Name: Całkowicie laserowy przeszczep śródbłonka (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 59 s
Description: Poznaj całkowicie laserową technikę przeszczepu śródbłonka rogówki z wykorzystaniem lasera femtosekundowego. Minimalnie inwazyjna metoda zmniejsza ryzyko przemieszczenia płatka i poprawia przyczepność tkanki dawcy już jeden dzień po zabiegu.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy pragną podziękować projektowi FORTE, finansowanemu przez Region Toskanii (POR CReO FESR 2007-2013, Bando Unico R&S 2012), eksperymentowi ECHORD++ LA-ROSES w ramach 7PR, który częściowo wsparł działania badawcze, oraz projektowi BiophotonicPlus "LITE" w ramach 7PR, przyznanemu przez Region Toskanii.

Badanie zostało przeprowadzone za prospektywną zgodą Komisji Etyki szpitala; uzyskano świadomą zgodę. Badanie było zgodne z założeniami Deklaracji Helsińskiej.
1. Przygotowanie śródbłonka dawcy
<ol>
	<li>Użyj rogówki dawcy przygotowanej przez lokalny bank oczu w temperaturze pokojowej.</li>
	<li>Na sali operacyjnej wyciągnij rogówkę dawcy z pojemnika do podawania i odłóż roztwór do konserwacji i odżywiania tkanek, który jest używany do transportu rogówki.</li>
	<li>Umieść obrzeże rogówki i twardówki dawcy nad sztuczną komorą przednią, do której może wpływać płyn i wytwarzać zmienne ciśnienie; przykryj rogówkę głowicą zatrzymującą tkankę.</li>
	<li>Podłącz sztuczną przednią komorę (AAC) przez 3-drożny łącznik do strzykawki wypełnionej płynem do konserwacji i odżywiania rogówki.</li>
	<li>Użyj pierścienia zaciskowego, aby bezpiecznie przytrzymać ustalacz na miejscu.</li>
	<li>Za pomocą strzykawki podłączonej do AAC należy użyć strzykawki podłączonej do układu AAC, aby utrzymać ciśnienie w komorze wewnątrzkomorowej: napełnić przednią komorę roztworem do konserwacji tkanek aż do osiągnięcia optymalnego ciśnienia (patrz 1.7). Zamknij łącznik.</li>
	<li>Sprawdź palcem ciśnienie wewnątrz przedniej komory. Zmieniaj ciśnienie wewnętrzne, aż do osiągnięcia odpowiedniego ciśnienia wewnętrznego (w zakresie 60–70 mmHg). Zamknij złącze 3-stykowe.</li>
	<li>Zmierz grubość rogówki dawcy za pomocą optycznej tomografii koherentnej (OCT). Utrzymuj przednią komorę z tą rogówką w stałej pozycji przed optyką instrumentu, a następnie wykonaj akwizycję pełnej grubości OCT.</li>
</ol>
2. Laserowe przygotowanie śródbłonka dawcy za pomocą lasera femtosekundowego
<ol>
	<li>Wykonaj aplanację rogówki dawcy pod urządzeniem lasera femtosekundowego. Za pomocą lasera femtosec przeciąć tkankę dawcy za pomocą trzech kolejnych cięć: nacięcia po stronie tylnej, pełnego nacięcia blaszkowego i cięcia po stronie przedniej. Ustaw następujące parametry dla trzech cięć.
	<ol>
		<li>Dla pełnego cięcia lamelarnego (wzór rasterowy, początek) należy ustawić głębokość cięcia odpowiadającą najcieńszemu punktowi rogówki dawcy (mierzonej za pomocą OCT zgodnie z opisem w 1.8), zawsze odejmując 95 μm. Ustaw energię impulsu w zakresie 0,8-0,9 μJ (w zależności od głębokości roboczej). Ustaw średnicę na 8,7 mm. Ustawić separację punktów stycznych na 2 μm. Ustawić promieniową separację punktową na 2 μm.</li>
		<li>W przypadku cięcia po stronie przedniej należy ustawić głębokość tylną o 30 μm głębiej niż w przypadku poprzedniego pełnego cięcia lamelarnego. Ustaw energię impulsu na 2,10 μJ; średnica do 8,6 mm; separacja punktowa do 3 μm, natomiast separacja warstw do 3 μm.</li>
		<li>W przypadku cięcia po stronie tylnej należy zlokalizować przednią głębokość cięcia po stronie tylnej 30 μm do przodu niż pełne cięcie blaszkowe. Ustaw tylną głębokość na 900 μm. Ustaw energię impulsu na 2,10 μJ; średnica do 8,3 mm; separacja punktowa do 2 μm; separacja warstw do 2 μm.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Przygotowanie oczu odbiorcy
<ol>
	<li>Przygotuj pacjenta do zabiegu. Wykonaj jedno nacięcie rogówki o średnicy 4,00 mm na godzinie 12 za pomocą wstępnie skalibrowanego ostrza o średnicy 4,0 mm. Wykonaj jedną paracentezę rąbkową za pomocą wstępnie skalibrowanego ostrza 1,2 mm, umieszczonego na godzinie 2. Wykonaj kolejną paracentezę rąbka o godzinie 6 za pomocą noża kłutego pod kątem 30°.</li>
	<li>Wprowadzić podtrzymujący przednią komorę do przedniej komory pacjenta, przez paracentezę godziny 2.</li>
	<li>Wykonaj jeden zjazd kołowy o średnicy 8,2 mm za pomocą dedykowanego haka.</li>
	<li>Usuń błonę Descemeta i śródbłonek z tylnego zrębu i usuń tkanki za pomocą haczyka Descemeta.</li>
</ol>
4. Przygotowanie chromoforu
<ol>
	<li>Umieścić 1 mg zielonego proszku indocyjaniny w probówce mikrowirówkowej o pojemności 1,5 ml.</li>
	<li>Dodać 9 mg sterylnej wody (roztwór wodny ICG ma 10% w/w).</li>
	<li>Ręcznie wymieszaj proszek ICG i wodę za pomocą metalowego mieszadła.</li>
</ol>
5. Barwienie śródbłonka dawcy
<ol>
	<li>Umieść śródbłonek dawcy na szerszej części wstrzykiwacza Busin, tak aby wewnętrzna strona stykała się z powierzchnią wtryskiwacza.</li>
	<li>Wewnętrzną stronę śródbłonka dawcy zabarwić roztworem chromoforu, w jego części obwodowej, za pomocą szpatułki. Prawidłowo wybarwiona tkanka ma jednorodny zielonkawy kolor. Odczekaj 3 minuty przed rozpoczęciem kroku 5.3.</li>
	<li>Pociągnij śródbłonek dawcy na przedniej części wstrzykiwacza Busin, zwinięty.</li>
</ol>
6. Zakładanie śródbłonka dawcy
<ol>
	<li>Chwyć i włóż złożony śródbłonek dawcy za pomocą atraumatycznych współosiowych kleszczy do soczewki śródbłonka.</li>
	<li>Zdemontować konserwator komory przedniej.</li>
	<li>Zszyj nacięcie rogówki i paracentezę (wykonaną w kroku 3.1) za pomocą pojedynczego szwu Nylon 10.0.</li>
	<li>Wstrzyknąć pęcherzyk powietrza, aby rozłożyć tkankę dawcy i przycisnąć ją do rogówki biorcy. Pęcherzyk powietrza musi całkowicie wypełnić przednią przestrzeń komory.</li>
</ol>
7. Spawanie laserowe
<ol>
	<li>Umieścić soczewkę dawcy na środku rogówki biorcy, od wewnątrz za pomocą haczyka lub przesuwając pęcherzyk powietrza od zewnątrz rogówki za pomocą szpatułki.</li>
	<li>Użyj lasera diodowego emitującego energię o długości fali 810 nm, wyposażonego w sterylny światłowód o średnicy rdzenia 300 μm, z aperturą numeryczną 0,22 (NA).</li>
	<li>Trzymaj końcówkę włókna na zewnątrz gałki ocznej i dostarczaj światło lasera w kierunku zabarwionego śródbłonka przez przezroczystą tkankę rogówki. Końcówka światłowodu jest w konfiguracji bezdotykowej.</li>
	<li>Użyj następujących ustawień dla lasera: tryb emisji pojedynczej plamki, czas trwania impulsu 70–80 ms, 35–40 mJ na impuls. Włączony wiązka celownicza He-Ne.</li>
	<li>Dostarczyć pojedyncze plamki laserowe na barwione obrzeża śródbłonka dawcy. Dostarczaj plamki sekwencyjnie: ostatnim aspektem jest pierścień plamek na obrzeżach soczewki dawczej. Odległość między dwoma sąsiednimi punktami w środku jest równa podwójnej średnicy plamki.</li>
	<li>Nałożyć soczewkę kontaktową na oko pacjenta wraz z 0,3% tobramycyną i 0,1% zawiesiną okulistyczną deksametazonu.</li>
</ol>

<ol><li>Tan, D. T., Dart, J. K., Holland, E. J., Kinoshita, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Corneal transplantation.</a> Lancet. 379 (9827), 1749-1761 (2012).</li>
<li>El Husseiny, M. A., Manero, F., Gris, O., Elies, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Historical+Review+and+Update+of+Surgical+Treatment+for+Corneal+Endothelial+Diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmol+Ther%22%5BJournal%5D)">Historical Review and Update of Surgical Treatment for Corneal Endothelial Diseases.</a> Ophthalmol Ther. , (2014).</li>
<li>Rossi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+tissue+welding+in+ophthalmic+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biophotonics%22%5BJournal%5D)">Laser tissue welding in ophthalmic surgery.</a> J Biophotonics. 1 (4), 331-342 (2008).</li>
<li>Pini, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combining+femtosecond+laser+ablation+and+diode+laser+welding+in+lamellar+and+endothelial+corneal+transplants%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+SPIE+Ophthalmic+Technologies+XVIII%22%5BJournal%5D)">Combining femtosecond laser ablation and diode laser welding in lamellar and endothelial corneal transplants.</a> Proc. SPIE Ophthalmic Technologies XVIII. 6 (844), 684411-1-684411-7 (2008).</li>
<li>Rossi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((All-laser%27+endothelial+corneal+transplant+in+human+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+SPIE+Ophthalmic+Technologies+XXII%22%5BJournal%5D)">All-laser' endothelial corneal transplant in human patients.</a> Proc. SPIE Ophthalmic Technologies XXII. 8209, 82091O-1-82091O-3 (2012).</li>
<li>Rossi, F., Pini, R., Menabuoni, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+and+model+analysis+on+the+temperature+dynamics+during+diode+laser+welding+of+the+cornea%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Opt%22%5BJournal%5D)">Experimental and model analysis on the temperature dynamics during diode laser welding of the cornea.</a> J Biomed Opt. 12 (1), 014031-1-014031-7 (2007).</li>
<li>Menabuoni, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-assisted+corneal+welding+in+cataract+surgery%3A+retrospective+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cataract+Refract+Surg%22%5BJournal%5D)">Laser-assisted corneal welding in cataract surgery: retrospective study.</a> J Cataract Refract Surg. 33 (9), 1608-1612 (2007).</li>
<li>Buzzonetti, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+Welding+in+Penetrating+Keratoplasty+and+Cataract+Surgery+in+Pediatric+Patients.+Early+Results%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cataract+Refract+Surg%22%5BJournal%5D)">Laser Welding in Penetrating Keratoplasty and Cataract Surgery in Pediatric Patients. Early Results.</a> J Cataract Refract Surg. 39 (12), 1829-1834 (2013).</li>
<li>Menabuoni, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+%27anvil%27+profile+in+femtosecond+laser-assistedpenetrating+keratoplasty%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">The 'anvil' profile in femtosecond laser-assistedpenetrating keratoplasty.</a> Acta Ophthalmol. 91 (6), e494-e495 (2013).</li>
<li>Canovetti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-assisted+penetrating+keratoplasty%3A+one+year%E2%80%99s+results+in+patients%2C+using+a+laser-welded+%E2%80%9Canvil%E2%80%9D-profiled+graft%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Laser-assisted penetrating keratoplasty: one year’s results in patients, using a laser-welded “anvil”-profiled graft.</a> Am J Ophthalmol. 158 (4), 664-670 (2014).</li>
</ol>

Autorzy oświadczają, że nie mają konkurencyjnych interesów finansowych.

"All laserowy" przeszczep śródbłonka jest oryginalnym podejściem do małoinwazyjnego przeszczepu rogówki.
Wszystkie zabiegi opisane w protokole zostały wykonane na sali operacyjnej, z zachowaniem procedury higienicznej i sterylizacyjnej, które są powszechną praktyką podczas operacji, takich jak stosowanie wysterylizowanych rękawiczek, fartuchu, maski i czepka. Roztwór ICG został przygotowany na sali operacyjnej, na krótko przed jego zastosowaniem do barwienia śródbłonka dawcy. Proszek ICG, woda...

W tej pracy prezentujemy oryginalne podejście do keratoplastyki śródbłonka, oparte na użyciu lasera femtosekundowego do przygotowania tkanki dawcy i lasera diodowego bliskiej podczerwieni do przyspawania jej do łoża biorcy. Śródoperacyjny pomiar rogówki dawcy jest niezbędny do prawidłowego zaprojektowania wymiarów tkanki dawcy. W ostatnich latach zaproponowano keratoplastykę śródbłonka w celu zastąpienia keratoplastyki penetrującej w leczeniu chorób śródbłonka1,2. Główną zaletą tej techniki jest szybsza rekonwalescencja wzrokowa w odniesieniu do keratoplastyki penetrującej, zmniejszone znieczulenie podczas operacji, zmniejszone ryzyko odrzucenia przeszczepu i zachowanie integralności oka. Głównym czynnikiem ryzyka jest pooperacyjne zwichnięcie soczewki dawcy. Standardowa technika polega na wprowadzeniu śródbłonka dawcy w jego końcowej pozycji, w której jest on utrzymywany przez wstrzyknięcie pęcherzyka powietrza: nie stosuje się szwów ze względu na mechaniczne, biofizyczne i wymiarowe cechy śródbłonka. Co więcej, odzyskanie ostrości wzroku może być ograniczone głównie z powodu niezgodności między tkankami dawcy i biorcy z powodu przeszczepionej grubej tkanki.
Tutaj prezentujemy procedurę wykonywania keratoplastyki śródbłonka, która może przezwyciężyć te główne problemy. Śródbłonek dawcy może być zapewniony w swoim końcowym położeniu dzięki zastosowaniu techniki spawania laserowego. Jest to kontrolowany i zlokalizowany proces fototermiczny: może być indukowany na granicy faz dawca/biorca. Był badany w ciągu ostatnich dziesięciu lat i proponowany w keratoplastyce penetrującej oraz w przeszczepie śródbłonka3-5. Światło bliskiej podczerwieni (długość fali: 810 nm) emitowane przez laser diodowy małej mocy jest dostarczane w kierunku tkanki biologicznej w miejscu rany. Rogówka jest naturalnie przezroczysta dla tej długości fali: aby ta tkanka pochłaniała światło lasera, konieczne jest zabarwienie jej chromoforem. Proponowany barwnik jest sterylnym nasyconym roztworem wodnym zieleni indocyjaninowej (ICG). Wykazaliśmy, że gdy tkanka rogówki jest odpowiednio wybarwiona tym preparatem ICG, wykazuje pik absorpcji przy 810 nm6. Co więcej, ICG jest szeroko stosowany w diagnostyce klinicznej, a jego bezpieczeństwo zostało już wykazane u ludzi. Zabarwiona rogówka pochłania energię światła lasera diodowego, a głównym efektem końcowym jest kontrolowany wzrost temperatury w miejscu spawania. W niezabarwionych tkankach nie są wywoływane żadne efekty termiczne. Poprawa temperatury indukuje odwracalną denaturację termiczną kolagenu zrębu, z natychmiastowym zamknięciem ścian rany po schłodzeniu. Ten efekt spawania laserowego został po raz pierwszy zademonstrowany w chirurgii zaćmy7,8 i keratoplastyce penetrującej9,10. Zoptymalizowane podejście, które prezentujemy w tym artykule, zostało zbadane pod kątem zastosowania w keratoplastyce śródbłonka.
W proponowanej operacji, pojedyncze plamki laserowe (trwające dziesiątki ms) są dostarczane do tkanki, co powoduje efekt fototermiczny zlokalizowany w wymiarze plamki (kilkaset μm średnicy): efektem indukowanym jest twarde spawanie laserowe, składające się z fotokoagulacji kolagenu zamkniętego na granicy dawca/gospodarz. Efektem denaturacji kolagenu w miejscu zgrzewania jest silna adhezja między tkankami dawcy i gospodarza, zapewniając tym samym efekt szycia, który jest niemożliwy do uzyskania standardową techniką (szwy). Tkanka odzyskuje swój naturalny wygląd w krótkim okresie obserwacji (1 miesiąc), a adhezja między tkankami dawcy/gospodarza ulega poprawie dzięki spawaniu zapewnionemu na bardzo wczesnym etapie fazy gojenia.
Aby uniknąć innego głównego ryzyka keratoplastyki śródbłonka, tj. przeszczepu grubej tkanki dawcy, stosuje się intrachirurgiczną optyczną tomografię koherentną (OCT): komercyjne urządzenie mierzy grubość rogówki dawcy, dzięki czemu można zaprojektować prawidłowy profil cięcia za pomocą lasera femtosec. Proponowany "całkowicie laserowy" przeszczep śródbłonka wydaje się zatem poprawiać wyniki kliniczne tej minimalnie inwazyjnej operacji.

<table><tbody><tr><td>Indocyanine Green</td><td>Pulsion Medical Systems, Niemcy</td><td>ICG-PULSION (http://www.pulsion.com/international-english/perfusion/icg-pulsion/)</td><td>Produkt alternatywny: IC-GREEN, Akorn&nbsp; Inc., Lake Forest, Illinois- US (http://www.icginjection.com/)</td></tr><tr><td>Laser femtosekundowy&nbsp;</td><td>Optyka medyczna Abbott,&nbsp; Abbott Laboratories Inc. Abbott Park, Illinois, Stany Zjednoczone</td><td>iFS150 (http://www.abbottmedicaloptics.com/products/refractive/ilasik/ifs-advanced-femtosecond-laser)</td><td></td></tr><tr><td>Optyczna tomografia koherentna (OCT)</td><td>Carl-Zeiss Meditec, Dublin, Kalifornia- USA (http://www.zeiss.com/meditec/en_de/home.html)</td><td>Visante</td><td></td></tr><tr><td>Diode Laser</td><td>E.l.En. Grupa s.pa., Calenzano-FI, Włochy (http://www.elengroup.com/en/divisions/medical)</td><td>Mod. WELD 800</td><td></td></tr><tr><td>Sztuczna komora przednia</td><td>CORONET, produkty do przeszczepów rogówki. Network Medical Products Ltd. Coronet House, Kearsley Road, Ripon, North Yorkshire, HG4 2SG, Wielka Brytania</td><td>Sztuczna komora przednia (A.A.C.) z dużymi i małymi głowicami zatrzymującymi tkanki. Kod 51-935 (http://www.networkmedical.co.uk/ophthalmic_artificial_ anterior_chamber.html)</td><td></td></tr><tr><td>Roztwór do konserwacji i odżywiania tkanek&nbsp; &nbsp;</td><td>Al. CHI.MI.A. Srl, Viale Austria 14, 35020 - Ponte S. Nicol&ograve; - PD &nbsp; WŁOCHY</td><td>Pożywka Carry-C do deturgescencji rogówki i transportu w temperaturze pokojowej - 12 x 50 ml (http://www.alchimiasrl.com/en/organ-culture-at-31&deg;-c-eb/carry-c-eb)</td><td></td></tr></tbody></table>

"całkowicie laserowy" przeszczep śródbłonka

An &#8220;All-laser&#8221; Endothelial Transplant

Zabieg keratoplastyki śródbłonka wspomagany "w całości laserem" to zabieg, który jest wykonywany za pomocą lasera femtosekundowego używanego do cięcia tkanki dawcy na zamierzonej głębokości, oraz lasera diodowego bliskiej podczerwieni do spawania tkanki rogówki. Proponowana technika pozwala osiągnąć trzy główne cele w keratoplastyce śródbłonka: precyzyjną kontrolę grubości tkanki dawcy; Łatwe wprowadzenie do łoża biorcy i zmniejszenie ryzyka zwichnięcia soczewki dawcy. Grubość rogówki dawcy jest mierzona na sali operacyjnej za pomocą optycznej koherentnej tomografii (OCT), w celu prawidłowego zaprojektowania wymiarów tkanki dawcy. Laser femtosekundowy służy do przecięcia rogówki dawcy. Oko biorcze jest przygotowywane poprzez ręczne zdejmowanie powłoki z błony brzusznej. Śródbłonek dawcy jest wprowadzany do wstrzykiwacza Busin, obwodowa strona wewnętrzna jest barwiona odpowiednim chromoforem (wodnym roztworem zieleni indocyjaninowej), a następnie jest wciągana do komory przedniej. Przeszczepioną tkankę umieszcza się w docelowym i prawidłowym miejscu, a następnie indukuje się spawanie laserem diodowym z zewnątrz gałki ocznej. Zabieg został przeprowadzony u ponad 15 pacjentów, co świadczy o poprawie wydajności operacyjnej, z dobrym przywróceniem ostrości wzroku i zmniejszeniem zwichnięcia soczewki dawczej.

Procedura chirurgiczna typu „all laser” jest proponowana do przeprowadzania małoinwazyjnej transplantacji rogówki. Procedura jest łatwa do wykonania (patrz Rysunek 1): w porównaniu do standardowego przeszczepu śródbłonkowego dodano jedynie etapy pomiaru grubości rogówki, barwienia tkanki dawcy oraz dostarczania światła laserowego. Uzyskane korzyści w dużej mierze rekompensują wydłużenie czasu zabiegu o kilka min. Zastosowanie śródoperacyjnego OCT do pomiaru grubości rogówki dawcy oraz lasera femtosekundo...

W przeszczepie śródbłonka proponuje się całkowicie laserową procedurę. Technika chirurgiczna opiera się na wykorzystaniu lasera femtosekundowego do przygotowania tkanki dawcy. Następnie stosuje się technikę spawania laserowego, aby zabezpieczyć śródbłonek dawcy we właściwej pozycji.

"Całkowicie laserowy" przeszczep śródbłonka

The &#8220;all laser&#8221; assisted endothelial keratoplasty is a procedure that is performed with a femtosecond laser used to cut the donor tissue at an ...

Ogólnym celem tej procedury jest wykonanie całkowicie laserowej, minimalnie inwazyjnej operacji przeszczepu cienkich entent rogówki. Osiąga się to poprzez najpierw zmierzenie rogówki dawcy i przecięcie jej drugim laserem Femto. Następnie wykonuje się nacięcia w łożysku rogówki biorcy, a błona desme i śródbłonek są usuwane w celu przygotowania tkanki dawcy.Następnie płat dawcy jest barwiony i wkładany w ostateczną pozycję. Na koniec dawca jest spawany laserowo do rogówki biorcy. Ostatecznie zrost śródbłonka dawcy można zauważyć już dzień po zabiegu.Główną zaletą tej techniki w porównaniu z istniejącą metodą, taką jak standardowa, jest to, że dzięki laserowemu zwichnięciu płata po operacji zmniejsza się ryzyko zwichnięcia. Implikacje tej techniki rozciągają się w kierunku chirurgii przeszczepu rogówki, ponieważ zastosowanie procedury spawania laserowego było również badane w neurochirurgii i laryngologii. Ogólnie rzecz biorąc, osoby nowe w tej metodzie nie będą walczyć, ponieważ jest ona bardzo łatwa do wykonania.Aby rozpocząć na sali operacyjnej, wyjmij rogówkę dawcy z pojemnika do podawania w temperaturze pokojowej i odstaw na bok roztwór do transportu rogówki. Podłącz sztuczną komorę przednią lub C przez trójdrożny łącznik do strzykawki wypełnionej konserwacją i odżywianiem rogówki. Ciecz. Umieść krawędź twardówki rogówki dawcy nad sztuczną komorą, do której może wpływać płyn i wytwarzać zmienne ciśnienie.Następnie głowicą zatrzymującą tkankę zakryj rogówkę. Następnie użyj pierścienia zaciskowego, aby bezpiecznie przytrzymać element ustalający na miejscu. Następnie, ze strzykawką podłączoną do AAC, aby utrzymać ciśnienie wewnątrzkomorowe, użyj roztworu do konserwacji tkanek, aby wypełnić przednią komorę aż do osiągnięcia optymalnego ciśnienia.Następnie zamknij złącze trójdrożne palcem. Sprawdź ciśnienie wewnątrz przedniej komory, regulując je, aż do osiągnięcia prawidłowego ciśnienia wewnętrznego. Aby zmierzyć grubość rogówki dawcy, utrzymuj przednią komorę z rogówką w ustalonej pozycji i za pomocą optycznej koherentnej tomografii lub OCT.Wykonaj pomiar OCT o pełnej grubości, aby przeciąć tkankę dawcy Po wyjaśnieniu aplikacji zacznij od pełnego lam lub cięcia, ustawiając głębokość cięcia odpowiadającą najcieńszemu punktowi rogówki dawcy minus 95 mikronów. Ustaw energię impulsu w zakresie od 0,8 do 0,9 mikrodżuli. Ustaw średnicę na 8,7 milimetra.Ustaw separację plamek stycznych na dwa mikrometry i ustaw separację plamek promieniowych na dwa mikrometry w miejscu, w którym przecina się przednia strona. Ustaw głębokość tylną o 30 mikrometrów głębiej niż poprzednia pełna lamira. Ciąć. Ustaw energię impulsu na 2,10 mikrodżuli, średnicę na 8,6 milimetra dla tylnej strony. Ciąć.Zlokalizuj przednią głębokość tylnej strony i przytnij 30 mikrometrów do przodu do pełnego lam lub cięcia. Ustaw głębokość tylną na 900 mikrometrów. Ustaw energię impulsu na 2,10 mikrodżuli.Średnica do 8,3 milimetra, separacja punktowa do dwóch mikrometrów i separacja warstw do dwóch mikrometrów. Następnie wykonaj cięcie, aby przygotować pacjenta do operacji za pomocą wstępnie skalibrowanego ostrza o średnicy 1,2 milimetra. Wykonaj paracentezę rąbka na godzinie drugiej przez paracentezę na godzinie drugiej.Wprowadzić konserwator komory przedniej do komory przedniej pacjenta. Następnie za pomocą noża kłutego pod kątem 30 stopni. Wykonaj drugą paracentezę rąbkową o godzinie szóstej.Użyj wstępnie skalibrowanego ostrza o średnicy 2.0 milimetra, aby wykonać nacięcie rogówki o godzinie 2.00 na godzinie 12. Następnie za pomocą dedykowanego haka wykonaj jedną okrągłą desme lub oś o średnicy 8,2 milimetra. Usuń błonę desme i śródbłonek z tylnego zrębu i użyj haczyka desme, aby usunąć tkanki.Aby przygotować chromofor do barwienia tkanki dawcy, dodaj jeden miligram zieleni indocyjaninowej lub proszku ICG do 1,5 mililitrowej mikroprobówki wirówkowej. Następnie dodaj dziewięć miligramów sterylnej wody za pomocą metalowego mieszadła. Ręcznie wymieszać roztwór ICG, aby zawiesić proszek.Umieść śródbłonek dawcy na szerszej części nadużyć i wstrzyknij wstrzykiwacz tak, aby wewnętrzna strona stykała się z powierzchnią wstrzykiwacza. Za pomocą szpatułki dodaj roztwór chromo four na wewnętrzną stronę śródbłonka dawcy, aby zabarwić go na jednorodny zielony kolor. Po odczekaniu trzech minut zwiń śródbłonek i włóż go do przedniej części wstrzykiwacza busin.Za pomocą atraumatycznych kleszczy współosiowych chwyć i włóż złożony śródbłonek dawcy za pomocą pojedynczego nylonowego ściegu 10,0. Zszyj nacięcie rogówki i paracentezę. Wstrzyknąć pęcherzyk powietrza całkowicie wypełniający przestrzeń komory przedniej, aby rozłożyć tkankę dawcy i docisnąć ją do rogówki biorcy.Następnie wyjmij konserwator przedniej komory od wewnątrz za pomocą haczyka lub za pomocą szpatułki, aby przesunąć pęcherzyk powietrza z zewnątrz. Umieścić lenti dawcy na środku rogówki biorcy. Ustaw laser DDE emitujący 810 nanometrów z średnicą rdzenia 300 mikrometrów, sterylnym światłowodem i aperturą numeryczną 0,22, korzystając z ustawień podanych tutaj dla lasera i utrzymując światłowód na zewnątrz gałki ocznej i sekwencyjnie w konfiguracji bezdotykowej, dostarczaj pojedyncze plamki laserowe wzdłuż obwodu barwionego śródbłonka przez przezroczystą tkankę rogówki.Ostatnim aspektem jest pierścień plam na obrzeżach lenti dawczej. Odległość między środkami dwóch sąsiadujących ze sobą punktów jest równa podwójnej średnicy plamki. Po zakończeniu spawania laserowego nałóż 0,3% tobramycyny i 0,1% deksametazonu zawiesinę okulistyczną do oka pacjenta.Następnie nałóż soczewkę kontaktową. Ten całkowicie laserowy zabieg chirurgiczny polega na minimalnie inwazyjnym przeszczepie rogówki w stosunku do standardowego przeszczepu śródbłonka. Dodawane są tylko etapy pomiaru grubości rogówki, barwienia tkanki dawcy i dostarczania światła laserowego.Osiągnięte korzyści w dużej mierze rekompensują wydłużenie czasu operacji o kilka minut. Zastosowanie śródoperacyjnego OCT do pomiaru grubości rogówki dawcy i lasera femtosekundowego używanego do dostosowywania wymiarów soczewki dawcy umożliwia poprawę adhezji interfejsu dawcy gospodarza w porównaniu z niewykonywaniem pomiaru grubości rogówki dawcy, jak pokazano tutaj, co powoduje słabą przyczepność na obrzeżach. W ten sposób gabinet jest projektowany zgodnie z potrzebami i cechami morfologicznymi indywidualnego pacjenta.W standardowej technice nie jest możliwe zszycie tkanki dawcy w żaden sposób ze względu na jej cechy biomechaniczne i lokalizację. Jednak procedura spawania laserowego zapewnia pełny pierścień plamek pokrywających zewnętrzną średnicę interfejsu dawcy i biorcy i zapewnia natychmiastowe zamknięcie interfejsu. Jednego dnia po zabiegu częściowo zespawany śródbłonek wykazuje zwichnięcie miejsca dawcy, z wyjątkiem miejsc spawania.Po tej procedurze można wykonać inne metody, takie jak otoplastyka przedniego odcinka moczowego, w celu uzyskania dodatkowych pytań, takich jak unikanie stosowania standardowego pozwu po jego opracowaniu. Technika ta utorowała drogę naukowcom zajmującym się mikrochirurgią do zbadania możliwości szycia w cienkich tkankach, w niedostępnych miejscach, takich jak zespolenie typu end-to-end w chirurgii mózgu. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś mieć dobre pojęcie o tym, jak wykonać śródbłonkową keroplastykę przy niskim ryzyku przemieszczenia linii po operacji.Materia ta dostarcza nam bardzo cienkiej linii, która przylega do biorcy med z dobrym zadowoleniem naszego pacjenta.

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Ten film pokazuje nieinwazyjną procedurę wspomaganą laserem, która selektywnie uszkadza komórki śródbłonka rogówki w oku świni. Opracowany ex vivo model uszkodzenia komórek śródbłonka może być wykorzystany do badania chorób śródbłonka rogówki.

Selektywna ablacja wspomagana laserowo komórek śródbłonka rogówki świń: technika wywoływania skoncentrowanego uszkodzenia śródbłonka rogówki świni do badań ex vivo

Unaczynione allotransplantacje kompozytowe (VCA) stały się kliniczną rzeczywistością. Jednak szerokie zastosowanie kliniczne VCA jest ograniczone przez przewlekłą wielolekową immunosupresję. Autorzy prezentują wiarygodny i powtarzalny duży model zwierzęcy do tłumaczenia nowych strategii immunomodulacyjnych, które mogą zminimalizować lub potencjalnie wyeliminować potrzebę immunosupresji w VCA.

Zmodyfikowany heterotopowy model przeszczepu kończyn tylnych świń do badań nad translacyjną unaczynioną allotransplantacją kompozytową (VCA)

Pomocniczy przeszczep wątroby zapewnia tymczasowe wsparcie w ostrej niewydolności wątroby, aż do regeneracji niewydolnej wątroby. Heterotopowy pomocniczy przeszczep wątroby (HALT) z tętnicą żyły wrotnej (PVA) zapewnia wystarczającą czynność wątroby. Opracowaliśmy analogiczną technikę na szczurach, aby zbadać wpływ tętnicy żyły wrotnej na morfologię i funkcję przeszczepu.

Heterotopowe pomocnicze przeszczepienie wątroby szczura z tętnicą żyły wrotnej o regulowanym przepływie w ostrej niewydolności wątroby

Dla niektórych pacjentek jedyną opcją zachowania płodności jest kriokonserwacja tkanki jajnika. Niestety, opóźniona rewaskularyzacja osłabia żywotność pęcherzyków. W tym miejscu przedstawiamy protokół wspólnego przeszczepiania ludzkiej tkanki jajnika z komórkami śródbłonka do wykorzystania jako strategia oparta na komórkach łącząca przyspieszoną perfuzję z bezpośrednim parakrynnym dostarczaniem cząsteczek bioaktywnych.

Kotransplantacja ludzkiej tkanki jajnika za pomocą zmodyfikowanych komórek śródbłonka: strategia oparta na komórkach łącząca przyspieszoną perfuzję z bezpośrednim dostarczaniem parakrynnym

Stripping Only Descemeta to eksperymentalna procedura, w której pacjenci z centralnym gutem rogówki wynikającym z dystrofii śródbłonka Fuchsa mają usuniętą błonę Descemeta na potrzeby komórek obwodowych w celu regeneracji warstwy śródbłonka. Przedstawiono nowatorską metodologię symulującą DSO w dystroficznych rogówkach ludzkich ex vivo z przyspieszonym gojeniem stymulowanym przez eFGF1 (NM141).

Model hodowli ludzkiego narządu rogówki z usuwaniem Descemeta tylko z przyspieszonym gojeniem stymulowanym przez zmodyfikowany czynnik wzrostu fibroblastów 1

Tutaj opisujemy platformę, która umożliwia nieinwazyjne obrazowanie in vivo sferoidów wątroby wszczepionych do przedniej komory oka myszy. Przebieg pracy obejmuje zarówno generowanie sferoid z pierwotnych komórek wątroby, jak i przeszczep do oka myszy oraz obrazowanie in vivo w rozdzielczości komórkowej za pomocą mikroskopii konfokalnej.

Obrazowanie in vivo sferoid wątroby wszczepionych do przedniej komory oka myszy

Protokół ten opisuje model przeszczepu jelita na szczurach z ileostomią w celu oceny w czasie interwencji lekowej w przypadku odrzucenia przeszczepu.

Model odrzucenia przeszczepu przeszczepu jelita szczura z zewnętrzną ileostomią do oceny rokowania podłużnego

W pracy przedstawiono protokół precyzyjnego dostarczania naczyniowych komórek macierzystych pod kontrolą USG do ściany naczynia aorty. Technika ta skutecznie celuje w ścianę naczynia i wspomaga naprawę naczyń w tętniakach i rozwarstwieniach aorty.

Precyzyjne dostarczanie komórek macierzystych pod kontrolą ultradźwięków w celu naprawy naczyń krwionośnych w chorobach aorty

Przedstawiamy powtarzalny model myszy heterotopowej allotransplantacji naczyń tylnych kończyn do szyi, unaczynionej allotransplantacji. Ten protokół supermikrochirurgiczny, obejmujący anastomozę naczyń o średnicy 0,3-0,5 mm, integruje naprowadzanie z włókna nylonowego oraz mankietowanie żylne. Stanowi wiarygodną platformę do badań translacyjnych nad tolerancją, uszkodzeniem niedokrwienia i reperfuzją oraz mechanizmami immunologicznymi w naczyniowej allotransplantacji złożonej.

Heterotopowa transplantacja kończyny tylnej do szyi u myszy: supermikrochirurgiczny model unaczynionej alotransplantacji kompozytowej

Określenie wszczepienia komórek dawcy stanowi wyzwanie w modelach przeszczepu szpiku kostnego u myszy, które nie mają dobrze zdefiniowanych markerów fenotypowych. Opisaliśmy metodologię ilościowego oznaczania wszczepienia męskich komórek dawcy u samic myszy biorców przeszczepu. Metoda ta może być stosowana u wszystkich szczepów myszy do badania funkcji HSC.

Wykorzystanie ilościowej reakcji PCR w czasie rzeczywistym do określenia wszczepienia komórek dawcy w konkurencyjnym modelu przeszczepu mysiego szpiku kostnego

Poznaj całkowicie laserową technikę przeszczepu śródbłonka rogówki z wykorzystaniem lasera femtosekundowego. Minimalnie inwazyjna metoda zmniejsza ryzyko przemieszczenia płatka i poprawia przyczepność tkanki dawcy już jeden dzień po zabiegu.

"Całkowicie laserowy" przeszczep śródbłonka

Przeglądaj więcej filmów