Wyznaczanie względnej powierzchni komórki i całkowitej ekspresji rekombinowanych kanałów jonowych za pomocą cytometrii przepływowej

Ogólnym celem tej metody jest ilościowe określenie ekspresji białek błonowych na powierzchni komórki za pomocą fluorescencyjnego testu w odstępach. Główną zaletą tej techniki jest to, że testy cytometrii przepływowej dostarczają wymiernych punktów końcowych na dużych objętościach żywych komórek w jednym eksperymencie. Implikacje tej techniki rozciągają się w kierunku diagnozy i terapii arytmii komorowych serca, ponieważ patologie te są często związane z mutacjami genetycznymi, które powodują defekty w transporcie kanałów jonowych serca.

Ogólnie rzecz biorąc, osoby nowe w tej metodzie mają trudności ze znalezieniem odpowiedniego miejsca insercji zewnątrzgrzbietowej dla epitopu, które nie szkodzi funkcji białka i generuje silny sygnał fluorescencyjny w obecności sprzężonego przeciwciała. Tę procedurę zademonstruje Benoite Bourdin, asystentka naukowa z mojego laboratorium. Na początek podwójnie znakowane DNA konstruuje się z mCherry na wewnątrzkomórkowym C-końcu.