Dostarczanie białek, peptydów lub nieprzepuszczalnych dla komórek małych cząsteczek do żywych komórek przez inkubację z odczynnikiem endosomolitycznym dfTAT

Ogólnym celem poniższego eksperymentu jest dostarczenie makrocząsteczek do żywych komórek za pomocą dimeru, fluorescencyjnego tat lub df tat, odczynnika, który może bardzo skutecznie przenikać do komórek bez ich uszkadzania. Osiąga się to poprzez uprzednie wytworzenie i oczyszczenie środka dostarczającego. Dfta jako drugi krok.

Dfta inkubuje się z komórkami przez godzinę w temperaturze 37 stopni Celsjusza w obecności interesującego ładunku makrocząsteczkowego, df tat indukuje wychwyt ładunku wewnątrz pęcherzyków endocytarnych. Pęcherzyki dojrzewają do wczesnych endosomów, ostatecznie osiągając późny etap endosomu, w którym DF tat jest w stanie uwolnić ładunek do przestrzeni cytozolowej komórek. Następnie komórki są obrazowane za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej w celu oceny wydajności dostarczania detty i ładunku będącego przedmiotem zainteresowania.