Minimalnie inwazyjne poprzeczne zwężenie aorty u myszy

Ogólnym celem tej procedury jest wywołanie przerostu lewej komory poprzez zwężenie poprzecznego łuku aorty za pomocą prostego zabiegu chirurgicznego, który nie wymaga sztucznej wentylacji. Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie kardiologii dotyczące przebudowy mięśnia sercowego, przerostu mięśnia sercowego, apoptozy i zwłóknienia oraz stanów przeciążenia ciśnienia w lewej komorze. Główną zaletą tej techniki jest to, że zachowuje ona podstawowe cechy regularnego poprzecznego zwężenia aorty, jednocześnie eliminując potrzebę respiratora i intubacji tchawicy.

Przed rozpoczęciem zabiegu użyj uchwytu na igłę, aby wygiąć końcówki dwóch do czterech igieł o rozmiarze 30 i zamontuj igły na poszczególnych bawełnianych aplikatorach. Następnie stęp igłę o rozmiarze 27 i użyj uchwytu igły, aby zgiąć końcówkę o 90 stopni. Następnie wygładź końcówkę na twardej powierzchni, aby uzyskać przekładkę o grubości 0,4 milimetra.

Po stwierdzeniu odpowiedniego poziomu sedacji poprzez brak reakcji na szczypanie palca u nogi, nałóż maść na oczy zwierzęcia i umieść mysz na poduszce grzewczej podgrzanej o temperaturze 37 stopni Celsjusza w pozycji leżącej. Przymocuj kończyny do poduszki grzewczej za pomocą taśmy chirurgicznej. Następnie zdezynfekuj skórę trzema kolejnymi chusteczkami nasączonymi alkoholem i roztworem jodu powidonu i umieść na zwierzęciu sterylną serwetę z odsłoniętym polem operacyjnym.

Aby rozpocząć procedurę podwiązania, użyj sterylnego skalpela, aby otworzyć skórę w pozycji środkowej szyi i klatki piersiowej. Następnie pod mikroskopem preparacyjnym użyj nożyczek, aby delikatnie oddzielić tkanki łączne i pociągnij tarczycę w kierunku głowy. Za pomocą zakrzywionych igieł oddziel warstwę mięśni na tchawicy w linii środkowej, w kierunku obu stron zwierzęcia i nożyczkami przeciąć mostek około pięciu milimetrów do drugiego żebra.

Otwórz nacięcie za pomocą zakrzywionych kleszczy i użyj zakrzywionej igły, aby oddzielić płaty grasicy i dolną ścianę klatki piersiowej. Poprzeczny łuk aorty i dwie tętnice szyjne będą w tym miejscu wyraźnie widoczne. Umieść zakrzywioną igłę pod łukiem i za pomocą końcówki wykonaj perforację między ścianą naczynia a tkanką łączną po drugiej stronie.

Za pomocą igły umieść szew monofilamentowy 6-0 pod łukiem aorty, a przygotowany wcześniej przekładkę umieść w pętli. Zamocuj szew na miejscu za pomocą podwójnego węzła i delikatnie usuń przekładkę. Po potwierdzeniu udanego zwężenia węzła, odetnij końce szwu i użyj jedwabnego szwu 6-0, aby zamknąć ścianę klatki piersiowej za pomocą prostego przerywanego wzoru szwu, a następnie zamknij skórę szwem monofilamentowym 6-0 w ciągłym wzorze szwów.

Następnie nałóż roztwór jodu powidonu na miejsce szwu i umieść zwierzę we wstępnie ogrzanej klatce w celu rekonwalescencji i monitorowania pooperacyjnego. Po tygodniu nałóż żel elektrodowy na łapy zwierzęcia doświadczalnego i przyklej je do elektrod podgrzanej o temperaturze 37 stopni Celsjusza poduszki grzewczej. Następnie nałóż żel ultradźwiękowy na klatkę piersiową myszy i wybierz tryb B w systemie ultrasonograficznym o wysokiej częstotliwości.

Za pomocą sondy MS550D o częstotliwości 40 megaherców zlokalizuj lewą komorę. Następnie, w trybie M, zmierz skurczową i rozkurczową grubość ścianki. Wróć do trybu B, aby zlokalizować lewą tętnicę szyjną wspólną przed punktem rozgałęzienia, a następnie użyj fali pulsacyjnej i kolorowego Dopplera do oceny przepływu, przechowując obrazy do późniejszej analizy, jeśli to konieczne.

Przechyl platformę do obsługi zwierząt maksymalnie w lewo, tak aby mysz znalazła się w lewej pozycji odleżynowej i umieść sondę pod kątem 30 stopni przesuniętym od pozycji równoległej do głowy w pozycji przymostkowej. Manipuluj momentami x i y, aby znaleźć łuk aorty i zlokalizować zwężenie za pomocą trybu kolorowego Dopplera, aby miejsce zwężenia było bardziej widoczne. Za pomocą fali pulsacyjnej i kolorowego Dopplera zmierz szczytową prędkość przepływu w punkcie, w którym krew przepływa między dwiema tętnicami szyjnymi rozgałęziającymi się od łuku aorty.

Następnie pozwól zwierzęciu dojść do siebie na poduszce grzewczej w pozycji leżącej z monitorowaniem, aż do całkowitego wyzdrowienia. Minimalnie inwazyjne poprzeczne zwężenie aorty lub MTAC niezawodnie powoduje przeciążenie ciśnienia w lewej komorze u myszy podwiązanych z wyraźnie widoczną zwężoną aortą poprzeczną i zwiększoną szczytową prędkością przepływu przez miejsce zwężenia. Dla porównania, zwierzę operowane pozorami nie wykazuje widocznego zwężenia przy normalnej szczytowej prędkości przepływu.

W wyniku podwiązania prędkość przepływu w prawej tętnicy szyjnej ulega znacznemu zwiększeniu, a w aorcie wstępującej i sercu może wzrosnąć ciśnienie, powodując przerost lewej komory, znacznie zmniejszając przepływ w lewej tętnicy szyjnej wspólnej. Prawie identyczny przepływ krwi obserwuje się jednak w prawej i lewej tętnicy szyjnej u myszy operowanej pozorowano. Wynikające z tego parametry związane z hipertrofią można łatwo zaobserwować w znacznie powiększonych i zdeformowanych sercach myszy podwiązanych MTAC oraz ich zmniejszone całkowite przeżycie.

Zmiany te są dalej obserwowane na poziomie komórkowym, w tym zwiększony rozmiar komórek mięśnia sercowego i zwłóknienie u myszy MTAC w porównaniu ze zwierzętami bez podwiązania. Po opanowaniu tej techniki można ją wykonać w ciągu pięciu do dziesięciu minut, jeśli jest wykonywana prawidłowo. Podejmując tę procedurę, należy pamiętać, aby uważać, aby nie uszkodzić naczyń.

Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak wywołać przerost lewej komory poprzez poprzeczne zwężenie łuku aorty, za pomocą prostego zabiegu chirurgicznego, który nie wymaga sztucznej wentylacji.