Jednoczesna rejestracja elektroretinografii i wzrokowych potencjałów wywołanych u znieczulonych szczurów

Ogólnym celem tej procedury jest jednoczesny pomiar elektroretinogamu i wizualnego potencjału wywołanego u szczura. Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie neuronauki szczelinowej. Na przykład, czy efekt starzenia się lub chorób wpływa na niektóre elementy ścieżki wzrokowej.

Główną zaletą tej techniki jest to, że umożliwia kompleksową ocenę funkcji siatkówki i jej wpływu na wzrokowo-wywołaną funkcję korową. Aby rozpocząć tę procedurę, wstępnie uformuj wykonane na zamówienie nieaktywne elektrody ERG, przecinając srebrny drut o długości 70 milimetrów i tworząc pętlę o średnicy ośmiu milimetrów, aby otoczyć oko szczura. Przygotuj jednolity okrąg i dostosuj rozmiar pętli, kształtując ją na jednomilimetrowej końcówce główki rury.

Jest to ważne, ponieważ zbyt mały pierścień może nieumyślnie podnieść ciśnienie śródstawowe, podczas gdy zbyt duży pierścień może zwiększyć zmienność sygnałów. Następnie wstępnie uformuj wykonaną na zamówienie nieaktywną elektrodę VEP, wycinając srebro o długości 70 milimetrów. I tworzy elipsę o średnicy ośmiu milimetrów, aby zaczepić się o siekacze szczurów.

Następnie wstępnie uformuj wykonane na zamówienie aktywne elektrody ERG, przecinając 30-milimetrowy drut srebrny i tworząc małą pętlę o średnicy około jednego do dwóch milimetrów, która służy do delikatnego kontaktu z rogówką szczura przy minimalnych otarciach rogówki. Następnie bezpiecznie przymocuj elektrody do przewodów elektrod, splatając srebro z odsłoniętym drutem wewnętrznym. Zaizoluj nadmiar odsłoniętego metalu taśmą maskującą, aby zmniejszyć artefakty fotowoltaiczne.

W przypadku elektrod aktywnych ERG można nałożyć więcej warstw taśmy maskującej, aby uzyskać grubsze i sztywniejsze owinięcie, dzięki czemu elektroda jest łatwiejsza do trzymania za pomocą mikromanipulatora. Na każdej nieaktywnej elektrodzie ERG przyklej mały kawałek zapięcia na rzep do taśmy maskującej, aby umożliwić stabilne przymocowanie do paska na szyję gryzonia. Następnie dla każdej aktywnej elektrody VEP przymocuj zacisk krokodylkowy do wewnętrznego przewodu elektrody.

Bezpośrednio przed nagraniami należy pokryć galwanicznie odsłonięte powierzchnie srebrnych drutów chlorkiem, aby poprawić przewodzenie sygnału. Aby to zrobić, podłącz katodę do ujemnego bieguna akumulatora i zanurz drugi koniec w soli fizjologicznej. Następnie zanurz srebrną końcówkę przewodu anodowego w zwykłej soli fizjologicznej i podłącz drugi koniec tego drutu elektrody do dodatniego zacisku dziewięciowoltowego akumulatora.

Odłącz je po 20 sekundach, a srebrna końcówka drutu elektrody powinna być równomiernie pokryta na biało. Powtórz procedurę chlorowania dla wszystkich srebrnych elektrod ERG i VEP. W tej procedurze należy trzykrotnie zdezynfekować ogolony obszar znieczulonego zwierzęcia 10% jodowidonem.

Wykonaj strzałkowe nacięcie wzdłuż linii środkowej głowy za pomocą skalpela i wytnij okrąg tkanki skórnej o średnicy 20 milimetrów, aby odsłonić kość czaszki. Następnie usuń leżącą poniżej okostną, zeskrobując i osuszając gazą, aby odsłonić szwy czaszkowe koronalne i strzałkowe. Wywierć dwa otwory w czaszce na obu półkulach.

Wkręć ze stali nierdzewnej w dwa wstępnie wykonane otwory na głębokość jednego milimetra, aby umożliwić mocne zakotwienie. Następnie przygotuj obszar operacyjny do amalgamatu dentystycznego, osuszając kość czaszki gazą i cofając skórę za pomocą dwóch szwów. Następnie rozprowadź amalgamat dentystyczny na odsłoniętej czaszce, aby zabezpieczyć elektrody śrubowe na miejscu i upewnić się, że około 1,5 milimetra jest odsłoniętych do nagrywania.

Następnie usuń szwy zwijające. W przypadku nagrań skotopowych wszystkie zabiegi wykonywane są w ciemnym pomieszczeniu. Dla celów ilustracyjnych, pozycjonowanie elektrod odbywa się tutaj przy normalnym oświetleniu pomieszczenia.

Zwierzę było przystosowane do ciemności przez 12 godzin i znieczulone ketaminą i ksylazyną. Po rozszerzeniu źrenicy i znieczuleniu miejscowym zaczepić nieaktywną elektrodę VEP o dolne siekacze. Następnie umieść zwierzę na platformie ERG przed miską Ganzfelda znajdującą się w klatce Faradaya.

Przymocuj zwierzę do platformy za pomocą paska zapięcia na rzep umieszczonego mocno, ale nie ciasno wokół karku. Następnie ustaw nieaktywne elektrody ERG, nieinwazyjnie otaczając pierścień skórny wokół równika oczu. Około trzy metry za rąbkiem.

Ustabilizuj to, mocując elektrodę do paska mocującego na rzep wokół karku. Powtórz procedurę dla oka przeciwległego. Teraz przymocuj aktywne elektrody VEP, przymocowując zaciski krokodylkowe do ze stali nierdzewnej, wstępnie wszczepionych w czaszkę.

Przed umieszczeniem aktywnej elektrody ERG umieść niewielką kroplę 1% karboksymetylocelulozy sodu na elektrodzie, aby poprawić jakość sygnału. Ustaw aktywne elektrody ERG tak, aby delikatnie dotykały środkowej powierzchni rogówki za pomocą mikromanipulatora przymocowanego do specjalnie zbudowanego ramienia stereotaktycznego. Upewnij się, że sól sodowa karboksymetylocelulozy styka się tylko z rogówką, a nie ze skórką, wycierając nadmiar płynu.

Następnie włóż od dwóch do pięciu milimetrów elektrody igłowej ze stali nierdzewnej podskórnie do ogona. Przesuń platformę bliżej misy Ganzfelda i upewnij się, że oczy zwierzęcia są wyrównane z otworem miski, aby umożliwić równomierne oświetlenie obu siatkówk. Następnie zamknij klatkę Faradaya, aby zredukować zewnętrzny hałas.

Korzystając z powyższego protokołu, można zarejestrować stos kształtów fal ERG w odpowiedzi na szereg bodźców, przy czym najciemniejszy błysk jest pokazany na dole, a najjaśniejszy na górze. Przy bardzo słabym oświetleniu można rejestrować skotopowe reakcje progowe. Wraz ze wzrostem jasności bodźca, formy fal zostają zdominowane przez falę B, a następnie ujemna fala A pojawia się przy najjaśniejszych bodźcach.

Funkcję fotoreceptora pręcika można oznaczyć za pomocą P3 do modelowania fali A. Rysunek ten pokazuje, że amplituda P2 rośnie wraz ze wzrostem energii bodźca. Funkcję komórek dwubiegunowych pręcików można oznaczyć, modelując teorie odpowiedzi intensywności pręcika P2 za pomocą funkcji naka rushtin.

Funkcja komórek zwojowych siatkówki jest oznaczana przy słabych energiach świetlnych i określana ilościowo za pomocą amplitudy i czasu piku pSTR. Funkcja dwubiegunowej komórki stożkowej jest wywoływana za pomocą sparowanego paradimu błysku i określana ilościowo przez amplitudę i czas piku stożka P2. Analiza amplitudy VEP jest traktowana jako amplitudy piku trofy i trofa do piku, co daje czas tych reakcji.

Amplituda form fali VEP wzrasta wraz ze wzrostem energii bodźca. Po opanowaniu tej techniki można wykonać w ciągu około 30 do 45 minut, nie licząc czasu na przygotowanie elektrody i umieszczenie elektrody oraz adakadaptację. Podczas wykonywania tej procedury szczególnie ważne jest, aby zwrócić uwagę na to, jak dokładnie umieszczasz elektrody i pozostawiasz wystarczająco dużo czasu na adaptację.

Po tej procedurze można wykonać inne procedury, takie jak modyfikacja choroby lub terapie, aby odpowiedzieć na konkretne pytania. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak przygotować i umieścić elektrody, a także jak rejestrować i analizować kształty fal ERG i VEP.