Name: Zastosowanie elektroforezy kapilarnej do ilościowego oznaczania kwasów organicznych z tkanki roślinnej: przypadek testowy badający nasiona Coffea arabica (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 13 s
Description: Poznaj metodę elektroforezy kapilarnej do ilościowego oznaczania kwasów organicznych w tkankach roślinnych Coffea arabica. Technika ta oferuje minimalną preparację próbek, wysoką przepustowość i niskie koszty w porównaniu do spektrometrii mas.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Autorzy pragną podziękować za finansowe wsparcie tego projektu przez firmę The J.M. Smucker.

<ol><li>Araújo, W. L., Nunes-Nesi, A., Nikoloski, Z., Sweetlove, L. J., Fernie, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+Control+and+Regulation+of+the+Tricarboxylic+Acid+Cycle+in+Photosynthetic+and+Heterotrophic+Plant+Tissues%3A+TCA+Control+and+Regulation+in+Plant+Tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell+Environ%22%5BJournal%5D)">Metabolic Control and Regulation of the Tricarboxylic Acid Cycle in Photosynthetic and Heterotrophic Plant Tissues: TCA Control and Regulation in Plant Tissues.</a> Plant Cell Environ. 35 (1), 1-21 (2012).</li>
<li>Finkemeier, I., Konig, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptomic+Analysis+of+the+Role+of+Carboxylic+Acids+in+Metabolite+Signaling+in+Arabidopsis+Leaves%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Transcriptomic Analysis of the Role of Carboxylic Acids in Metabolite Signaling in Arabidopsis Leaves.</a> Plant Physiol. 162 (1), 239-253 (2013).</li>
<li>Doyle, M. P., Buchanan, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDoyle%2C+MP+%22Food+Microbiology%3A+Fundamentals+and+Frontiers%22">Food Microbiology: Fundamentals and Frontiers</a>. , 4th, ASM Press. Washington, DC, USA. (2013).</li>
<li>Tůma, P., Samcová, E., Štulìk, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+the+Spectrum+of+Low+Molecular+Mass+Organic+Acids+in+Urine+by+Capillary+Electrophoresis+with+Contactless+Conductivity+and+Ultraviolet+Photometric+Detection-An+Efficient+Tool+for+Monitoring+of+Inborn+Metabolic+Disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chim+Acta%22%5BJournal%5D)">Determination of the Spectrum of Low Molecular Mass Organic Acids in Urine by Capillary Electrophoresis with Contactless Conductivity and Ultraviolet Photometric Detection-An Efficient Tool for Monitoring of Inborn Metabolic Disorders.</a> Anal Chim Acta. 685 (1), 84-90 (2011).</li>
<li>López-Bucio, J., Nieto-Jacobo, M. F., Ramı́rez-Rodrı́guez, V., Herrera-Estrella, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organic+Acid+Metabolism+in+Plants%3A+From+Adaptive+Physiology+to+Transgenic+Varieties+for+Cultivation+in+Extreme+Soils%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Sci%22%5BJournal%5D)">Organic Acid Metabolism in Plants: From Adaptive Physiology to Transgenic Varieties for Cultivation in Extreme Soils.</a> Plant Sci. 160 (1), 1-13 (2000).</li>
<li>Cebolla-Cornejo, J., Valcárcel, M., Herrero-Martìnez, J. M., Rosellò, S., Nuez, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+Efficiency+Joint+CZE+Determination+of+Sugars+and+Acids+in+Vegetables+and+Fruits%3A+CE+and+CEC%5BTitle%5D)+AND+%22Electrophoresis%22%5BJournal%5D)">High Efficiency Joint CZE Determination of Sugars and Acids in Vegetables and Fruits: CE and CEC.</a> Electrophoresis. 33 (15), 2416-2423 (2012).</li>
<li>Rosello, S., Galiana-Balaguer, L., Herrero-Martinez, J. M., Maquieira, A., Nuez, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+Quantification+of+the+Main+Organic+Acids+and+Carbohydrates+Involved+in+Tomato+Flavour+Using+Capillary+Zone+Electrophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Sci+Food+Agr%22%5BJournal%5D)">Simultaneous Quantification of the Main Organic Acids and Carbohydrates Involved in Tomato Flavour Using Capillary Zone Electrophoresis.</a> J Sci Food Agr. 82 (10), 1101-1106 (2002).</li>
<li>Wasielewska, M., Banel, A., Zygmunt, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capillary+Electrophoresis+in+Determination+of+Low+Molecular+Mass+Organic+Acids%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Environ+Sci+Dev%22%5BJournal%5D)">Capillary Electrophoresis in Determination of Low Molecular Mass Organic Acids.</a> Int J Environ Sci Dev. 5 (4), 417-425 (2014).</li>
<li>Galli, V., Garcìa, A., Saavedra, L., Barbas, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capillary+Electrophoresis+for+Short-Chain+Organic+Acids+and+Inorganic+Anions+in+Different+Samples%5BTitle%5D)+AND+%22Electrophoresis%22%5BJournal%5D)">Capillary Electrophoresis for Short-Chain Organic Acids and Inorganic Anions in Different Samples.</a> Electrophoresis. 24 (1213), 1951-1981 (2003).</li>
<li>Klampfl, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+Organic+Acids+by+CE+and+CEC+Methods%5BTitle%5D)+AND+%22Electrophoresis%22%5BJournal%5D)">Determination of Organic Acids by CE and CEC Methods.</a> Electrophoresis. 28 (19), 3362-3378 (2007).</li>
<li>Kenney, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+Organic+Acids+in+Food+Samples+by+Capillary+Electrophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Chromatogr+A%22%5BJournal%5D)">Determination of Organic Acids in Food Samples by Capillary Electrophoresis.</a> J Chromatogr A. 546, 423-430 (1991).</li>
<li>Galli, V., Barbas, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capillary+Electrophoresis+for+the+Analysis+of+Short-Chain+Organic+Acids+in+Coffee%5BTitle%5D)+AND+%22J+Chromatogr+A%22%5BJournal%5D)">Capillary Electrophoresis for the Analysis of Short-Chain Organic Acids in Coffee.</a> J Chromatogr A. 1032 (1-2), 299-304 (2004).</li>
<li>Capillary Electrophoresis: Methods and Protocols. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Methods+in+Molecular+Biology%22">Methods in Molecular Biology</a>. Schmitt-Kopplin, P. , Humana Press, USA. Totowa, NJ. 384(2008).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Chromatographic+analysis+of+the+environment+3rd+ed%22">Chromatographic analysis of the environment 3rd ed</a>. Nollet, L. , CRC/Taylor & Franciss, Boca. Raton, USA. (2006).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22ElixerOA+Organic+Acids%2FAnions+Operating+and+Instruction+Manual%2C+MicroSolv+Technology+Corperation%22">ElixerOA Organic Acids/Anions Operating and Instruction Manual, MicroSolv Technology Corperation</a>. , Eatontown, NJ, USA. (2001).</li>
<li>Dahlen, J., Hagberg, J., Karlsson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+low+molecular+weight+organic+acids+in+water+with+capillary+zone+electrophoresis+employing+indirect+photometric+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Fresenius+J.+Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Analysis of low molecular weight organic acids in water with capillary zone electrophoresis employing indirect photometric detection.</a> Fresenius J. Anal. Chem. 366 (5), 488-493 (2000).</li>
<li>Ibanez, A. B., Bauer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analytical+method+for+the+determination+of+organic+acids+in+dilute+acid+pretreated+biomass+hydrolysate+by+liquid+chromatography-time-of-flight+mass+spectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Biotech.+For+Biofuels%22%5BJournal%5D)">Analytical method for the determination of organic acids in dilute acid pretreated biomass hydrolysate by liquid chromatography-time-of-flight mass spectroscopy.</a> Biotech. For Biofuels. 7 (145), (2014).</li>
</ol>

Autorzy oświadczają, że nie mają konkurencyjnych interesów finansowych.

Podobnie jak w przypadku każdej techniki analitycznej, istnieje kilka krytycznych czynników, które mogą znacząco wpłynąć na jakość i wiarygodność generowanych danych. Po pierwsze, ważne jest, aby przetwarzać próbki wydajnie, przy minimalnej liczbie cykli zamrażania/rozmrażania. Wielokrotne zamrażanie i rozmrażanie może pogorszyć skład chemiczny próbki przed przetwarzaniem lub analizą. Po drugie, bardzo ważne jest, aby konsekwentnie i równomiernie stosować etapy tego protokołu do wszystkich próbek. Błędy techniczne wynika...

Kwasy karboksylowe to związki organiczne zawierające jedną lub więcej końcowych karboksylowych grup funkcyjnych, z których każda jest przyłączona do grupy R zawierającej jeden lub więcej atomów węgla (R-C[O]OH). Krótkołańcuchowe kwasy karboksylowe o niskiej masie cząsteczkowej (krótkołańcuchowe kwasy karboksylowe, SCCA) zawierające od jednego do sześciu atomów węgla, są niezbędnymi składnikami oddychania komórkowego i funkcjonują w kilku szlakach biochemicznych niezbędnych do wzrostu i rozwoju komórek. SCCA odgrywają kluczową rolę w metabolizmie komórkowym1, sygnalizacji komórkowej2 i reakcjach organizmu na środowisko (takich jak antybioza3). Z tego powodu SCCA mogą służyć jako użyteczne wskaźniki zakłóceń metabolizmu komórkowego, reakcji roślin na stres4,5 i jakości owoców6,7. Do tej pory SCCA były oznaczane ilościowo głównie za pomocą technik chromatograficznych, takich jak wysokosprawna chromatografia cieczowa (HPLC) lub chromatografia gazowa ze spektroskopią mas (GC-MS). Chociaż metody te są w stanie osiągnąć bardzo niskie granice wykrywalności, mogą być kosztowne, wymagają derywatyzacji docelowych SCCA przy użyciu i/lub toksycznych odczynników i obejmują długie przebiegi separacji na GC lub HPLC. Z tego powodu stale rośnie zainteresowanie zastosowaniem wolnej, strefowej elektroforezy kapilarnej (CZE), która nie wymaga derywatyzacji próbki, do ilościowego oznaczania kwasów organicznych8.
Wolna strefowa elektroforeza kapilarna (CZE) to metodologia chromatograficznego rozdzielania, która, ze względu na dużą liczbę teoretycznych płytek, szybkość i względną łatwość użycia, coraz częściej zastępuje zarówno GC-MS, jak i wysokociśnieniową chromatografię cieczową jako metodę analityczną do oznaczania ilościowego (szczególnie dla celów kontroli jakości) anionów, kationów, aminokwasów, węglowodanów i krótkołańcuchowych kwasów karboksylowych (SCCA)8,9,10. Separacja małych cząsteczek, w tym SCCA, oparta na CZE, opiera się na dwóch podstawowych zasadach: elektroforetycznym ruchu naładowanych jonów w polu elektrycznym utworzonym w poprzek buforu wypełniającego kapilarę; oraz ruch elektroosmotyczny całego układu buforowego z jednego końca kapilary na drugi, na ogół w kierunku elektrody ujemnej. W tym układzie małe cząsteczki poruszają się w kierunku elektrody ujemnej z różnymi prędkościami, przy czym prędkość każdej cząsteczki zależy od stosunku ładunku netto cząsteczki do masy cząsteczkowej. Ponieważ ruch każdej pojedynczej cząsteczki w tym układzie zależy od stanu naładowania cząsteczki i ogólnej szybkości przepływu elektroosmotycznego (która z kolei opiera się na zawartości jonów w buforze używanym do wypełnienia kapilary), pH buforu i skład jonowy mają duży wpływ na stopień, w jakim cząsteczki mogą być skutecznie oddzielone za pomocą CZE. Z tego powodu SCCA, ze względu na stosunkowo wysoki stosunek ładunku do masy, są idealnymi celami do separacji opartej na CZE. Metabolity wydzielone za pomocą CZE można wykrywać różnymi metodami, w tym absorbancją UV, absorbancją spektralną (która jest zwykle wykonywana przy użyciu matrycy fotodiodowej [PDA]) i/lub spektroskopii mas (CE-MS lub CE-MS/MS)8. Różnorodność metod separacji i detekcji oferowanych przez CZE sprawia, że jest to technika niezwykle elastyczna i adaptowalna. Z tego powodu CZE jest coraz częściej stosowane jako standardowa metoda analizy w obszarach bezpieczeństwa i jakości żywności11,12, badań farmaceutycznych13 i monitorowania środowiska13,14. 
Elektroforeza kapilarna jest używana do wykrywania i ilościowego oznaczania krótkołańcuchowych kwasów karboksylowych od prawie dwóch dekad13. Zdolność rozdzielcza (szczególnie w przypadku małych, naładowanych cząsteczek), krótki czas trwania i niski koszt analiz CZE w przeliczeniu na próbkę sprawiają, że CZE jest idealną techniką do rozdzielania i oznaczania ilościowego SCCA13. Metoda ta przedstawia protokół wykorzystania CZE do pomiaru stężenia kwasów organicznych w tkankach roślinnych. Przykładowe dane zostały wygenerowane dzięki pomyślnemu wdrożeniu tego protokołu w celu zmierzenia zmian poziomu kwasów organicznych w nasionach kawy po wtórnej fermentacji. Protokół szczegółowo opisuje krytyczne etapy i typowe błędy związane z separacją SCCA na podstawie CZE oraz omawia środki, za pomocą których protokół ten może być z powodzeniem stosowany do ilościowego oznaczania SCCA w dodatkowych tkankach roślinnych.

<table><tbody><tr><td>Ceramiczny Moarter i tłuczek</td><td>Coorstek</td><td>60310</td><td></td></tr><tr><td>System Beckman Coulter P / ACE MDQ CE Beckman</td><td>Coulter</td><td>Różne</td><td></td></tr><tr><td>szklane fiolki na próbki</td><td>Fisher Inc.</td><td>033917D</td><td></td></tr><tr><td>Probówki do mikrowirówek 1,5 ml&nbsp;</td><td>Fisher Inc.</td><td>02-681-5</td><td></td></tr><tr><td>Woda klasy LC/MS</td><td>Fisher Inc.</td><td>W6-1</td><td>Mili-Q woda (18.2&nbsp; M&Omega; &#183; cm) jest również dopuszczalna</td></tr><tr><td>15 ml szklana rurka / nakrętka wyłożona teflonem&nbsp;</td><td>Fisher Inc.</td><td>14-93331A</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm M</td><td>Fisher Inc.</td><td>13-374-12</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw do wykrywania CElixirOA pH 5,4&nbsp;</td>Strzykawki <td>MicroSolv</td><td>06100-5.4</td><td></td></tr><tr><td>BD Safety-Lok</td><td>Fisher Inc.</td><td>14-829-32</td><td></td></tr><tr><td>Filtr strzykawkowy 17 mm, PTFE</td><td>Fisher Inc.</td><td></td><td></td>3377154</tr><tr><td>32 Karatów, V. 8.0 oprogramowanie sterujące</td><td>Beckman Coulter</td><td>285512</td><td></td></tr><tr><td>fiolki na próbki do elektroforezy kapilarnej (CE)&nbsp;</td><td>Beckman Coulter</td><td>144980</td><td></td></tr><tr><td>nakrętki do fiolek CE&nbsp;</td><td>Beckman Coulter</td><td>144648</td><td></td></tr><tr><td>Ciekły azot</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Ciekły azot jest dostępny w większości usług obiektowych</td></tr></tbody></table>

zastosowanie elektroforezy kapilarnej do ilościowego oznaczania kwasów organicznych z tkanki roślinnej: przypadek testowy badający nasiona coffea arabica

Using Capillary Electrophoresis to Quantify Organic Acids from Plant Tissue: A Test Case Examining Coffea arabica Seeds

Kwasy karboksylowe to kwasy organiczne zawierające jedną lub więcej końcowych karboksylowych grup funkcyjnych (COOH). Krótkołańcuchowe kwasy karboksylowe (SCCA; kwasy karboksylowe zawierające od trzech do sześciu atomów węgla), takie jak jabłczan i cytrynian, mają kluczowe znaczenie dla prawidłowego funkcjonowania wielu systemów biologicznych, w których działają w oddychaniu komórkowym i mogą służyć jako wskaźniki zdrowia komórek. W żywności zawartość kwasów organicznych może mieć znaczący wpływ na smak, a zwiększony poziom SCCA skutkuje kwaśnym lub "kwaśnym" smakiem. Z tego powodu metody szybkiej analizy poziomów kwasów organicznych są szczególnie interesujące dla przemysłu spożywczego i napojów. Niestety, większość metod stosowanych do oznaczania ilościowego SCCA opiera się na czasochłonnych protokołach wymagających derywatyzacji próbek za pomocą niebezpiecznych odczynników, a następnie kosztownych analiz chromatograficznych i/lub spektrometrycznych mas. Niniejsza metoda szczegółowo opisuje alternatywną metodę wykrywania i oznaczania ilościowego kwasów organicznych z materiału roślinnego i próbek żywności przy użyciu swobodnej strefowej elektroforezy kapilarnej (CZE), czasami nazywanej po prostu elektroforezą kapilarną (CE). CZE zapewnia opłacalną metodę pomiaru SCCA o niskiej granicy wykrywalności (0,005 mg/ml). Ten artykuł zawiera szczegółowe informacje na temat ekstrakcji i oznaczania ilościowego SCCA z próbek roślin. Podczas gdy przedstawiona metoda koncentruje się na pomiarze SCCA z ziaren kawy, przedstawiona metoda może być stosowana do wielu roślinnych materiałów spożywczych.

Niniejszy protokół został z sukcesem wykorzystany do pomiaru wpływu zabiegów nasiennych na zawartość SCCA w ziarnach zielonej kawy. W tym eksperymencie zastosowano sześć wariantów: nasyconą zawiesinę drobnoustrojów Leuconostoc pseudomesenteroides szczep GCP674 w pożywce wzrostowej (1), wodną zawiesinę drobnoustrojów GCP674 w wodzie (2), wodny roztwór kwasu octowego i mlekowego (odpowiednio 0.15 i 0.4 mg/ml) (3), zabieg z użyciem zużytej pożywki wzrostowej M1 (4), wodę dH2</s...

Ten artykuł przedstawia metodę wykrywania i kwantyfikacji kwasów organicznych z materiału roślinnego za pomocą swobodnej strefowej elektroforezy kapilarnej. Podano przykład potencjalnego zastosowania tej metody, określającej wpływ wtórnej fermentacji na poziom kwasów organicznych w nasionach kawy.

Zastosowanie elektroforezy kapilarnej do ilościowego oznaczania kwasów organicznych z tkanki roślinnej: przypadek testowy badający nasiona Coffea arabica

Carboxylic acids are organic acids containing one or more terminal carboxyl (COOH) functional groups. Short chain carboxylic acids (SCCAs; carboxylic ...

Ogólnym celem niniejszej procedury jest ilościowe oznaczenie poziomu kwasów organicznych obecnych w tkankach roślinnych. Metoda ta może być wykorzystana do odpowiedzi na pytania z zakresu biochemii i fizjologii roślin, takie jak wpływ bodźców środowiskowych na wzrost korzeni, rozwój upraw oraz jakość żywności lub napojów. Głównymi zaletami tej metody są minimalny nakład pracy przy przygotowaniu próbek, wysoka przepustowość oraz fakt, że elektroforeza kapilarna jest bardziej ekonomiczna niż spektrometria mas.Choć metoda ta jest wykorzystywana do wyjaśniania fizjologicznych odpowiedzi roślin, może ona zostać zastosowana również w nauce o żywności i kontroli jej jakości, gdzie kwasy organiczne mają kluczowy wpływ na smak, bezpieczeństwo i stabilność. Na początek należy przygotować próbki do ekstrakcji krótkołańcuchowych kwasów karboksylowych (SCCA). Przygotowuj po jednym gramie ziaren kawy na raz, aby upewnić się, że po przetworzeniu pozostanie wystarczająca ilość próbki.Aby uzyskać jednolity rozmiar cząstek dla maksymalnej wydajności ekstrakcji SCCA, należy najpierw schłodzić moździerz i tłuczek ciekłym azotem. Do moździerza z niewielką objętością ciekłego azotu należy dodać próbkę.

using-capillary-electrophoresis-to-quantify-organic-acids-from-plant

Research

JoVE Journal

Chemistry

Chemia

Połączenie genomiki, analizy koekspresji genów oraz identyfikacji związków docelowych poprzez metabolizm umożliwia funkcjonalną adnotację genów.

Adnotacja funkcji genów roślin poprzez zintegrowaną genomikę, metabolomikę i informatykę

Ten film opisuje metodę ilościowego oznaczania strawnych węglowodanów obecnych w tkankach roślinnych. Pomaga to zbierać dane z różnych tkanek roślinnych w celu badania ekologii żywieniowej, interakcji między roślinami a roślinożercami oraz dynamiki sieci pokarmowej.

Test kolorymetryczny do oznaczania ilościowego węglowodanów niestrukturalnych w tkankach roślinnych

Znajomość składu soku łyka, jak również mechanizmu jego ładowania i transportu na duże odległości jest niezbędna do zrozumienia długodystansowej sygnalizacji w rozwoju roślin i odpowiedzi na stres/patogen oraz transportu asymilacyjnego. Niniejszy manuskrypt opisuje pobieranie wysięków łyka przy użyciu metody wspomaganej przez EDTA.

Pobieranie i analiza wysięków łyka Arabidopsis przy użyciu metody wspomaganej przez EDTA

Biomasa roślinna stanowi źródło odnawialne dla wielu produktów, w tym paliwa, paszy, żywności i różnych materiałów. W artykule badamy właściwości drzewa tytoniowego (Nicotiana glauca) i topoli jako odpowiednich źródeł dla rurociągu biorafineryjnego.

Profilowanie transkryptu i metabolitów w celu oceny drzewa tytoniowego i topoli jako surowca dla przemysłu biotechnologicznego

Przedstawiono protokół kompleksowej ekstrakcji lipidów, metabolitów i białek z tkanek biologicznych przy użyciu jednej próbki.

Prosta metoda ekstrakcji frakcjonowanej do kompleksowej analizy metabolitów, lipidów i białek z pojedynczej próbki

Opisane tutaj protokoły zapewniają jasną i przystępną metodologię pomiaru zawartości rozpuszczalnych białek i strawnych (niestrukturalnych) węglowodanów w tkankach roślinnych. Możliwość ilościowego określenia tych dwóch makroskładników odżywczych roślin ma znaczące implikacje dla postępu w dziedzinie fizjologii roślin, ekologii żywieniowej, interakcji roślinożerców i ekologii sieci pokarmowej.

Kwantyfikacja zawartości białka rozpuszczalnego w roślinach i strawnych węglowodanów na przykładzie kukurydzy (Zea mays)

Ten protokół opisuje efektywną metodologię ekstrakcji i kwantyfikacji kofeiny w zawiesinach komórkowych C. arabica L. oraz eksperymentalny proces oceny aktywności enzymatycznej syntazy kofeiny z poziomem ekspresji genu kodującego ten enzym.

Ekstrakcja kofeiny, aktywność enzymatyczna i ekspresja genów syntazy kofeiny z zawiesin komórek roślinnych

Produkty naturalne stanowią obiecujące punkty wyjścia dla rozwoju nowych leków i środków terapeutycznych. Jednak ze względu na dużą różnorodność chemiczną znalezienie nowych związków terapeutycznych z roślin jest trudnym i czasochłonnym zadaniem. Opisujemy uproszczone podejście do identyfikacji cząsteczek przeciwdrobnoustrojowych i antybiofilmu z ekstraktów i frakcji roślinnych.

Systematyczne podejście do identyfikacji nowych cząsteczek przeciwdrobnoustrojowych i przeciwbiofilmowych z ekstraktów i frakcji roślinnych w celu zapobiegania próchnicy zębów

Tu opisano jest precyzyjna i możliwa do powtórzenia metoda ilościowego oceny nukleozydów/nukleotydów in vivo w roślinach. Ta metoda wykorzystuje HPLC-MS/MS.

Przygotowanie próbki roślinnej do pomiaru zawartości nukleozydów/nukleotydów za pomocą HPLC-MS/MS

Kwasy fenolowe są ważnymi substancjami fitochemicznymi, które są obecne w pełnych ziarnach. Posiadają właściwości bioaktywne, takie jak przeciwutleniające funkcje ochronne. Prace te miały na celu przedstawienie informacji na temat uogólnionej metody identyfikacji HPLC, szacowania całkowitej zawartości fenoli oraz oznaczania zdolności przeciwutleniającej kwasów fenolowych w zbożach i roślinach strączkowych.

Uogólniona metoda oznaczania składu swobodnie rozpuszczalnych kwasów fenolowych i zdolności przeciwutleniających zbóż i roślin strączkowych

Demonstrujemy średnioprzepustową metodę ilościowego oznaczania aflatoksyn i fitoaleksyn stilbenoidowych w pojedynczych nasionach orzeszków ziemnych przy użyciu ultra wydajnej chromatografii cieczowej. Metoda ta została opracowana specjalnie do analiz dzikich gatunków pajęczaków zagrożonych przez aflatoksynogenne gatunki Aspergillus.

Nieniszcząca kwantyfikacja aflatoksyn i fitoaleksyn stilbenoidowych w pojedynczych orzechach ziemnych (Arachis spp.) Nasiona

Poznaj metodę elektroforezy kapilarnej do ilościowego oznaczania kwasów organicznych w tkankach roślinnych Coffea arabica. Technika ta oferuje minimalną preparację próbek, wysoką przepustowość i niskie koszty w porównaniu do spektrometrii mas.

Zastosowanie elektroforezy kapilarnej do ilościowego oznaczania kwasów organicznych z tkanki roślinnej: przypadek testowy badający nasiona Coffea arabica (Wideo) | JoVE Journal

Zastosowanie elektroforezy kapilarnej do ilościowego oznaczania kwasów organicznych z tkanki roślinnej: przypadek testowy badający nasiona Coffea arabica

Przeglądaj więcej filmów