Wyprowadzanie fibroblastów dorosłego człowieka i ich bezpośrednia konwersja do ekspandowalnych nerwowych komórek progenitorowych

Ogólnym celem tej procedury jest skrócenie klasycznego podejścia IPS Yamanaka poprzez bezpośrednie generowanie indukowanych nerwowych komórek progenitorowych z biopsji skóry pacjenta do zastosowań terapeutycznych. Osiąga się to poprzez wykonanie najpierw biopsji dziurkowej od pacjenta w celu uzyskania pierwotnych komórek fibroblastów, które można hodować in vitro. Drugim krokiem jest namnażanie, a następnie infekowanie hodowanych fibroblastów wirusami, które kodują czynniki przeprogramowujące w celu wywołania różnicowania trans.

Następnie, przypuszczalnie przekształcone indukowane neuronalne komórki progenitorowe lub kolonie INPC muszą być starannie wybrane przez walidację wizualną, a następnie wyizolowane przez ręczne pobieranie około 20 dni po zakażeniu. Ostatnim krokiem jest monoklonalne, namnażające się IPC w pożywce neuroindukcyjnej, ostatecznie ukierunkowane różnicowanie in vitro, a także mikroskopia immunofluorescencyjna jest wykorzystywana w celu wykazania, że pacjenci posiadający bezpośrednio przekształcone IPC są w stanie różnicować się w komórki neuronalne i glejowe, co czyni je praktycznie nieograniczonym źródłem zastosowań biomedycznych. Przewaga tej techniki bezpośredniej konwersji nad istniejącymi metodami, takimi jak wyprowadzanie indukowanych niebieskich silnych komórek macierzystych typu Yamanaka i ich późniejsze różnicowanie, jest dwojaka.