Fuzja pojedynczych proteoliposomów za pośrednictwem SNARE z dwuwarstwami na uwięzi w mikroprzepływowej komórce przepływowej monitorowanej za pomocą spolaryzowanej mikroskopii TIRF

Ogólnym celem tego testu jest obserwacja poszczególnych zdarzeń fuzji błonowej napędzanych przez neuronalne i egzocytotyczne białka SNARE w celu zrozumienia podstawowych mechanizmów uwalniania neuroprzekaźników i hormonów. Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie fuzji membranowej, takie jak to, w jaki sposób następuje uwalnianie ładunku przez dynamiczne pory fuzyjne oraz los porów po fuzji. Główną zaletą tej techniki jest to, że można zaobserwować różne etapy dokowania pęcherzyków, fuzji w celu otwarcia i kinetyki uwalniania ładunku dla poszczególnych zdarzeń w biochemicznie zdefiniowanych środowiskach.

Chociaż metoda ta może zapewnić wgląd w egzocytozę, można ją również zastosować do innych reakcji fuzji błonowej, takich jak fuzja wirusów otoczki z błonami komórek docelowych podczas infekcji. Ogólnie rzecz biorąc, osoby, które dopiero zaczynają korzystać z tej metody, będą miały trudności, ponieważ należy opanować wiele różnych etapów, od mikrofabrykacji po oczyszczanie białek i obrazowanie. Na początek przygotuj silikonową formę wzorcową, korzystając ze standardowych technik fotolitografii i pokazanego tutaj szablonu.