Mysi model do przeszczepu trzustki przy użyciu zmodyfikowanej techniki mankietowej

Nazywam się Benno Cardini i pracuję w Laboratorium Badawczym Daniela Swarovskiego na Wydziale Chirurgii Wisceralnej, Transplantacyjnej i Chirurgii Klatki Piersiowej Uniwersytetu Medycznego w Innsbrucku. Dzisiaj pokażemy Wam model myszy do przeszczepu trzustki przy użyciu zmodyfikowanej techniki mankietu. Znieczulić zwierzę dawcy dootrzewnowym wstrzyknięciem ketaminy i ksylazyny, a następnie ogolić okolicę brzucha.

Następnie ułóż biorcę na polu operacyjnym w pozycji leżącej na plecach i trzykrotnie wyszoruj obszar operacyjny chlorheksydyną. Teraz wykonaj laparotomię w linii środkowej od okolicy łonowej do mieczykowatego i powiększ nacięcie podżebrowo po obu stronach, aby uzyskać lepszy widok na pole operacyjne. Następnie zewnętrz wnętrzności przechylić na lewą stronę i wstrzyknąć heparynę do żyły głównej podnerkowej.

W następnym kroku zidentyfikuj aortę brzuszną proksymalnie do skrzyżowania lewej żyły nerkowej, podważ aortę i zawiąż ją w tym miejscu. Teraz przejdź do wnęki wątroby, zidentyfikuj i wypreparuj wspólny przewód żółciowy w pobliżu wątroby i podwiąż go w pobliżu trzustki. Na koniec przeciąć wspólny przewód żółciowy powyżej ligatury.

Następnie należy wyciąć żyłę wrotną w pobliżu wątroby, aby uzyskać długość wystarczającą do zespolenia żylnego. Jako wskazówkę zostaw mały kawałek wątroby na żyle wrotnej, aby później łatwiej było zidentyfikować. Następnie należy podważyć lewą żyłę nerkową w tkance okołoaortalnej i podwiązać ją.

Następnie przeciąć żyłę nerkową i tkankę okołoaortalną, pozostając po prawej stronie ligatury. Następnie tępo wypreparuj aortę brzuszną od tułowia trzewnej do przepony, podważ aortę w pobliżu przepony i przetnij ją w tym miejscu. Następnie zidentyfikuj i skoaguluj wszystkie gałęzie lędźwiowe i przetransektuj je.

Teraz przeciąć aortę pod wcześniej ustawioną ligaturą. Teraz przeprowadź fuzję trzustki przez łatkę aortalną lodowatym roztworem perfuzyjnym, aż zobaczysz ścieki wychodzące z żyły wrotnej. Na górze widać perfundowaną żyłę wrotną, a poniżej perfundowaną aortę.

Teraz włóż wnętrzności do jamy otrzewnej i stopniowo oddziel trzustkę od jelita za pomocą 8-0 ligatury jedwabne. Zaczynając od okolicy postodźwiernikowej, dwukrotnie podważ dwunastnicę i remis 8-0 jedwabna ligatura przez niego. Następnie podwiąż go i ostro oddziel trzustkę od dwunastnicy.

To podejście jest wielokrotnie wykonywane, aż do osiągnięcia więzadła Treitza. Ważne jest, aby nie uszkodzić dwunastnicy, ponieważ wykluczyłoby to przeszczep z eksperymentów ze względu na możliwe zanieczyszczenie. Po całkowitym oddzieleniu trzustki od dwunastnicy przejdź do krezki, podważ ją i podwiąż, a następnie przetransektuj.

Analogicznie do poprzednich kroków, oddziel trzustkę od okrężnicy poprzecznej, podważając ją, podwiązując i ostatecznie transektując. Teraz, stosując to samo podejście, oddziel trzustkę od okolicy żółciowej, ostro ją preparując po podwiązaniu. Następnie tępo wypreparuj trzustkę z żołądka.

Zidentyfikuj lewą tętnicę żołądkową, podwiąż ją i przeciąć. Na koniec usuń trzustkę z dołączoną śledzioną i umieść ją w lodowatym roztworze reperfuzyjnym do czasu dalszej implantacji. Użyj śledziony jako uchwytu.

Analogicznie do dawcy, znieczulij zwierzę biorcy za pomocą dootrzewnowego wstrzyknięcia ketaminy i ksylazyny oraz ogol okolicę szyjki macicy. Następnie umieść zwierzę dawcy na polu operacyjnym w pozycji leżącej na plecach i trzykrotnie wyszoruj okolicę szyjki macicy chlorheksydyną. Następnie wykonaj nacięcie skóry od nacięcia szyjnego do prawego kąta żuchwy.

Następnie zidentyfikuj wszystkie boczne gałęzie prawej żyły szyjnej zewnętrznej, zmobilizuj je, podważ i podziel po krzepnięciu dwubiegunowym. Następnie chwyć dolny biegun prawego gruczołu podżuchwowego, unieś go czaszkowo i wypreparuj po dwubiegunowej koagulacji jego naczyń pokarmowych. Teraz przeciąć wszystkie przyśrodkowe gałęzie prawej zewnętrznej żyły szyjnej po wykrzepieniu dwubiegunowym.

Podwiązaj żyłę szyjną zewnętrzną dwa razy bardziej czaszkowo, niż to możliwe i podziel ją między ligatury. Przełóż proksymalny koniec żyły szyjnej zewnętrznej przez mankiet z polietylenu. Tutaj ważne jest, aby uchwyt mankietu był skierowany w stronę chirurga operującego.

W kolejnym kroku umieść zacisk żylny mikronaczyniowy wychodzący od strony bocznej. Teraz zwilż żyłę heparyną, usuń ligaturę i delikatnie przeciągnij żyłę przez mankiet polietylenowy. Na koniec przymocuj żyłę nad mankietem za pomocą okrągłego 8-0 Jedwabna ligatura z jednym węzłem z tyłu i trzema z przodu.

Aby uzyskać dostęp do prawej tętnicy szyjnej wspólnej, należy zmobilizować i przeciąć prawy mięsień mostkowo-obojczykowo-sutkowy po krzepnięciu bliższym i dalszym. Następnie delikatnie zmobilizuj tętnicę szyjną wspólną, uważając, aby nie uszkodzić sąsiednich struktur, takich jak nerw błędny. Analogicznie do żyły, tętnicę szyjną wspólną podwiązać dwukrotnie, tak czaszkowo, jak to możliwe, i podzielić ją między ligatury.

Teraz przepuść naczynie przez mankiet tętniczy. Na koniec przymocuj mankiet tętniczy za pomocą zacisku mikronaczyniowego, wychodzącego od strony przyśrodkowej. Następnie usuń ligaturę i poszerz światło tętnicy za pomocą rozszerzaczy naczyń.

Po wystarczającym poszerzeniu światła przeciągnij tętnicę nad mankietem tętniczym. Na koniec, analogicznie do żyły, napraw tętnicę za pomocą 8-0 jedwabna ligatura. Tutaj możesz zobaczyć żyłę i tętnicę naprawioną pod kątem zespolenia tętniczego żylnego.

W celu implantacji umieść przeszczep na zwilżonym Ace w okolicy szyjki macicy. Następnie przeciągnij żyłę wrotną przez 8-0 jedwabną pętlę ligaturową, skróć żyłę, aby uzyskać zespolenie bez napięć, a następnie przeciągnij żyłę wrotną przez mankiet żylny. Na koniec napraw żyłę za pomocą okrągłego 8-0 jedwabna ligatura.

Analogicznie do żyły, przełóż kikut aorty przez pętlę ligatury i skróć aortę. Następnie przeciągnij aortę przez mankiet tętniczy i na koniec przymocuj ją za pomocą okrągłego 8-0 jedwabna ligatura. Przed reperfuzją zidentyfikuj naczynia śledziony i podwiąż je, a na koniec ostro je wypreparuj i usuń śledzionę.

W celu reperfuzji najpierw usuń zacisk żylny, a następnie zacisk tętniczy. Odpowiednia reperfuzja przeszczepu pokazuje widoczną pulsację tętnicy i różowawy kolor całego przeszczepu. Zwilż przeszczep normotermicznym roztworem soli

Przed zamknięciem rany należy zdjąć uchwyt mankietu żylnego, aby uniknąć załamania naczynia. Na koniec zamknij ranę szwem biegowym 6-0 i wstrzyknij podskórnie 0,5 mililitra soli fizjologicznej normotermicznej. Aby zweryfikować model, przetestowaliśmy funkcję hormonalną przeszczepionej trzustki.

Myszy zostały poddane hipoglikemii przez wstępne leczenie streptozotocyną cztery dni przed operacją i zostały uznane za hipoglikemiczne, jeśli poziom glukozy we krwi przekraczał 300 miligramów. To zdjęcie liniowe pokazuje poziom glukozy we krwi żywych myszy kontrolnych bez przeszczepu na czerwono, a także biorców przeszczepów, którzy nie byli narażeni na długotrwały czas niedokrwienia zimnem na niebiesko. Ponadto na zielono pokazany jest poziom glukozy we krwi biorców przeszczepów trzustki narażonych na 16-godzinny czas zimnego niedokrwienia.

Żywe myszy pozostawały w stanie hipoglikemii przez cały okres obserwacji. Natomiast przeszczep przeszczepów trzustki nienarażonych na przedłużony czas zimnego niedokrwienia spowodował normalną glikemię w ciągu 24 godzin, potwierdzając funkcję hormonalną przeszczepu. Przeszczep graftów wystawionych na 16-godzinny czas zimnego niedokrwienia nie przywrócił biorcom prawidłowej glikemii.

Co więcej, w tej grupie wszystkie myszy musiały zostać uśmiercone w ciągu 48 godzin z powodu uszkodzenia reperfuzyjnego związanego z wczesnym uszkodzeniem przeszczepu. W tym filmie przedstawiliśmy metodę przeszczepu trzustki u myszy przy użyciu techniki mankietu bez szwów. Jest to technicznie i mikrochirurgicznie wykonalne z doskonałymi wskaźnikami sukcesu.

Jednak biorąc pod uwagę postępujące zwłóknienie trzustki, spowodowane niedrożnością przewodów, naszym zdaniem model ten najlepiej nadaje się do obszarów badawczych koncentrujących się na wcześniejszym uszkodzeniu przeszczepu związanym z uszkodzeniem reperfuzyjnym niedokrwiennym.