Name: Badania kompleksu Ga(III) EOB-DTPA i jego analogu znakowanego radioizotopowo o masie 68Ga (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-08-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 22 s
Description: Poznaj metodę kompleksowania EOB-DTPA z izotopami galu w celu oceny nowego znacznika Ga-68 do obrazowania molekularnego. Technika ta pozwala szybko określić wydajność znakowania, stabilność in vitro oraz współczynnik podziału n-oktanol/woda.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy nie mają żadnych podziękowań.

1. Przygotowanie EOB-DTPA i Ga[EOB-DTPA]
Ostrzeżenie: Przed użyciem należy zapoznać się ze wszystkimi odpowiednimi kartami charakterystyki substancji niebezpiecznych (MSDS) stosowanych rozpuszczalników organicznych, kwasów i zasad. Wszystkie czynności należy wykonywać pod wyciągiem i stosować środki ochrony osobistej (okulary ochronne, rękawice, fartuch laboratoryjny).
<ol>
	<li>Izolacja EOB-DTPA z kwasu gadoksetowego
	<ol>
		<li>Umieścić 3 ml 0,25 M roztworu do wstrzykiwań kwasu gadoksetowego do kolby. Dodać 500 mg (5,6 mmol) kwasu szczawiowego do wymieszanego roztworu.</li>
		<li>Po mieszaniu przez 1 godzinę przefiltrować zawiesinę przez frytę pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość umyć trzykrotnie odpowiednio 3 ml wody.</li>
		<li>Połączyć filtraty wodne i wyposażyć roztwór w elektrodę pH. Dodać 12 M kwasu solnego do filtratu, aż pH osiągnie około -0,1.</li>
		<li>Usunąć rozpuszczalnik w próżni, aby uzyskać bezbarwną pozostałość. Przechowywać w atmosferze gazu obojętnego.</li>
		<li>Pozostałość dokładnie umyć (co najmniej trzy razy) octanem etylu w celu usunięcia nadmiaru kwasu szczawiowego. Wysuszyć pozostałość w próżni.</li>
		<li>Ponownie rozpuść pozostałość w 2 ml wody o temperaturze pokojowej, a następnie schłodzić roztwór w łaźni lodowej. Nie usuwając łaźni lodowej, dodawać kroplami 0,5 M wodny roztwór wodorotlenku sodu, aż do zaobserwowania tworzenia się bezbarwnej lepkiej substancji stałej.</li>
		<li>Usunąć wodę przez dekantację. Umyj ciało stałe jeszcze dwa razy 1 ml zimnej wody. Wysuszyć ciało stałe w próżni, aby uzyskać pierwszą frakcję produktu.</li>
		<li>Wyizolować drugą frakcję produktu z połączonych frakcji zdekantowanej wody za pomocą chromatografii kolumnowej (krzemionka, metanol/woda 4/1). 24 Usunąć rozpuszczalnik w próżni.</li>
		<li>Jeżeli otrzymane w ten sposób ciało stałe nie jest czysto białe, należy je ponownie rozpuścić w 1 ml wody, dodać 10 ml etanolu, a następnie 10 ml eteru dietylowego w celu wytrącenia produktu. Przefiltrować przez frytę pod zmniejszonym ciśnieniem i wysuszyć w próżni.</li>
		<li>Połącz obie frakcje stałe EOB-DTPA i wykonaj spektroskopowe analizy NMR,25 spektrometryczne26 i pierwiastkowe27.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Synteza Ga[EOB-DTPA] 
	UWAGA: Stały chlorek Ga(III) należy przechowywać w suchej, obojętnej atmosferze, ponieważ w kontakcie z powietrzem dochodzi do rozkładu wilgoci lub tłuszczu, co powoduje powstawanie oparów i tworzenie się żółtych, brązowych lub czarnych zanieczyszczeń.
	<ol>
		<li>Przygotować 0,11 M roztwór podstawowy, rozpuszczając 1,94 g (11,0 mmol) chlorku Ga(III) w 100 ml wody. Rozcieńczyć 1 ml 25% wodnego roztworu amoniaku w 4 ml wody.</li>
		<li>Rozpuścić 80 mg (0,15 mmol) EOB-DTPA w kolbie w 10 ml wody. W razie potrzeby podgrzej rozpuszczalnik do całkowitego rozpuszczenia.</li>
		<li>Dodać 1,4 ml (0,15 mmol) roztworu podstawowego chlorku Ga(III). Wyposażyć kolbę w mieszadło i elektrodę pH. Dodawać kroplami rozcieńczony wodny roztwór amoniaku, aż pH roztworu wyniesie około 4,1. Mieszać w temperaturze pokojowej przez 30 minut.</li>
		<li>Usunąć rozpuszczalnik w próżni. Umieścić pozostałość w kolbie wyposażonej w destylator z centralną i równoległą boczną szyjką. Wyposaż środkową szyjkę w palec chłodzący, a boczną szyjkę w wylot pompy próżniowej</li>
		<li>Podgrzać pozostałość pod zmniejszonym ciśnieniem (125 °C, 0,6 mbar). Okresowo usuwać sublimowany chlorek amonu (widoczny jako biały nalot powierzchni szkła) z chłodzącego palca i destylatora, a także z górnych części kolby lekko wilgotną szmatką. Kontynuuj proces, aż nie będzie widocznego tworzenia się nowego sublimatu.</li>
		<li>Aby usunąć końcowe ślady chlorku amonu, przemyj pozostałość trzykrotnie odpowiednio 0,5 ml gorącego metanolu. Wysuszyć bezbarwną pozostałość w próżni. Wykonaj spektroskopowe analizy NMR,25 spektrometrycznemas 26 i pierwiastkowe27.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Ogólna procedura etykietowania
UWAGA: Wszystkie eksperymenty obejmujące bezpośredni lub pośredni kontakt z substancjami radioaktywnymi mogą być wykonywane wyłącznie przez przeszkolony personel. Proszę używać odpowiedniego sprzętu ekranującego. Wszelkie odpady radioaktywne należy zbierać oddzielnie, a następnie przechowywać i utylizować zgodnie z obowiązującymi przepisami.
<ol>
	<li>Elucja generatora 
	Uwaga: Zastosowano generator 40 mCi 68Ge/68Ga z nuklidem macierzystym związanym jako tlenek na krzemionce dodecylo-3,4,5-trihydroksybenzoesanowej. Elucja i oczyszczanie mogą być przeprowadzane ręcznie lub, jak miało to miejsce w przypadku tej procedury, jako połączony proces zautomatyzowany z wykorzystaniem pompy perystaltycznej i dozownika.
	<ol>
		<li>Przygotować roztwory kwasu solnego o stężeniu 5,5 M, 1,0 M i 0,05 M. Przygotować roztwór 5,0 M chlorku sodu zawierający 25 μl 5,5 M kwasu solnego na ml. Przygotować roztwór buforowy o pH 4,6, łącząc 4,1 g octanu sodu, 1 ml HCl (30%) i 2,5 ml lodowatego kwasu octowego i rozcieńczając mieszaninę wodą do 50 ml.</li>
		<li>Przygotowanie wkładu PS-H+ należy powoli przepłukać 1 ml 1,0 M kwasu solnego, a następnie 5 ml wody.</li>
		<li>Eluować kolumnę krzemionkową generatora za pomocą 4 ml 0,05 M HCl.12 Załadować eluat 68Ga na wkład PS-H+.</li>
		<li>Przepłukać wkład 5 ml wody, a następnie osuszyć go 5 ml powietrza. Wypłukać 68Ga z wkładu za pomocą 1 ml 5,0 M zakwaszonego roztworu chlorku sodu. 28</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Etykietowanie EOB-DTPA za pomocą 68Ga
	<ol>
		<li>Rozpuścić 1 mg (1,9 μmol) EOB-DTPA w 1 ml wody. Z tego roztworu pobrać 100 μl (0,19 μmol) i rozcieńczyć je 9,9 ml wody, aby przygotować 19 μM (10 μg/ml) roztwór podstawowy EOB-DTPA.</li>
		<li>Usunąć 50 μl (co odpowiada 22-29 MBq) roztworu zawierającego 68Ga i umieścić w fiolce. Dodać 50 μl (0,5 μg) 19 mM roztworu podstawowego EOB-DTPA i 300 μl buforu, aby podnieść pH do 4,0. Wstrząśnij krótko i inkubuj roztwór w temperaturze pokojowej przez 5 minut. Usunąć podwielokrotność 1-5 μl i poddać analizie HPLC lub TLC.</li>
		<li>Przeprowadzić analizę radiową HPLC na kolumnie C18 z odwróconą fazą (RP). 29 Zastosować następującą fazę ruchomą: A - woda/kwas trifluorooctowy (99,9%/0,1%), B - acetonitryl/kwas trifluorooctowy (99,9%/0,1%), gradient: 06 min 80% A → 0% A (0,5 ml/min), 610 min 0% A (0,5 ml/min).</li>
		<li>Określ szczytowe intensywności sygnałów radiowych HPLC jako obszar pod krzywą. Obliczyć wydajność znakowania jako czystość radiochemiczną (RCP) znacznika w następujący sposób: 
		RCP = AGa-EOB-DTPA/(AGa + AGa-EOB-DTPA) ∙ 100% 
		AGa-EOB-DTPA: obszar pod krzywą 68Ga[EOB-DTPA] 
		AGa: obszar pod krzywą swobodną 68Ga</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Efektywność etykietowania
<ol>
	<li>Wykonaj procedury etykietowania zgodnie z opisem w sekcji 2. Stosować stały zakres aktywności wyjściowej 68Ga eluatu, np. 22-29 MBq (40-140 μl, w zależności od świeżości eluatu).</li>
	<li>Dodać wymaganą ilość roztworu buforowego, aby dostosować pH do 3,8-4,0 (40-190 μl, w zależności od objętości eluianu 68Ga). Dodać wymaganą ilość roztworu podstawowego liganda (10-70 μl roztworu o stężeniu 19 mM).</li>
	<li>Dodać wymagane ilości wody, aby dostosować całkowitą objętość każdej sondy do etykietowania do 1,75 ml. Dokładnie wymieszać i odstawić próbkę na 5 minut w temperaturze pokojowej. Przeprowadzić analizę HPLC zgodnie z opisem w sekcji 2 w celu określenia wydajności etykietowania.</li>
	<li>Przeprowadzić procedury znakowania z ilością liganda od 0,1 μg do 0,7 μg w krokach co 0,1 μg. Przeprowadzić eksperymenty w trzech egzemplarzach dla każdego stężenia liganda. Oblicz średnią wydajność i odchylenie standardowe.</li>
</ol>
4. Stabilność in vitro
<ol>
	<li>Ogólna procedura i przygotowania
	<ol>
		<li>Rozpuścić tabletkę soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS) w 200 ml wody dejonizowanej, aby przygotować roztwór podstawowy PBS o stężeniu fosforanów 10 mM.</li>
		<li>Wykonać etykietowanie 22-29 MBq 68Ga za pomocą 0,5 μl roztworu podstawowego EOB-DTPA, jak opisano w sekcji 2. W zależności od objętości eluatu 68Ga dostosować ilość buforu, jak opisano w sekcji 3. Pobrać próbki roztworu do etykietowania zawierającego 6-12 MBq znacznika w celu wykonania pomiarów stabilności.</li>
		<li>Przeprowadzić analizę radiową TLC na płytkach aluminiowych pokrytych żelem krzemionkowym o średnicy 80 mm, używając 0,1 M wodnego roztworu cytrynianu sodu jako eluentu i przeanalizować płytki za pomocą skanera radioaktywności TLC. Rozdział 30 Określ intensywność sygnałów TLC jako obszar pod krzywą. Oblicz RCP znacznika w następujący sposób: 
		RCP = AGa-EOB-DTPA/(Abez Ga +A Ga-EOB-DTPA + AGa-koloidalny) ∙ 100% 
		AGa-EOB-DTPA: obszar pod krzywą 68Ga[EOB-DTPA] 
		Awolny od Ga: obszar pod krzywą swobody 68Ga 
		AGa-koloidalny: pole pod krzywą koloidalnego 68Ga</li>
		<li>Oblicz RCPt/RCP0 dla każdego punktu czasowego. Wykreślić tak ustandaryzowany RCP w funkcji różnicy czasu od punktu początkowego t = 0 min. 
		RCPt = RCP 68Ga[EOB-DTPA] w punkcie czasowym t. 
		RCP0 = RCP 68Ga[EOB-DTPA] przy t = 0 min.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Stabilność w roztworze soli fizjologicznej (A) buforowanym fosforanem
	<ol>
		<li>Do 65 μl roztworu do znakowania dodać 150 μl roztworu podstawowego PBS i 60 μl roztworu wodorotlenku sodu (0,1 M) w celu podniesienia pH do 7,4. Dokładnie wymieszaj.</li>
		<li>Usunąć podwielokrotność 1-5 μl, aby przeprowadzić analizę TLC ("punkt początkowy"). Roztwór należy natychmiast przechowywać w inkubatorze w temperaturze 37 °C i usunąć podwielokrotności w celu przeprowadzenia analizy TLC w reprezentatywnych punktach czasowych przez 3 godziny.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Stabilność w stosunku do nadmiaru apo-transferyny w PBS (B)
	<ol>
		<li>Do 120 μl roztworu do znakowania dodać 50 μl roztworu podstawowego PBS i 430 μl roztworu wodorotlenku sodu (0,1 M) w celu podniesienia pH do 7,4. Dodać 40 μl roztworu apo-transferyny (25 mg/ml). Dokładnie wymieszaj.</li>
		<li>Usunąć podwielokrotność 1-5 μl, aby przeprowadzić analizę TLC ("punkt początkowy"). Roztwór należy natychmiast przechowywać w inkubatorze w temperaturze 37 °C i usunąć podwielokrotności w celu przeprowadzenia analizy TLC w reprezentatywnych punktach czasowych przez 3 godziny.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Stabilność w surowicy ludzkiej (C)
	<ol>
		<li>Do 500 μl surowicy ludzkiej dodać 25 μl roztworu do znakowania i 45 μl roztworu wodorotlenku sodu (0,1 M), aby podnieść pH do 7,4. Dokładnie wymieszaj.</li>
		<li>Usunąć podwielokrotność 1-5 μl, aby przeprowadzić analizę TLC ("punkt początkowy"). Roztwór należy natychmiast przechowywać w inkubatorze w temperaturze 37 °C i usunąć podwielokrotności w celu przeprowadzenia analizy TLC w reprezentatywnych punktach czasowych przez 3 godziny.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
5. Wyznaczanie współczynnika dystrybucji LogD
<ol>
	<li>Wykonaj procedury etykietowania zgodnie z opisem w sekcji 2. Do 50 μl roztworu do znakowania dodać 20 μl roztworu podstawowego PBS i 170 μl roztworu wodorotlenku sodu (0,1 M) w celu podniesienia pH do 7,4.</li>
	<li>Pobrać 200 μl z tego roztworu i umieścić go w plastikowej V-fiolce. Dodać 200 μl n-oktanolu. Zamknąć fiolkę i wirować przez 2 minuty. Następnie odwirować próbkę o masie 1 600 x g przez 5 minut.</li>
	<li>Usunąć trzy egzemplarze po 40 μl z fazy n-oktanolowej i fazy wodnej i umieścić je w oddzielnych V-fiolkach. Uważaj, aby nie pomieszać warstw.</li>
	<li>Mierz aktywność każdej próbki w liczniku studzienek gamma przez 30 sekund. Dla każdej próbki natychmiast powtórzyć pomiar dwa razy i na tej podstawie obliczyć średnią aktywność Ᾱt w zliczeniach na minutę (cpm). Wymień uzyskane w ten sposób Ᾱt,W1, Ᾱt,W2 i Ᾱt,W3 (aktywności w próbkach wodnych) oraz Ᾱt,O1, Ᾱt,O2, Ᾱt,O3 (aktywności w n-oktanolu) wraz z odpowiednim punktem czasowym t ich oznaczenia.</li>
	<li>Określ punkt czasowy pomiaru ostatniej próbki jako t0. Określ i wymień Δt w min, obliczając Δt = t-t0. Wykonaj korekcję zaniku Ᾱt, używając następującego wzoru: 
	Ᾱ0 = Ᾱt · 2(Δt/68 min).</li>
	<li>Oblicz Ᾱ0,W jako średnią Ᾱ0,W1, Ᾱ0,W2 i Ᾱ0,W3 oraz Ᾱ0,O jako średnią Ᾱ0,O1, Ᾱ0,O2 i Ᾱ0,O3. Oblicz logD za pomocą następującego wzoru: 
	logD = log[(Ᾱ0,O · 40 μg)/(Ᾱ0,W · 33 μg)].</li>
	<li>Wykonaj cały eksperyment w trzech egzemplarzach i oblicz średnią logD wraz z jej odchyleniem standardowym.</li>
</ol>

<ol><li>Weinmann, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+lipophilic+gadolinium+chelate+as+a+tissue-specific+contrast+medium+for+MRI%5BTitle%5D)+AND+%22Magn.+Reson.+Med%22%5BJournal%5D)">A new lipophilic gadolinium chelate as a tissue-specific contrast medium for MRI.</a> Magn. Reson. Med. 22, 233-237 (1991).</li>
<li>Stroszczynski, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aktueller+Stand+der+MRT-Diagnostik+mit+leberspezifischen+Kontrastmitteln%5BTitle%5D)+AND+%22Radiologe%22%5BJournal%5D)">Aktueller Stand der MRT-Diagnostik mit leberspezifischen Kontrastmitteln.</a> Radiologe. 44, 1185(2004).</li>
<li>Van Beers, B. E., Pastor, C. M., Hussain, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primovist%2C+Eovist+-+what+to+expect%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Primovist, Eovist - what to expect.</a> J. Hepatol. 57, 421-429 (2012).</li>
<li>Zech, C. J., Herrmann, K. A., Reiser, M. F., Schoenberg, S. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MR+Imaging+in+Patients+with+Suspected+Liver+Metastases%3A+Value+of+Liver-specific+Contrast+Agent+Gd-EOB-DTPA%5BTitle%5D)+AND+%22Magn.+Reson.+Med.+Sci%22%5BJournal%5D)">MR Imaging in Patients with Suspected Liver Metastases: Value of Liver-specific Contrast Agent Gd-EOB-DTPA.</a> Magn. Reson. Med. Sci. 6, 43-52 (2007).</li>
<li>Leonhardt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+Uptake+of+the+Magnetic+Resonance+Imaging+Contrast+Agent+Gd-EOB-DTPA%3A+Role+of+Human+Organic+Anion+Transporters%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Metab.+Dispos%22%5BJournal%5D)">Hepatic Uptake of the Magnetic Resonance Imaging Contrast Agent Gd-EOB-DTPA: Role of Human Organic Anion Transporters.</a> Drug Metab. Dispos. 38, 1024-1028 (2010).</li>
<li>Wadas, T. J., Wong, E. H., Weisman, G. R., Anderson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coordinating+Radiometals+of+Copper%2C+Gallium%2C+Indium%2C+Yttrium%2C+and+Zirconium+for+PET+and+SPECT+Imaging+of+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chem.+Rev%22%5BJournal%5D)">Coordinating Radiometals of Copper, Gallium, Indium, Yttrium, and Zirconium for PET and SPECT Imaging of Disease.</a> J. Chem. Rev. 110, 2858-2902 (2010).</li>
<li>Ametamey, S. M., Honer, M., Schubiger, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+Imaging+with+PET%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Rev%22%5BJournal%5D)">Molecular Imaging with PET.</a> Chem. Rev. 108, 1501-1516 (2008).</li>
<li>Cutler, C. S., Hennkens, H. M., Sisay, N., Huclier-Markai, S., Jurisson, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiometals+for+Combined+Imaging+and+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Rev%22%5BJournal%5D)">Radiometals for Combined Imaging and Therapy.</a> Chem. Rev. 113, 858-883 (2013).</li>
<li>Henze, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PET+Imaging+of+Somatostatin+Receptors+Using+%5B68GA%5DDOTA-D-Phe1-Tyr3-Octreotide%3A+First+Results+in+Patients+with+Meningiomas%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Nucl.+Med%22%5BJournal%5D)">PET Imaging of Somatostatin Receptors Using [68GA]DOTA-D-Phe1-Tyr3-Octreotide: First Results in Patients with Meningiomas.</a> J. Nucl. Med. 42, 1053-1056 (2001).</li>
<li>Hofmann, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biokinetics+and+imaging+with+the+somatostatin+receptor+PET+radioligand+68Ga-DOTATOC%3A+preliminary+data%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Nucl.+Med%22%5BJournal%5D)">Biokinetics and imaging with the somatostatin receptor PET radioligand 68Ga-DOTATOC: preliminary data.</a> Eur. J. Nucl. Med. 28, 1751-1757 (2001).</li>
<li>Blau, M., Nagler, W., Bender, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorine-18%3A+a+new+isotope+for+bone+scanning%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Nucl.+Med%22%5BJournal%5D)">Fluorine-18: a new isotope for bone scanning.</a> J. Nucl. Med. 3, 332-334 (1962).</li>
<li>Green, M. A., Welch, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gallium+Radiopharmaceutical+Chemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Radiat.+Appl.+Instrum.+B%22%5BJournal%5D)">Gallium Radiopharmaceutical Chemistry.</a> Int. J. Radiat. Appl. Instrum. B. 16, 435-448 (1989).</li>
<li>Rösch, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Past%2C+present+and+future+of+68Ge%2F68Ga+generators%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Radiat.+Isot%22%5BJournal%5D)">Past, present and future of 68Ge/68Ga generators.</a> Appl. Radiat. Isot. 76, 24-30 (2013).</li>
<li>Liu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+coordination+chemistry+in+the+development+of+target-specific+radiopharmaceuticals%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Soc.+Rev%22%5BJournal%5D)">The role of coordination chemistry in the development of target-specific radiopharmaceuticals.</a> Chem. Soc. Rev. 33, 445-461 (2004).</li>
<li>Haubner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+%2868%29Ga-labelled+DTPA+galactosyl+human+serum+albumin+for+liver+function+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Nucl.+Med.+Mol.+Imaging%22%5BJournal%5D)">Development of (68)Ga-labelled DTPA galactosyl human serum albumin for liver function imaging.</a> Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imaging. 40 (68), 1245-1255 (2013).</li>
<li>Yang, W., Zhang, X., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Asialoglycoprotein+Receptor-Targeted+Radiopharmaceuticals+for+Measurement+of+Liver+Function%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Med.+Chem%22%5BJournal%5D)">Asialoglycoprotein Receptor-Targeted Radiopharmaceuticals for Measurement of Liver Function.</a> Curr. Med. Chem. 21, 4-23 (2014).</li>
<li>Chauhan, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((68Ga+based+probe+for+Alzheimer%27s+disease%3A+synthesis+and+preclinical+evaluation+of+homodimeric+chalcone+in+%CE%B2-amyloid+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Org.+Biomol.+Chem%22%5BJournal%5D)">68Ga based probe for Alzheimer's disease: synthesis and preclinical evaluation of homodimeric chalcone in β-amyloid imaging.</a> Org. Biomol. Chem. 12, 7328-7337 (2014).</li>
<li>Chakravarty, R., Chakraborty, S., Dash, A., Pillai, M. R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detailed+evaluation+on+the+effect+of+metal+ion+impurities+on+complexation+of+generator+eluted+68Ga+with+different+bifunctional+chelators%5BTitle%5D)+AND+%22Nucl.+Med.+Biol%22%5BJournal%5D)">Detailed evaluation on the effect of metal ion impurities on complexation of generator eluted 68Ga with different bifunctional chelators.</a> Nucl. Med. Biol. 40, 197-205 (2013).</li>
<li>Clevette, D. J., Orvig, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+ligands+of+differing+denticity+and+basicity+for+the+in+vivo+chelation+of+aluminum+and+gallium%5BTitle%5D)+AND+%22Polyhedron%22%5BJournal%5D)">Comparison of ligands of differing denticity and basicity for the in vivo chelation of aluminum and gallium.</a> Polyhedron. 9, 151-161 (1990).</li>
<li>Prinsen, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+evaluation+of+a+68Ga+labeled+pamoic+acid+derivative+for+in+vivo+visualization+of+necrosis+using+positron+emission+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorg.+Med.+Chem%22%5BJournal%5D)">Development and evaluation of a 68Ga labeled pamoic acid derivative for in vivo visualization of necrosis using positron emission tomography.</a> Bioorg. Med. Chem. 18, 5274-5281 (2010).</li>
<li>Vogl, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+tumors%3A+comparison+of+MR+imaging+with+Gd-EOB-DTPA+and+Gd-DTPA%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%22%5BJournal%5D)">Liver tumors: comparison of MR imaging with Gd-EOB-DTPA and Gd-DTPA.</a> Radiology. 200, 59-67 (1996).</li>
<li>Reimer, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phase+II+clinical+evaluation+of+Gd-EOB-DTPA%3A+dose%2C+safety+aspects%2C+and+pulse+sequence%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%22%5BJournal%5D)">Phase II clinical evaluation of Gd-EOB-DTPA: dose, safety aspects, and pulse sequence.</a> Radiology. , 177-183 (1996).</li>
<li>Ba-Ssalamah, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MRT+der+Leber%5BTitle%5D)+AND+%22Radiologe%22%5BJournal%5D)">MRT der Leber.</a> Radiologe. 44, 1170-1184 (2004).</li>
<li>Scott, R. P. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aScott%2C+RPW+%22Journal+of+Chromatography+Library%22">Journal of Chromatography Library</a>. 22A, Elsevier Scientific Publishing Co. A137-A160 (1983).</li>
<li>Reichenbaecher, M., Popp, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aReichenbaecher%2C+M+%22Strukturanalytik+organischer+und+anorganischer+Verbindungen%22">Strukturanalytik organischer und anorganischer Verbindungen</a>. , 1st, B. G. Teubner Verlag. Wiesbaden. (2007).</li>
<li>Gross, J. H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGross%2C+JH+%22Mass+Spectrometry%3A+A+Textbook%22">Mass Spectrometry: A Textbook</a>. , Springer. (2004).</li>
<li>Ma, T. S., Rittner, R. C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMa%2C+TS+%22Modern+Organic+Elemental+Analysis%22">Modern Organic Elemental Analysis</a>. , Marcel Dekker, Inc. (1979).</li>
<li>Mueller, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simplified+NaCl+Based+68Ga+Concentration+and+Labeling+Procedure+for+Rapid+Synthesis+of+68Ga+Radiopharmaceuticals+in+High+Radiochemical+Purity%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chem%22%5BJournal%5D)">Simplified NaCl Based 68Ga Concentration and Labeling Procedure for Rapid Synthesis of 68Ga Radiopharmaceuticals in High Radiochemical Purity.</a> Bioconjugate Chem. 23, 1712-1717 (2012).</li>
<li>Roberts, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radio-column+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography+Library%22%5BJournal%5D)">Radio-column chromatography.</a> Journal of Chromatography Library. 14, 103-132 (1978).</li>
<li>Roberts, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radio-thin-layer+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography+Library%22%5BJournal%5D)">Radio-thin-layer chromatography.</a> Journal of Chromatography Library. 14, 45-83 (1978).</li>
<li>Green, M. A., Welch, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gallium+radiopharmaceutical+chemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Nucl.+Med.+Biol%22%5BJournal%5D)">Gallium radiopharmaceutical chemistry.</a> Nucl. Med. Biol. 16, 435-448 (1989).</li>
<li>Notni, J., Plutnar, J., Wester, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone-seeking+TRAP+conjugates%3A+surprising+observations+and+their+implications+on+the+development+of+gallium-68-labeled+bisphosphonates%5BTitle%5D)+AND+%22EJNMMI+Res%22%5BJournal%5D)">Bone-seeking TRAP conjugates: surprising observations and their implications on the development of gallium-68-labeled bisphosphonates.</a> EJNMMI Res. 2, 13(2012).</li>
<li>Schmitt-Willich, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+Physicochemical+Characterization+of+a+New+Gadolinium+Chelate%3A+The+Liver-Specific+Magnetic+Resonance+Imaging+Contrast+Agent+Gd-EOB-DTPA%5BTitle%5D)+AND+%22Inorg.+Chem%22%5BJournal%5D)">Synthesis and Physicochemical Characterization of a New Gadolinium Chelate: The Liver-Specific Magnetic Resonance Imaging Contrast Agent Gd-EOB-DTPA.</a> Inorg. Chem. 38, 1134-1144 (1999).</li>
<li>68Ga generator for positron emission tomography. , DE102010037964B3 (2012).</li>
<li>Simecek, J., Hermann, P., Wester, H. J., Notni, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+is+68Ga+Labeling+of+Macrocyclic+Chelators+Influenced+by+Metal+Ion+Contaminants+in+68Ge%2F68Ga+Generator+Eluates%3F%5BTitle%5D)+AND+%22ChemMedChem%22%5BJournal%5D)">How is 68Ga Labeling of Macrocyclic Chelators Influenced by Metal Ion Contaminants in 68Ge/68Ga Generator Eluates?</a> ChemMedChem. 8, 95-103 (2013).</li>
<li>Baur, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis%2C+Radiolabelling+and+In+Vitro+Characterization+of+the+Gallium-68-%2C+Yttrium-90-+and+Lutetium-177-Labelled+PSMA+Ligand%2C+CHX-A%27%27-DTPA-DUPA-Pep%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceuticals+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Synthesis, Radiolabelling and In Vitro Characterization of the Gallium-68-, Yttrium-90- and Lutetium-177-Labelled PSMA Ligand, CHX-A''-DTPA-DUPA-Pep.</a> Pharmaceuticals (Basel). 7, 517-529 (2014).</li>
<li>Boros, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RGD+conjugates+of+the+H2dedpa+scaffold%3A+synthesis%2C+labeling+and+imaging+with+68Ga%5BTitle%5D)+AND+%22Nucl.+Med.+Biol%22%5BJournal%5D)">RGD conjugates of the H2dedpa scaffold: synthesis, labeling and imaging with 68Ga.</a> Nucl. Med. Biol. 39, 785-794 (2012).</li>
<li>Beck, W. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBeck%2C+WS+%22Hematology%22">Hematology</a>. , 5th, MIT press. Cambridge, Massachusetts. (1998).</li>
<li>Patel, V., Morrissey, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPatel%2C+V+%22Practical+and+Professional+Clinical+Skills%22">Practical and Professional Clinical Skills</a>. , 1, Oxford University Press Inc. New York. (2001).</li>
<li>Bartke, A., Constanti, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBartke%2C+A+%22Basic+Endocrinology%22">Basic Endocrinology</a>. , 1, CRC Press. (1998).</li>
<li>Bernstein, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+Therapeutic+Activity+for+Gallium%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of Therapeutic Activity for Gallium.</a> Pharmacol. Rev. 50, 665-682 (1998).</li>
<li>Clausen, J., Edeling, C. J., Fogh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((67Ga+Binding+to+Human+Serum+Proteins+and+Tumor+Components%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">67Ga Binding to Human Serum Proteins and Tumor Components.</a> Cancer Res. 34, 1931-1937 (1974).</li>
<li>Dumont, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+64Cu-+and+68Ga-Labeled+RGD+conjugates+show+improved+PET+imaging+of+%CE%B1v%CE%B23+integrin+expression+and+facile+radiosynthesis+%5BErratum+to+document+cited+in+CA156%3A116856%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Nucl.+Med%22%5BJournal%5D)">Novel 64Cu- and 68Ga-Labeled RGD conjugates show improved PET imaging of αvβ3 integrin expression and facile radiosynthesis [Erratum to document cited in CA156:116856.</a> J. Nucl. Med. 52, 1498(2011).</li>
<li>Pohle, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((68Ga-NODAGA-RGD+is+a+suitable+substitute+for+18F-Galacto-RGD+and+can+be+produced+with+high+specific+activity+in+a+cGMP%2FGRP+compliant+automated+process%5BTitle%5D)+AND+%22Nucl.+Med.+Biol%22%5BJournal%5D)">68Ga-NODAGA-RGD is a suitable substitute for 18F-Galacto-RGD and can be produced with high specific activity in a cGMP/GRP compliant automated process.</a> Nucl. Med. Biol. 39, 777-784 (2012).</li>
<li>Notni, J., Pohle, K., Wester, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Be+spoilt+for+choice+with+radiolabelled+RGD+peptides%3A+Preclinical+evaluation+of+68+Ga-TRAP%28RGD%293%5BTitle%5D)+AND+%22Nucl.+Med.+Biol%22%5BJournal%5D)">Be spoilt for choice with radiolabelled RGD peptides: Preclinical evaluation of 68 Ga-TRAP(RGD)3.</a> Nucl. Med. Biol. 40, 33-41 (2013).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

EOB-DTPA jest dostępny w drodze wieloetapowej syntezy33 , ale równie dobrze może być izolowany z dostępnych środków kontrastowych zawierających kwas gadoksetowy. W tym celu centralny jon Gd(III) można wytrącić nadmiarem kwasu szczawiowego. Po usunięciu szczawianu Gd(III) i kwasu szczawiowego ligand można wyizolować przez wytrącanie w zimnej wodzie o pH 1,5. Jednakże w celu zwiększenia wydajności można przeprowadzić chromatografię kolumnową filtratu zamiast niego lub jako procedurę następczą. Każda z metod daje...

Kwas gadoksetowy, potoczna nazwa kompleksu Gd(III) liganda EOB-DTPA1, jest często stosowanym środkiem kontrastowym w rezonansie magnetycznym wątroby i dróg żółciowych (MRI). 2,3 Ze względu na specyficzny wychwyt przez hepatocyty wątroby i wysoki procent wydalania przez wątrobę i drogi żółciowe, umożliwia lokalizację zmian ogniskowych i guzów wątroby. 2-5 Jednak pewne ograniczenia techniki MRI (np. toksyczność środków kontrastowych, ograniczona możliwość zastosowania u pacjentów z klaustrofobią lub metalowymi implantami) wymagają alternatywnego narzędzia diagnostycznego.
Pozytonowa tomografia emisyjna (PET) to metoda obrazowania molekularnego, w której podawana jest niewielka ilość substancji radioaktywnej (znacznika), na której rejestrowana jest jej dystrybucja w organizmie przez skaner PET. 6 PET to metoda dynamiczna, która pozwala na uzyskanie wysokiej rozdzielczości przestrzennej i czasowej obrazów, a także kwantyfikację wyników, bez konieczności radzenia sobie ze skutkami ubocznymi środków kontrastowych MRI. Wartość informacyjną uzyskanych informacji metabolicznych można dodatkowo zwiększyć poprzez połączenie z danymi anatomicznymi otrzymanymi z dodatkowych metod obrazowania, co najczęściej uzyskuje się za pomocą obrazowania hybrydowego z tomografią komputerową (CT) w skanerach PET/CT.
Struktura chemiczna znacznika odpowiedniego dla PET musi zawierać radioaktywny izotop służący jako emiter pozytonów. Pozytony mają krótką żywotność, ponieważ niemal natychmiast anihilują elektronami otoczek atomowych otaczającej tkanki. Poprzez anihilację emitowane są dwa fotony gamma o natężeniu 511 keV o przeciwnym kierunku ruchu, które są rejestrowane przez skaner PET. 7,8 Aby utworzyć znacznik, nuklidy PET mogą być kowalencyjnie wiązane z cząsteczką, jak ma to miejsce w przypadku 2-deoksy-2-[18F]fluoroglukozy (FDG), najszerzej stosowanego znacznika PET. 7 Jednak nuklid może również tworzyć wiązania koordynacyjne z jednym lub kilkoma ligandami (np. [68Ga]-DOTATOC9,10) lub być stosowany jako rozpuszczone sole nieorganiczne (np. [18F] fluorek sodu11). Ogólnie rzecz biorąc, struktura znacznika ma kluczowe znaczenie, ponieważ determinuje jego biodystrybucję, metabolizm i zachowanie wydalanie.
Odpowiedni nuklid PET powinien łączyć korzystne cechy, takie jak dogodna energia pozytonowa i dostępność, a także okres półtrwania odpowiedni dla zamierzonego badania. Nuklid 68Ga stał się istotną siłą w dziedzinie PET w ciągu ostatnich dwóch dekad. 12,13 Wynika to głównie z jego dostępności za pośrednictwem systemu generatora, który umożliwia etykietowanie na miejscu niezależnie od otoczenia cyklotronu. W generatorze nuklid macierzysty 68Ge jest absorbowany na kolumnie, z której eluuje się nuklid potomny 68Ga, a następnie znakuje go odpowiednim chelatorem. 6,14 Ponieważ nuklid 68Ga występuje jako kation trójwartościowy, podobnie jak Gd(III)10,13, chelatowanie EOB-DTPA za pomocą 68Ga dałoby zamiast tego kompleks o takim samym ogólnym ładunku ujemnym jak kwas gadoksetowy. W związku z tym znacznik 68Ga może łączyć podobną charakterystyczną specyficzność wątrobową z przydatnością do obrazowania PET. Chociaż kwas gadoksetowy jest kupowany i podawany jako sól disodowa, w następnym kontekście będziemy go nazywać Gd[EOB-DTPA], a nieradioaktywny kompleks Ga(III) jako Ga[EOB-DTPA] lub 68Ga[EOB-DTPA] w przypadku składnika znakowanego radioaktywnie dla wygody.
Aby ocenić ich przydatność jako znaczników dla PET, kompleksy metali radioaktywnych muszą być najpierw dokładnie zbadane w eksperymentach in vitro, in vivo lub ex vivo. Aby określić przydatność dla danego problemu medycznego, należy zbadać różne cechy znacznika, takie jak zachowanie biodystrybucji i profil klirensu, stabilność, swoistość narządowa oraz wychwyt komórek lub tkanek. Ze względu na ich nieinwazyjny charakter, oznaczenia in vitro są często wykonywane przed eksperymentami in vivo. Powszechnie uznaje się, że DTPA i jego pochodne mają ograniczoną przydatność jako chelatory dla 68Ga ze względu na brak obojętności kinetycznej tych kompleksów, co powoduje porównywalnie szybki rozkład po podaniu in vivo. 14-20 Jest to spowodowane przede wszystkim przez apo-transferynę działającą jako konkurent dla 68Ga w osoczu. Niemniej jednak zbadaliśmy ten nowy znacznik pod kątem jego możliwego zastosowania w obrazowaniu wątroby i dróg żółciowych, w którym informacje diagnostyczne mogą być dostarczone w ciągu kilku minut po wstrzyknięciu3,4,21-23, co niekoniecznie wymaga długoterminowej stabilności znacznika. W tym celu wyizolowaliśmy EOB-DTPA z kwasu gadoksetowego i wstępnie przeprowadziliśmy kompleksowanie z naturalnym Ga(III), który występuje jako mieszanina dwóch stabilnych izotopów, 69Ga i 71Ga. Otrzymany w ten sposób kompleks posłużył jako nieradioaktywny wzorzec dla następującej chelatacji 68Ga. Zastosowaliśmy sprawdzone metody i jednocześnie oceniliśmy ich przydatność do określenia skuteczności 68Galabeling EOB-DTPA oraz do zbadania lipofilowości nowego znacznika 68Ga i jego stabilności w różnych mediach.

<table><tbody><tr><td>primovist</td><td></td> <td>Bayer-0,25 M</td><td></td></tr> <tr><td>chlorek galu(III)</td><td>Sigma-Aldrich Co.</td><td></td><td></td>450898</tr><tr><td>woda (dejonizowana)</td> <td>-</td><td></td> <td>urządzenia do dejonizacji wody wodociągowej firmy Auma-Tec GmbH</td></tr><tr><td>kwas solny 12 M</td><td>VWR</td><td>20252.29</td><td></td></tr><tr><td>wodorotlenek sodu</td><td>Polskie Odczynniki Chemiczne S.A.</td><td></td><td></td>810925429</tr><tr><td>Kwas szczawiowy</td><td>Sigma-Aldrich Co.</td><td>75688</td><td></td></tr><tr><td>octan etylu</td><td>Brenntag GmbH</td><td>10010447</td><td></td></tr><tr><td>żel krzemionkowy</td><td>Merck KGaA</td><td>1.10832.9025</td><td>Geduran Si 60 0,063-0,2&nbsp; mm</td></tr><tr><td>Żel krzemionkowy TLC 60 F254</td><td>Merck KGaA</td><td>1.16834.0001</td><td></td></tr><tr><td>metanol</td><td>VWR</td><td>20903.55</td><td></td></tr><tr><td>etanol</td><td>Brenntag GmbH</td><td>10018366</td><td></td></tr><tr><td>eiethylether</td><td>VWR</td><td>23807.468</td><td>przechowywany na płytkach KOH</td></tr><tr><td>roztwór amoniaku (25%)</td><td>VWR</td><td>1133.1</td><td></td></tr><tr><td>Elektroda pH</td><td>VWR</td><td>662-1657</td><td></td></tr><tr><td>jednostka mieszająco-grzewcza</td><td>Pompa Heidolph</td><td>505-20000-00</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Ilmvac GmbH</td><td>322002</td><td></td></tr><tr><td>fryta</td><td></td> <td>- niestandardowa konstrukcja</td><td></td></tr><tr><td>Spektrometr NMR Spektrometr</td><td>masowy Bruker Coorporation-Ultra</td><td></td> <td>Shield 400</td></tr><tr><td></td><td>Thermo Fisher Scientific Inc.</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>analizator elementarny</td><td>Hekatech GmbH Analysentechnik-EuroVector</td><td></td> <td>EA 3000 CHNS</td></tr> woda <tr><td>deuterowana D2O</td><td>euriso-top</td><td>D214</td><td>99,90% D</td></tr><tr><td colspan="4">Materiał/Sprzęt wymagany do procedur etykietowania</td></tr><tr><td>68Ge/68Ga</td> generator <td>ITG Isotope Technologies Garching GmbH</td> System pomp i dozowników <td>A150</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Scintomics</td><td></td> <td>GmbH-Variosystem</td></tr><tr><td>kwas solny 30% (suprapur)</td><td>Merck KGaA</td><td>1.00318.1000</td><td></td></tr><tr><td>woda (ultrapur)</td><td>Merck KGaA</td><td>1.01262.1000</td><td></td></tr><tr><td>chlorek sodu (suprapur)</td><td>Merck KGaA</td><td>1.06406.0500</td><td></td></tr><tr><td>octan sodu (suprapur)</td><td>Merck KGaA</td><td>1.06264.0050</td><td></td></tr><tr><td>lodowaty kwas octowy (suprapur)</td><td>Merck KGaA</td><td>1.00066.0250</td><td></td></tr><tr><td>dwuwodny cytrynian sodu</td><td>VEB Laborchemie Apolda</td><td>10782</td><td>>98,5%</td></tr><tr><td>PS-H+ Cartridge (S)</td><td>Macherey-Nagel</td><td>731867</td><td>Chromafix</td></tr><tr><td>apo-Transferrin</td><td>Sigma-Aldrich Co.</td><td>Bufor T2036</td><td></td></tr><tr><td>PBS (tabletki)</td><td>Sigma-Aldrich Co.</td><td>79382</td><td></td></tr><tr><td>surowica ludzka</td><td>Sigma-Aldrich Co.</td><td>H4522</td><td>z ludzkich męskich kolb plazmowych AB</td></tr><tr><td>, kolumn, etc.</td><td></td> <td>niestandardowa elektroda</td><td></td></tr><tr><td>pH</td><td>Knick Elektronische Messger&auml; te GmbH & Co. KG</td><td>765-Set</td><td></td></tr><tr><td>pompa binarna (HPLC)</td><td>Hewlett-Packard</td><td>G1312A (HP 1100)</td><td></td></tr><tr><td>Detektor UV/Vis (HPLC)</td><td>Hewlett-Packard</td><td>G1315A (HP 1100)detektor</td><td></td></tr> <tr><td>radioaktywny (HPLC)</td><td>EGRC Berthold</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HPLC C-18-PFP</td><td>kolumna Advanced Chromatography Technologies Ltd.</td><td>ACE-1110-1503/A100528</td><td></td></tr><tr><td>Fiolki szklane HPLC</td><td>GTG Glastechnik Graefenroda GmbH</td><td>8004-HP-H/i3&micro;</td><td></td></tr><tr><td>pipeta</td><td>Eppendorf-fiolki</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>plastikowe</td><td>Sarstedt AG & Co.</td><td>6542.007</td><td></td></tr><tr><td>fiolki plastikowe</td><td>Greiner Bio-One International GmbH</td><td>717201</td><td></td></tr><tr><td>activimeter</td><td>MED Nuklear-Medizintechnik Dresden</td> <td>GmbH-Isomed</td> <td>2010</td></tr><tr><td>pęseta</td><td></td> do <td>projektowania</td><td></td>na zamówienie</tr><tr><td>inkubator</td><td>Heraeus Instruments GmbH</td><td>51008815</td><td></td></tr><tr><td>mieszalnik wirowy</td><td>Fisons-Whirlimixer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>wirówka</td><td>Heraeus Instruments GmbH</td><td>75003360</td><td></td></tr><tr><td>licznik studni gamma</td><td>MED Nuklear-Medizintechnik Dresden</td><td></td> <td>GmbH-Isomed 2100</td></tr><tr><td>woda do chromatografii</td><td>Merck KGaA</td><td>1.15333.2500</td><td></td></tr><tr><td>acetonitryl do chromatografii</td><td>Merck KGaA</td><td>1.00030.2500</td><td></td></tr><tr><td>kwas trifluorooctowy</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>91707</td><td></td></tr><tr><td>Skaner radioaktywności TLC</td><td>raytest Isotopenmessger&auml; te GmbH</td><td>B00003875</td><td>wyposażona w detektor tworzywa sztucznego beta</td></tr></tbody></table>

badania kompleksu ga(iii) eob-dtpa i jego analogu znakowanego radioizotopowo o masie 68ga

Investigations on the Ga(III) Complex of EOB-DTPA and Its 68Ga Radiolabeled Analogue

Pokazujemy metodę izolacji EOB-DTPA (kwas 3,6,9-triaza-3,6,9-tris(karboksymetylo)-4-(etoksybenzylo)-undekanodioinowy) z jego kompleksu Gd(III) oraz protokoły przygotowania jego nowego nieradioaktywnego, tj. naturalnego kompleksu Ga(III) oraz radioaktywnego kompleksu 68Ga. Zarówno ligand, jak i kompleks Ga(III) scharakteryzowano za pomocą spektroskopii magnetycznego rezonansu jądrowego (NMR), spektrometrii mas i analizy pierwiastkowej. 68 RozdziałGa otrzymano standardową metodą elucji z generatora 68Ge/68Ga. Przeprowadzono eksperymenty mające na celu ocenę skuteczności znakowania 68Ga EOB-DTPA przy pH 3,8–4,0. Do określenia czystości radiochemicznej znacznika wykorzystano sprawdzone techniki analityczne radiowe TLC (chromatografia cienkowarstwowa) i radiowe HPLC (wysokosprawna chromatografia cieczowa). W pierwszym badaniu lipofilowości znaczników 68Ga określono współczynnik dystrybucji n-oktanol/woda 68gatunków Ga obecnych w roztworze o pH 7,4 metodą ekstrakcji. Przeprowadzono pomiary stabilności znacznika in vitro w różnych pożywkach przy fizjologicznym pH, ujawniając różne tempo rozkładu.

Przeanalizowano ligand EOB-DTPA oraz nieradiacyjny kompleks Ga(III) poprzez 1H i 13C{1Spektroskopia H NMR, spektrometria mas i analiza elementarna. Wyniki wymienione w Tabela 1 i przedstawione na Rysunki 1-6 zweryfikuj czystość substancji.
Elucja generatora 68Ge/68Ga pozwoliła na otrzymanie roztworów zawierających 400-600 MBq 6...

Przedstawiono tu procedurę izolacji EOB-DTPA i późniejszej kompleksacji z naturalnym Ga(III) i 68Ga, a także dokładną analizę wszystkich związków i badania nad skutecznością znakowania, stabilnością in vitro i współczynnikiem dystrybucji n-oktanol/woda w radioznakowanym kompleksie.

Badania kompleksu Ga(III) EOB-DTPA i jego analogu znakowanego radioizotopowo o masie 68Ga

We demonstrate a method for the isolation of EOB-DTPA (3,6,9-triaza-3,6,9-tris(carboxymethyl)-4-(ethoxybenzyl)-undecanedioic acid) from its Gd(III) ...

Ogólnym celem niniejszej procedury jest ocena nowego kompleksu radioaktywnego galu-68 w obrazowaniu molekularnym. Metoda ta może pomóc w uzyskaniu odpowiedzi na kluczowe pytania w dziedzinie chemii znaczników galu-68, takie jak warunki znakowania, stabilność znacznika oraz lipofilność. Technika znakowania radioaktywnego jest prosta i pozwala na szybkie ustalenie wyników, wymagając przy tym jedynie minimalnych ilości materiału.Aby rozpocząć tę procedurę, należy dodać do kolby trzy mililitry 0,25-molarnego roztworu kwasu gadoksetowego do wstrzykiwań. Następnie do mieszanego roztworu kwasu gadoksetowego należy dodać 500 miligramów kwasu szczawiowego. Po godzinie mieszania zawiesinę należy przefiltrować przez frat pod zmniejszonym ciśnieniem.Przemyj osad trzykrotnie trzema mililitrami wody. Następnie połącz filtraty wodne w zlewce i umieść w roztworze elektrodę pH. Dodawaj 12 M kwas solny do filtrate'u, aż pH wyniesie około 0,1.Po usunięciu rozpuszczalnika w próżni, pozostałość należy dokładnie przemyć gorącym octanem etylu, aby usunąć nadmiar kwasu szczawiowego. Następnie pozostałość należy wysuszyć w próżni. Po wysuszeniu pozostałość należy ponownie rozpuścić w dwóch mililitrach wody dejonizowanej, a następnie schłodzić roztwór w kąpieli lodowej.Bez wyjmowania z kąpieli lodowej, dodawaj kroplami 0,5 M wodorotlenek sodu, aż do pojawienia się bezbarwnej, kleistej substancji stałej. Następnie usuń wodę za pomocą pipety. Aby przygotować 0,11 M roztwór zapasowy trójchlorku galu, rozpuść 1,94 g otrzymanej substancji stałej w 100 ml wody.Następnie rozpuść 80 miligramów EOB-DTPA w 10 mililitrach wody. W razie potrzeby podgrzej roztwór, aby uzyskać całkowite rozpuszczenie. Dodaj 1,4 mililitra roztworu zapasu chlorku galu do roztworu EOB-DTPA i umieść elektrodę pH w zlewce.Następnie dodawaj kroplami rozcieńczony wodny roztwór amoniaku, aż pH roztworu wyniesie około 4,1. Po usunięciu rozpuszczalnika w próżni, umieść pozostałość w kolbie wyposażonej w stalową głowicę z centralną i równoległą boczną szyjką. Centralną szyjkę wyposaż w palec chłodzący, a boczną w wylot do pompy próżniowej.Podgrzewaj osad pod zmniejszonym ciśnieniem. Okresowo usuwaj sublimowany chlorek amonu z kolby za pomocą lekko wilgotnej ściereczki. Przygotuj kartridż PSH plus, przepłukując go powoli 1 mililitrem 1 molarnego kwasu solnego, a następnie 5 mililitrami wody.Następnie eluuj kolumnę krzemionkową generatora za pomocą czterech mililitrów 0,05 M kwasu solnego i wprowadź eluat galu-68 do kartridża PSH plus. Przepłucz kartridż pięcioma mililitrami wody. Po osuszeniu powietrzem eluuj gal-68 z kartridża za pomocą jednego mililitra pięciomolarnego zakwaszonego chlorku sodu.Teraz należy dodać do fiolki 50 µL eluatu galu-68 oraz 50 µL wcześniej przygotowanego 19 µM roztworu stokowego EOB-DTPA. Dodać 300 µL buforu, aby podnieść pH do 4,0. Krótko wstrząsnąć i inkubować roztwór w temperaturze pokojowej przez pięć minut.Przenieś alikwot roztworu o objętości od 5 do 20 µL do fiolki HPLC. Następnie przeprowadź analizę radio-HPLC na kolumnie C18 w fazie odwróconej. Aby wykonać pomiary stabilności in vitro, pobierz próbki z roztworu do znakowania zawierającego od 6 do 12 MBq znacznika.Przeprowadź analizę radio-TLC na aluminiowych płytkach powlekanych żelem krzemionkowym o długości 80 milimetrów, używając 0,1 molarnego wodnego roztworu cytrynianu sodu jako eluentu. Przeanalizuj płytki za pomocą skanera radioaktywności TLC. Aby określić stabilność w soli fizjologicznej z buforem fosforanowym (PBS), dodaj 150 mikrolitrów 10 milimolarnego roztworu stokowego PBS oraz 60 mikrolitrów 0,1 molarnego wodorotlenku sodu do 65 mikrolitrów roztworu znakującego.Dokładnie wymieszaj roztwór. Następnie przenieś alikwot roztworu o objętości od 1 do 5 µL na płytkę krzemionkową do analizy TLC. Bezzwłocznie przechowuj roztwór w inkubatorze w temperaturze 37 °C.Pobierać alikwoty w celu przeprowadzenia analizy TLC w reprezentatywnych punktach czasowych w ciągu trzech godzin. Aby określić stabilność w obecności nadmiaru apotransferyny, do 120 µL roztworu znakującego dodać 50 µL 10 mM roztworu buforu PBS oraz 430 µL 0,1 M wodorotlenku sodu. Dodać 40 µL roztworu apotransferyny o stężeniu 25 mg/mL i dokładnie wymieszać roztwór.Następnie przenieś alikwot od 1 do 5 µL roztworu na płytkę krzemionkową do analizy TLC. Bezzwłocznie umieść roztwór w inkubatorze w temperaturze 37 °C. Pobieraj alikwoty w reprezentatywnych punktach czasowych w ciągu trzech godzin w celu przeprowadzenia analizy TLC.Aby określić stabilność w surowicy ludzkiej, należy dodać 45 µL 0,1 M wodorotlenku sodu oraz 500 µL surowicy ludzkiej do 25 µL roztworu znakującego. Po dokładnym wymieszaniu roztworu, przenieś alikwot od 1 do 5 µL na płytkę krzemionkową do analizy TLC. Roztwór należy niezwłocznie przechowywać w inkubatorze w temperaturze 37 °C.Pobierać alikwoty w celu przeprowadzenia analizy TLC w reprezentatywnych punktach czasowych w ciągu trzech godzin. Aby wyznaczyć współczynnik podziału, dodać 20 µL roztworu stokowego PBS o stężeniu 10 mM oraz 170 µL 0,1 M wodorotlenku sodu do 50 µL roztworu znakującego. Przenieść 200 µL roztworu do plastikowej fiolki V i dodać 200 µL n-oktanolu.Zamknąć fiolkę i mieszać w wirówce typu vortex przez dwie minuty, a następnie odwirować próbkę przy 1600 ×g przez pięć minut. Po wirowaniu pobrać powtórzenia trzykrotne o objętości 40 µL z fazy n-oktanolu oraz z fazy wodnej i umieścić je w oddzielnych plastikowych fiolkach typu V. Na koniec zmierzyć aktywność każdej próbki w liczniku gamma dla studzienek przez 30 sekund.Kompleksy liganda EOB-DTPA oraz nieradiacyjnego galu(III) przeanalizowano za pomocą spektroskopii NMR protonowej i węglowej, spektrometrii mas oraz analizy elementarnej. Procedura znakowania prowadzi do powstania pożądanego znacznika gal-68 EOB-DTPA, objawiającego się jako radiowy pik HPLC z czasem retencji 2,8 minuty. Porównanie z czasem retencji zimnego standardu przy 220 nanometrach potwierdza pomyślne znakowanie.Wydajność znakowania EOB-DTPA galem-68 badano poprzez wyznaczenie wydajności znakowania w funkcji stężenia ligandu za pomocą metody HPLC. Tutaj przedstawiono reprezentatywny chromatogram płytki TLC analizowanej za pomocą skanera radioaktywności TLC. Aby zbadać stabilność znacznika, określono czystość radiochemiczną w czasie za pomocą metody TLC.Tutaj przedstawiono ustandaryzowany procent nienaruszonego znacznika w funkcji czasu. Wartości aktywności oraz wynikający z nich obliczony współczynnik dystrybucji wymieniono tutaj. Po zastosowaniu tej procedury można przeprowadzić inne metody, takie jak eksperymenty in vitro, w celu udzielenia odpowiedzi na dodatkowe pytania, np. dotyczące biodystrybucji i dynamiki poboru.Po obejrzeniu tego filmu powinni Państwo dobrze rozumieć techniki stosowane do oceny i analizy znaczników z galu-68 w obrazowaniu molekularnym. Prosimy pamiętać, że praca z substancjami promieniotwórczymi może być szkodliwa. Może być ona wykonywana wyłącznie przez przeszkolony personel.Podczas wykonywania tej procedury należy zawsze przestrzegać środków ostrożności, takich jak stosowanie osłon ołowianych i pęset.

investigations-on-ga-iii-complex-eob-dtpa-its-68ga-radiolabeled

Research

JoVE Journal

Chemistry

Chemia

Prezentujemy proces metalacji, oczyszczania i charakterystyki kompleksów lantanowców. Opisane tutaj kompleksy mogą być sprzęgane z makrocząsteczkami, co umożliwia śledzenie tych cząsteczek za pomocą obrazowania rezonansem magnetycznym.

Przygotowanie, oczyszczanie i charakterystyka kompleksów lantanowców do zastosowania jako środki kontrastowe w obrazowaniu rezonansem magnetycznym

Bioortogonalna cykloaddycja Dielsa-Aldera została wykorzystana do stworzenia skutecznej i modułowej, pretargetowanej strategii obrazowania PET dla raka. W niniejszym protokole etapy tej metodologii są opisane w kontekście systemu modelowego wykorzystującego przeciwciało ukierunkowane na raka jelita grubego huA33 i radioligand znakowany 64Cu.

Wykorzystanie bioortogonalnej cykloaddycji Dielsa-Aldera z odwróconym zapotrzebowaniem elektronów do wstępnie ukierunkowanego obrazowania PET

Ten protokół opisuje przygotowanie i charakterystykę dendrymerowego środka kontrastowego do obrazowania metodą rezonansu magnetycznego (MRI), który przenosi makrocykliczne chelaty koordynujące paramagnetyczne jony gadolinu. W serii eksperymentów MRI in vitro środek ten wytwarzał wzmocniony sygnał MRI w porównaniu z dostępnym na rynku analogiem monomerycznym.

Przygotowanie i charakterystyka in vitro środków kontrastowych na bazie dendrymerów do obrazowania metodą rezonansu magnetycznego

Tutaj prezentujemy protokół do uzyskania 68Ga domieszkowanych rdzeniem nanocząstek tlenku żelaza poprzez szybką syntezę mikrofalową. Metodologia ta pozwala uzyskać nanocząstki PET/(T1)MRI o skuteczności znakowania radioaktywnego wyższej niż 90% i czystości radiochemicznej 99% w 20-minutowej syntezie.

Synteza nanocząstek tlenku żelaza domieszkowanego rdzeniem 68Ga do podwójnej pozytonowej tomografii emisyjnej /(T1)Obrazowanie metodą rezonansu magnetycznego

Dobrze zróżnicowane guzy neuroendokrynne nadmiernie eksprymują receptory somatostatyny, które mogą być wykorzystane do diagnostyki obrazowej za pomocą radioznakowanego analogu somatostatyny 68Ga-DOTATATE. Protokół ten szczegółowo opisuje znakowanie radioizotopowe 68Ga-DOTATATE, kontrolę jakości, przygotowanie pacjenta i późniejsze obrazowanie PET/CT. Pod uwagę brane jest bezpieczeństwo radiologiczne i ograniczenia czasowe wynikające z krótkiego okresu połowicznego rozpadu wynoszącego 68Ga.

Praktyczny przewodnik po wytwarzaniu i obrazowaniu PET/CT 68GA-DOTATATE w guzach neuroendokrynnych w codziennej praktyce klinicznej

To badanie opracowało nieinwazyjną metodę oceny rozkładu programowanego ligandu śmierci 1 w całym ciele, na podstawie obrazowania tomograficznego emisji pozytonów antagonisty D-dodekapeptydu [68Ga]. Technika ta ma przewagę nad konwencjonalną immunohistochemią i poprawia skuteczność identyfikacji odpowiednich pacjentów, którzy odniosą korzyści z terapii blokującej immunologiczne punkty kontrolne.

Opracowanie znacznika PET znakowanego 68galem peptydu D do obrazowania ekspresji programowanego ligandu śmierci 1

Obecny protokół opisuje, jak przeprowadzić obrazowanie 64Cu PET/CT i PET/MRI u ludzi w celu zbadania zaburzeń związanych z miedzią, takich jak choroba Wilsona, oraz wpływu leczenia na metabolizm miedzi.

Pozytonowa tomografia emisyjna wykorzystująca miedź 64 jako znacznik do badania zaburzeń związanych z miedzią

Ilościowe pomiary metabolizmu tlenu i glukozy za pomocą PET są uznanymi technologiami, ale szczegóły praktycznych protokołów są rzadko opisane w literaturze. W artykule przedstawiono praktyczny protokół, który z powodzeniem został wdrożony na najnowocześniejszym skanerze pozytonowej tomografii emisyjnej i tomografii komputerowej.

Wielośladowe badania metabolizmu tlenu i glukozy w mózgu przy użyciu skanera pozytonowej tomografii emisyjnej i tomografii komputerowej czasu przelotu

Ta praca opisuje zautomatyzowaną produkcję do 1,7 GBq [68Ga]Ga-FAPI-46 na syntezatorze iPHASE MultiSyn do obrazowania PET białka aktywującego fibroblasty.

Zautomatyzowana radiosynteza [68Ga]Ga-FAPI-46 do rutynowego stosowania klinicznego

Ten artykuł opisuje radiosyntezę, formułowanie, kontrolę jakości nowej sondy znakowanej radioaktywnie (tj. nanoniki NM-02 znakowanej 68Ga) oraz jej zastosowanie do obrazowania PET/CT małych zwierząt w modelu ksenoprzeszczepu.

Radiosynteza, kontrola jakości i obrazowanie pozytonowej tomografii emisyjnej małych zwierząt 68nanocząsteczek znakowanych Ga

To badanie opisuje zautomatyzowany proces produkcji [68Ga]Ga-3BP-3940 za pomocą syntezatora GAIA V2, do obrazowania PET białka aktywującego fibroblasty. Przedstawiono również wyniki badań kontroli jakości przeprowadzonych na trzech seriach testowych.

Automatyczne przygotowanie [68Ga]GA-3BP-3940 na module syntezy do obrazowania PET mikrośrodowiska guza

Poznaj metodę kompleksowania EOB-DTPA z izotopami galu w celu oceny nowego znacznika Ga-68 do obrazowania molekularnego. Technika ta pozwala szybko określić wydajność znakowania, stabilność in vitro oraz współczynnik podziału n-oktanol/woda.

Badania kompleksu Ga(III) EOB-DTPA i jego analogu znakowanego radioizotopowo ^{o masie 68}Ga

Przeglądaj więcej filmów