Name: Nowatorski test rozpoznawania obiektów do badania uczenia się i pamięci u myszy (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-30T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 52 s
Description: Poznaj test rozpoznawania obiektów do badania uczenia się i pamięci u myszy. Ta metoda pozwala ocenić funkcje poznawcze oraz wpływ interwencji farmakologicznych na pamięć rozpoznawczą.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Praca cytowana i wcześniej opublikowana przez autora była wspierana przez grant z Narodowego Instytutu Zdrowia Psychicznego (MH088480). Autorka chciałaby podziękować swojemu byłemu mentorowi, dr Jamesowi O'Donnellowi za wsparcie w tym projekcie. Publikacja jest finansowana z grantu Narodowego Instytutu Zdrowia (T32 DA007135).

Wszystkie procedury przeprowadzone tutaj zostały przedłożone i zatwierdzone przez Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami i Użytkowania i zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi NIH.
1. Wybór obiektów i konfiguracja eksperymentalna
<ol>
	<li>Wybierz obiekty, które są na tyle różne, że mogą być łatwo rozróżniane przez myszy, ale mają podobny stopień złożoności (tekstura, kształt, wzór kolorów i jasność itp.), aby zminimalizować potencjalną preferencję obiektu, która może zniekształcić wyniki (zobacz Ennaceur 2010, aby uzyskać pełny opis wyboru obiektu7).
	<ol>
		<li>Test na wrodzone preferencje i dyskryminację (patrz Kroki 2 i 3).</li>
		<li>Używaj obiektów, które są wielkości myszy lub tylko nieznacznie większe, aby zachęcić do eksploracji (Rysunek 1). Aby zmniejszyć indukowane preferencje, upewnij się, że myszy są w stanie wspinać się na oba obiekty lub na żaden z nich, chociaż zdolność do wspinania się na obiekt może zwiększyć zainteresowanie eksploracją (czas spędzony na samym siedzeniu na obiekcie nie jest wliczany do czasu eksploracji).</li>
		<li>Posiadaj co najmniej 2 kopie każdego obiektu. Jednak, aby zminimalizować potencjalne sygnały zapachowe podczas testowania, miej co najmniej 3 egzemplarze każdego obiektu, duplikaty do trenowania i jeden do testowania.</li>
		<li>Używaj przedmiotów wykonanych z nietłukącego się materiału, ponieważ utrata przedmiotu z powodu uszkodzenia podczas eksperymentów może zakłócić ciągłość badań i potencjalnie spowodować krzywdę lub obrażenia zwierzęcia.</li>
		<li>Dokładnie wyczyść przedmioty przed i między użyciem (odpowiedni jest etanol 70% obj.).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Aby zminimalizować stres związany z jasnym oświetleniem, używaj rozproszonego, słabego oświetlenia, z środkiem labiryntu oświetlonym około 20 luksów. Używaj temperatury i wilgotności zbliżonej do zwykłych warunków mieszkaniowych. Jeśli myszy są przenoszone z pomieszczenia do innego pomieszczenia na czas eksperymentu, należy zaaklimatyzować myszy w nowym pomieszczeniu przez co najmniej 1 godzinę przed użyciem każdego dnia.</li>
	<li>Dobrze obchodź się z myszami przed treningiem. Ponieważ test opiera się na naturalnej skłonności gryzoni do odkrywania nowości, zmniejsz stres lub niepokój związany z obchodzeniem się, który może zakłócać ich chęć eksploracji areny, a następnie obiektów. Najlepiej obchodzić się z myszami 1-2 razy dziennie przez co najmniej 1 minutę, 1 do 2 tygodni przed testem15,29.</li>
	<li>Na głównej arenie użyj kwadratowej komory (około 40 cm x 40 cm x 40 cm) wykonanej z białego lub czarnego, nieporowatego plastiku, skontrastowanego z kolorem myszy. Alternatywnie użyj okrągłej areny ed. W szczególności, w przypadku korzystania z niespokojnych myszy, które mogą siedzieć w rogach kwadratowej areny, okrągła arena może być preferowana, aby zachęcić do zachowań eksploracyjnych18,30.
	<ol>
		<li>W dniu treningu umieść 2 identyczne obiekty po przekątnej (tj. jeden w rogu NW i jeden w narożniku SE). Jeśli przedmioty są zbyt lekkie i mogą być przesuwane za pomocą myszy, przymocuj je do podłogi. Dobrze sprawdza się zdejmowana szpachlówka montażowa.</li>
		W dniu testowym użyj 3. kopii każdego obiektu, aby umieścić jeden znajomy obiekt i jeden nowy obiekt na tej samej przekątnej, co dzień treningowy (<silna klasa="xfig">Rysunek 2).<li></li>
		<li>Zrównoważ użycie każdego zestawu obiektów, tak aby każdy obiekt był używany zarówno jako znany obiekt, jak i jako nowy obiekt. Zrównoważ również lokalizację nowego obiektu w każdym z 4 rogów areny. Pamiętaj, aby zanotować, która przekątna jest używana dla którego zwierzęcia, aby przekątna używana w dniu treningu była taka sama, jak ta używana w dniu testu, dla każdej myszy.</li>
		<li>Dokładnie wyczyść aparat i przedmioty, aby usunąć oznaki zapachu przed i między użyciem (odpowiedni jest etanol 70% obj.).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Umieść kamerę bezpośrednio nad głową, aby uzyskać optymalny view eksploracji. Używaj wyłącznie oprogramowania z wykrywaniem punktu nosa w celu dokładnej analizy. Jeśli korzystasz z oprogramowania, przed rozpoczęciem uchwyć obraz tła z obiektami na miejscu. W oprogramowaniu ustaw obszar eksploracji tak, aby znajdował się w odległości około 2 - 3 cm wokół obiektu.</li>
	<li>Aby zmniejszyć ingerencję eksperymentatora, nagraj próbę i oceń ją później. Nie zwracaj uwagi na warunki eksperymentalne. Jeśli ręcznie oceniasz podczas eksperymentu, upewnij się, że eksperymentator znajduje się w odległości większej niż 1 metr od areny i nie jest widoczny dla myszy. 
	UWAGA: Każdy czas, w którym mysz siedzi na obiekcie bez aktywnego zamiatania lub wąchania wibrysów, nie liczy się jako czas eksploracji.</li>
	<li>Zdefiniuj eksplorację jako sytuację, w której odgłos myszy jest skierowany w stronę obiektu i w odległości 2-3 cm od obiektu, z aktywnym zamiataniem wibrysami lub wąchaniem. Nie licz czasu na siedzenie na obiekcie bez oznak aktywnej eksploracji.</li>
</ol>
2. Niezbędne eksperymenty pilotażowe
<ol>
	<li>Testowanie pod kątem preferencji indukowanej
	<ol>
		<li>Aby się przyzwyczaić, wyjmij mysz z jej domowej klatki i umieść ją na środku otwartej areny. Pozwól myszy na swobodną eksplorację przez 5 minut.</li>
		<li>W Dniu Treningu (T1) umieść 2 różne obiekty w przeciwległych kwadrantach aparatury (tj. w rogach NW i SE). Wyjmij mysz z jej domowej klatki i umieść ją na środku otwartej areny. Pozwól na swobodną eksplorację przez 10 minut.</li>
		<li>Oblicz wskaźnik dyskryminacji. Jeśli nie ma wymuszonej preferencji, wskaźnik dyskryminacji powinien być równy zeru lub bliski zeru. Żadne obiekty, które wykazują preferencje, nie powinny być używane dla ORT.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Testy na zdolność do dyskryminacji
	<ol>
		<li>Aby się przyzwyczaić, wyjmij mysz z jej domowej klatki i umieść ją na środku otwartej areny. Pozwól myszy na swobodną eksplorację przez 5 minut.</li>
		<li>Podczas sesji treningowej (T1) umieść 2 identyczne obiekty w przeciwległych kwadrantach. Umieść mysz na środku areny i pozwól jej eksplorować przez 10 minut.</li>
		<li>W sesji testowej (T2) umieść jeden z obiektów używanych podczas T1 i jeden nowy obiekt w przeciwległych kwadrantach (tj. narożnikach NW i SE). Sześćdziesiąt minut po T1 umieść mysz na środku areny i pozwól na swobodną eksplorację przez 10 minut.</li>
		<li>Oblicz wskaźnik dyskryminacji. Przy 60-minutowym interwale przechowywania wskaźnik dyskryminacji powinien wynosić powyżej 0,25.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Procedura eksperymentalna
<ol>
	<li>Przyzwyczajenia
	<ol>
		<li>Wyjmij mysz z jej domowej klatki i umieść ją na środku otwartej, pustej areny. Pozwól na swobodną eksplorację areny przez 5 minut. Gdy klatka domowa jest pusta, zachowaj ją do wykorzystania jako klatkę do przechowywania następnego dnia.</li>
		<li>Po upływie 5 minut wyjmij mysz i umieść ją w klatce. Nie należy umieszczać myszy w jej pierwotnej klatce, ponieważ może to wpłynąć na zachowanie pozostałych myszy, które mają być testowane.</li>
		<li>Dokładnie wyczyść aparat między myszami, używając 70% obj./obj. etanolu. 
		UWAGA: Podczas habituacji, zachowanie podobne do lęku można ocenić, obliczając czas spędzony w centrum (patrz Prut & Belzung 200331). Jest to przydatna metryka przy rozważaniu długości czasu T1. Myszy o wyższym poziomie lęku mogą wymagać 10-minutowej sesji, aby osiągnąć minimalne kryterium eksploracji.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Szkolenia (T1)
	<ol>
		<li>Umieść dwa identyczne obiekty w przeciwległych ćwiartkach areny (tj. narożniku NE i narożniku SW).</li>
		<li>24 godziny po przyzwyczajeniu wyjmij mysz z jej domowej klatki i umieść ją na środku areny, w równej odległości od 2 identycznych obiektów.</li>
		<li>Pozwól na swobodną eksplorację przez co najmniej 5 minut. W przypadku korzystania ze szczepu myszy, o których wiadomo, że mają niską aktywność lokomotoryczną lub eksploracyjną (tj. większość myszy nie osiąga minimum 20 sekund eksploracji obu obiektów przez 5 minut, jak zauważono w eksperymentach pilotażowych lub literaturze), przedłuż badanie do 10 minut dla wszystkich myszy w kohorcie.</li>
		<li>Po zakończeniu próby wyjmij mysz i umieść ją w klatce. Gdy klatka domowa jest pusta, zachowaj ją do użytku jako klatkę do przechowywania w dniu testu.</li>
		<li>Dokładnie wyczyść aparaturę i przedmioty między myszami, używając etanolu o stężeniu 70% obj.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Testowanie (T2)
	<ol>
		<li>Umieść jeden obiekt używany podczas T1 (tj. znajomy obiekt) i jeden nowy obiekt w przeciwległych kwadrantach areny. Dla każdej myszy używaj tych samych lokalizacji, które były używane podczas T1.</li>
		<li>W odstępach od T1 do T2 wyjmij mysz z jej klatki domowej i umieść ją na środkowej arenie, w równej odległości od znanego obiektu i nowego obiektu. 
		UWAGA: W odstępie czasu wynoszącym 24 godziny większość myszy nie będzie w stanie odróżnić znanego obiektu od nowego (zwykle -0,2 < d2 < 0,2, w porównaniu z kontrolą pozytywną32). Jeśli testuje się efekty nootropowe, użyj tego punktu czasowego, aby sondować poprawę pamięci. Aby zbadać deficyty pamięci, użyj krótszego interwału przechowywania, wynoszącego od 20 minut do 4 godzin, w zależności od obciążenia myszy.</li>
		<li>Pozwól na swobodną eksplorację przez 10 minut. Po zakończeniu próby wyjmij mysz i umieść ją w klatce.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Zarówno w przypadku T1, jak i T2 zdobądź pierwsze 5 minut. Jeśli mysz nie osiągnie minimalnego czasu eksploracji wynoszącego 20 s dla obu obiektów, kontynuuj punktację po upływie 5 minut, aż całkowita eksploracja przekroczy 20 s.</li>
</ol>
4. Analiza danych
<ol>
	<li>Kryteria wykluczenia
	<ol>
		<li>Zarówno podczas treningu (T1), jak i testowania (T2) oblicz całkowity czas eksploracji dla obu obiektów dla każdej sesji (e1 i e2). Większość myszy powinna osiągnąć minimalną sumę eksploracji dla obu obiektów wynoszącą 20 s przez 5 minut.</li>
		<li>Wydłużenie czasu T1 i T2 do 10 minut dla szczepów myszy, które mają niską eksplorację i nie spełniają tego minimalnego kryterium o 5 minut, jak zaobserwowano podczas badań pilotażowych.</li>
		<li>Oceniaj zachowanie przez 5 minut lub dłużej niż 5 minut, aż osiągną kryterium minimum 20 s.</li>
		<li>Jeśli myszy nie osiągną minimum 20 s eksploracji dla obu obiektów dla T1 lub T2 po 10 minutach, należy je wykluczyć z analizy, ponieważ nie można potwierdzić, że spędziły wystarczająco dużo czasu na eksploracji, aby się uczyć/rozróżniać.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Analiza bezwzględna a względna 
	UWAGA: Różne wzory analizy i ich wzajemne powiązania można zobaczyć w tabeli 1.
	<ol>
		<li>Oblicz e1 jako całkowity czas eksploracji podczas treningu dla 2 identycznych obiektów, gdzie a1 i a2 są identycznymi obiektami. 
		E1 = A1 + A2</li>
		<li>Oblicz e2 jako całkowity czas eksploracji podczas testowania dla znanego obiektu (a) i nowego obiektu (b). 
		e2 = a+b</li>
		<li>Oblicz d1 jako po prostu czas spędzony na eksploracji nowego obiektu minus czas spędzony na eksploracji znanego obiektu. Miara dyskryminacji bezwzględnej (d1) nie uwzględnia różnic w czasie eksploracji między myszami lub grupami leczonymi, chociaż w pewnych okolicznościach może to być bardziej czuła miara2. 
		d1 = b-a</li>
		<li>Oblicz d2 jako czas spędzony na eksploracji nowego obiektu pomniejszony o czas spędzony na eksploracji znanego obiektu podzielony przez całkowity czas eksploracji. Najczęściej stosowaną miarą jest względna wartość dyskryminacji, często określana jako wskaźnik dyskryminacji (d2), na którą nie mają wpływu różnice w czasie eksploracji. Oznacza to, że wszystkie wartości będą mieścić się w przedziale od -1 do +1, 
		d2 = d1/e2</li>
		<li>Alternatywnie oblicz indeks rozpoznawania lub preferencji (d3)3. Jest to czas spędzony na zwiedzaniu nowego obiektu podzielony przez czas całkowity. Oznacza to, że wszystkie wartości będą mieścić się w przedziale od 0 do 1. Często mnoży się ją przez 100 i używa jako wartości procentowej. 
		d3 = b/e2*100</li>
	</ol>
	</li>
	<li>analiza statystyczna
	<ol>
		<li>Korzystając ze średnich wartości dyskryminacji dla każdej grupy, określ wydajność pamięci przy użyciu jednokierunkowej analizy ANOVA. W celu dalszej analizy należy dokonać dwukierunkowych porównań post hoc z grupami leczonymi w porównaniu ze stanem nośnika i pozytywnymi/ujemnymi grupami kontrolnymi.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Ennaceur, A., Meliani, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+one-trial+test+for+neurobiological+studies+of+memory+in+rats+III.+Spatial+vs.+non-spatial+working+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">A new one-trial test for neurobiological studies of memory in rats III. Spatial vs. non-spatial working memory.</a> Behav. Brain Res. 51 (1), 83-92 (1988).</li>
<li>Akkerman, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Object+recognition+testing%3A+methodological+considerations+on+exploration+and+discrimination+measures%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Object recognition testing: methodological considerations on exploration and discrimination measures.</a> Behav. Brain Res. 232 (2), 335-347 (2012).</li>
<li>Antunes, M., Biala, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+novel+object+recognition+memory%3A+neurobiology%2C+test+procedure%2C+and+its+modifications%5BTitle%5D)+AND+%22Cogn.+Process%22%5BJournal%5D)">The novel object recognition memory: neurobiology, test procedure, and its modifications.</a> Cogn. Process. 13 (2), 93-110 (2012).</li>
<li>Leger, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Object+recognition+test+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Object recognition test in mice.</a> Nat. Protoc. 8 (12), 2531-2537 (2013).</li>
<li>van Goethem, N. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Object+recognition+testing%3A+Rodent+species%2C+strains%2C+housing+conditions%2C+and+estrous+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Object recognition testing: Rodent species, strains, housing conditions, and estrous cycle.</a> Behav. Brain Res. 232 (2), 323-334 (2012).</li>
<li>Lueptow, L. M., Zhang, C. -G., O'Donnell, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclic+GMP-mediated+memory+enhancement+in+the+object+recognition+test+by+inhibitors+of+phosphodiesterase-2+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">Cyclic GMP-mediated memory enhancement in the object recognition test by inhibitors of phosphodiesterase-2 in mice.</a> Psychopharmacology (Berl). , (2015).</li>
<li>Ennaceur, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((One-trial+object+recognition+in+rats+and+mice%3A+Methodological+and+theoretical+issues%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">One-trial object recognition in rats and mice: Methodological and theoretical issues.</a> Behav. Brain Res. 215 (2), 244-254 (2010).</li>
<li>Berlyne, D. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/232522058_Novelty_and_Curiosity_as_Determinants_of_Exploratory_Behavior">Novelty and curiosity as determinants of exploratory behavior.</a> Br. J. Psychol. 41 (1-2), 68-80 (1950).</li>
<li>Ennaceur, A., Delacour, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+one-trial+test+for+neurobiological+studies+of+memory+in+rats+I.+Behavioral-data%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">A new one-trial test for neurobiological studies of memory in rats I. Behavioral-data.</a> Behav. Brain Res. 31 (1), 47-59 (1988).</li>
<li>Aguilar-Valles, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+the+stress+response+in+rats+trained+in+the+water-maze%3A+differential+expression+of+corticotropin-releasing+hormone%2C+CRH-R1%2C+glucocorticoid+receptors+and+brain-derived+neurotrophic+factor+in+limbic+regions%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroendocrinology%22%5BJournal%5D)">Analysis of the stress response in rats trained in the water-maze: differential expression of corticotropin-releasing hormone, CRH-R1, glucocorticoid receptors and brain-derived neurotrophic factor in limbic regions.</a> Neuroendocrinology. 82 (5-6), 306-319 (2005).</li>
<li>Anisman, H., Hayley, S., Kelly, O., Borowski, T., Merali, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Psychogenic%2C+neurogenic%2C+and+systemic+stressor+effects+on+plasma+corticosterone+and+behavior%3A+Mouse+strain-dependent+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Psychogenic, neurogenic, and systemic stressor effects on plasma corticosterone and behavior: Mouse strain-dependent outcomes.</a> Behav. Neurosci. 115 (2), 443-454 (2001).</li>
<li>Kim, J. J., Diamond, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+stressed+hippocampus%2C+synaptic+plasticity+and+lost+memories%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The stressed hippocampus, synaptic plasticity and lost memories.</a> Nat. Rev. Neurosci. 3 (6), 453-462 (2002).</li>
<li>Willner, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validity%2C+reliability+and+utility+of+the+chronic+mild+stress+model+of+depression%3A+a+10+year+review+and+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">Validity, reliability and utility of the chronic mild stress model of depression: a 10 year review and evaluation.</a> Psychopharmacology (Berl). 134, 319-329 (1997).</li>
<li>Leussis, M. P., Bolivar, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Habituation+in+rodents%3A+A+review+of+behavior%2C+neurobiology%2C+and+genetics%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Biobehav.+Rev%22%5BJournal%5D)">Habituation in rodents: A review of behavior, neurobiology, and genetics.</a> Neurosci. Biobehav. Rev. 30 (7), 1045-1064 (2006).</li>
<li>Hurst, J. L., West, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taming+anxiety+in+laboratory+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">Taming anxiety in laboratory mice.</a> Nat. Methods. 7 (10), 825-826 (2010).</li>
<li>Dere, E., Huston, J. P., De Souza Silva, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pharmacology%2C+neuroanatomy+and+neurogenetics+of+one-trial+object+recognition+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Biobehav.+Rev%22%5BJournal%5D)">The pharmacology, neuroanatomy and neurogenetics of one-trial object recognition in rodents.</a> Neurosci. Biobehav. Rev. 31, 673-704 (2007).</li>
<li>Winters, B. D., Saksida, L. M., Bussey, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Object+recognition+memory%3A+Neurobiological+mechanisms+of+encoding%2C+consolidation+and+retrieval%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Biobehav.+Rev%22%5BJournal%5D)">Object recognition memory: Neurobiological mechanisms of encoding, consolidation and retrieval.</a> Neurosci. Biobehav. Rev. 32, 1055-1070 (2008).</li>
<li>Rutten, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-dependent+involvement+of+cAMP+and+cGMP+in+consolidation+of+object+memory%3A+studies+using+selective+phosphodiesterase+type+2%2C+4+and+5+inhibitors%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Time-dependent involvement of cAMP and cGMP in consolidation of object memory: studies using selective phosphodiesterase type 2, 4 and 5 inhibitors.</a> Eur. J. Pharmacol. 558 (1-3), 107-112 (2007).</li>
<li>Prickaerts, J., De Vente, J., Honig, W., Steinbusch, H. W. M., Blokland, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((cGMP%2C+but+not+cAMP%2C+in+rat+hippocampus+is+involved+in+early+stages+of+object+memory+consolidation%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">cGMP, but not cAMP, in rat hippocampus is involved in early stages of object memory consolidation.</a> Eur. J. Pharmacol. 436 (1-2), 83-87 (2002).</li>
<li>Bertaina-Anglade, V., Enjuanes, E., Morillon, D., Drieu la Rochelle, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+object+recognition+task+in+rats+and+mice%3A+A+simple+and+rapid+model+in+safety+pharmacology+to+detect+amnesic+properties+of+a+new+chemical+entity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Toxicol.+Methods%22%5BJournal%5D)">The object recognition task in rats and mice: A simple and rapid model in safety pharmacology to detect amnesic properties of a new chemical entity.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 54 (2), 99-105 (2006).</li>
<li>Li, S., Wang, C., Wang, W., Dong, H., Hou, P., Tang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+mild+stress+impairs+cognition+in+mice%3A+From+brain+homeostasis+to+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Chronic mild stress impairs cognition in mice: From brain homeostasis to behavior.</a> Life Sci. 82 (17), 934-942 (2008).</li>
<li>Frick, K. M., Gresack, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+Differences+in+the+Behavioral+Response+to+Spatial+and+Object+Novelty+in+Adult+C57BL%2F6+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Sex Differences in the Behavioral Response to Spatial and Object Novelty in Adult C57BL/6 Mice.</a> Behav. Neurosci. 117 (6), 1283-1291 (2003).</li>
<li>Grayson, B., Leger, M., Piercy, C., Adamson, L., Harte, M., Neill, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+disease-related+cognitive+impairments+using+the+novel+object+recognition+%28NOR%29+task+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Assessment of disease-related cognitive impairments using the novel object recognition (NOR) task in rodents.</a> Behav. Brain Res. 285, 176-193 (2015).</li>
<li>Tuscher, J. J., Fortress, A. M., Kim, J., Frick, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+object+recognition+and+object+placement+by+ovarian+sex+steroid+hormones%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Regulation of object recognition and object placement by ovarian sex steroid hormones.</a> Behav. Brain Res. 285, 140-157 (2015).</li>
<li>Balderas, I., Moreno-Castilla, P., Bermudez-Rattoni, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopamine+D1+receptor+activity+modulates+object+recognition+memory+consolidation+in+the+perirhinal+cortex+but+not+in+the+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Dopamine D1 receptor activity modulates object recognition memory consolidation in the perirhinal cortex but not in the hippocampus.</a> Hippocampus. 23 (10), 873-878 (2013).</li>
<li>Akkerman, S., Blokland, A., Prickaerts, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mind+the+gap%3A+delayed+manifestation+of+long-term+object+memory+improvement+by+phosphodiesterase+inhibitors%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Learn.+Mem%22%5BJournal%5D)">Mind the gap: delayed manifestation of long-term object memory improvement by phosphodiesterase inhibitors.</a> Neurobiol. Learn. Mem. 109, 139-143 (2014).</li>
<li>Domek-Łopacińska, K., Strosznajder, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+selective+inhibition+of+cyclic+GMP+hydrolyzing+phosphodiesterases+2+and+5+on+learning+and+memory+processes+and+nitric+oxide+synthase+activity+in+brain+during+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">The effect of selective inhibition of cyclic GMP hydrolyzing phosphodiesterases 2 and 5 on learning and memory processes and nitric oxide synthase activity in brain during aging.</a> Brain Res. 1216, 68-77 (2008).</li>
<li>Reneerkens, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+phoshodiesterase+type+2+or+type+10+reverses+object+memory+deficits+induced+by+scopolamine+or+MK-801%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Inhibition of phoshodiesterase type 2 or type 10 reverses object memory deficits induced by scopolamine or MK-801.</a> Behav. Brain Res. 236 (1), 16-22 (2013).</li>
<li>Deacon, R. M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Housing%2C+husbandry+and+handling+of+rodents+for+behavioral+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Housing, husbandry and handling of rodents for behavioral experiments.</a> Nat. Protoc. 1 (2), 936-946 (2006).</li>
<li>Şık, A., van Nieuwehuyzen, P., Prickaerts, J., Blokland, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performance+of+different+mouse+strains+in+an+object+recognition+task%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Performance of different mouse strains in an object recognition task.</a> Behav. Brain Res. 147 (1-2), 49-54 (2003).</li>
<li>Prut, L., Belzung, C., Rabelias, U. F., Psychobiologie, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+open+field+as+a+paradigm+to+measure+the+effects+of+drugs+on+anxiety-like+behaviors+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">The open field as a paradigm to measure the effects of drugs on anxiety-like behaviors a review.</a> Eur. J. Pharmacol. 463, 3-33 (2003).</li>
<li>Akkerman, S., Prickaerts, J., Steinbusch, H. W. M., Blokland, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Object+recognition+testing%3A+statistical+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Object recognition testing: statistical considerations.</a> Behav. Brain Res. 232 (2), 317-322 (2012).</li>
<li>Balderas, I., Rodriguez-Ortiz, C. J., Bermudez-Rattoni, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retrieval+and+reconsolidation+of+object+recognition+memory+are+independent+processes+in+the+perirhinal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Retrieval and reconsolidation of object recognition memory are independent processes in the perirhinal cortex.</a> Neuroscience. 253, 398-405 (2013).</li>
<li>de curtis, M., Pare, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+rhinal+cortices%3A+a+wall+of+inhibition+between+the+neocortex+and+the+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Prog.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">The rhinal cortices: a wall of inhibition between the neocortex and the hippocampus.</a> Prog. Neurobiol. 74 (2), 101-110 (2004).</li>
<li>Brown, M. W., Barker, G. R. I., Aggleton, J. P., Warburton, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+pharmacological+interventions+indicate+concerning+the+role+of+the+perirhinal+cortex+in+recognition+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychologia%22%5BJournal%5D)">What pharmacological interventions indicate concerning the role of the perirhinal cortex in recognition memory.</a> Neuropsychologia. 50 (13), 3122-3140 (2012).</li>
<li>Moore, S. J., Deshpande, K., Stinnett, G. S., Seasholtz, A. F., Murphy, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conversion+of+short-term+to+long-term+memory+in+the+novel+object+recognition+paradigm%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Learn.+Mem%22%5BJournal%5D)">Conversion of short-term to long-term memory in the novel object recognition paradigm.</a> Neurobiol. Learn. Mem. 105, 174-185 (2013).</li>
<li>Suzuki, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+anatomy%2C+physiology+and+functions+of+the+perirhinal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">The anatomy, physiology and functions of the perirhinal cortex.</a> Curr. Opin. Neurobiol. 6, 179-186 (1996).</li>
<li>Wan, H., Aggleton, J. P., Brown, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+contributions+of+the+hippocampus+and+perirhinal+cortex+to+recognition+memory%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Different contributions of the hippocampus and perirhinal cortex to recognition memory.</a> J. Neurosci. 19 (3), 1142-1148 (1999).</li>
<li>Warburton, E. C., Brown, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Findings+from+animals+concerning+when+interactions+between+perirhinal+cortex%2C+hippocampus+and+medial+prefrontal+cortex+are+necessary+for+recognition+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychologia%22%5BJournal%5D)">Findings from animals concerning when interactions between perirhinal cortex, hippocampus and medial prefrontal cortex are necessary for recognition memory.</a> Neuropsychologia. 48 (8), 2262-2272 (2010).</li>
</ol>

Autor nie ma nic do zdradzienia.

ORT jest wydajną i elastyczną metodą badania uczenia się i pamięci u myszy. Podczas przygotowywania eksperymentu należy wziąć pod uwagę szereg zmiennych, które mogą mieć wpływ na wynik. Jak omówiono w reprezentatywnych wynikach, obciążenie myszy będzie miało wpływ zarówno na czas eksploracji, jak i na interwał retencji. Skrócenie czasu eksploracji może zniekształcić lub zamaskować wyniki w analizie dyskryminacji bezwzględnej 2,3,5,30,32.<sup class="xre...

Test rozpoznawania obiektów (ORT), znany również jako test rozpoznawania nowych obiektów (NOR), jest stosunkowo szybkim i skutecznym sposobem testowania różnych faz uczenia się i pamięci u myszy. Został pierwotnie opisany przez Ennaceura i Delacoura w 1988 roku i używany głównie w szczurach1; Jednak od tego czasu został z powodzeniem zaadaptowany do użytku w myszach2,3,4,5,6,7. Test opiera się na zaledwie trzech sesjach: jednej sesji przyzwyczajenia, jednej sesji treningowej i jednej sesji testowej. Trening polega po prostu na wizualnej eksploracji dwóch identycznych obiektów, podczas gdy sesja testowa polega na zastąpieniu jednego z wcześniej eksplorowanych obiektów nowym obiektem. Ponieważ gryzonie mają wrodzoną preferencję do nowości, gryzoń, który zapamięta znajomy obiekt, spędzi więcej czasu na jego eksploracji7,8,9.
Główną przewagą ORT nad innymi testami pamięci gryzoni jest to, że opiera się na naturalnej skłonności gryzoni do odkrywania nowości8. Dlatego nie ma potrzeby przeprowadzania licznych sesji treningowych ani żadnego pozytywnego lub negatywnego wzmocnienia, aby motywować do zachowania. Oznacza to, że ORT jest znacznie mniej stresujący w porównaniu z innymi testami10,11,12,13,14,15, i wymaga znacznie mniej czasu na uruchomienie niż inne powszechnie używane testy pamięci, takie jak labirynt wodny Morrisa lub labirynt Barnesa, które mogą trwać do tygodnia lub dłużej. W związku z tym warunki ORT bardziej przypominają te stosowane w badaniu ludzkich funkcji poznawczych, co zwiększa ekologiczną ważność testu w porównaniu z wieloma innymi testami pamięci gryzoni. Podobnie, ponieważ ORT jest prostym zadaniem wizualnym, został z powodzeniem zaadaptowany do użytku u wielu gatunków, w tym ludzi i naczelnych, do oceny różnych międzygatunkowych aspektów pamięci deklaratywnej 2,16,17. Wreszcie, ORT można łatwo zmodyfikować w celu zbadania różnych faz uczenia się i pamięci (tj. nabywania, konsolidacji lub przypominania), oceny różnych typów pamięci (np. pamięci przestrzennej) lub oceny różnych interwałów przechowywania (tj. pamięci krótkotrwałej i długotrwałej).
Wszechstronność ORT stanowi platformę dla niezliczonych zastosowań badawczych. W badaniach można wykorzystać środki farmakologiczne w celu zakłócenia lub poprawy pamięci. Zróżnicowanie czasu podawania leku przed lub po treningu lub przed badaniem może wskazywać na mechanizmy neuronalne, które prowadzą do zaburzeń lub wzmocnienia pamięci6,18,19,20. W podobny sposób technologia optogenetyczna może być wykorzystywana w tych samych różnych punktach czasowych, aby przyjrzeć się aktywacji/hamowaniu neuronalnemu, które przyczynia się do różnych faz uczenia się i pamięci. ORT jest również odpowiedni do oceny różnic u zwierząt transgenicznych, w badaniach nad zmianami chorobowymi, w modelach neurodegeneracyjnych lub w badaniach starzenia się21,22,23,24,25,26,27,28. Czas między treningiem a testowaniem, znany jako interwał przechowywania, może być zmieniony, aby ocenić dowolną z tych zmian w pamięci krótko- i długotrwałej26. Ostatecznie ORT może być używany jako narzędzie do badania farmakologicznych, genetycznych i neurologicznych zmian w uczeniu się i pamięci, lub te narzędzia mogą być używane do badania podstaw uczenia się i pamięci w ORT.

<table><tbody><tr><td>Aparat Open Field Box</td><td>Panlab/Harvard</td><td>LE800SC</td><td>Dostępny w kolorze szarym, białym lub czarnym</td></tr><tr><td>ANY-maze</td><td>Stoelting Co.</td><td>60000</td><td>System śledzenia zachowań</td></tr><tr><td>EthoVisionXT 12</td> System śledzenia zachowań <td>Noldus</td><td></td><td>; wymaga 3-punktowego śledzenia</td></tr><tr><td>Kamera wideo</td><td>Każda</td><td></td><td>kamera wideo powinna być zamontowana bezpośrednio nad głową urządzenia</td></tr><tr><td>70% etanolu&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2818-4</td><td>Przed rozpoczęciem testów i pomiędzy próbami każdy obiekt powinien być dokładnie oczyszczony. Podłoga i ściany urządzenia również powinny być czyszczone.&nbsp;</td></tr></tbody></table>

nowatorski test rozpoznawania obiektów do badania uczenia się i pamięci u myszy

Novel Object Recognition Test for the Investigation of Learning and Memory in Mice

Test rozpoznawania obiektów (ORT) jest powszechnie używanym testem behawioralnym do badania różnych aspektów uczenia się i pamięci u myszy. ORT jest dość prosty i można go ukończyć w ciągu 3 dni: dzień przyzwyczajenia, dzień treningu i dzień testu. Podczas treningu mysz może eksplorować 2 identyczne obiekty. W dniu testu jeden z obiektów treningowych jest zastępowany nowym obiektem. Ponieważ myszy mają wrodzoną preferencję do nowości, jeśli mysz rozpozna znajomy obiekt, spędzi większość czasu przy nowym obiekcie. Ze względu na tę wrodzoną preferencję nie ma potrzeby stosowania pozytywnego lub negatywnego wzmocnienia ani długich harmonogramów treningowych. Dodatkowo ORT może być również modyfikowany do wielu zastosowań. Interwał retencji można skrócić w celu zbadania pamięci krótkotrwałej lub wydłużyć w celu zbadania pamięci długotrwałej. Interwencja farmakologiczna może być stosowana w różnych momentach przed treningiem, po treningu lub przed przypomnieniem w celu zbadania różnych faz uczenia się (tj. przyswojenia, wczesnej lub późnej konsolidacji lub przypomnienia). Ogólnie rzecz biorąc, ORT jest stosunkowo mało stresującym, skutecznym testem pamięci u myszy i jest odpowiedni do wykrywania zmian neuropsychologicznych po manipulacjach farmakologicznych, biologicznych lub genetycznych.

Ogólny schemat eksperymentalny dla ORT przedstawiono na Rysunku 2. W dniu habituacji (T0) myszy są umieszczane w pustej arenie na 5 min. Dwadzieścia cztery godziny później myszy są ponownie umieszczane w komorze z dwoma identycznymi obiektami i mogą swobodnie eksplorować otoczenie przez maksymalnie 10 min (T1). W dniu testowym (T2) myszy są ponownie umieszczane w arenie, ale tym razem z jednym znanym i jednym nowym obiektem, i mogą eksplorować przez maksymaln...

Test rozpoznawania obiektów (ORT) to prosty i skuteczny test do oceny uczenia się i pamięci u myszy. Metodologia została opisana poniżej.

Nowatorski test rozpoznawania obiektów do badania uczenia się i pamięci u myszy

The object recognition test (ORT) is a commonly used behavioral assay for the investigation of various aspects of learning and memory in mice. The ORT is ...

Ogólnym celem tego testu behawioralnego jest badanie różnych aspektów uczenia się i pamięci u myszy. Metoda ta może pomóc w udzieleniu odpowiedzi na liczne pytania z zakresu poznawczego gryzoni – od podstawowych kwestii służących pogłębieniu zrozumienia określonych aspektów uczenia się i pamięci u myszy, po bardziej złożone zagadnienia, takie jak zaburzenia poznawcze (w tym modele chorób, np. choroby Alzheimera), aż po badanie potencjalnej poprawy funkcji poznawczych. Główną zaletą testu ORT jest jego prostota, wydajność oraz elastyczność w badaniu uczenia się i pamięci u myszy.Procedurę tę zaprezentuje Andrei Jeltyi, technik laboratoryjny z naszego laboratorium. Rozpocznij od wybrania obiektów o wielkości kreta, które będą łatwo rozróżnialne dla zwierzęcia, ale będą miały podobny stopień złożoności cech, takich jak tekstura, kształt lub jasność, aby zminimalizować potencjalne preferencje wobec obiektów, które mogłyby zaburzyć wyniki. Ponadto, aby dodatkowo ograniczyć indukowane preferencje, upewnij się, że myszy mogą wejść na oba obiekty lub na żaden z nich.Zdolność do wspinania się na obiekt może zwiększyć zainteresowanie eksploracją. Aby zminimalizować stres wywołany silnym oświetleniem, należy zastosować rozproszone, słabe oświetlenie, tak aby w centrum labiryntu natężenie światła wynosiło około 20 luksów. Przed każdym dniem badań należy poddać myszy aklimatyzacji w nowych pomieszczeniach testowych przez co najmniej jedną godzinę, utrzymując temperaturę i wilgotność zbliżoną do warunków standardowego chowu.Należy pamiętać, że myszy powinny być obsługiwane jeden lub dwa razy dziennie przez co najmniej jedną minutę, w okresie od jednego do dwóch tygodni przed testowaniem. Wreszcie, jako główną arenę należy wykorzystać kwadratową komorę wykonaną z białego lub czarnego nieporowatego plastiku, kontrastującego z kolorem myszy. Rozpocznij od wyjęcia myszy z klatki domowej i umieszczenia jej na środku otwartej, pustej areny.Pozostaw mysz na pięć minut w celu swobodnej eksploracji areny. Gdy klatka domowa będzie pusta, zachowaj ją do wykorzystania jako klatkę przechowalną następnego dnia. Po upływie pięciu minut wyjmij mysz i umieść ją w klatce przechowalnej.Nie należy zwracać myszy do jej oryginalnej klatki domowej, ponieważ może to wpłynąć na zachowanie pozostałych myszy przeznaczonych do badań. Następnie należy dokładnie oczyścić aparat pomiędzy kolejnymi myszami, używając 70% (v/v) etanolu. Następnie należy rozpocząć fazę treningową lub T1, umieszczając dwa identyczne obiekty w przeciwległych kwadrantach areny.Na przykład jeden w północno-zachodnim rogu, a drugi w południowo-wschodnim rogu. Przedmioty, które są zbyt lekkie, należy przymocować do podłoża za pomocą usuwalnej masy montażowej. Należy zrównoważyć użycie każdego zestawu przedmiotów, a także umiejscowienie nowego przedmiotu w każdym z czterech rogów areny.Należy upewnić się, która przekątna jest przypisana do którego zwierzęcia, aby przekątna wykorzystana w dniu treningu odpowiadała tej użytej w dniu testowym dla każdej myszy. 24 godziny po habituacji należy wyjąć mysz z klatki macierzystej i umieścić ją w centrum areny, w równej odległości od dwóch identycznych obiektów, aby rozpocząć trening. Należy pozwolić na swobodną eksplorację przez minimum pięć minut; w przypadku użycia szczepu myszy znanego z niskiej aktywności lokomotorycznej lub eksploracyjnej, czas próby dla wszystkich myszy w kohortach należy wydłużyć do 10 minut.Po zakończeniu próby treningowej wyjmij mysz i umieść ją w klatce przetrzymowej. Gdy klatka domowa będzie pusta, zachowaj ją do wykorzystania jako klatkę przetrzymową w dniu testowania. Należy pamiętać o oczyszczeniu aparatury i przedmiotów pomiędzy kolejnymi myszami.Następnie rozpocznij fazę testową lub T2, umieszczając znany obiekt używany podczas treningu oraz jeden nowy obiekt w przeciwległych kwadrantach areny. Dla każdej myszy zastosuj te same lokalizacje, których używano podczas treningu. W odstępie T1 do T2 dotyczącym wyboru, wyjmij mysz z klatki domowej i umieść ją w centrum areny, w równej odległości od obiektu znanego i obiektu nowego.Pozostaw mysz do swobodnej eksploracji przez 10 minut. Na koniec próby testowej wyjmij mysz i umieść ją w klatce holdingowej. Do celów analizy eksplorację definiuje się jako skierowanie nosa w stronę obiektu w odległości od dwóch do trzech centymetrów przy jednoczesnym aktywnym ruchu wibrysami.Jednak czas, w którym mysz siedzi na obiekcie, nie jest wliczany do czasu eksploracji. Dla obu sesji, T1 i T2, oceniany jest czas pierwszych pięciu minut, a następnie oblicza się całkowity czas eksploracji obu obiektów dla każdej sesji. Jeśli mysz nie osiągnie minimalnego czasu eksploracji wynoszącego 20 sekund dla obu obiektów, ocenianie kontynuuje się po upływie pięciu minut, aż całkowity czas eksploracji przekroczy 20 sekund.W przypadku szczepów myszy wykazujących niską eksplorację i nie spełniających tego minimalnego kryterium o pięć minut w oparciu o obserwacje z testów pilotażowych, należy wydłużyć czas T1 i T2 do 10 minut. Ostatecznie, jeśli w czasie 10 minut myszy nie osiągną minimum 20 sekund eksploracji obu obiektów w fazie T1 lub T2, należy wykluczyć je z analizy, ponieważ nie można potwierdzić, że zwierzę spędziło wystarczająco dużo czasu na eksploracji, aby nauczyć się i rozróżnić obiekty. Zadanie rozpoznawania obiektów jest wydajną i elastyczną metodą badania uczenia się i pamięci u myszy, w której wykazano, że inhibitory fosfodiesterazy 2 poprawiają wyniki w tym zadaniu.W porównaniu z grupą kontrolną, podanie inhibitorów PDE2 bays 60-7550 lub ND7001 znacząco poprawiło pamięć w sposób zależny od dawki, gdy podano je 30 minut przed treningiem. Po podaniu w różnych punktach czasowych względem treningu i testowania, inhibitor PDE2 bay 60-7550 znacząco poprawił pamięć, gdy podano go 30 minut przed treningiem, a także bezpośrednio po treningu i 30 minut przed przypominaniem. Po opanowaniu ta technika może zostać wykonana w ciągu dwóch do trzech dni, jeśli jest przeprowadzana prawidłowo.Podczas wykonywania tej procedury należy pamiętać o przeprowadzeniu badań pilotażowych i starannym doborze odstępu czasu między T1 a T2, ponieważ wybór niewłaściwego interwału może doprowadzić do błędnych wyników. Po zastosowaniu tej procedury można przeprowadzić inne metody, takie jak labirynt Barnsa, aby odpowiedzieć na dodatkowe pytania, na przykład dotyczące różnic w uczeniu się, których nie można w pełni wyjaśnić za pomocą testów rozpoznawania obiektów. Po opracowaniu ta technika utorowała drogę badaczom z dziedziny uczenia się i pamięci do zgłębiania podstawowych biologicznych mechanizmów pamięci, a także badania potencjalnych mechanizmów różnych deficytów poznawczych u gryzoni.Po obejrzeniu tego filmu powinieneś mieć dobre wyobrażenie o tym, jak przygotować i zaprojektować odpowiedni eksperyment z wykorzystaniem testu rozpoznawania obiektów, w tym jak przeprowadzać badania pilotażowe, dobierać obiekty oraz wybierać właściwy interwał między T1 a T2. Dziękujemy za oglądanie i życzymy powodzenia w prowadzeniu eksperymentów.

novel-object-recognition-test-for-investigation-learning-memory

Research

JoVE Journal

Behavior

Zachowanie

Niniejszy artykuł przedstawia protokół testów w labiryncie T z wykorzystaniem zmodyfikowanego zautomatyzowanego aparatu do oceny funkcji uczenia się i pamięci u myszy.

Zadania wymuszonej alternacji w labiryncie T oraz dyskryminacji lewo-prawo w celu oceny pamięci operacyjnej i referencyjnej u myszy

Bardziej ograniczone, powtarzające się zachowania (RRB) zakłócają życie osób dotkniętych tym problemem.  Zachowania te są trudne do modelowania u gryzoni, co utrudnia podstawowe badania biomedyczne nad potencjalnymi terapiami lub interwencjami w przypadku RRB.  W tym miejscu opisujemy eksplorację nowych obiektów jako potencjalny test dla RRB wyższego rzędu u myszy.

Eksploracja nowych obiektów jako potencjalny test dla powtarzających się zachowań wyższego rzędu u myszy

Opisane tutaj jest etapowe, behawioralne podejście przesiewowe, które może być użyte do badania przesiewowego pod kątem związków wykazujących skuteczność in vivo na poznawcze i funkcjonalne zachowania motoryczne w transgenicznych mysich modelach β-amyloidozy i tauopatii. Metody te są zoptymalizowane pod kątem badań przesiewowych związków pod kątem aktywności w zadaniach pamięci krótkotrwałej i roboczej.

Ocena spontanicznej przemiany, rozpoznawania nowych obiektów i zaciskania kończyn w transgenicznych mysich modelach β amyloidu i neuropatologii tau

Tutaj szkolimy myszy w zadaniu uczenia asocjacyjnego, aby przetestować rozróżnianie zapachów. Protokół ten pozwala również na badania nad zmianami strukturalnymi w mózgu wywołanymi uczeniem się.

Obiektywny i powtarzalny test uczenia się węchu i dyskryminacji u myszy

Tutaj udostępniamy protokół, który zawiera obszerne instrukcje dotyczące ekonomicznego ustanawiania lokalizacji obiektów mysich i nowatorskich testów behawioralnych rozpoznawania obiektów, w tym projektowania, kosztu i budowy wymaganego sprzętu, a także wykonywania testów behawioralnych, zbierania danych i analizy.

Nowatorskie rozpoznawanie obiektów i testy behawioralne lokalizacji obiektów u myszy przy ograniczonym budżecie

Kompleksowy test behawioralny obejmujący umiejętności motoryczne, nastrój - w tym interakcje społeczne, depresję i lęk - oraz funkcje poznawcze jest przeznaczony do wielokrotnej oceny zmian behawioralnych związanych z neurodegeneracją u myszy.

Bateria testów behawioralnych do wielokrotnej oceny zdolności motorycznych, nastroju i funkcji poznawczych u myszy

Ten artykuł przedstawia eksperymentalne procedury oceny zaburzeń pamięci u myszy z padaczką wywołaną pilokarpiną. Protokół ten może być wykorzystany do badania patofizjologicznych mechanizmów spadku funkcji poznawczych związanego z padaczką, który jest jedną z najczęstszych chorób współistniejących w padaczce.

Ocena funkcji pamięci u myszy z padaczką indukowaną pilokarpiną

Przedstawiony tutaj protokół dostarcza informacji na temat jednoczesnej elektroencefalografii (EEG) i oceny behawioralnej w czasie rzeczywistym. Omówiliśmy wszystkie kroki związane z tym protokołem jako atrakcyjnym rozwiązaniem dla badaczy z wielu dziedzin neuronauki, szczególnie w obszarach uczenia się i pamięci.

Jednoczesne monitorowanie bezprzewodowego testu elektrofizjologii i pamięci behawioralnej jako narzędzia do badania neurogenezy hipokampa

Ten protokół zawiera szczegółowe kroki dla zadania lokalizacji obiektu z czterema powtórzeniami przy użyciu tej samej kohorty szczurów. Słabe i silne kodowanie może wytwarzać wspomnienia krótko- i długotrwałe. Elastyczność protokołu z powtarzaniem może być korzystna w badaniach obejmujących operacje chirurgiczne, oszczędzając czas i pracę.

Wewnątrzprzedmiotowy projekt eksperymentalny wykorzystujący zadanie lokalizacji obiektu w szczurach

Ten protokół dostarcza kompleksowego opisu metody jednoczesnego rejestrowania sygnałów wapniowych z neuronów i astrocytów w wielu obszarach mózgu związanych z pamięcią i demonstruje jej zastosowanie w paradygmacie zachowania uczenia się i pamięci.

Metoda fotometrii światłowodowej dwukolorowej do rejestracji aktywności astrocytów-neuronów w wielu regionach mózgu podczas nauki i zachowań pamięciowych

Poznaj test rozpoznawania obiektów do badania uczenia się i pamięci u myszy. Ta metoda pozwala ocenić funkcje poznawcze oraz wpływ interwencji farmakologicznych na pamięć rozpoznawczą.

Nowatorski test rozpoznawania obiektów do badania uczenia się i pamięci u myszy

Przeglądaj więcej filmów