Rozdzielanie mieszanin przez wytrącanie

1. Opady CaCO₃

1. Przygotować 5 ml 1 M CaCl₂.
2. Przygotuj 5 ml 1 m Na₂CO₃.
3. Do małej probówki wirówkowej (1,5 ml) dodaj 750 μl CaCl₂ i 750 μl Na₂CO₃.
4. Odczekaj 2 minuty, aż nastąpi reakcja. Roztwór powinien stać się mętny.
5. Odwirować mieszaninę o sile 10 000 × g przez 5 minut.
6. Zdekantować supernatant.
7. Dodaj 1 ml zimnej wody do granulki.
8. Zawiesić pelet, mieszając w mieszalniku wirowym przez 10 s.
9. Odwirować mieszaninę o sile 10 000 × g przez 5 minut.
10. Zdekantować supernatant.

2. Wytrącanie białek mleka

1. Wlej mleko do zlewki i dodaj mieszadło.
2. Delikatnie podgrzej mleko do temperatury 40 °C na mieszającej płycie grzejnej. Nie podgrzewać powyżej 40 °C.
3. Przygotuj 15% (v/v) kwasu octowego, mieszając 7,5 ml kwasu octowego i rozcieńczając w wystarczającej ilości wody, aby osiągnąć 50 ml.
4. Zanurz elektrodę pH-metru w ciepłym mleku i monitoruj pH.
5. Dodawaj kwas octowy kroplami do mleka, aż do osiągnięcia pH 4,6.
6. Filtracja mleka
   1. Złóż flet na kawałku bibuły filtracyjnej i umieść go w lejku.
   2. Umieść lejek w kolbie i wlej do niego zakwaszony roztwór mleka.
   3. Podczas nalewania roztworu bibuła filtracyjna może się zatkać. Za pomocą mieszadła od czasu do czasu mieszaj roztwór i bibułę filtracyjną, aby się odblokować. Jeśli nie poprawi to przepływu roztworu, wymień bibułę filtracyjną.
   4. Umieść nową bibułę filtracyjną na blacie stołu i przenieś jak najwięcej mokrego ciała stałego na nową bibułę filtracyjną. Powinno to wchłonąć więcej wody z ciała stałego.
   5. Jeśli nowa bibuła filtracyjna stanie się zbyt mokra, kontynuuj jej wymianę, aż na bibule filtracyjnej pojawi się minimalna ilość wilgoci. Lekko dociśnij, aby w razie potrzeby wchłonąć więcej wody.
   6. Weź wysuszoną substancję stałą i ponownie zawiesić w około 70% etanolu. Przefiltruj ciało stałe ponownie, wykonując kroki od 2.6.1 do 2.6.5.
7. Wirowanie mleka (jako alternatywa dla filtracji)
   1. Przenieść 50 ml porcji mieszaniny do probówek wirówkowych o pojemności 50 ml.
   2. Odwirować przy 4 500 × g przez 10 minut, a następnie zdekantować supernatant.
   3. Dodaj 50 ml 70% etanolu do granulatu.
   4. Za pomocą mieszadła ponownie zawiesić granulki w etanolu.
   5. Odwirować tę zawiesinę zgodnie z krokiem 2.7.2.
8. Ponownie zawiesić granulkę w buforze do dalszej analizy, takim jak SDS-PAGE, w przeciwnym razie przechowywać ją w temperaturze 4°C.

3. Rekrystalizacja KCl

1. Odważyć 50 g KCl w kolbie Erlenmeyera i dodać 100 ml wody
2. Podgrzej mieszaninę, aż woda się zagotuje. Upewnij się, że cały proszek KCl jest rozpuszczony. Niektóre zanieczyszczenia mogą nie rozpuszczać się w wodzie.
3. Podgrzej kolejną (pustą) kolbę Erlenmeyera wraz z mieszaniną i utrzymuj ją w cieple.
4. Umieścić lejek z bibułą filtracyjną w ciepłej, pustej kolbie.
5. Przelej roztwór przez bibułę filtracyjną, aby usunąć nierozpuszczone zanieczyszczenia. Kolba odbiorcza jest utrzymywana w cieple, aby upewnić się, że podczas filtracji nie wystąpią żadne zmiany temperatury, w przeciwnym razie utworzy się surowy osad. Jeśli tak się stanie, ponownie podgrzej mieszaninę, aż cały osad się rozpuści.
6. Zdjąć kolbę z roztworem z ognia.
7. Przechowuj go w chłodnym miejscu w pomieszczeniu i pozwól mu powoli ostygnąć przez około 30 minut lub do momentu, gdy przestanie być ciepły w dotyku.
8. Po schłodzeniu do temperatury pokojowej umieścić kolbę w łaźni lodowej, aby jeszcze bardziej obniżyć temperaturę. Alternatywnie można zostawić kolbę w lodówce lub pomieszczeniu o kontrolowanej temperaturze 4 °C.
9. Kryształy można zbierać przez filtrowanie, jak w krokach 3.4–3.5 (użyć kolby i lejka w temperaturze pokojowej).