Name: Spektroskopia rezonansu magnetycznego Phosphorus-31: narzędzie do pomiaru zdolności ultrautleniającej fosforylacji mitochondrialnej in vivo w ludzkich mięśniach szkieletowych (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-19T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 40 s
Description: Poznaj nieinwazyjną metodę spektroskopii rezonansu magnetycznego fosforu-31 do pomiaru zdolności fosforylacji oksydacyjnej mitochondriów w mięśniach szkieletowych człowieka. Technika umożliwia powtarzalne badania kliniczne.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była częściowo wspierana przez Davis Heart and Lung Research Institute Trifit Award, a także przez Intramural Research Program NIH National Institute on Aging.

Niniejszy protokół został zatwierdzony przez Instytucjonalną Radę Przeglądową (Institutional Review Board) Uniwersytetu Stanowego Ohio i jest zgodny z wytycznymi dotyczącymi badań z udziałem ludzi. Krytycznie ważne jest, aby wszystkie procedury z wykorzystaniem sprzętu MR były wykonywane przez odpowiednio przeszkolony personel, przestrzegający najwyższych standardów bezpieczeństwa MR59.

1. Materiały i przygotowanie
<ol>
	<li>Przed rozpoczęciem eksperymentu należy upewnić się, że wszystkie niezbędne materiały są dostępne (Rycina 2).</li>
	<li>Podłączyć cewkę 31P do złącza cewki w stole badawczym, znajdującego się na końcu stołu najbliżej otworu gantry. Umieścić dużą trójkątną poduszkę z pianki w pobliżu głowy stołu do badań MR, ale nie bezpośrednio na cewce 31P. Na drugim końcu stołu do badań MR, w największej odległości od otworu gantry, umieścić poduszkę pod głowę w celu zapewnienia komfortu badanemu.</li>
</ol>
2. Pozycjonowanie badanego (Rysunek 3a)
<ol>
	<li>Poproś badanego o położenie się na plecach na stole MR, z nogami skierowanymi w stronę gantry. Pod kolanami umieść poduszkę z pianki, aby podeprzeć nogę w pozycji częściowo zgiętej.</li>
	<li>Upościcuj badanego blisko prawej krawędzi stołu (prawą stroną badanego), aby wycentrować lewe udo jak najbliżej izocentrum magnesu, zapewniając tym samym optymalną homogeniczność B0 w badanym mięśniu uda. Dostarcz badanemu zatyczki do uszu i/lub słuchawki.</li>
	<li>Umieść cewkę RF 31P na lewym mięśniu czworogłowym w przybliżeniu w połowie odległości między rzepką a głową kości udowej i przymocuj ją do nogi za pomocą pasów. Umieść cewkę nad boczną częścią nogi, nad mięśniem obszernym bocznym.</li>
	<li>Przymocuj olej dla niemowląt do przyśrodkowej strony uda za pomocą tych samych pasów, których użyto do przymocowania cewki do nogi. Ułatwia to lokalizację skanowania.</li>
	<li>Zwiąż nogi badanego pasem umieszczonym poniżej cewki i powyżej kolana. Przymocuj nogi badanego do stołu MR dodatkowymi pasami: jednym powyżej kolana i jednym w połowie drogi między kolanem a kostką.</li>
	<li>Użyj laserowego przewodnika światła do wyznaczenia środka cewki i przesuń stół do izocentrum magnesu, korzystając z tego punktu centrowania.</li>
</ol>
3. Protokół ćwiczeń
<ol>
	<li>Wyjaśnij badanemu, że protokół ćwiczeń składa się z trzech faz: wstępnej fazy bazowej, krótkiej fazy intensywnego wysiłku oraz fazy regeneracji.</li>
	<li>Poinstruuj badanego, aby podczas fazy bazowej i fazy regeneracji podczas akwizycji spektroskopowej leżał nieruchomo i rozluźnił mięśnie nóg w celu zminimalizowania artefaktów ruchowych.</li>
	<li>Odlicz czas do rozpoczęcia ćwiczenia, informując o tym badanego. W tym momencie badany powinien rozpocząć wyprost i zgięcie kolana tak silnie i szybko, jak to możliwe, przeciwko oporowi pasów. 
	UWAGA: Mięśnie czworogłowe są wykorzystywane do ruchu lewej podudzia w górę i w dół, aż do otrzymania instrukcji o zatrzymaniu.</li>
	<li>Zakończ ćwiczenie po spadku wysokości piku PCr o 30%.
	<ol>
		<li>Obserwuj wysokość piku PCr w oknie podglądu akwizycji oraz sprawdź ją po zakończeniu sekwencji ćwiczeń. 
		UWAGA: Ogólna wytyczna mówi, że spadek wysokości piku PCr o około 30% odpowiada pikowi Pi, którego wysokość stanowi 50% wysokości piku PCr. Jeśli wyczerpanie PCr nie następuje wystarczająco szybko, aby osiągnąć 30-procentowy spadek podczas fazy ćwiczeń badania, zachęć badanego do mocniejszego lub szybszego kopania podczas wysiłku. 
		UWAGA: Przerwanie ćwiczenia określa się na podstawie monitorowania wysokości piku PCr i czasu trwania wysiłku. Może to skutkować nieco różnym czasem trwania ćwiczeń u różnych pacjentów, co należy uwzględnić w analizie.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. Protokół skanowania
<ol>
	<li>Wykonaj lokalizator trzechpłaszczyznowy, aby zweryfikować prawidłowe ustawienie badanego i zidentyfikować położenie cewki 31P. 
	UWAGA: Sekwencja lokalizatora uruchamia się automatycznie i centruje się w indicated pozycji przy użyciu laserowego prowadnika świetlnego (krok 2.9)</li>
	<li>Wykonaj drugi lokalizator trzechpłaszczyznowy.
	<ol>
		<li>Otwórz widok przekrojów na obrazach z pierwszego lokalizatora trzechpłaszczyznowego. 
		UWAGA: Proces ten może się różnić w zależności od zastosowanego oprogramowania i systemów sprzętowych.</li>
		<li>Wycentruj i obróć orientację przekroju, klikając lewym przyciskiem myszy i przytrzymując grupę przekrojów. Obróć grupę przekrojów. Upewnij się, że końcowa orientacja przekrojów odpowiada pozycji oleju dla niemowląt.</li>
		<li>W oknie rutyny sekwencji zwiększ liczbę przekrojów tak, aby objęły całą nogę na obrazach osiowych i strzałkowych (Rycina 3b).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Sekwencja spektroskopii 31P:
	<ol>
		<li>Użyj następujących parametrów niezlokalizowanej sekwencji impuls-akwizycja: TR: 1 0 msec; TE: 0,34 msec; szerokość widma: 2 0 Hz; kąt odchylenia: 90 stopni; liczba punktów danych: 1 024; 4 średnie, co daje rozdzielczość czasową 1 widmo co 6 sec.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Umiejscowienie pola shimmingu 31P:
	<ol>
		<li>Używając myszy, przeciągnij obrazy z drugiego lokalizatora trzechpłaszczyznowego do okna podglądu na górze ekranu. Przeciągnij sekwencję spektroskopii do okna protokołu i kliknij dwukrotnie, aby ją otworzyć.</li>
		<li>Użyj paska narzędzi pozycji, aby zwizualizować woksel shimmingu (wybierz czarny prostokąt z poziomymi liniami). Po wybraniu tej opcji na obrazach lokalizatora pojawi się zielone pole. 
		UWAGA: Jest to woksel shimmingu.</li>
		<li>Przesuwaj woksel, klikając lewym przyciskiem myszy i przytrzymując go w centrum. Zmień rozmiar i obróć orientację woksela, klikając lewym przyciskiem myszy i przytrzymując go w narożniku pola. Umieść pole shimmingu tak, aby zapewnić jednorodność pola B0 bezpośrednio pod cewką i równolegle do płaszczyzny mięśnia czworogłowego uda. 
		UWAGA: Ma to na celu zapewnienie właściwego shimmingu w obszarze wrażliwym pod cewką, którym jest objętość tkanki znajdująca się bezpośrednio pod centrum cewki.</li>
		<li>Wykorzystaj obrazy z lokalizatora trzechpłaszczyznowego do zidentyfikowania obszaru wrażliwego cewki i dostosuj pole shimmingu tak, aby objęło ten obszar w obrębie mięśnia czworogłowego uda. 
		UWAGA: Pole shimmingu może być większe niż rzeczywisty zasięg cewki powierzchniowej, aby zapewnić jednorodność B0 w obrębie woksela akwizycji danych (Rycina 3c).</li>
		<li>Testowa akwizycja 31P:
		<ol>
			<li>Otwórz okno podglądu akwizycji i wybierz ikonę głowy na pasku narzędzi akwizycji. Umożliwi to podgląd akwizycji spektroskopii w czasie rzeczywistym.</li>
			<li>Po umieszczeniu woksela shimmingu 31P uruchom sekwencję, aby uzyskać pojedyncze widmo, klikając przycisk „run” u góry okna protokołu.</li>
			<li>Sprawdź jakość shimmingu B0. Przeanalizuj uzyskane widmo w oknie akwizycji. Powinien pojawić się wyraźny pik PCr wycentrowany na 0 ppm, bez znaczącego szumu (Rycina 4a, lewa strona). 
			UWAGA: Rozwiązywanie problemów: Jeśli widmo jest zaszumione, upewnij się, że pole shimmingu znajduje się w obrębie mięśnia. Dostosuj rozmiar i położenie pola shimmingu, aby poprawić stosunek sygnału do szumu. W razie potrzeby powtórz testową akwizycję.</li>
			<li>Aby sprawdzić wysokość piku PCr, otwórz widmo w narzędziu spektroskopii („Applications” → „Spectroscopy”). Otwórz folder pacjenta (ikona drzewa folderów), wybierz odpowiedni skan i kliknij dwukrotnie, aby załadować widmo.</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Obraz T1 przed wysiłkiem:
	<ol>
		<li>Uzyskaj pojedynczy przekrój osiowy obrazu T1-zależnego w centrum cewki.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Akwizycja 31P przed wysiłkiem:
	<ol>
		<li>Skopiuj sekwencję z kroku 4.4 (która zapewniła najlepszą jakość widma), klikając lewym przyciskiem myszy i przeciągając sekwencję w oknie protokołu. Użyj tej sekwencji do wszystkich kolejnych pomiarów.</li>
		<li>W oknie rutyny sekwencji zwiększ liczbę pomiarów z 1 do 10. Wybierz „run”, aby zebrać 10 pomiarów, gdy badany pozostaje w spoczynku.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Akwizycja 31P podczas wysiłku: 
	UWAGA: Dokładnie zanotuj czas rozpoczęcia i zakończenia wysiłku, ponieważ będzie to istotne dla analizy.
	<ol>
		<li>Spoczynek: Zastosuj ustawienia shimmingu z poprzedniego skanu i ustaw sekwencję na 20 pomiarów. Poleć badanemu rozpoczęcie kopania po odliczaniu. Poleć badanemu pozostanie w spoczynku przez pierwsze 2 pomiary.</li>
		<li>Wysiłek: Poproś badanego o wykonywanie ćwiczenia prostowania kolana przez ok. 30 sec (lub czas wymagany do osiągnięcia 30% spadku amplitudy piku PCr). Po osiągnięciu przez badanego wystarczającego wyczerpania PCr, poproś go o odpoczynek.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Akwizycje 31P po wysiłku:
	<ol>
		<li>Zebierz dodatkowe 20 pomiarów w spoczynku. Upewnij się, że akwizycje po wysiłku rozpoczynają się natychmiast po sekwencji wysiłkowej, bez przerw i ponownego shimmingu (Rycina 4a, prawa strona). 
		UWAGA: Podział tego okresu regeneracji na dwie oddzielne akwizycje umożliwia analizę pierwszych 20 dynamicznych widm podczas zbierania kolejnych 20 widm dynamicznych, co pozwala operatorowi uniknąć akwizycji pełnego okresu regeneracji, jeśli wysiłek musi zostać powtórzony.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Zapewnienie jakości wysiłku:
	<ol>
		<li>Porównaj wysokości piku PCr na początku i na końcu wysiłku. Wysokiej jakości sesje wysiłkowe skutkują spadkiem stężenia PCr o ok. 30%.</li>
		<li>Zweryfikuj, czy wysokość piku PCr na początku spoczynku i na końcu regeneracji jest taka sama (zazwyczaj pożądana jest różnica &lt; 10%). Zapewnia to, że podczas akwizycji doszło do pomijalnej utraty jednorodności pola. 
		UWAGA: Jeśli rozkład PCr jest niewystarczający lub nastąpiła utrata jednorodności pola, powtórz część badania dotyczącą wysiłku/regeneracji (uważając, aby nie doprowadzić do zmęczenia), upewnij się, że cewka i pasy są stabilnie przymocowane oraz wydłuż czas wysiłku i/lub zachęć do bardziej energicznego ćwiczenia (Rycina 4b). 
		UWAGA: Porównanie obrazów uzyskanych w krokach 6 i 11 pozwala na dodatkowy etap kontroli jakości w celu zwizualizowania ewentualnego przemieszczenia uda i cewki w wyniku wysiłku, co zapewnia minimalny ruch podczas protokołu, który mógłby znacząco wpłynąć na zebrane dane.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Po obrazowaniu T1 po wysiłku powtórz osiowe obrazowanie T1 sprzed wysiłku (krok 4.5) przy użyciu tych samych parametrów akwizycji.
	<ol>
		<li>Oprócz stwierdzenia wystarczającego wyczerpania PCr, zmierz pH na koniec wysiłku, aby upewnić się, że wysiłek nie wywołał kwasicy mięśniowej.</li>
		<li>Zrób to, mierząc przesunięcie chemiczne między Pi a PCr (δPi) i stosując następujące równanie60: 
		pH = 6,7 + log[(δPi-3,29)/(5,68-δPi)] 
		UWAGA: pH powinno pozostać powyżej 6,861. Jeśli rozkład PCr jest wystarczający, ale pH jest zbyt niskie, powtórz serię wysiłkową przez krótszy czas i/lub z mniejszą intensywnością.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Zapisywanie danych:
	<ol>
		<li>Zapisz wszystkie uzyskane widma jako pliki DICOM i wyeksportuj je do przetwarzania za pomocą programu JMRUI.</li>
		<li>W przypadku korzystania ze skanera wybierz wszystkie akwizycje spektroskopii w oknie „Navigator”.</li>
		<li>W sekcji „Applications” wybierz „Dicom Tools” → „Export MR Spectroscopy” i zapisz pliki DICOM (*.dcm) w lokalizacji C:/User/MedCom/temp/CDROFFLINE 
		(narzędzie automatycznie wybiera tę lokalizację).</li>
		<li>W sekcji „Transfer” wybierz „Export to Offline”. Zapisz w żądanym miejscu.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
5. Przetwarzanie i analiza danych62
<ol>
	<li>Analizę widm MR należy przeprowadzić z wykorzystaniem bezpłatnego oprogramowania JMRUI (wersja 5.2; http://www.jmrui.eu/).</li>
	<li>Zastosuj okno apodyzacyjne i przesunięcie fazowe widm, aby zapewnić jednorodność we wszystkich pozyskanych punktach czasowych (Rycina 5). Pik PCr w widmach będzie wycentrowany na wartości 0 ppm.</li>
	<li>Użyj wbudowanego algorytmu AMARES, aby określić amplitudę piku PCr w każdym uzyskanym widmie. Amplituda piku reprezentuje stężenie PCr w obszarze czułości cewki powierzchniowej w danym punkcie czasowym.</li>
	<li>W oprogramowaniu obliczeniowym należy wykreślić stężenia PCr jako funkcję czasu akwizycji. Używając wbudowanego w oprogramowanie narzędzia do dopasowania krzywych, należy dopasować dane dotyczące okresu regeneracji PCr do następującego równania52,63: 
	<img alt="Wzór na rozpad fosfokreatyny, PCR(t)=PCR₀+PCRΔ*e^(1/τ), równanie analizy kinetycznej." src="/files/ftp_upload/54977/54977eq1.jpg" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Równanie 1"></li>
	<li>Zapisz wartości podstawowego poziomu PCr (<img alt="Równowaga statyczna; równanie; PCR₀ + PCRΔ; wzór fizyczny; zastosowanie badawcze; metoda analityczna." src="/files/ftp_upload/54977/54977eq2.jpg" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Równanie 2">), najniższy poziom PCr (<img alt="Równanie równowagi statycznej, ΣFx=0, wzór w badaniu fizycznym." src="/files/ftp_upload/54977/54977eq3.jpg" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Równanie 3">), oraz czas rekonwalescencji(<img alt="Równanie matematyczne w LaTeX przedstawiające równowagę statyczną, ΣF=0, schemat z analizą składowych momentu obrotowego." src="/files/ftp_upload/54977/54977eq4.jpg" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Równanie 4">.</li>
	<li>Należy upewnić się, że podczas sesji ćwiczeń spełnione zostały odpowiednie warunki, obliczając stopień wyczerpania PCr, czyli procentową różnicę między wyjściowym poziomem PCr a najniższym poziomem PCr. Idealne sesje ćwiczeń skutkują wyczerpaniem w zakresie od 20% do 50%. 
	UWAGA: Jakość dopasowania krzywej można zapewnić, weryfikując, czy R2 wartość jest większa niż 0,75. R2 wartości są automatycznie obliczane przez oprogramowanie do dopasowania.</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

W artykule opisano standardowy protokół badania 31PMRS, który umożliwia seryjny i nieinwazyjny pomiar in vivo funkcji mitochondriów mięśni szkieletowych. Protokół jest bardzo atrakcyjny, jeśli weźmie się pod uwagę zakres badań ukierunkowanych na rosnące obciążenie zespołem metabolicznym i wynikającą z niego zachorowalność i śmiertelność. Ten protokół 31PMRS wymaga minimalnej ilości czasu skanera i może być włączony do kompleksowych badań metabolicznych u pacjentów w dowolnym ośrodku z komer...

Celem tej pracy jest nakreślenie powtarzalnej metody nieinwazyjnego pomiaru in vivo funkcji mitochondriów mięśni szkieletowych u osób posiadających szeroki zakres zdolności. Nieprawidłowe upośledzenie mitochondriów jest cechą charakterystyczną wielu zespołów metabolicznych i chorób genetycznych, od powszechnych schorzeń, takich jak starzenie się i cukrzyca, po rzadkie zaburzenia, takie jak ataksja Friedreicha.
Zespół metaboliczny i dysfunkcja mitochondriów
Wykazano, że Wykazano, że zespół metaboliczny zakłóca funkcję mitochondriów, hamuje mięśnie szkieletowe OXPHOS i prowadzi do ektopowego magazynowania lipidów w mięśniach szkieletowych1,2. Jako kluczowe organelle regulujące homeostazę metaboliczną i energetyczną, mitochondria są zaangażowane w patofizjologię otyłości3,4, insulinooporność5, Cukrzyca typu 2 (T2DM)6,7, mikro-8,9,10, 11 i powikłania makronaczyniowe12,13, oraz niealkoholowa stłuszczeniowa choroba wątroby (NAFLD)14,15,16, między innymi. Insulinooporność charakteryzuje się głębokimi zmianami w aktywności mitochondriów mięśni szkieletowych, w tym zmniejszoną szybkością strumienia mitochondrialnego kwasu trikarboksylowego (TCA), szybkością syntezy ATP oraz aktywnością syntazy cytrynianu i oksydoreduktazy NADH:O25. Jedna z hipotez głosi, że zmiany te mogą być spowodowane akumulacją metabolitów wolnych kwasów tłuszczowych (FFA) w mięśniach, które są znacznie zwiększone podczas otyłości i innych chorób związanych z otyłością2,17. Narażenie mięśni na podwyższone FFA i półprodukty lipidowe może zmniejszyć ekspresję genów w szlaku oksydacyjnym lipidów, a także cykl TCA i łańcuch transportu elektronów (ETC)18. Temu zmniejszeniu zdolności OXPHOS mitochondrialnych mięśni szkieletowych w warunkach przeciążenia lipidami towarzyszy spadek ilościowy (zawartość i biogeneza mitochondriów)19 i jakościowej funkcji mitochondriów mięśni szkieletowych20. Wystawienie mięśni szkieletowych i miocytów na działanie FFA prowadzi do ciężkiej insulinooporności, a zwiększony wychwyt FFA w mięśniach jest związany z insulinoopornością zarówno u ludzi, jak i gryzoni21. Wykazano, że półprodukty lipidowe, ceramid i diacyloglicerol (DAG), bezpośrednio hamują szlak sygnałowy insuliny poprzez zmianę aktywności kinaz, takich jak kinaza białkowa C i kinaza białkowa B21. Dlatego cząsteczki pochodzące z lipidów wydają się odgrywać znaczącą rolę w rozwoju insulinooporności mięśni szkieletowych i cukrzycy typu 2. Nie jest jednak jasne, czy zmiany w pojemności mitochondriów są przyczyną, czy konsekwencją insulinooporności22.
Ataksja Friedricha i dysfunkcja mitochondriów
Obniżony OXPHOS może również wynikać z wad genetycznych. Ataksja Friedricha (FA), najczęstsza forma dziedzicznej ataksji, jest zaburzeniem genetycznym spowodowanym mutacją w genie frataksyny (FXN), powodującą wewnątrzmitochondrialną akumulację żelaza, produkcję reaktywnych form tlenu i nieprawidłowości fosforylacji oksydacyjnej23,24,25,26. To ważne odkrycie doprowadziło do opracowania terapii celowanych, które mają na celu poprawę funkcji mitochondriów na poziomie subkomórkowym. Pomimo tego zrozumienia, prace nad odtwarzalnymi biomarkerami in vivo do badań klinicznych FA są ograniczone. W rzeczywistości krytyczną przeszkodą w skutecznej ocenie terapii celowanych w FA jest brak możliwości śledzenia zmian w funkcji mitochondriów. Obecne pomiary funkcjonalne, na przykład, mogą zidentyfikować zmniejszoną pojemność minutową serca; jednak nie są w stanie określić poziomu, na którym występuje dysfunkcja (ryc. 1). Opracowanie wiarygodnego markera funkcji mitochondriów, który można wykorzystać do identyfikacji i oceny postępu choroby w ataksji Friedricha, ma kluczowe znaczenie dla oceny istotnego mechanistycznego wpływu terapii celowanych.
Upośledzony OXPHOS i dysfunkcja serca
Nieprawidłowa funkcja mitochondriów, nabyta lub genetyczna, może przyczynić się do rozwoju lub progresji dysfunkcji serca. W warunkach przeciążenia ciśnieniowego i niewydolności serca preferencja substratu energii pierwotnej zmienia się z FFA na glukozę. Jest to związane ze zmniejszoną aktywnością ETC i fosforylacją oksydacyjną27. Patofizjologia bioenergetyki mitochondrialnej w dysfunkcji serca może być różna w zależności od pierwotnego pochodzenia defektu mitochondrialnego. Cukrzyca i zespół metaboliczny powodują nieprawidłowości mitochondrialne w mięśniu sercowym, takie jak upośledzona biogeneza i metabolizm kwasów tłuszczowych, co prowadzi do zmniejszenia elastyczności substratu, efektywności energetycznej i ostatecznie dysfunkcji rozkurczowej28,29. Z drugiej strony, w FA niedobór frataksyny powoduje znaczną akumulację żelaza w mitochondriach w kardiomiocytach30,31. Akumulacja żelaza prowadzi do produkcji wolnych rodników poprzez reakcję Fentona32 i zwiększa ryzyko uszkodzenia kardiomiocytów wywołanego przez wolne rodniki. Wewnątrzmitochondrialna akumulacja żelaza wiąże się również ze zwiększoną wrażliwością na stres oksydacyjny i zmniejszoną zdolnością oksydacyjną30,31. Akumulacja żelaza i wynikająca z niej nieprawidłowa funkcja mitochondriów, spowodowana niedoborem frataksyny, mogą być zatem odpowiedzialne za upośledzenie energetyki serca i kardiomiopatię obserwowane w FA33,34. Warto również zauważyć, że zmniejszona zdolność oksydacyjna w mitochondriach mięśni szkieletowych jest równoległa do nietolerancji wysiłku i zmniejszonej zdolności metabolicznej w niewydolności serca (HF)35. Pomiar pojemności OXPHOS mięśni szkieletowych, jak opisano w niniejszym dokumencie, jest łatwy do wdrożenia i solidny; W połączeniu ze znaczeniem OXPHOS mięśni szkieletowych w HF, cechy te sprawiają, że jest on atrakcyjnym biomarkerem w kompleksowych badaniach chorób serca36.
Upośledzony OXPHOS i towarzysząca mu dysfunkcja serca nie jest nieistotnym aspektem choroby metabolicznej i mitochondrialnej. Osoby z cukrzycą i chorobami metabolicznymi są bardziej narażone na rozwój chorób sercowo-naczyniowych i mają nadmierną śmiertelność po zawale mięśnia sercowego (MI)37,38,39,40,41; ponad połowa pacjentów z FA ma kardiomiopatię, a wielu umiera z powodu arytmii serca lub niewydolności serca42. W związku z tym kwantyfikacja obniżonego OXPHOS może nie tylko pozwolić na wczesne wykrycie i leczenie dysfunkcji serca, ale może również złagodzić poważne obciążenie kliniczne w tych chorobach.
Terapie celowane bezpośrednio zwiększające zdolność OXPHOS to obiecujący obszar do poprawy leczenia pacjentów, niezależnie od tego, czy przyczyna dysfunkcji metabolicznej jest genetyczna czy nabyta. Obecnie opracowanie nowych leków celowanych, które albo łagodzą nieprawidłową funkcję mitochondriów43 lub korygują pierwotną wadę genetyczną44 może poprawić zaburzoną bioenergetykę charakterystyczną dla FA. W przypadku nabytej dysfunkcji mitochondriów zwiększona aktywność fizyczna może poprawić funkcję mitochondriów 45,46,47.
31Spektroskopia rezonansu magnetycznego fosforu jako nieinwazyjny biomarker funkcji mitochondriów
Niezależnie od testowanej terapii, zintegrowana ocena in vivo bioenergetyki mięśni szkieletowych jest kluczowym narzędziem do oceny wpływu ukierunkowanych interwencji, szczególnie u osób z ciężką nietolerancją wysiłku lub niemożnością poddania się konwencjonalnym testom metabolicznym. Spektroskopia rezonansu magnetycznego dostrojona do fosforu (31PMRS), endogennego jądra znajdującego się w różnych wysokoenergetycznych substratach w komórkach w całym ciele, została wykorzystana do ilościowego określenia zdolności oksydacyjnych mitochondriów przy użyciu różnych podejść, w tym protokołów odzyskiwania ćwiczeń w magnesie i protokołów stymulacji mięśni48. Protokoły ćwiczeń i regeneracji opierają się na różnych aparaturach o różnym stopniu złożoności, od ergometrów kompatybilnych z MRI, które regulują i mierzą obciążenie pracą, po proste konfiguracje pasków i elektrod pozwalających na ćwiczenia oporowe i quasi-statyczne typu burst. Jednym z głównych celów każdego z tych protokołów jest wytworzenie nierównowagi energetycznej, w której zapotrzebowanie na adenozynotrójfosforan (ATP) jest początkowo zaspokajane poprzez enzymatyczny rozkład fosfokreatyny (PCr) w wyniku reakcji kinazy kreatynowej 49. Po zaprzestaniu ćwiczeń tempo produkcji ATP jest zdominowane przez fosforylację oksydacyjną i reprezentuje maksymalną zdolność in vivo mitochondriów50. Co więcej, OXPHOS podczas regeneracji po wysiłku może być opisany przez reakcję pierwszego rzędu51. Regenerację PCr po wysiłku można zatem określić ilościowo poprzez dopasowanie wykładniczej stałej czasowej (τPCr), przy czym mniejsze wartości τPCr reprezentują większe zdolności do oksydacyjnej syntezy ATP. Podjęto znaczne wysiłki w celu walidacji 31PMRS w odniesieniu do ex vivo i bardziej bezpośrednich pomiarów OXPHOS oraz wykazania potencjalnej klinicznej przydatności tej techniki52,53,54,55.
Warto zauważyć, że protokół opisany w tej pracy może być zaimplementowany na klinicznie dostępnych skanerach i został szeroko zweryfikowany jako nieinwazyjny biomarker funkcji mitochondriów56. Jednak protokół ćwiczeń 31PMRS zoptymalizowany do stosowania u osób z różnym stopniem upośledzenia nerwowo-mięśniowego lub mobilnością nie został dobrze opracowany57. Dobrze zdefiniowany, szeroko stosowany protokół ćwiczeń i technika 31PMRS byłyby szczególnie przydatne w ocenie chorób z podstawowymi nieprawidłowościami w funkcjonowaniu mitochondriów.
Kilka wcześniejszych badań badało zastosowanie technik nieinwazyjnych do ilościowego określania funkcji mitochondriów u badanych. Na przykład, techniki te wykazały upośledzony OXPHOS u osób z cukrzycą typu 236. Lodi i wsp. najpierw przetestowali wykonalność technik PMRS u osób z FA i stwierdzili, że 1) podstawowa wada genetyczna w FA upośledza OXPHOS mięśni szkieletowych i 2) liczba powtórzeń trypletów GAA jest odwrotnie proporcjonalna do mięśni szkieletowych OXPHOS33. Niedawno Nachbauer i wsp. wykorzystali PMRS jako drugorzędową miarę wyniku w badaniu klinicznym FA z udziałem 7 osób. Czas rekonwalescencji PCr był znacznie dłuższy u badanych w porównaniu z grupą kontrolną, co potwierdza wcześniejszą pracę Lodi i wskazuje, że efekty nieprawidłowej ekspresji frataksyny w FA mogą powodować spadek pojemności mitochondriów, który można wykryć za pomocą technik PMRS58.
Niezawodne metody adekwatnego definiowania in vivo funkcji mięśni szkieletowych w wykonalny, opłacalny i powtarzalny sposób są kluczowe dla poprawy wyników pacjentów w wielu chorobach wpływających na funkcję mitochondriów.
Ta praca przedstawia solidną procedurę uzyskiwania in vivo maksymalnej zdolności oksydacyjnej mięśni szkieletowych przy użyciu 31PMRS. Protokół ćwiczeń w magnesie jest dobrze tolerowany przez osoby o szerokim zakresie zdolności fizycznych i funkcjonalnych i zapewnia uproszczoną konfigurację obiektu przy użyciu niedrogiego i powszechnie dostępnego sprzętu.

<table><tbody><tr><td>Skaner MR 1,5 T</td><td>Producent Siemens</td><td></td><td>nie wpłynie na wyniki</td></tr><tr><td>Cewka nadawczo-odbiorcza 10 cm 31P, producent</td><td>PulseTeq</td><td></td> kompatybilny z 1,5T <td>nie wpłynie na wyniki</td></tr><tr><td>3 uncje olejku dla niemowląt</td><td>Johnson & Producent Johnson</td><td></td><td>nie wpłynie na wyniki</td></tr><tr><td>Piankowa trójkątna poduszka (kolano)</td><td>Producent Siemens</td><td></td><td>nie wpłynie na wyniki</td></tr><tr><td>(3) plastikowe paski rezystancyjne z klamrą; od stołu do stołu</td><td>Producent Siemens</td><td></td><td>nie będzie miał wpływu na wyniki</td></tr><tr><td>(1) plastikowy pasek rezystancyjny z klamrą; samołączny</td><td>Siemens</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

spektroskopia rezonansu magnetycznego phosphorus-31: narzędzie do pomiaru zdolności ultrautleniającej fosforylacji mitochondrialnej in vivo w ludzkich mięśniach szkieletowych

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

Zdolność do fosforylacji oksydacyjnej mitochondriów mięśni szkieletowych (OXPHOS), która jest niezwykle ważna dla zdrowia i choroby, może być mierzona in vivo i nieinwazyjnie u ludzi za pomocą spektroskopii rezonansu magnetycznego fosforu-31 (31PMRS). Podejście to nie zostało jednak powszechnie przyjęte w badaniach translacyjnych i klinicznych, ze względu na różnice w metodologii i ograniczone wytyczne z literatury. Zwiększona optymalizacja, standaryzacja i rozpowszechnienie metod in vivo 31PMRS ułatwiłoby rozwój terapii celowanych w celu poprawy zdolności OXPHOS i ostatecznie mogłoby korzystnie wpłynąć na zdrowie układu sercowo-naczyniowego. Rozdział 31PMRS wytwarza nieinwazyjny pomiar in vivo pojemności OXPHOS w ludzkich mięśniach szkieletowych, w przeciwieństwie do alternatywnych pomiarów uzyskanych z eksplantowanych i potencjalnie zmienionych mitochondriów za pomocą biopsji mięśni. Opiera się jedynie na skromnym dodatkowym oprzyrządowaniu wykraczającym poza to, co jest już stosowane w skanerach rezonansu magnetycznego dostępnych do badań klinicznych i translacyjnych w większości instytucji. W niniejszej pracy przedstawiono metodę pomiaru in vivo OXPHOS mięśni szkieletowych. Technika ta jest demonstrowana przy użyciu skanera MR całego ciała o natężeniu 1,5 Tesli, wyposażonego w odpowiedni sprzęt i oprogramowanie dla 31PMRS, a my wyjaśniamy prosty i solidny protokół ćwiczeń rezystancyjnych w magnesie, aby szybko zmęczyć mięsień czworogłowy. Powtarzalność i wykonalność wykazano zarówno u ochotników, jak i u osób o szerokim zakresie zdolności funkcjonalnych.

Badanie powtarzalności
Sześciu ochotników (4 mężczyzn i 2 kobiety; średni wiek: 24,5 ± 6,2 lat) bez zgłoszonych schorzeń serca, metabolicznych lub mitochondrialnych poddało się sesjom opisanego wysiłku fizycznego oraz techniki obrazowania 31PMRS w dwóch różnych dniach w ciągu jednego tygodnia w celu oceny powtarzalności techniki (Rycina 6a). Badania przeprowadzone na zdrowych ochotnik...

Ta praca demonstruje wykonalność techniki spektroskopii rezonansu magnetycznego in vivo fosforu-31 (31PMRS) do ilościowego określenia zdolności mitochondrialnej fosforylacji oksydacyjnej (OXPHOS) w ludzkich mięśniach szkieletowych.

Spektroskopia rezonansu magnetycznego Phosphorus-31: narzędzie do pomiaru zdolności ultrautleniającej fosforylacji mitochondrialnej in vivo w ludzkich mięśniach szkieletowych

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo ...

Ogólnym celem tej techniki rezonansu magnetycznego in vivo i protokołu ćwiczeń jest ustanowienie solidnej i znormalizowanej metody nieinwazyjnego pomiaru zdolności fosforylacji oksydacyjnej mitochondriów. Zdolność mitochondrialnej fosforylacji oksydacyjnej mięśni szkieletowych można mierzyć nieinwazyjnie za pomocą spektroskopii rezonansu magnetycznego fosforu 31 In Vivo. Ta ustandaryzowana technika ułatwi opracowanie terapii celowanych w celu poprawy zdolności fosforylacji oksydacyjnej.Głównymi zaletami tej techniki jest to, że jest nieinwazyjna, co pozwala na seryjne badania, oraz że jest dobrze tolerowana przez osoby o szerokim zakresie możliwości funkcjonalnych. Ogólnie rzecz biorąc, osoby, które są nowicjuszami w tej metodzie, będą miały trudności, ponieważ konfiguracja sprzętu i pozycjonowanie obiektu są technicznie intensywne i niezwykle ważne dla uzyskania dobrych wyników. Przed wykonaniem badań obrazowych należy najpierw uzyskać pisemną i świadomą zgodę pacjenta, a następnie dokładnie przebadać go pod kątem bezpieczeństwa rezonansu magnetycznego.Następnie przygotuj się do eksperymentu. Protokół ten jest demonstrowany przy użyciu systemu Siemens Avanto 1.5 Tesla. Rozpocznij przygotowanie do obrazowania, najpierw podłączając cewkę fosforu 31 do złącza cewki stołu znajdującego się najbliżej otworu.Następnie umieść dużą trójkątną poduszkę piankową w pobliżu drugiego końca stołu egzaminacyjnego skanera, ale nie bezpośrednio na cewce. Umieść również poduszkę pod głowę na stole do badania MR najdalej od otworu, a następnie poinstruuj pacjenta, aby leżał na wznak stopami najpierw na stole MR. Umieść piankową poduszkę pod kolanami, aby podeprzeć nogę w częściowo zgiętej pozycji.Pamiętaj, aby umieścić obiekt blisko prawej strony stołu, aby wyśrodkować lewe udo jak najbliżej izocentrum magnesu, aby zapewnić optymalną jednorodność B0. Następnie zaopatrz osobę badaną w zatyczki do uszu lub słuchawki w celu ochrony słuchu. Umieść cewkę fosforu 31 na lewym mięśniu czworogłowym pacjenta mniej więcej w środkowym punkcie między rzepką a głową kości udowej.Następnie przymocuj go do nogi za pomocą pasków. Cewka powinna znajdować się nad boczną częścią nogi, powyżej obszernego bocznego. Przymocuj butelkę z olejkiem dla niemowląt do środkowej części uda za pomocą tych samych pasków, które służą do mocowania cewki do nogi, a następnie zwiąż nogi badanego razem za pomocą paska umieszczonego poniżej cewki i powyżej kolana.Przymocuj nogi pacjenta do stołu MR za pomocą dodatkowych pasków, jednego nad kolanem, a drugiego w połowie odległości między kolanem a kostką. Pozwól testerowi przećwiczyć ćwiczenie izometryczne, aby upewnić się, że paski zapewniają wystarczający opór. Następnie, gdy obiekt poczuje się komfortowo, użyj światłowodu laserowego, aby zaznaczyć środek cewki i przesuń stół do izocentrum magnesu za pomocą centrującego punktu orientacyjnego.W podstawowej fazie akwizycji spektroskopii poinstruuj badanego, aby leżał nieruchomo i rozluźnił mięśnie nóg, aby zminimalizować artefakty ruchu. Zacznij od uzyskania lokalizatora trójpłaszczyznowego, aby zweryfikować położenie i zidentyfikować lokalizację cewki. Zdobądź również drugi lokalizator, ale otwórz widok przekroju na pierwszym lokalizatorze trójpłaszczyznowym.Następnie ustaw sekwencję spektroskopii fosforu 31 z niezlokalizowanymi parametrami sekwencji nabytej impulsu, jak pokazano tutaj. Wyśrodkuj i obróć orientację plasterka, klikając lewym przyciskiem myszy i przytrzymując grupę plasterków, a następnie dopasuj ostateczną orientację plasterków do pozycji butelki z olejem. Teraz umieść pole podkładki, przeciągając drugi lokalizator trójpłaszczyznowy do viewokienko, a następnie przeciągnij sekwencję spektroskopii do okna protokołu i kliknij dwukrotnie, aby otworzyć.Użyj paska narzędzi położenia, aby zwizualizować woksel podkładki, który pojawi się na obrazach lokalizatora. Woksel można przesuwać, klikając lewym przyciskiem myszy i przytrzymując go na środku pola, a jego rozmiar i obrót można zmienić, klikając lewym przyciskiem myszy i przytrzymując go w rogu pola. Umieść skrzynkę podkładki bezpośrednio pod cewką i równolegle do płaszczyzny mięśnia czworogłowego, aby zapewnić jednorodność pola B0.Użyj obrazów lokalizatora, aby zidentyfikować wrażliwy obszar cewki i dostosuj pole podkładki, aby objąć ten obszar w mięśniu. Otwórz okno przeglądarki akwizycji i wybierz ikonę głowicy na pasku narzędzi, aby umożliwić przeglądanie akwizycji spektroskopii w czasie rzeczywistym, a następnie uruchom sekwencję, aby uzyskać pojedyncze widmo testowe. Następnie obserwuj wynikowe widmo i sprawdź jakość podkładkowania B0.Szukaj wyraźnego piku fosfokreatyny wyśrodkowanego na poziomie zero części na milion bez znaczącego szumu. Jeśli widmo wydaje się zaszumione, zmień położenie podkładki regulacyjnej i ponownie uzyskaj. Skopiuj sekwencję spektroskopii testowej o najlepszej jakości spektralnej i używaj jej do wszystkich kolejnych pomiarów.Zwiększ liczbę pomiarów od jednego do 10, a następnie wykonuj, gdy obiekt jest w spoczynku. Następnie, aby uzyskać ćwiczenia, zastosuj ustawienia podkładki regulacyjnej z poprzedniego skanowania i ustaw sekwencję tak, aby uzyskać 20 pomiarów. Poinstruuj badanego, aby najpierw pozostał w spoczynku przez dwa pomiary, a następnie podaj mu odliczanie, aby wskazać, kiedy rozpocząć ćwiczenie.W tym momencie badany powinien zainicjować zgięcie kolana tak mocno i szybko, jak to możliwe, wbrew oporowi pasków przez około 30 sekund. Po zaobserwowaniu 30% spadku wysokości piku PCR, poinstruuj badanego, aby przerwał ćwiczenie i odpoczął. Następnie natychmiast uzyskaj 20 dodatkowych pomiarów po wysiłku, bez przerw i podkładek.Po zakończeniu akwizycji upewnij się, że jakość ćwiczeń jest możliwa, porównując szczytowe wysokości fosfokreatyny na początku i na końcu ćwiczeń. Ten wykres pokazuje odzyskiwanie stężenia fosfokreatyny po jego wyczerpaniu dzięki szybkiemu quasi-statycznemu ćwiczeniu prostowania kolana. Linia reprezentuje dopasowanie funkcji odzyskiwania wykładniczego.Analiza czasu odzyskiwania fosfokreatyny Blanda-Altmana wykazała średnią różnicę i odchylenie standardowe wynoszące 1,03 plus minus 4,83 sekundy oraz współczynnik zmienności między próbami wynoszący 4,66. Pokazano tutaj reprezentatywną krzywą odzysku fosfokreatyny z badania osoby niechodzącej. Należy zauważyć, że przy użyciu tego protokołu ćwiczeń osiągnięto niedobór fosfokreatyny o 64%.Wreszcie, to porównanie czasów rekonwalescencji fosfokreatyny wykazuje kolejno gorszą zdolność oksydacyjną mitochondriów u osób z grupy kontrolnej, bez cukrzycy i z cukrzycą. Po opanowaniu tej techniki można ją wykonać w mniej niż 20 minut, jeśli jest wykonywana prawidłowo. Próbując wykonać tę procedurę, należy pamiętać zarówno o sprawdzeniu, czy widmo ma wystarczający sygnał przed ćwiczeniami, jak i o upewnieniu się, że ćwiczenia powodują niedobór fosfokreatyny o co najmniej 30%Po tej procedurze można wykonać inne metody, takie jak obrazowanie ilościowe mięśni tłuszczowych w celu obliczenia masy mięśniowej i zawartości tłuszczu, które są również ważne dla ogólnego funkcjonowania mięśni szkieletowych.Technika ta może być wykorzystana do zbadania wielu chorób, w tym ataksji Friedreicha, gdzie pozwoliła naukowcom skorelować genetyczne markery ciężkości choroby w zdolności oksydacyjnej mitochondriów. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak wykonać skan spektroskopii rezonansu magnetycznego 31 in vivo fosforu 31 i protokół ćwiczeń. Nie zapominaj, że praca ze skanerami rezonansu magnetycznego wymaga rygorystycznych środków bezpieczeństwa, a wszystkie eksperymenty MR powinny być wykonywane przez odpowiednio przeszkolony personel.

phosphorus-31-magnetic-resonance-spectroscopy-tool-for-measuring-vivo

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Perfuzja izolowanego serca w trybie Langendorffa, w połączeniu ze spektroskopią NMR 31P, łączy dziedziny biochemii i fizjologii w jednym eksperymencie. Protokół ten umożliwia dynamiczny pomiar zawartości i obrotu fosforanów wysokoenergetycznych w sercu przy jednoczesnym monitorowaniu funkcji fizjologicznych. Prawidłowo wykonana, technika ta stanowi cenne narzędzie w ocenie energetyki serca.

Ocena funkcji i energetyki serca w izolowanych sercach myszy z wykorzystaniem spektroskopii 31P NMR

Opisano model zwierzęcy urazu in vivo. Metoda wykorzystuje podskórne położenie nerwu strzałkowego. Prędkość, czas aktywacji mięśni oraz łuk ruchu są wcześniej określone i zsynchronizowane przy użyciu komercyjnego oprogramowania. Zmiany po urazie są monitorowane in vivo za pomocą obrazowania/spektroskopii MR.

Model gryzoni in vivo w urazie wywołanym przykurczem i nieinwazyjne monitorowanie powrotu do sprawności

Ten artykuł ma na celu opisanie podstawowego protokołu łączenia przezczaszkowej stymulacji prądem stałym (tDCS) z pomiarami spektroskopii magnetycznego rezonansu protonowego (1H-MRS) w celu zbadania wpływu obustronnej stymulacji na metabolizm pierwotnej kory ruchowej.

Zastosowanie spektroskopii rezonansu magnetycznego jako narzędzia do pomiaru wpływu przezczaszkowej stymulacji elektrycznej na pierwotny metabolizm kory ruchowej

Choroby nerwowo-mięśniowe często wykazują zróżnicowaną czasowo, przestrzennie niejednorodną i wieloaspektową patologię. Celem tego protokołu jest scharakteryzowanie tej patologii za pomocą nieinwazyjnych metod obrazowania metodą rezonansu magnetycznego.

Ilościowy rezonans magnetyczny w chorobach mięśni szkieletowych

Nowa metoda elektronowego rezonansu paramagnetycznego (EPR), rapid scan EPR (RS-EPR), została zademonstrowana do przestrzennego obrazowania spektralnego 2D, która jest lepsza od tradycyjnej techniki ciągłej fali (CW) i otwiera nowe możliwości obrazowania in vivo. Wyniki są demonstrowane na częstotliwości 250 MHz, ale technika ta ma zastosowanie na dowolnej częstotliwości.

Szybki skan elektronowy rezonansu paramagnetycznego otwiera nowe możliwości obrazowania fizjologicznie ważnych parametrów in vivo

Rezonans paramagnetyczny elektronów o niskim polu (pasmo L, 1,2 GHz) przy użyciu rozpuszczalnych sond nitroksylowych i trytylowych jest demonstrowany do oceny fizjologicznie ważnych parametrów w mikrośrodowisku guza w mysich modelach raka piersi.

In vivo (in vivo) Ocena EPR pH, pO2, stanu redoks oraz stężeń fosforanów i glutationu w mikrośrodowisku guza

Konie mają wyjątkową zdolność do ćwiczeń aerobowych, co sprawia, że mięśnie szkieletowe koni są ważną tkanką zarówno do badania fizjologii ćwiczeń koni, jak i fizjologii mitochondriów ssaków. W artykule opisano techniki kompleksowej oceny funkcji mitochondriów w mięśniach szkieletowych koni.

Fluororespirometria mięśni szkieletowych koni w wysokiej rozdzielczości

Tutaj opisujemy kompleksową metodę pomiaru mitochondrialnej fosforylacji oksydacyjnej w świeżych, przepuszczalnych włóknach mięśni szkieletowych z mięśni ludzkich lub myszy. Metoda ta pozwala na ilościowe określenie oddychania mitochondriów w czasie rzeczywistym oraz ocenę preferencji paliwowych i elastyczności metabolicznej przy jednoczesnym zachowaniu istniejących sieci mitochondrialnych i integralności błony.

Pomiar oddychania mitochondrialnego we włóknach mięśni szkieletowych ludzi i myszy za pomocą respirometrii o wysokiej rozdzielczości

Metody badania bioenergetyki mitochondriów pod fizjologicznie istotnymi stężeniami substratów w komórkach odpornościowych są ograniczone. Zapewniamy szczegółowy protokół, który wykorzystuje fluorespirometrię o wysokiej rozdzielczości do oceny zmian w odpowiedzi potencjału błony mitochondrialnej na zapotrzebowanie na energię w ludzkich limfocytach T, monocytach i obwodowych komórkach jednojądrzastych.

Fluorespirometria o wysokiej rozdzielczości do oceny dynamicznych zmian potencjału błony mitochondrialnej w ludzkich komórkach odpornościowych

Opisujemy małoinwazyjną i bezbolesną metodę pomiaru siły mięśni kończyn tylnych u psów oraz reakcji mięśni na powtarzające się skurcze ekscentryczne.

Test funkcji mięśni psów in vivo

Poznaj nieinwazyjną metodę spektroskopii rezonansu magnetycznego fosforu-31 do pomiaru zdolności fosforylacji oksydacyjnej mitochondriów w mięśniach szkieletowych człowieka. Technika umożliwia powtarzalne badania kliniczne.

Spektroskopia rezonansu magnetycznego Phosphorus-31: narzędzie do pomiaru zdolności ultrautleniającej fosforylacji mitochondrialnej in vivo w ludzkich mięśniach szkieletowych (Wideo) | JoVE Journal

Spektroskopia rezonansu magnetycznego Phosphorus-31: narzędzie do pomiaru zdolności ultrautleniającej fosforylacji mitochondrialnej in vivo w ludzkich mięśniach szkieletowych

Przeglądaj więcej filmów