morfologii w pożywce wolnej od surowicy

Celem tego protokołu jest odizolowanie mikronaczyń z wielu regionów ośrodkowego układu nerwowego kręgowców lizencefalicznych i gyrencefalicznych.

Niezawodna izolacja mikronaczyń ośrodkowego układu nerwowego w pięciu grupach kręgowców

Dostarczamy protokół izolacji mikrogleju z różnych wypreparowanych obszarów półkuli mózgu dorosłej myszy, a następnie półautomatyczne przygotowanie biblioteki do głębokiego sekwencjonowania RNA pojedynczej komórki transkryptomów pełnej długości. Metoda ta pomoże wyjaśnić funkcjonalną heterogeniczność mikrogleju w zdrowiu i chorobie.

Izolacja specyficznego dla regionu mikrogleju z jednej dorosłej półkuli mózgu myszy w celu głębokiego sekwencjonowania RNA pojedynczej komórki

Ten manuskrypt przedstawia protokół indukcji aktywnego eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia (EAE) u myszy. Przedstawiono również metodę izolacji i charakterystyki naciekających limfocytów w ośrodkowym układzie nerwowym (OUN), aby pokazać, w jaki sposób limfocyty są zaangażowane w rozwój choroby autoimmunologicznej OUN.

Analiza cytometryczna przepływowa nacieku limfocytów w ośrodkowym układzie nerwowym podczas eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia kręgowego

Metoda izolacji nerwowych komórek macierzystych i komórek progenitorowych oligodendrocytów z mózgów żywych szczurów jest tutaj przedstawiona w szczegółach eksperymentalnych. Pozwala to na wielokrotne pobieranie tych komórek od tych samych zwierząt bez uszczerbku dla ich dobrostanu.

Metoda "dojenia mózgu" do izolacji nerwowych komórek macierzystych i komórek progenitorowych oligodendrocytów od żywych szczurów

To badanie przedstawia dwie techniki izolowania licznych pułapek zewnątrzkomórkowych neutrofili (NET) ze szpiku kostnego szczura. Jedna metoda łączy komercyjny zestaw do izolacji neutrofili z wirowaniem w gradionym przepływie gęstości, podczas gdy druga wykorzystuje tylko wirowanie w gradiencie gęstości. Oba podejścia dają funkcjonalne NET przewyższające te z neutrofili krwi obwodowej.

Unikalne podejście do izolowania neutrofili szpiku kostnego szczurów o porównywalnej pojemności

Do tej pory, protokoły jednoczesnej izolacji wszystkich głównych typów komórek rezydujących w ośrodkowym układzie nerwowym od tej samej myszy są niezaspokojonym wymaganiem. Protokół przedstawia procedurę mającą zastosowanie u myszy z nieleczonym i eksperymentalnym autoimmunologicznym zapaleniem mózgu i rdzenia w celu zbadania złożonych sieci komórkowych podczas zapalenia nerwów i jednoczesnego zmniejszenia wymaganej liczby myszy.

Jednoczesna izolacja głównych typów komórek rezydujących w ośrodkowym układzie nerwowym od dorosłych myszy z autoimmunologicznym zapaleniem mózgu i rdzenia

Naucz się izolować komórki jednojądrzaste z ośrodkowego układu nerwowego szczurów z wykorzystaniem perfuzji sercowej i gradientu Percolla. Ta metoda umożliwia uzyskanie żywych komórek do analiz cytometrii przepływowej i hodowli.

Izolacja komórek mononuklearnych z ośrodkowego układu nerwowego szczurów z EAE

Przeglądaj więcej filmów