Szybki fenotypowy system punktacji neurologicznej do oceny postępu choroby w mysim modelu SOD1-G93A ALS

Ogólnym celem tej procedury jest szybka i wiarygodna ocena funkcji nerwowo-mięśniowej myszy SOD one G 93 a poprzez codzienną ocenę funkcji ich kończyn tylnych przy użyciu prostego fenotypowego systemu punktacji neurologicznej. Osiąga się to, obserwując najpierw tylne kończyny myszy, jednocześnie zawieszając je za ogon. Drugim krokiem jest umożliwienie myszom chodzenia, obserwując ich chód.

Następnie myszy umieszcza się na boku, aby przetestować obecność lub brak odruchu pisania. Ostatnim krokiem jest przeprowadzenie analizy danych poprzez dopasowanie danych neurologicznych kohort myszy do porządkowego modelu regresji logistycznej. Ostatecznie nasz fenotypowy system punktacji neurologicznej służy do oceny postępu choroby w SOD one G 93, mysim modelu LS w celu rozpoznania skuteczności interwencji terapeutycznych.

Główną zaletą tej metody nad wszystkimi innymi istniejącymi technikami jest to, że jest szybka, prosta, niezawodna i minimalnie stresująca dla myszy. Implikacje tej metody rozciągają się na terapię neotropowego stwardnienia bocznego lub LS, ponieważ pozwala na szybką ocenę interwencji terapeutycznych w najczęstszym mysim modelu choroby. Demonstracja wizualna ma kluczowe znaczenie, ponieważ metoda oceny neurologicznej jest trudna do nauczenia, ponieważ różnice neurologiczne mogą być subtelne.

Zacznij od trzymania samców SOD jednej myszy G 93 A tak, aby na klatkę przypadała jedna mysz, samica SOD jednej myszy G 93 A do dwóch na klatkę. Zapewnij myszom wzbogacenie środowiska w postaci plastikowych chatek. Zapewnij myszom jedzenie i wodę w rekordzie Lido.

Masa ciała dla wszystkich myszy i badań w tym samym czasie. Dzienna masa ciała jest czułym wskaźnikiem postępu choroby i wszelkich złych nawyków, które mogą wynikać z przewlekłego leczenia farmakologicznego. Podczas badania oceniaj wynik neurologiczny każdej myszy dziennie za pomocą schematu trzech testów wykonywanych sekwencyjnie.

Obserwuj uważnie, ponieważ wyznaczenie wyników w fenotypowych punktach przejścia jest bardzo trudne w pierwszym teście. Test zawieszenia ogona, przytrzymaj mysz około 1.5 cala od podstawy ogona nad drucianą górną częścią klatki domowej. Obserwuj funkcję kończyn tylnych przez okres od jednej do dwóch sekund i powtórz test trzy razy.

Do testu chodzenia. Umieść mysz na czystej powierzchni, która zapewnia przyczepność i ma odległość spaceru co najmniej 25 centymetrów. Pozwól myszy przejść do 75 centymetrów, obserwując jej ga.

W teście refleksu pisania połóż mysz na boku i użyj stopera, aby zmierzyć czas potrzebny na samodzielne pisanie z obu stron. Wymagana jest tylko jedna próba tego testu. Oceń każdą kończynę tylną w lewo lub w prawo niezależnie w skali od zera do czterech w oparciu o zbiorczy wynik trzech testów obserwacji fenotypowej.

Wynik zatokowy równy zero wskazuje, że mysz jest przedobjawowa. Podczas badania w zawieszeniu kończyny tylne są całkowicie wyprostowane z dala od bocznej linii środkowej i pozostają w tej pozycji przez dwie sekundy lub dłużej. Również podczas testu chodzenia obserwuje się normalny chód.

Przypisz wynik jeden wskazujący na pojawienie się pierwszych objawów. Jeżeli podczas badania w zawieszeniu kończyna tylna jest albo zapadnięta w kierunku bocznej linii środkowej, albo częściowo zapadnięta w kierunku bocznej linii środkowej, drżąc, albo nienormalnie rozchylona w inny sposób. Oprócz pokazanych właśnie objawów testu zawieszenia, chód myszy, która powinna otrzymać jeden punkt, powinien nadal wydawać się normalny lub nieco niższy.

Przypisz wynik dwa wskazujący początek Parsis. Jeżeli podczas testu w zawieszeniu kończyna tylna jest częściowo lub całkowicie zapadnięta, a dodatkowo podczas testu chodu kończyny tylne są używane do ruchu do przodu. Jednak palce u nóg albo zwijają się w dół co najmniej dwa razy podczas 75-centymetrowego spaceru, albo dowolna część stopy ciągnie się, aby uzyskać wynik dwa.

Mysz musi również nadal być w stanie pisać sama po umieszczeniu po obu jej stronach w ciągu 10 sekund. Wynik zatokowy równy trzy wskazuje na paraliż. Jeśli podczas testu zawieszenia mysz wykazuje sztywny paraliż kończyny tylnej lub ma minimalny ruch stawu, mysz może nadal wykazywać ruch do przodu podczas testu chodu, jednak nie przy użyciu kończyn tylnych.

Oprócz wyniku zatokowego wynoszącego trzy, mysz musi nadal być w stanie pisać sama po umieszczeniu po obu stronach w ciągu 10 sekund. Wreszcie, wynik cztery, określający humanitarny punkt końcowy za każdym razem, gdy mysz wykazuje sztywny paraliż podczas zawieszenia. Test nie wykazuje ruchu do przodu podczas testu chodzenia przy użyciu kończyn tylnych, a także nie jest w stanie zapisać się w ciągu 10 sekund po umieszczeniu po którejkolwiek ze stron.

Samce myszy zazwyczaj mają bardziej agresywny postęp choroby niż samice, o czym świadczy większa część ich długości życia wykazująca objawy, które można sklasyfikować z wynikiem neurologicznym równym jeden w porównaniu z samicami. Gdy objawy rosną do zakresu dwóch lub trzech punktów neurologicznych, liczba dni spędzonych na każdym poziomie jest jednakowa pod względem częstości u wszystkich płci. Pokazano tutaj logistykę porządkową, wykresy analizy statystycznej wygenerowane przy użyciu właśnie opisanego protokołu neuroco.

Dane te pochodzą z badania farmakologicznego skuteczności leku, w którym kohorta myszy SOD one G 93 a otrzymujących badany związek TDI 1 73 jest porównywana z kohortą myszy otrzymujących nośnik. Nie zaobserwowano istotnych statystycznie różnic, gdy płcie były analizowane oddzielnie, ale istotność statystyczną osiągnięto, gdy płcie zostały połączone. Chociaż analiza przeżycia Kaplana Meyera wykazała podobne trendy, nie była wystarczająco czuła, aby ujawnić znaczące różnice nawet po połączeniu płci.

Po opanowaniu system punktacji można zastosować w mniej niż minutę na mysz, jeśli jest prawidłowo wykonany. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak ocenić postęp choroby w SOD one G 93, mysim modelu LS przy użyciu systemu Neuroco.