"Podobny do pacjenta" ortotopowy syngeniczny mysi model przerzutów raka wątrobowokomórkowego

Przerzutowe rozprzestrzenianie się raka jest główną przyczyną zgonów związanych z rakiem. Przedstawiamy szczegółowy opis naszej metodologii chirurgii przeżycia w celu ustanowienia "podobnego do pacjenta" ortotopowego syngenicznego modelu myszy do badania mechanizmów przerzutów w guzach narządów litych.

Ogólnym celem tej procedury jest stworzenie pacjenta, takiego jak Orthotopic Syngeneic mysiego systemu modelowego do badania mechanizmów przerzutów w raku wątrobowokomórkowym. Osiąga się to poprzez uprzednie przygotowanie mysich komórek raka wątrobowokomórkowego do implantacji. W drugim etapie otwiera się brzuch biorcy zwierzęcia syngenicznego, a komórki są ostrożnie wstrzykiwane do prawego płata wątroby.

Ostatecznie, sukces i powtarzalność tej metodologii rekomenduje ją do powszechnego stosowania w wyjaśnianiu biologicznych mechanizmów przerzutów raka wątrobowokomórkowego. Główną przewagą tej techniki nad istniejącymi technikami, takimi jak mysie modele ksenoprzeszczepów guzów, jest to, że nasz system genetycznych modeli nowotworów syn umożliwia badanie roli odpowiedzi immunologicznej w przerzutach guza. Tę procedurę zademonstruje mi Michelle Nadu, studentka studiów licencjackich z naszego laboratorium Aby przygotować komórki do implantacji, zacznij od dwukrotnego przemycia 60 do 70% zlewającej się kultury komórek raka wątrobowokomórkowego pięcioma mililitrami PBS.

Inkubuj kulturę komórkową z dwoma mililitrami trypsyny w temperaturze 37 stopni Celsjusza. Po pięciu minutach policz komórki i rozcieńcz je pięć razy od 10 do piątej komórki na mililitr PBS. Następnie przenieś 100 mikrolitrowych porcji komórek do jednej sterylnej mikroprobówki wirówkowej o pojemności 1,5 mililitra na mysz i umieść komórki na lodzie.

Przed przystąpieniem do zabiegu chirurgicznego należy potwierdzić prawidłowy poziom znieczulenia za pomocą palca u nogi. Uszczypnij, nałóż maść na oczy zdrowej dorosłej myszy bsy o wadze od 16 do 20 gramów i ogol się w obszarze około jednego cala wokół linii środkowej brzucha zwierzęcia. Następnie weź parę lateksowych rękawiczek i kilkakrotnie umyj odsłoniętą skórę mydlanym peelingiem dezynfekującym, a następnie sterylnym płukaniem PBS przez około pięć minut.

Po przygotowaniu skóry należy wyrzucić rękawice i założyć odpowiednie środki ochrony osobistej. Zapewnij zewnętrzne źródło ciepła, aby zapobiec hipotermii anestezjologicznej podczas zabiegu, a następnie umieść taśmę chirurgiczną na kończynach i ogonie zwierzęcia, aby ustawić mysz w pozycji leżącej. Następnie wykonaj proste nacięcie bezpośrednio poniżej mostka mieczykowatego i użyj sterylnego, samozatrzymującego się retraktora chirurgicznego, aby otworzyć brzuch.

Gdy wątroba jest widoczna, odessać jedną porcję komórek do jednomililitrowej strzykawki wyposażonej w igłę o rozmiarze 20 i powoli i ostrożnie wstrzyknąć wszystkie 100 mikrolitrów komórek raka wątrobowokomórkowego do prawego płata wątroby. Po wyjęciu igły należy przyłożyć sterylny bawełniany wacik na co najmniej jedną minutę, aby zatamować krwawienie. Następnie użyj wchłanialnego szwu, aby zamknąć tkankę podskórną, a następnie zamknij skórę.

Za pomocą klipsów chirurgicznych oczyść ranę innym peelingiem dezynfekującym i podskórnie podaj 100 mikrolitrów zwykłej soli fizjologicznej. Następnie bezpośrednio po zabiegu przenieś mysz do czystej klatki bez osób towarzyszących i z papierową ściółką na co najmniej 24 godziny. Te wątroby myszy BSY zostały wszczepione z pięcioma razy 10 do sześciu jeden ME. Mysie komórki raka wątrobowokomórkowego, jak właśnie pokazano.

Kliniczne dowody kliniczne rozwoju raka wątrobowokomórkowego można było zaobserwować 63 dni później, jak wskazano strzałką u jednej myszy. Na powierzchni wątroby zaobserwowano powierzchowny guz z pewnym przyczepem do ściany brzucha. Płuca tej myszy wykazywały nieprawidłową morfologię, a także wykazywały obszary widocznej martwicy krwotoku.

U drugiej myszy wątroba wydawała się rażąco nieprawidłowa, przy czym nieprawidłowość bardzo mocno przypominała powierzchowny guz zgodnie z oczekiwaniami kontroli. Myszy, które nie zostały wszczepione, nie rozwinęły guzów ani w wątrobie, ani w płucach. Po opanowaniu, ten ortotopowy model genetyczny myszy syn może stanowić dobrą platformę do wyjaśnienia biologicznych mechanizmów przerzutów i raka wątrobowokomórkowego.