Name: Urządzenie do wykonywania migracji komórek/gojenia ran w płytce 96-dołkowej (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-07T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 46 s
Description: Poznaj metodę oceny migracji komórek w płytce 96-dołkowej za pomocą ośmiokanałowego urządzenia mechanicznego. Protokół umożliwia szybką analizę wpływu związków na gojenie ran bez kosztownego sprzętu.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy chcieliby podziękować Panu/Pani Tam Po Leung, Panu Wong Chi Kinowi oraz personelowi technicznemu Warsztatu Naukowego Uniwersytetu Baptystów w Hongkongu, za ich umiejętności techniczne i rady przy tworzeniu prototypu tego urządzenia.

1. Wprowadzenie do elementów urządzenia do wywoływania ran (Rysunek 1)
<ol>
	<li>Przygotować uchwyt pinów, mocując piny do zadawania ran w równych odstępach. Przytrzymać końcówki pipety i dostosować ich wysokość, przesuwając regulowane piny w górę i w dół.</li>
	<li>Zamocować regulowaną prowadnicę na płytkach hodowlanych z 96 dołkami różnych marek i upewnić się, że obszar zadawania ran znajduje się w ustalonej pozycji.</li>
	<li>Utrwalić regulowany pin do zadawania ran, dokręcając śrubę imbusową. Zamocować prowadnicę w odpowiedniej pozycji, dokręcając śruby z łbem cylindrycznym z gniazdem imbusowym na obu końcach.</li>
</ol>
2. Ustawianie szerokości uchwytu pinów (Rysunek 2)
<ol>
	<li>Poluzuj śruby z łbem imbusowym za pomocą klucza imbusowego M5.</li>
	<li>Włóż odpowiednią liczbę pierścieni regulacyjnych po obu stronach uchwytu pinów, tak aby prowadnice idealnie pasowały do szerokości 96-dołkowej płytki hodowlanej. 
	UWAGA: Płytki Corning i Iwaki wymagają 1 pary dużych pierścieni i 1 pary małych pierścieni. Płytki Falcon i Nunc wymagają 1 pary dużych pierścieni.</li>
	<li>Dokręć śruby z łbem imbusowym, aby przymocować prowadnicę.</li>
</ol>
3. Regulacja prowadnic (Rysunek 3)
<ol>
	<li>Na piny do raniania nałóż sterylne plastikowe końcówki do pipet o pojemności 10-µL.</li>
	<li>Poluzuj śruby z łbem sześciokątnym za pomocą klucza imbusowego M5.</li>
	<li>Trzymając urządzenie do raniania, zanurz piny w jednej kolumnie 96-dołkowej płytki hodowlanej.</li>
	<li>Reguluj wysokość prowadnic, aż wszystkie końcówki będą ledwo dotykać dna dołków.</li>
	<li>Dokręć śruby z łbem sześciokątnym. Upewnij się, że urządzenie do raniania idealnie pasuje do płytki hodowlanej, a piny są dobrze rozmieszczone na środku dołków.</li>
</ol>
4. Kalibracja pinów
<ol>
	<li>Trzymać urządzenie do zadawania ran prostopadle do płaskiej sterylnej powierzchni (np. szalki Petriego) i poluzować wszystkie śruby imbusowe za pomocą klucza imbusowego M3.</li>
	<li>Opuścić urządzenie, aż wszystkie końcówki równomiernie dotkną płaskiej sterylnej powierzchni.</li>
	<li>Ponownie dokręcić śruby imbusowe, aby zablokować piny w tej pozycji.</li>
	<li>Sprawdzić wyrównanie każdej końcówki, delikatnie opukując urządzenie o płaską sterylną powierzchnię.</li>
</ol>
5. Zadrapanie monowarstwy komórek (Rycina 4)
<ol>
	<li>Przesiać ludzkie naczyniowe komórki śródbłonka pępowiny na 96-dołkową płytkę hodowlaną pokrytą 0,1% żelatyną. Hodować komórki w Medium 19 uzupełnionym o 20% inaktywowanego ciepłem płodowej surowicy bydlęcej, 1% penicyliny/streptomycyny oraz 0,09 g/L heparyny. Utrzymywać komórki w inkubatorze z nawilżaniem, w atmosferze 5% dwutlenku węgla w temperaturze 37 ºC przez noc przed użyciem. Przed wykonaniem zranienia komórki powinny osiągnąć 10% konfluencji.</li>
	<li>Umieścić końcówki do zraniania po lewej (lub prawej) stronie każdego dołka w tej samej kolumnie płytki hodowlanej. Przesunąć urządzenie do zraniania na drugą stronę dołka, upewniając się, że końcówki dotykają dna dołka.</li>
	<li>Powtórzyć czynność drapania (Krok 5.2) dla wszystkich kolumn.</li>
	<li>Po zranieniu usunąć pożywkę z każdego dołka i zastąpić ją świeżą pożywką zawierającą testowane związki.</li>
</ol>
6. Akwizycja danych i analiza obrazu
<ol>
	<li>Wykonaj obrazowanie całego dołka z mechaniczną raną w monowarstwie komórkowej, korzystając z mikroskopu o małym powiększeniu z kamerą cyfrową (np. obiektyw 10X) bezpośrednio po zranieniu (t=0 h).</li>
	<li>W razie potrzeby dodać związki testowe i inkubować przez wybrany czas. Po upływie żądanego czasu inkubacji (t=Δh) ponownie wykonać obraz całego dołka wraz z obszarem rany.</li>
	<li>Korzystając z oprogramowania do analizy obrazu, takiego jak ImageJ (<a href="https://imagej.nih.gov/ij/">https://imagej.nih.gov/ij/</a>), zmierz obszar rany na obrazie, korzystając z narzędzia do rysowania obszarów dowolnego kształtu (freehand tool).</li>
	<li>Oblicz procent zamknięcia rany: 
	<img alt="Wzór na szybkość gojenia rany, przedstawiający obliczenie procentowego zmniejszenia powierzchni rany w czasie." src="/files/ftp_upload/55411/55411eq1.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="Równanie"></li>
</ol>

<ol><li>Friedl, P., Wolf, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour-cell+invasion+and+migration%3A+diversity+and+escape+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Tumour-cell invasion and migration: diversity and escape mechanisms.</a> Nat Rev Cancer. 3 (5), 362-374 (2003).</li>
<li>Friedl, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prespecification+and+plasticity%3A+shifting+mechanisms+of+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Prespecification and plasticity: shifting mechanisms of cell migration.</a> Curr Opin Cell Biol. 16 (1), 14-23 (2004).</li>
<li>Lampugnani, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+migration+into+a+wounded+area+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Cell migration into a wounded area in vitro.</a> Methods Mol Biol. 96, 177-182 (1999).</li>
<li>Sholley, M. M., Gimbrone, M. A. Jr, Cotran, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+migration+and+replication+in+endothelial+regeneration%3A+a+study+using+irradiated+endothelial+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Cellular migration and replication in endothelial regeneration: a study using irradiated endothelial cultures.</a> Lab Invest. 36 (1), 18-25 (1977).</li>
<li>Gotlieb, A. I., Spector, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migration+into+an+in+vitro+experimental+wound%3A+a+comparison+of+porcine+aortic+endothelial+and+smooth+muscle+cells+and+the+effect+of+culture+irradiation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Migration into an in vitro experimental wound: a comparison of porcine aortic endothelial and smooth muscle cells and the effect of culture irradiation.</a> Am J Pathol. 103 (2), 271-282 (1981).</li>
<li>Chen, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+migration+chip+for+chemotaxis-based+microfluidic+selection+of+heterogeneous+cell+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Single-cell migration chip for chemotaxis-based microfluidic selection of heterogeneous cell populations.</a> Sci Rep. 18 (5), 9980(2015).</li>
<li>Yarrow, J. C., Periman, Z. E., Westwood, N. J., Mitchison, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-throughput+cell+migration+assay+using+scratch+wound+healing%2C+a+comparsion+of+image-based+readout+methods%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A high-throughput cell migration assay using scratch wound healing, a comparsion of image-based readout methods.</a> BMC Biotechnol. 4, 21(2004).</li>
<li>Lauder, H., Frost, E. E., Hiley, C. R., Fan, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+the+repair+process+involved+in+the+repair+of+a+cell+monolayer+using+an+in+vitro+model+of+mechanical+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">Quantification of the repair process involved in the repair of a cell monolayer using an in vitro model of mechanical injury.</a> Angiogenesis. 2 (1), 67-80 (1998).</li>
<li>Yue, P. Y. K., Leung, E. P. Y., Mak, N. K., Wong, R. N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+method+for+quantifying+cell+migration%2F+wound+healing+in+96-well+plates%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomol+Screen%22%5BJournal%5D)">A simplified method for quantifying cell migration/ wound healing in 96-well plates.</a> J. Biomol Screen. 15 (4), 427-433 (2010).</li>
<li>Yue, P. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elucidation+of+the+mechanisms+underlying+the+angiogenic+effects+of+ginsenoside+Rg%281%29+in+vivo+and+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">Elucidation of the mechanisms underlying the angiogenic effects of ginsenoside Rg(1) in vivo and in vitro.</a> Angiogenesis. 8 (3), 205-216 (2005).</li>
<li>Kwok, H. H., Chan, L. S., Poon, P. Y., Yue, P. Y., Wong, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ginsenoside-Rg1+induces+angiogenesis+by+the+inverse+regulation+of+MET+tyrosine+kinase+receptor+expression+through+miR-23a%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Appl+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Ginsenoside-Rg1 induces angiogenesis by the inverse regulation of MET tyrosine kinase receptor expression through miR-23a.</a> Toxicol Appl Pharmacol. 287 (3), 276-283 (2015).</li>
</ol>

Autorzy oświadczają, że nie mają konkurencyjnych interesów finansowych.

Nasz moduł komórkowy ma kilka unikalnych cech w rozwiązywaniu problemów związanych z tradycyjnymi testami migracji komórek. 8-kanałowa komórka mechaniczna wykonana jest z wysokiej jakości stali nierdzewnej (Steel 304) o długiej żywotności, którą można sterylizować w autoklawie. Prawie wszystkie komercyjne marki 96-dołkowych płytek hodowlanych dostępnych na rynku mogą być używane z tą mechaniczną matrycą komórkową ze względu na regulowaną prowadnicę. Konstrukcja regulowanego drążka prowadzącego zapewnia również, że obszar...

Migracja komórek odgrywa ważną rolę w procesach komórkowych, takich jak embriogeneza, neurogeneza, angiogeneza, gojenie się ran, naprawa błony śluzowej, przejścia nabłonkowo-mezenchymalne w warunkach normalnego rozwoju i choroby1. Jest to skomplikowany proces, który obejmuje koordynację wielu zdarzeń między- i wewnątrzkomórkowych, w tym interakcji cząsteczek sygnałowych, polaryzacji komórek, reorganizacji cytoszkieletu, przebudowy macierzy, wysunięcia błony i dynamicznej modulacji adhezji komórka-komórka2. Badając migrację komórek, można określić odkrycie i walidację substancji chemicznych lub biomolekuł prowadzących do ruchu komórki i powiązanych z nim szlaków biochemicznych. Ten podstawowy proces może być z korzyścią wykorzystany jako wskaźnik zastępczy dla różnych zastosowań, takich jak leczenie chorób i celowanie w leki.
Test zranienia jest jednym z testów migracji komórek3. W tym przypadku pojedyncza próbka komórek zostanie częściowo usunięta za pomocą środków mechanicznych, aby wytworzyć ogołocony obszar, w którym komórki będą migrować, aby pokryć ten obszar. Procent odzysku w określonym punkcie czasowym będzie monitorowany. W przypadku pracy z dużą liczbą próbek problematyczne mogą być takie kwestie, jak koszt eksperymentu i zanieczyszczenie krzyżowe w próbkach. Chociaż dostępnych jest wiele komercyjnych narzędzi i testów do badania migracji komórek4,5,6, wiele z nich wymagało drogiego i wyrafinowanego sprzętu, a ulepszenia są nadal potrzebne. Z tych powodów opracowano 8-kanałową mechaniczną komórkę ogniwową (ilustracja 1).
Nasz 8-kanałowy mechaniczny system ogniw zawiera kilka unikalnych funkcji w rozwiązywaniu wyżej wymienionych problemów. Zapewnia elastyczność w wykonywaniu testów migracji/zranień komórek w formacie 96-dołkowej płytki hodowlanej. Regulowana konstrukcja prowadnicy zapewnia, że obszar zarysowania znajduje się w centralnym położeniu każdej studzienki. Wysokość prętów prowadzących można również regulować, aby podkładka miała zastosowanie do różnych marek płytek hodowlanych. Wreszcie, regulowana konstrukcja trzpienia do nawijania umożliwia równomierny kontakt końcówek pipet z powierzchnią płytki hodowlanej, aby uzyskać jednoczesne i powtarzalne nawijanie7,8.

<table><tbody><tr><td>96-dołkowa płytka do hodowli komórkowej</td><td>Nunc</td><td>167008</td><td>Można również używać innych marek 96-dołkowych płytek do hodowli komórkowych</td></tr><tr><td>Końcówki do pipet P10</td><td>Axygen</td><td>301-03-051</td><td>Krótka końcówka do pipet P10 jest łatwiejsza do stworzenia wyraźnej rany</td></tr><tr><td>Wounder</td><td>R& P Technology Limited</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Medium 199</td><td>Sigma</td><td>M2520-1L</td><td>Do hodowli komórkowych ludzkich komórek śródbłonka żyły pępowinowej. Użyj odpowiedniej pożywki hodowlanej i warunków dla innych typów komórek.</td></tr><tr><td>Surowica bydlęca</td><td>płodu Gibco</td><td>26140079</td><td>Do hodowli komórkowych ludzkich komórek śródbłonka żyły pępowinowej. Użyj odpowiedniej pożywki hodowlanej i warunków dla innego typu komórek.</td></tr><tr><td>Penicylina/Streptomycyna</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td>Do hodowli komórkowych ludzkich komórek śródbłonka żyły pępowinowej. Użyj odpowiedniej pożywki hodowlanej i warunków dla innych typów komórek.</td></tr><tr><td>Sól sodowa heparyny z błony śluzowej jelit świń</td><td>Sigma</td><td>H3393</td><td>Do hodowli komórkowych ludzkich komórek śródbłonka żyły pępowinowej. Użyj odpowiedniej pożywki hodowlanej i warunków dla innych typów komórek.</td></tr><tr><td>Żelatyna ze skóry bydlęcej</td><td>Sigma</td><td>G9391</td><td>Do hodowli komórkowej ludzkich komórek śródbłonka żyły pępowinowej. Użyj odpowiedniej pożywki hodowlanej i kondycji dla innego typu komórek.</td></tr></tbody></table>

urządzenie do wykonywania migracji komórek/gojenia ran w płytce 96-dołkowej

A Device for Performing Cell Migration/Wound Healing in a 96-Well Plate

Test migracji komórek/zranień jest powszechnie stosowaną metodą do badania migracji komórek i innych procesów biologicznych, takich jak angiogeneza i przerzuty nowotworowe. W tym teście komórki są hodowane w celu utworzenia zlewającej się monowarstwy, a mechaniczna rana jest tworzona przez drapanie urządzeniem. Następnie tempo migracji komórek w kierunku ogołoconego obszaru można monitorować za pomocą obrazowania. Nasz 8-kanałowy wóz mechaniczny został zaprojektowany tak, aby rozwiązać większość problemów związanych z testem migracji komórek. Po pierwsze, nasz wózek można łatwo sterylizować w autoklawie lub za pomocą zwykłych środków dezynfekujących. Po drugie, indywidualne regulowane szpilki umożliwiają równomierny kontakt z płytką do hodowli komórkowej, dzięki czemu można tworzyć ostre i powtarzalne rany. Po trzecie, pręty prowadzące po obu stronach rowka zapewniają stałą pozycję nawijania w każdym dołku. Użycie jednorazowych plastikowych końcówek do pipet do nawijania może dodatkowo zapewnić lepszą obsługę koła, a także zminimalizować zanieczyszczenie krzyżowe. Podsumowując, nasz system do hodowli komórek może zapewnić naukowcom przyjazne dla użytkownika i powtarzalne urządzenie do wykonywania testu migracji komórek przy użyciu standardowej 96-dołkowej płytki hodowlanej.

Ten 8-kanałowy mechaniczny urządzenie do zadawania ran służy do tworzenia zarysowań w monowarstwie komórek w celu przeprowadzenia testu migracji komórek. Jest to urządzenie przyjazne dla użytkownika, które pozwala na wykonanie testów zarysowań komórek w płytkach 96-dołkowych w czasie krótszym niż minuta, bez konieczności specjalistycznego szkolenia. Urządzenie to umożliwia tworzenie obszarów rany w monowarstwach komórek o jednolitej szerokości około 60 µm i z ostrymi krawędziami (...

Tutaj prezentujemy protokół do przeprowadzenia półwysokoprzepustowego testu migracji komórek na 96-dołkowej płytce do hodowli komórek. Protokół ten jest szybką, prostą i ekonomiczną metodą tworzenia spójnych ran zadrapań na monowarstwie komórki.

Urządzenie do wykonywania migracji komórek/gojenia ran w płytce 96-dołkowej

The cell migration/wounding assay is a commonly used method to study cell migration and other biological processes, such as angiogenesis and tumor ...

Ogólnym celem tego ośmiokanałowego mechanicznego urządzenia do zadawania ran komórkowych jest ilościowe określenie wpływu preparatu na migrację komórek z wykorzystaniem testu gojenia ran w sposób szybki i półautomatyczny, bez użycia drogiego i skomplikowanego sprzętu. Migracja komórek jest istotnym procesem komórkowym w różnych warunkach fizjologicznych i patofizjologicznych. Testy gojenia ran in vitro są stosowane w różnorodnych badaniach, w tym w badaniach nad nowotworami, naczyniami krwionośnymi oraz w dermatologii.Główną zaletą tej metody jest możliwość monitorowania wpływu na migrację komórek na płytce 96-dołkowej, co pozwala na jednoczesną obserwację różnych warunków traktowania. Procedurę zaprezentuje Ka Chun Ng, doktorant z naszego laboratorium. Aby rozpocząć eksperyment, należy przygotować uchwyt na piny, mocując piny do zadawania uszkodzeń w równych odstępach.Trzymając końcówki pipety, przesuwać regulowane piny do wywoływania urazów w górę i w dół, aby dostosować wysokość końcówki. Następnie zamocować regulacyjną szynę prowadzącą na płytkach hodowlanych z 96 dołkami różnych marek i upewnić się, że obszar wywoływania urazów znajduje się w stałej pozycji. Utrwalić regulowany pin do wywoływania urazów, dokręcając śrubę imbusową.Zablokuj prowadnicę w pozycji, dokręcając śruby z łbem walcowym z otworem sześciokątnym na obu końcach. Użyj klucza imbusowego M5, aby poluzować śruby z łbem walcowym z otworem sześciokątnym. Włóż odpowiednią liczbę pierścieni regulacyjnych po obu stronach uchwytu pinów, tak aby prowadnice idealnie pasowały do szerokości 96-dołkowej płytki hodowlanej.Następnie dokręć śruby z imbusową głową, aby przymocować prowadnicę. Rozpocznij regulację prowadnic, nakładając na piny mocujące sterylne plastikowe końcówki do pipet 10-microliter. Następnie poluzuj śruby z imbusową głową za pomocą klucza imbusowego M5.Przytrzymaj urządzenie do zadawania ran i zanurz piny w jednej kolumnie płytki hodowlanej 96-dołkowej. Następnie dostosuj wysokość prowadnic tak, aby wszystkie końcówki ledwo dotykały dna dołków. Dokręć śruby z łbem sześciokątnym.Upewnij się, że urządzenie do zadawania ran idealnie pasuje do płytki hodowlanej, a piny są prawidłowo ustawione na środku dołków. Trzymaj urządzenie prostopadle do płaskiej, sterylnej powierzchni, takiej jak szalka Petriego, i poluzuj wszystkie śruby imbusowe za pomocą klucza imbusowego M3. Opukuj urządzenie, aż wszystkie końcówki równomiernie dotkną powierzchni.Gdy końcówki równomiernie dotkną powierzchni, ponownie dokręć śruby imbusowe, aby zablokować piny w pozycji. Następnie sprawdź wyrównanie każdej końcówki, delikatnie opukując urządzenie do zadawania ran o płaską sterylną powierzchnię. Wysiej ludzkie komórki śródbłonka naczyniowego pępowiny na 96-dołkową płytkę hodowlaną pokrytą 0,1% żelatyną.Hodować komórki w medium 199 uzupełnionym o 20% inaktywowaną ciepłem płodową surowicę bydlęcą, 1% penicyliny streptomycyny oraz 0,09 g/L heparyny. Przechowywać komórki w inkubatorze z nawilżaniem, w atmosferze 5% dwutlenku węgla w temperaturze 37 °C przez noc przed użyciem. Po osiągnięciu przez komórki 100% konfluencji, umieścić końcówki do zadawania ran po lewej stronie każdego dołka w tej samej kolumnie płytki hodowlanej.Przesuń urządzenie do zadawania ran na drugą stronę studzienki. Upewnij się, że końcówki zadające rany dotykają dna studzienki. Aby zapewnić, że rana w każdej studzience monowarstwy komórkowej znajduje się w centrum i ma taki sam przebieg, przesuń urządzenie w sposób obejmujący studzienkę aż do przeciwległego końca.Powtórz czynność robienia zadrapań dla wszystkich kolumn. Po zranieniu usuń pożywkę z każdej studni i zastąp ją świeżą pożywką zawierającą badane związki. Następnie przejdź do akwizycji danych i analizy obrazów.Reprezentatywne obrazy rzędu i kolumny dołków wykonane bezpośrednio po zadrapaniu umożliwiają ilościową analizę szerokości każdej rany. Obrazy ran uzyskano z ludzkich komórek śródbłonka żyły pępowinowej oraz ludzkich fibroblastów skóry właściwej. Linia przerywana oznacza obszar rany, a linia ciągła obszar migracji komórek.Po obejrzeniu tego filmu powinni Państwo posiadać dobrą wiedzę na temat tego, jak używać tego urządzenia do przeprowadzania testu gojenia ran w płytce 96-dołkowej w sposób półwysokoprzepustowy oraz jak zapewnić, aby każdy dołek został zarysowany przez narzędzie do tworzenia ran.

a-device-for-performing-cell-migrationwound-healing-in-a-96-well-plate

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia rozwojowa

Opisano powszechnie stosowane, wysoce dostępne metody badania migracji komórek i inwazji in vitro. Pierwszą metodą jest test zamykania ran komórkowych, który mierzy ruchliwość komórek. Drugą metodą jest test migracji i inwazji transwell, który ocenia zdolność komórek do chemotakcji i inwazyjności.

Metody in vitro Testy migracji i inwazji komórek

MRP4 reguluje różne cykliczne zdarzenia sygnalizacyjne zależne od nukleotydów, w tym niedawno wyjaśnioną rolę w migracji komórek. Opisujemy bezpośrednie, ale wieloaspektowe podejście do rozwikłania dalszych celów molekularnych MRP4, co skutkuje identyfikacją unikalnego interaktomii MRP4, który odgrywa kluczową rolę w precyzyjnej regulacji migracji fibroblastów.

Metody badania kompleksów makromolekularnych zawierających Mrp4 w regulacji migracji fibroblastów

Celem tego protokołu jest ocena wpływu czynników pro- i antymigracyjnych na migrację komórek w trójwymiarowej matrycy fibryny.

Charakterystyka migracji komórek w trójwymiarowym środowisku ran in vitro

To badanie przedstawia dwie różne metody analizy inwazji i migracji komórek: test komory Boydena i test gojenia ran oparty na mikroskopie in vitro. Opisano protokoły tych dwóch eksperymentów oraz porównano ich zalety i wady.

Ocena procesu inwazji i migracji komórek: porównanie testu ran drapanych opartego na mikroskopie wideo i testu z komorą Boydena

Ten manuskrypt opisuje, w jaki sposób zmiany przypominające nacięcia wykonane na monowarstwach hodowanych komórek nabłonkowych wygodnie modelują gojenie się ran in vitro, umożliwiając obrazowanie za pomocą konfokalnej lub laserowej mikroskopii skaningowej, i które mogą dostarczyć wysokiej jakości danych ilościowych i jakościowych do badania zarówno zachowania komórek, jak i mechanizmów związanych z migracją.

Mikroskopowe metody oceny migracji komórek nabłonka podczas gojenia się ran in vitro

Tutaj prezentujemy protokół do oceny wpływu peptydów na migrację komórek nabłonka oskrzeli. Metoda ta pozwala na szybkie i wysoce powtarzalne uzyskanie danych ilościowych na temat szybkości migracji komórek i zamykania ran.

Nowatorski test gojenia ran in vitro do oceny migracji komórek

Obecny protokół opisuje zintegrowaną metodę badania migracji i inwazji komórek rakowych na jednej platformie w czasie rzeczywistym, zapewniając łatwą do odtworzenia i efektywną czasowo opcję badania mobilności i morfologii komórek.

Prosty przepływ pracy migracji/inwazji przy użyciu zautomatyzowanego imagera Live Cell

Tutaj prezentujemy protokół dla testu in vitro z użyciem pierwotnych fibroblastów oraz dla testu in vivo gojenia ran skóry na myszach. Oba testy są prostymi metodami oceny gojenia się ran in vitro i in vivo.

Test migracji zadrapań i komora grzbietowego fałdu skórnego do analizy gojenia się ran in vitro i in vivo

W tym artykule, nowo zaprojektowana wkładka wydrukowana w 3D jest przedstawiona jako model kokultury i zweryfikowana przez badanie parakrynnej komunikacji międzykomórkowej między komórkami śródbłonka a keratynocytami.

Innowacyjna wkładka drukowana w 3D zaprojektowana z myślą o prostych hodowlach komórkowych 2D i 3D

Poprzez włączenie projektowania doświadczeń interakcji i analizy wymagań użytkownika, wprowadzamy innowacyjny skrobak do komórek, który poprawia testy gojenia się ran komórkowych pod względem odtwarzalności, niezawodności, praktyczności, integralności komórkowej i doświadczenia użytkownika.

Narzędzie do automatycznego tworzenia stabilnych i powtarzalnych przerw bezkomórkowych w celu poprawy wiarygodności testu gojenia się ran komórkowych

Protokół do ilościowej oceny migracji komórek 3D w obrębie i do interfejsu granulowanych hydrożeli jest przedstawiony tutaj.

Kwantyfikacja trójwymiarowej migracji komórek w obrębie i do granulowanych biomateriałów hydrożelowych

Poznaj metodę oceny migracji komórek w płytce 96-dołkowej za pomocą ośmiokanałowego urządzenia mechanicznego. Protokół umożliwia szybką analizę wpływu związków na gojenie ran bez kosztownego sprzętu.

Urządzenie do wykonywania migracji komórek/gojenia ran w płytce 96-dołkowej

Przeglądaj więcej filmów