Przemijający model niedrożności tętnicy środkowej mózgu udaru noworodka u szczurów P10

Udar noworodkowy jest istotną przyczyną wczesnego uszkodzenia mózgu, wymagającym modelu translacyjnego ze spójnymi wzorcami urazów ogniskowych i wysoką odtwarzalnością, aby umożliwić badanie. W pracy opisano szczegółową procedurę chirurgiczną mającą na celu stworzenie niekrwotocznego, jednostronnego ogniskowego uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego u gryzoni o długości równoważnej.

Ogólnym celem przejściowej niedrożności tętnicy środkowej mózgu u noworodków szczurów jest zapewnienie translacyjnego modelu udaru u noworodków urodzonych w terminie. Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie niedokrwiennego uszkodzenia mózgu u noworodków poprzez zrozumienie mechanizmów urazu i naprawy w rozwijającym się mózgu oraz tego, jak możemy je modyfikować za pomocą różnych strategii terapeutycznych. Główną zaletą tej techniki jest to, że zapewnia fizjologicznie dokładny model ogniskowego udaru niedokrwiennego tętnic u noworodków, a także zawiera komponent reperfuzyjny, który jest ważną częścią progresji urazu u noworodków ludzkich.

Wizualna demonstracja tego modelu ma kluczowe znaczenie, ponieważ etapy tej operacji mogą być bardzo trudne do nauczenia. Dwuwymiarowe reprezentacje anatomii tętnic nie zawsze odpowiednio pokazują złożoną naturę rozgałęzień 3D u szczura. Zacznij od zważenia szczeniaka, aby upewnić się, że waży od 19 do 21 gramów.

Po znieczuleniu szczeniaka za pomocą wziewnego izofluranu zgodnie z zatwierdzonymi protokołami, upewnij się, że nie ma reakcji na uszczypnięcie stopy. Utrzymuj temperaturę powierzchni ciała za pomocą poduszki grzewczej pod sceną chirurgiczną. Zabezpiecz zwierzę w pozycji leżącej taśmą w poprzek ramion.

Użyj sterylnych bawełnianych wacików, aby przetrzeć przedni obszar szyjki macicy 70% etanolem, a następnie wacik z roztworem jodu powidonu. Następnie należy miejscowo naciekać 0,25% bupiwakainy do planowanego miejsca nacięcia. Następnie, podczas pracy przez stereoskop, wykonaj w linii środkowej pięcio- do siedmiomilimetrowego przedniego nacięcia szyjki macicy, aby odsłonić wspólną tętnicę szyjną.

Umieść dwa do czterech retraktorów, aby jama była otwarta, a tętnica odsłonięta. Następnie zlokalizuj tętnicę szyjną wewnętrzną, tętnicę potyliczną i tętnicę szyjną zewnętrzną. Usuń tkankę łączną i tłuszcz z tętnic, aby uzyskać wyraźny widok.

Po przecięciu 1,5 centymetra nici do szwu jedwabnego 6-0 należy rozpleść szew, wyciągając pojedyncze pasma. Upewnij się, że pojedyncze pasma są schludne i nie są postrzępione. Trzymając pasmo szwu w kleszczach pod kątem 45 stopni, przeciągnij kleszcze po łuku pod ICA, tak aby końcówki wyłoniły się między ICA a OA. Następnie chwyć koniec pasma szwu i pociągnij go tak, aby koniec był łatwo dostępny.

Zwolnij pasmo z kleszczy i wycofaj kleszcze spod ICA, odwracając poprzedni ruch. Zawiąż tymczasową ligaturę wokół ICA u podstawy najbliżej miejsca, w którym oddziela się od CCA. Ostrożnie cofnij ICA na boki, a następnie użyj klipsa, aby przymocować cofające się pasmo do nadmiaru skóry w pobliżu okolicy pachy po stronie przeciwnej do nacięcia.

Upewnij się, że chowane pasmo jest wystarczająco napięte, aby zatrzymać przepływ krwi przed przejściem do następnego kroku. Tętnica powinna być płaska i blada. Użyj kleszczy pod kątem 45 stopni, aby chwycić kolejne niesplecione pasmo szwu i owinąć je pod i wokół ICA, tak jak poprzednio.

Ustaw to pasmo bocznie do pasma wciągającego. Następnie przeciąć arteriotomię o średnicy 0,2 milimetra w połowie drogi między zawiązanymi i niezwiązanymi więzadłami, błądząc bliżej zawiązanej ligatury. Teraz za pomocą linijki metrycznej zmierz 10 milimetrów nylonowego szwu pokrytego silikonem jako szew zamykający.

Przetnij szew z dodatkowym naddatkiem od dwóch do trzech milimetrów do usunięcia podczas reperfuzji. Przytrzymaj szew okluzyjny za pomocą kleszczy 45 stopni i użyj prostych kleszczy, aby utworzyć zgięcie, zaznaczając punkt zatrzymania postępu. Włóż szew okluzyjny do arteriotomii, kierując go równolegle do ECA i w kierunku głowy.

Płynnie przesuwaj szew, aż do osiągnięcia zgięcia. Następnie użyj pasma umieszczonego bocznie do pasma retrakcyjnego, aby zawiązać tymczasową ligaturę, aby zabezpieczyć szew okluzyjny. Zdejmij zacisk zwijacza, a następnie przytnij pasma obu tymczasowych ligatur, pozostawiając pasmo, które zostanie użyte do usunięcia węzła, dłuższe niż pasmo użyte do jego zaciśnięcia.

Usuń zwijacze i zamknij ubytek za pomocą plecionego jedwabiu 6-0, aby utworzyć trzy lub cztery przerywane szwy. Wyjmij szczeniaka ze znieczulenia i umieść go na poduszce grzewczej w powietrzu w pomieszczeniu. Monitoruj młode, dopóki nie odzyska wystarczającej przytomności, aby utrzymać leżący mostek i upewnij się, że jest w pełni wyleczone przed powrotem do matki.

Podczas okluzji można zastosować dyfuzyjne obrazowanie rezonansu magnetycznego w celu sprawdzenia odpowiedniej indukcji urazu. Obrazy te pokazują trwający uraz niedokrwienny, wskazywany przez strzałkę, wykryty przez DW-MRI podczas przejściowego MCAO. Około dwie godziny i 50 minut po zamknięciu MCA należy przygotować materiał chirurgiczny, a następnie rozpocząć procedurę reperfuzji poprzez znieczulenie jak poprzednio.

Usuń przerwane szwy i zlokalizuj połączenie, które jest oznaczone przez dwie ligatury i ogonowy koniec szwu zamykającego. Ostrożnie rozwiąż najbardziej boczny węzeł tymczasowej ligatury, pociągając za dłuższe pasmo i usuń pasmo szwu z ubytku. Dokładnie trzy godziny po niedrożności MCA powoli wycofaj szew zamykający z tętnicy.

Nie powinno być żadnego oporu. Użyj kleszczy, aby wywrzeć nacisk na arteriotomię, a następnie ostrożnie rozwiąż węzeł przyśrodkowy, aby przywrócić przepływ krwi. Po usunięciu pasma szwu z ciała nałóż środek hemostatyczny na arteriotomię, aby zatrzymać krwawienie.

Powrót pierwotnego kształtu tętnicy i czerwonego koloru potwierdza, że przepływ krwi ICA został przywrócony. Usuń retraktory i zamknij ubytek za pomocą plecionego jedwabiu 6-0, aby utworzyć trzy lub cztery przerwane szwy. Wyjmij szczenię ze znieczulenia i pozwól mu dojść do siebie, monitorując jak poprzednio, zanim wrócisz do klatki domowej.

Sprawdzaj szczenięta codziennie przez pięć dni. Zapisz ich wagę i dokładnie sprawdź miejsca nacięć pod kątem prawidłowego gojenia. Te 50-mikronowe, zabarwione fioletem krezylo-fioletowym odcinki mózgu pobrane od zwierząt P-38 wykazują dość poważne obrażenia po trzygodzinnym TMCAO w P-10.

Strzałka wskazuje na tworzenie się torbieli ipsilateralnej oraz zmniejszoną objętość kory mózgowej i prążkowia. Okrągły otwór po lewej stronie reprezentuje identyfikator półkuli przeciwległej. Próbując wykonać tę procedurę, należy pamiętać, że chociaż procedura ta jest koncepcyjnie prosta, sukces i mistrzostwo mogą wymagać godzin optymalizacji i praktyki.

Po opanowaniu okluzji można zakończyć w mniej niż 10 minut, podczas gdy reperfuzję można zakończyć w mniej niż pięć minut.