Półautomatyczne podejście do przygotowywania koktajli przeciwciał do analizy immunofenotypowej ludzkiej krwi obwodowej

Ogólnym celem tego półautomatycznego protokołu przygotowania koktajlu przeciwciał barwiących jest ustanowienie niezawodnej metody immunofenotypowania w celu zminimalizowania zmienności dozowania odczynników. Metoda ta może pomóc w rozwiązaniu kluczowych problemów w dziedzinie immunomonitoringu, takich jak: sposób kontrolowania zmienności wewnątrz- i międzyeksperymentalnej po dozowaniu odczynników. Główną zaletą tej techniki jest to, że automatyzacja przygotowywania koktajli zwiększa dokładność pipetowania, jednocześnie zmniejszając błędy związane z ręcznym przygotowywaniem koktajli. Procedurę zademonstruje Iliana Gonzalez, technik z mojego laboratorium. Przed rozpoczęciem procedury należy nakleić etykiety czytelne dla człowieka na probówkach z kodami kreskowymi 2D. Następnie przenieś całą zawartość każdej fiolki z przeciwciałem do odpowiednich probówek z kodami kreskowymi 2D, uważając, aby uniknąć pęcherzyków. Po przeniesieniu przeciwciał użyj czytnika kodów kreskowych 2D, aby odczytać probówki. Następnie utwórz arkusz kalkulacyjny zawierający nazwy przeciwciał i odczyty kodów kreskowych, a następnie zapisz arkusz kalkulacyjny jako plik z wartościami oddzielonymi przecinkami. Teraz uruchom czytnik kodów kreskowych 2D, a następnie automatyczną obsługę cieczy. Aby zalać strzykawki automatycznego urządzenia do obsługi cieczy, w obszarze Instrument wybierz opcję Home All Axes (Położenie początkowe wszystkich osi).Upewnij się, że żadna ze strzykawek nie zawiera widocznych pęcherzyków powietrza. Po zalaniu strzykawek otwórz metody przygotowania koktajlu bazowego i koktajlu aktywacyjnego w oprogramowaniu do automatycznego obchodzenia się z płynami. Następnie umieść probówki z mikrofugami w małych probówkach do mikrofugi na koktajl bazowy i koktajl aktywacyjny, w zależności od liczby koktajli bazowych i aktywacyjnych, które należy wykonać. Użyj schematu konfiguracji przyrządu jako odniesienia do umieszczania stojaków na probówki na pokładzie. Umieść zbiornik buforowy w odpowiedniej sekcji pokładu i użyj ośmiokanałowego odkręcacza z nakrętką, aby odkręcić probówki z kodami kreskowymi 2D zawierające przeciwciała. Aby uniknąć zanieczyszczenia krzyżowego, umieść każdą nakrętkę na tacce na nakrętki podczas wyjmowania, aby utrzymać nakrętki w odpowiedniej kolejności. Następnie umieść końcówki filtra P50 LLS, końcówki filtra P200 LLS, końcówki P1000 i stojak na probówki Matrix 1 ml na pokładzie w odpowiednich pozycjach. Kliknij ikonę start, aby uruchomić metodę. Gdy pojawi się wyskakujące okienko, upewnij się, że wszystkie elementy na pokładzie są zgodne ze schematem konfiguracji instrumentu dla tej metody. Jeśli wszystko jest na swoim miejscu, kliknij przycisk OK. Zautomatyzowana maszyna do obsługi cieczy przeniesie bufor ze zbiornika do probówek do mikrofuge. Stojak na probówki Matrix 1 ml zostanie przeniesiony do czytnika kodów kreskowych 2D, a kody kreskowe zostaną odczytane. Po odczytaniu wszystkich kodów kreskowych kliknij OK w wyskakującym okienku, aby rozpocząć transfer przeciwciał. Po zakończeniu transferu użyj ośmiokanałowego decappera z nakrętką, aby ponownie zamknąć probówki z kodami kreskowymi 2D i przywróć probówki do 4