Połączenie mokrych i suchych technik laboratoryjnych w celu kierowania krystalizacją dużych zwiniętych cewek białkowych

Ogólnym celem tej procedury jest szybka identyfikacja i przetestowanie możliwych granic domen w dużych białkach o zwiniętej cewce, aby zwiększyć prawdopodobieństwo znalezienia wewnętrznego fragmentu, który ulegnie krystalizacji. Metoda ta może pomóc naukowcom usprawnić proces krystalizacji dużych białek o zwoju spiralnym, które mogą być niezwykle trudne do skrystalizacji. Zaletą tej techniki jest to, że integruje ona zarówno metody eksperymentalne, jak i obliczeniowe w celu szybkiej identyfikacji i badań przesiewowych prawdopodobnych kandydatów do krystalizacji, zwiększając w ten sposób ich szanse na sukces.

Technikę tę zademonstrują Jenna Zalewski, doktorantka w moim laboratorium, oraz Keith O'Conor, badacz w moim laboratorium. Na początek połącz dane wyjściowe z uznanych narzędzi internetowych, aby wygenerować przewidywania możliwych granic domen zwojów zwojów, zgodnie z opisem w protokole tekstowym. Po wygenerowaniu plazmidów ekspresyjnych i przetestowaniu ich poziomów ekspresji, jak opisano w tekście, rozpocznij oczyszczanie każdego szczepu, który pomyślnie eksprymował białko oznaczone Ruby.