Wysokowydajny i ekonomiczny system ekspresji ludzkich granzymów w komórkach ssaków

Ogólnym celem tej procedury jest uzyskanie wysokich plonów glikozylowanych i enzymatycznie aktywnych granzymów foliowych w ludzkich embrionalnych komórkach T nerki 2 93. Osiąga się to poprzez najpierw rozprężanie limfocytów T HEC 2 93 w odpowiednich szalkach do hodowli tkankowej. Typowy rozmiar preparatu po ekspansji składa się z 20 do 25 naczyń hodowlanych.

Drugim krokiem jest przejściowa transfekcja ekspandowanych komórek plazmidem o ekspresji granzyma przy użyciu wydajnej metody fosforanu wapnia. Następnie zbiera się supernat komórkowy, a wydzielane wielkie enzymy są oczyszczane za pomocą unieruchomionej chromatografii powinowactwa do metali. Ostatnim krokiem jest aktywacja wielkich enzymów poprzez leczenie kinazą wejściową i dalsze oczyszczanie proteaz za pomocą chromatografii kationowymiennej.