Badania elektrotaktyczne komórek raka płuc przy użyciu wielokanałowego układu mikroprzepływowego o podwójnym polu elektrycznym

Ogólnym celem tego eksperymentu mikroprzepływowego jest ocena wpływu inhibitorów kinaz na migrację komórek nowotworowych pod bezpośrednim polem elektrycznym. Tak więc ta metoda może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w badaniach komórkowych w Teksasie, takie jak to, jakie są szlaki determinujące migrację komórek nowotworowych sterowaną polem elektrycznym. Tak więc główną zaletą tej techniki jest to, że jest to wysoce powtarzalne i oszczędzające czas badanie elektroteksańskie, które można łatwo wdrożyć.

Implikacje tej techniki rozciągają się w kierunku diagnozy siły przerzutowej raka. Ponieważ ruchliwość magnetycznych komórek nowotworowych może być zwiększona przez pole elektromagnetyczne. Tak więc ta metoda może zapewnić wewnętrzne, elektrojądro komórek nowotworowych.

Może być również stosowany w procesach regeneracji skóry, takich jak gojenie się ran. Zacznij od użycia programu do rysowania i projektowania, aby narysować indywidualny wzór warstwy akrylowej. Zapisz wzór, a następnie włącz rysik laserowy.

Podłącz rysik do laptopa sterującego i kliknij zaprojektowany plik wzoru, aby otworzyć wzór warstwy akrylowej. Następnie umieść kawałek czystego arkusza akrylowego na stoliku x, Y, Z rysika laserowego i użyj odpowiedniego drążka do automatycznego wyrównywania rysika laserowego. Aby ustawić skupienie wiązki laserowej na powierzchni arkusza.

Wyślij zaprojektowany wzór do rysika laserowego w celu bezpośredniej obróbki arkusza akrylowego. Następnie za pomocą kleszczyków usuń papier ochronny z arkuszy akrylowych i przedmuchaj powierzchnie do czysta gazowym azotem. Teraz ułóż arkusze w stos i połącz je ze sobą pod ciśnieniem dwóch kilogramów na centymetr kwadratowy w spoiwa termicznym przez 45 minut w temperaturze 110 stopni Celsjusza, aby utworzyć zespół kanału stymulacji elektrycznej przepływu.

Po przygotowaniu taśmy dwustronnej w ten sam sposób, przyklej czystą szklankę nakrywkową do zespołu kanału stymulacji elektrycznej przepływu. Następnie użyj super kleju, aby przykleić 13 sztuk adapterów akrylowych do poszczególnych otworów w pierwszej warstwie wielokanałowego podwójnego pola elektrycznego lub zespołu chipów MDF, aby skonfigurować sieć mostków solnych z chipów MDF. Zacznij od podłączenia plastikowych rurek podłogowych do zespołu wiórów MDF za pomocą adapterów wlotowych i wylotowych medium.

Następnie podłącz stożek przynęty średniej plastikowej rurki wlotowej i wylotowej do trójdrożnego ogranicznika Cox Trzymililitrowa strzykawka zawierająca 2,5 mililitra dwutlenku węgla zrównoważona PBS do trójdrożnego kurka zatrzymującego plastikowej rurki wlotowej i pustą trzymililitrową strzykawkę do trójdrożnego kurka zatrzymującego plastikowej rurki wylotowej. Użyj białych, solidnych nakrętek dokręcających palce, aby uszczelnić otwory niebieskich i zielonych adapterów na arkuszu akrylowym warstwy pierwszej. Następnie napełnij kanały mostków solnych i komory hodowlane PBS zrównoważonym dwutlenkiem węgla, uważając, aby uniknąć pęcherzyków.

Przenieś chip do inkubatora hodowli komórkowych z dwutlenkiem węgla o temperaturze 37 stopni Celsjusza i 5% na noc, aby następnego ranka powietrze rozpuszczone w taśmie dwustronnej utworzyło pęcherzyki w komorach. Użyj dwóch strzykawek, aby wygenerować szybki przepływ PBS, aby wypłukać pęcherzyki, pompując PBS tam iz powrotem, jeśli to konieczne. Po usunięciu wszystkich pęcherzyków użyj trójdrogowego kranu podłączonego do rurki wylotowej medium, aby spuścić PBS z kanałów.

Następnie zastrzykaj strzykawkę podłączoną do wlotu trzymililitrową strzykawką zawierającą 2,5 mililitra dwutlenku węgla, w oznaczeniu DM EM i napełnij komory medium, gdy komory są pełne. Usuń solidne nakrętki z zielonych adapterów i wstrzyknij 3% aros podgrzany do co najmniej 70 stopni Celsjusza do kanału mostu solnego. Przez otwory w adapterach, gorący A przygotowuje mostek solny do wstrzyknięcia, zapewniając zablokowanie środkowego rzędu między komorami hodowlanymi.

Przestań wstrzykiwać agros, gdy związek wypełni trzy czwarte długości kanału mostka solnego i ponownie uszczelnij pory solidnymi nakrętkami. Teraz zastąp solidne nakrętki na niebieskich adapterach półprzezroczystymi rurowymi nakrętkami dokręcanymi palcami i załaduj aros do nakrętek rurowych. Następnie zanurz elektrody srebrne, chlorku srebra w nakrętkach rurkowych, zanim aro zestalą się.

Aby przeprowadzić eksperyment elektrotaktyczny, wstrzyknij 0,3 mililitra komórek do chipa MDF przez rurkę wylotową i zwróć chip do inkubatora kultur komórkowych. Po dwóch do czterech godzinach zainstaluj system mikroprzepływowy MDF na przezroczystym grzejniku z tlenku indu i cyny i podłącz termoparę typu K między chipem MDF a szkłem z tlenku indu i cyny. Aby zmierzyć temperaturę chipa, użyj proporcjonalnego kontrolera pochodnej całkowej, aby ustawić temperaturę inkubacji systemu mikroprzepływowego MDF na 37 stopni Celsjusza i zamontuj zespół chipa MDF z kontrolowaną temperaturą na sterowanym komputerowo zmotoryzowanym stoliku XYZ mikroskopu odwróconego.

Następnie za pomocą czterokanałowej pompy strzykawkowej dozować kompletną pożywkę do komór hodowlanych przez wloty z natężeniem przepływu 20 mikrolitrów na godzinę. Zbieranie odpadów kulturowych z wylotów w mikrocentralnych probówkach fuge. Inkubuj komórki w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez kolejne 16 do 18 godzin.

Następnego dnia należy zastąpić pożywkę w każdej komorze świeżą, uzupełnioną odpowiednim stężeniem inhibitora kinazy na 60 minut zabiegu. Następnie podłącz zasilacz prądu stałego do chipa MDF za pomocą elektrod srebrnych, chlorku srebra i szeregowo. Podłącz amperomierz do obwodu elektrycznego, aby monitorować prąd elektryczny w chipie MDF.

Na koniec włącz zasilanie i dostosuj napięcie do zakresu od 15 do 19 woltów. Aby ustawić prąd amperomierza na 86,94 mikroamperów. W tym reprezentatywnym eksperymencie z systemem mikroprzepływowym MDF komórki raka płuc leczone różnymi stężeniami inhibitora kinazy.

Y 2 7 6 3 2 nie wykazywały zmian w szybkości migracji komórek ze stymulacją elektryczną lub bez niej. Jednak leczenie Y 2 7 6 3 2 z dodatkiem pola elektrycznego znacznie zmniejszyło nautykę migracji komórek nowotworowych. Rzeczywiście, przy stężeniu 50 mikromolowych inhibitor skał całkowicie wyeliminował ruch nautyczny komórek, nie wpływając na ich prędkość migracji.

Ponadto stwierdzono zależną od dawki korelację pomiędzy zastosowanymi stężeniami chemicznymi a wskaźnikiem kierunkowości, potwierdzającą niezawodność i skuteczność systemu mikroprzepływowego MDF jako metody badania axxis. Po opanowaniu technika ta może zostać wykonana w ciągu siedmiu do ośmiu godzin, jeśli zostanie wykonana prawidłowo po jej opracowaniu. Technika ta zabiera badaczom zajmującym się elektro Teksasem eksplodowanie uderzeniem w skórę.

Nie zapominaj, że praca ze skrobakiem laserowym może być bardzo niebezpieczna i że podczas wykonywania tej procedury należy zawsze zachować środki ostrożności.