Testy przesiewowe w celu scharakteryzowania nowych regulatorów śródbłonka zaangażowanych w odpowiedź zapalną
15 września 2017
Śródbłonek naczyniowy ściśle kontroluje rekrutację leukocytów. Niewystarczające wynaczynienie leukocytów przyczynia się do chorób zapalnych u ludzi. Dlatego poszukiwanie nowych elementów regulacyjnych aktywacji śródbłonka jest niezbędne do projektowania ulepszonych terapii zaburzeń zapalnych. W tym miejscu opisujemy kompleksową metodologię charakteryzującą nowe regulatory śródbłonka, które mogą modyfikować transport leukocytów podczas stanu zapalnego.
Ogólnym celem tego testu przesiewowego jest scharakteryzowanie nowych regulatorów śródbłonka zaangażowanych w odpowiedź zapalną, która jest przedmiotem zainteresowania w celu zaprojektowania nowych strategii terapeutycznych przeciwko zaburzeniom zapalnym. Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie patologii, takie jak zdefiniowanie nowych leków ukierunkowanych na śródbłonek, które mogą łagodzić choroby związane ze stanem zapalnym. Główną zaletą tego protokołu śródbłonka jest to, że opisuje technologię testów, która stanowi podstawę do badania nowych mechanizmów zaangażowanych w regulację odpowiedzi zapalnej. Metodologię tę zademonstrują Maria Angeles Higueras, doktor habilitowany z naszego laboratorium oraz Sandra Herranz, technik z naszego laboratorium. Na początek hoduj komórki MLEC-04 w kompletnym pożywce DMEM F12 uzupełnionej 10% FBS i Pen-Strep.Inkubuj komórki w inkubatorze biologicznym w wieku 37 lat
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych
Przegląd
Niniejsze badanie koncentruje się na roli śródbłonka naczyniowego w regulacji rekrutacji leukocytów podczas stanu zapalnego. Podkreśla ono znaczenie identyfikacji nowych elementów regulacyjnych w celu usprawnienia terapii chorób zapalnych.
Kluczowe elementy badania
Dziedzina nauki
- Biologia naczyniowa
- Stan zapalny
- Migracja leukocytów
Wstęp
- Śródbłonek naczyniowy ma kluczowe znaczenie dla kontroli rekrutacji leukocytów.
- Niewłaściwa ekstrawasacja leukocytów jest powiązana z różnymi chorobami zapalnymi.
- Zrozumienie aktywacji śródbłonka może prowadzić do opracowania lepszych strategii terapeutycznych.
- Identyfikacja nowych elementów regulacyjnych jest niezbędna do poprawy opcji leczenia.
Cel badania
- W celu scharakteryzowania nowych regulatorów śródbłonkowych.
- W celu zbadania ich wpływu na ruch leukocytów podczas stanu zapalnego.
- W celu przyczynienia się do opracowania ulepszonych terapii zaburzeń zapalnych.
Zastosowane Metody
- Kompleksowa metodologia charakteryzacji regulatorów śródbłonka.
- Podejścia eksperymentalne do oceny ruchu leukocytów.
- Analiza mechanizmów aktywacji śródbłonka.
- Ocena potencjalnych celów terapeutycznych.
Główne wyniki
- Identyfikacja nowych elementów regulacyjnych w komórkach śródbłonka.
- Wykazanie ich wpływu na ekstrawasację leukocytów.
- Wgląd w mechanizmy aktywacji śródbłonka.
- Potencjalne implikacje dla rozwoju terapii chorób zapalnych.
Wnioski
- Nowe regulatory śródbłonka odgrywają istotną rolę w ruchu leukocytów.
- Zrozumienie tych regulatorów może pomóc w opracowaniu strategii terapeutycznych.
- Konieczne są dalsze badania w celu pełnego poznania ich potencjału w leczeniu stanów zapalnych.
Najczęściej zadawane pytania
Znaczenie dla przemysłu
Efektywne charakteryzowanie nowych regulatorów śródbłonka jest kluczowe dla minimalizacji ryzyka na wczesnym etapie odkrywania leków w portfolio chorób zapalnych. Ilościowe testy przesiewowe ukierunkowane na aktywację śródbłonka i rekrutację leukocytów zapewniają wiarygodność prognostyczną w zakresie walidacji celów oraz segregacji mechanistycznej. Podejścia te umożliwiają zespołom biofarmaceutycznym priorytetyzację celów naczyniowych o potencjale translacyjnym w terapii zaburzeń zapalnych.
Strategiczne zastosowania w badaniach i rozwoju biofarmaceutycznym
Wczesne etapy odkrywania i walidacja celu
- Umożliwia badanie ścieżek śródbłonkowych kluczowych dla regulacji stanu zapalnego.
- Wspiera funkcjonalną walidację potencjalnych regulatorów wpływających na rekrutację leukocytów.
- Ułatwia ograniczanie ryzyka mechanistycznego poprzez kwantyfikację ekspresji cytokin, chemokin i cząsteczek adhezyjnych.
- Dostarcza danych pozwalających na zwiększenie pewności prognostycznej w wyborze i segregacji celów terapeutycznych.
Przesiewy i rozwój testów
- Ustanawia zestandaryzowane, ilościowe analizy z wykorzystaniem RT-qPCR, western blot, cytometrii przepływowej oraz testów adhezji.
- Zapewnia powtarzalne wyniki w zakresie aktywacji śródbłonka i adhezji leukocytów.
- Umożliwia skalowalny screening nowych modulatorów wpływających na sygnalizację zapalną.
- Przygotowuje zwalidowane systemy biologiczne do dalszej oceny związków.
Badania translacyjne i przedkliniczne
- Umożliwia powiązanie aktywacji śródbłonka in vitro z mechanizmami zapalnymi istotnymi dla przebiegu choroby.
- Zapewnia ciągłość procesu od etapu odkrywania po przedkliniczną walidację celów naczyniowych.
- Dostarcza podstaw do podejmowania decyzji o dalszym rozwoju strategii przeciwzapalnych, z uwzględnieniem analizy ryzyka.
- Zapewnia wgląd w mechanizmy niezbędne do opracowania translacyjnych biomarkerów.
Integracja rurociągów i przepływów pracy
Przedstawione testy przesiewowe sytuują charakteryzację regulatorów śródbłonka na styku wczesnej fazy odkrywania i badań przedklinicznych, wspierając identyfikację związków wiodących oraz ciągłość translacyjną w projektach badawczych nad chorobami zapalnymi.
- Biologia odkrywcza: Ilościowe określanie odpowiedzi śródbłonka na bodźce zapalne, co pozwala wyjaśnić udział poszczególnych szlaków i zredukować ryzyko biologiczne.
- Screening: Zapewnienie zestandaryzowanych, powtarzalnych testów do oceny potencjalnych regulatorów i związków.
- Analityka: Generowanie ilościowych wyników ekspresji cytokin, chemokin i cząsteczek adhezyjnych w celu porównania warunków doświadczalnych.
- Badania translacyjne: Przenoszenie wyników uzyskanych in vitro na mechanizmy istotne dla chorób oraz strategie biomarkerowe.
- Wykorzystanie w przedsiębiorstwie: Udostępnienie platformy wielokrotnego użytku do ciągłego odkrywania i walidacji celów naczyniowych.
Wpływ operacyjny i przedsiębiorczy
- Wartość naukowa: Zwiększa pewność prognostyczną i redukuje niejednoznaczność mechanistyczną w walidacji celu.
- Wartość operacyjna: Zapewnia standaryzowane, skalowalne i powtarzalne przepływy pracy dla przesiewu śródbłonka.
- Wartość strategiczna: Poprawia decyzje typu go/no-go oraz efektywność kapitałową poprzez skupienie się na zwalidowanych celach naczyniowych.
- Wpływ na portfolio: Umożliwia priorytetyzację skorygowaną o ryzyko oraz rozwój kandydatów przeciwzapalnych.
Uwagi dotyczące implementacji
- Wymagana jest wiedza specjalistyczna z zakresu biologii śródbłonka oraz szlaków sygnalizacji zapalnej.
- Niezbędny jest dostęp do infrastruktury umożliwiającej przeprowadzanie analiz RT-qPCR, western blot, cytometrii przepływowej oraz testów adhezji komórkowej.
- Wymagana jest standaryzacja międzyzespołowa w celu zapewnienia powtarzalności analiz i porównywalności danych.
- Może być konieczna adaptacja metody dla różnych modeli komórek śródbłonka lub różnych kontekstów zapalnych.
- Interpretacja wyników przesiewowych zależy od zastosowania rzetelnej analizy ilościowej.
Najczęściej zadawane pytania dotyczące biofarmacji
Chapters in this video
0:05
Title
0:58
Endothelial Cell Culture and Tissue Culture Conditions
11:52
Conclusion
9:59
Results: Activation Parameters of LPS-stimulated Endothelial Cells and Influence on Leukocyte Behavior
2:42
Evaluate Endothelial Factor Released on Leukocyte Activation by Adhesion Assays
4:12
Leukocyte Adhesion Assay
7:42
Test Endothelial Activation by Leukocyte Endothelium Co-adhesion Assay
