Proste i wspomagane komputerowo testy węchowe dla myszy

Ogólnym celem poniższego eksperymentu jest przetestowanie wrodzonej dyskryminacji węchowej, preferencji węchowej lub unikania i wrażliwości węchowej u myszy. Osiąga się to poprzez wystawienie myszy na działanie nowego atraktantu lub apelu oraz neutralnego zapachu, którym jest woda. W tym czasie kamera wideo rejestruje sesję behawioralną.

Następnie wideo jest analizowane na obrazie J za pomocą dostarczonych makr w celu uzyskania czasu spędzonego w parametrach zapachu i wody. Wyniki pokazują preferowanie lub unikanie zapachów w porównaniu z wodą wśród różnych genotypów w oparciu o analizę wspomaganą komputerowo post hoc. Główną zaletą testów węchowych w porównaniu z wykorzystaniem dedykowanej areny i węchu jest to, że wykorzystuje ono znaną arenę, a zatem jest szybkie i proste w konfiguracji.

Ponadto wykorzystuje niedrogi sprzęt, który demonstruje, że procedura będzie Emmanuelem Abry, według studenta w moim laboratorium. Do tego eksperymentu użyj trzy- do pięciu miesięcznych samców, czarnych C 57, sześciu myszy typu dzikiego i transgenicznych. W tej demonstracji wykorzystano dwie linie nokautu i kontrole kolegów.

Na arenach eksperymentalnych używaj czystych, wysterylizowanych klatek dla myszy z trzema centymetrami ściółki. Następnie przygotuj konfigurację kamery. Umieść go 58 centymetrów nad podłogą klatki na niestandardowym uchwycie do statywu.

Zrób kilka znaków na blacie, aby wskazać, gdzie powinna znajdować się klatka. Aby uzyskać centralny obraz, ustaw aparat tak, aby nagrywał wideo o wymiarach 320 na 240 pikseli z około 15 klatkami na sekundę. Aby się przygotować, osoba badana powinna przechowywać koncentraty każdego zapachu w rozpuszczalniku, gdy tylko jest to możliwe.

Do testu preferencji przygotuj 10% wagowy roztwór masła orzechowego w oleju arachidowym. Do testu unikania należy spożyć roztwór 98% kwasu metylomasłowego. Do testu wrażliwości należy pobrać mocz samicy myszy tego samego szczepu na jeden do dwóch dni przed badaniem.

Skrępuj samicę brzuchem nad siatką klatki i zbieraj krople jej moczu do plastikowego naczynia. Zbierz próbki od kilku samic w celu normalizacji. Aby uzyskać indywidualną zmienność, należy pobrać wszystkie próbki do 1,5-mililitrowej probówki i przechowywać ją w temperaturze minus 20 stopni Celsjusza.

Aby zacząć się przyzwyczajać, zwierzęta umieść je w oczyszczonej klatce i pozwól mu eksplorować. Przez pięć minut środowisko klatki testowej powinno być takie samo jak w klatce domowej. Powtórz fazę habituacji raz w każdym dniu testu, po zakończeniu okresu przyzwyczajenia rozpocznij zapis i odpipetuj 60 mikrolitrów przyjemnego zapachu.

W takim przypadku masło orzechowe wyłóż na jedną ścianę na przeciwległej ściance, odpipetuj taką samą ilość wody. Neutralny zapach, nałóż krople około 10 centymetrów w górę każdej ściany. Teraz pozwól zwierzęciu eksplorować przez dwie minuty, a następnie zatrzymaj nagrywanie i wróć mysz do klatki domowej.

Powtórz ten proces dla każdej myszy, która ma być testowana. Zawsze używaj nowych klatek testowych. Trzy do pięciu dni Po wykonaniu wszystkich testów preferencji przeprowadź test unikania przy użyciu nowej klatki testowej.

Dla każdej myszy wykonaj test unikania. Podobnie jak w przypadku testu przyciągania, zastąp przyjemny zapach tylko zapachem unikania, którym są dwa kwasy metylomasłowy. Do testu wrażliwości jedna klatka może być ponownie użyta między próbami dla tej samej myszy.

Dlatego zaznacz klatkę od strony wody i przygotuj się do czyszczenia krótkich ścian papierem nasączonym 70% etanolem między próbami. W dniu eksperymentu wykonaj cztery stężenia moczu z dziesięciokrotną serią rozcieńczeń. Używając podwójnie destylowanej wody, takiej jak w teście unikania, przyzwyczaj każde zwierzę do klatki testowej na pięć minut.

Następnie wystawiaj każdą mysz na działanie moczu w najwyższym rozcieńczeniu na początku, czyli od 1 do 10 000. Podczas nagrywania nałóż rozcieńczony mocz do klatki testowej i nałóż wodę na przeciwległą ścianę. Podobnie jak w przypadku innych testów, pozwól zwierzęciu eksplorować.

Przez dwie minuty. Następnie przenieś zwierzę do czystej klatki dla myszy. Po tym, jak wszystkie zwierzęta doświadczą najniższego stężenia, wyczyść wszystkie ściany klatki testowej i powtórz test na każdej myszy, używając następnego najbardziej zagęszczonego moczu.

Kontynuuj ten proces, aż czysty mocz zostanie przetestowany. Po zebraniu wszystkich danych do eksperymentu otwórz filmy na obrazie J w celu dostosowania i przetworzenia, których szczegóły są podane w protokole tekstowym przy użyciu opisanych protokołów. Dwie różne linie nokautu.

Grupy B i C porównano z grupą kontrolną wykonaną w miocie, grupa A.A bezkierunkowy test T studenta o równej lub nierównej wariancji porównuje czas spędzony między zapachem a wodą w genotypach. Porównaj zachowanie między genotypami za pomocą jednokierunkowej inova. Obie grupy eksperymentalne, B i C, nie wykazały preferencji dla atrakcyjnego zapachu W teście unikania reakcja na odpychający zapach kwasu metylomasłowyego była zgodna z oczekiwaniami dla grup A i B, ale grupa C nie wykazała zachowania unikającego tego zapachu.

W teście wrażliwości próg przyciągania uzyskano poprzez odjęcie czasu spędzonego z moczem od czasu spędzonego z wodą, przy czym mocz był preferowany do wody w rozcieńczeniu od jednego do 1000. Podczas gdy obie grupy eksperymentalne, B i C potrzebowały 100-krotnie większego stężenia, aby wykazać preferencje. Po opanowaniu tej techniki można ją wykonać w ciągu kilku godzin, jeśli zostanie wykonana prawidłowo, a następnie zgodnie z tą procedurą można zastosować inne metody, takie jak uczenie się węchu i wygaszanie, aby zbadać plastyczność węchową i uczenie się.