Technika minimalnie inwazyjnego poprzecznego zwężenia aorty u myszy w celu indukcji przerostu lewej komory

Ogólnym celem tego protokołu jest ustalenie minimalnie inwazyjnego poprzecznego zwężenia aorty u myszy. Ta metoda może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania dotyczące wdrażania poprzecznego zwężenia aorty u myszy, takie jak sposób tworzenia przejścia pod łukiem aorty. Głównymi zaletami tej techniki jest to, że jest prosta, przyjazna dla użytkownika i eliminuje potrzebę intubacji i wentylacji myszy.

Będę demonstrować procedurę z naszą postdoc Simoną Nemską, która będzie wykonywać etapy przedoperacyjnego przygotowania zwierząt i nadzoru pooperacyjnego. W dniu zabiegu należy ogolić szyję i klatkę piersiową znieczulonej myszy oraz zdezynfekować odsłoniętą skórę 70% etanolem. Po potwierdzeniu odpowiedniego poziomu sedacji poprzez uszczypnięcie palca u nogi, zabezpiecz zwierzę w pozycji leżącej na czystej podkładce roboczej z korka.

Następnie użyj ostrza noża numer 11, aby wykonać 10-milimetrowe podłużne nacięcie szyjki macicy w linii środkowej od wcięcia nadmostkowego do środkowej części klatki piersiowej, aby odsłonić mostek. Za pomocą uchwytu na igłę Crile-Wood przełóż szew polipropylenowy 4-0 z monofilamentu, aby cofnąć tarczycę. I przyklej szew do podkładki roboczej.

Następnie przesuń podkładkę roboczą pod mikroskopem chirurgicznym i użyj kleszczy mikrochirurgicznych, aby tępo oddzielić mięśnie przedtchawicze, aby odsłonić tchawicę. Delikatnie przesuń zamknięte końcówki pary zakrzywionych kleszczy mikrochirurgicznych po tchawicy i za mostek, a następnie ostrożnie otwórz i zamknij zakrzywione kleszcze, aby tępo wyciąć opłucną. Użyj prostych kleszczy mikrochirurgicznych, aby chwycić prawe mięśnie nadobojczykowe i delikatnie pociągnij klatkę piersiową.

Wsuwając dolny koniec szczypiec kostny pod mostek, wykonaj górną częściową sternotomię o długości od trzech do czterech milimetrów, kierując dolną część mini sternotomii lekko w lewo. Za pomocą mikrochirurgicznego uchwytu na igłę przełóż szew polipropylenowy 7-0 z monofilamentu od wewnątrz na zewnątrz drugiej przestrzeni międzyżebrowej po każdej stronie mini sternotomii. Użyj monofilamentowych szwów polipropylenowych 7-0, aby rozłożyć krawędzie mostka z każdej strony.

I użyj zakrzywionych kleszczy, aby delikatnie przesunąć mięśnie przedtchawicze, tłuszcz śródpiersia i grasicę na bok, aby uwidocznić łuk aorty w powiększeniu o niskiej mocy. Aby odsłonić tkankę miękką pod łukiem aorty, włóż kleszczyki do wiązania pod łuk z zamkniętymi końcówkami i delikatnie otwórz kleszcze. Użyj drugich kleszczy do wiązania, aby zrobić tunel w tkance miękkiej pod łukiem aorty, delikatnie otwierając i zamykając kleszcze w tkance miękkiej.

Następnie przełóż kawałek jedwabnej ligatury 6-0 przewleczony przez oczko pomocy do podwiązania pod łukiem aorty, używając kleszczy do wiązania, aby pobrać szew spomiędzy początku prawej tętnicy szyjnej bezimiennej i lewej. Najtrudniejszym etapem zabiegu jest wprowadzenie szwu pod łuk aorty. Zachowanie odpowiedniej staranności podczas tworzenia tunelu pod łukiem ułatwi późniejsze założenie szwów.

Teraz użyj prostych kleszczy, aby umieścić igłę o rozmiarze 27 obok łuku aorty i użyj dwóch kleszczy wiążących, aby ściśle zawiązać szew wokół igły i aorty między prawą nienominalną a lewą wspólną tętnicą szyjną. Po zabezpieczeniu szwu szybko, ale delikatnie wyjmij igłę, aby uzyskać zwężenie o średnicy 0,4 milimetra i powtarzalne poprzeczne zwężenie aorty od 65 do 70%. Po potwierdzeniu hemostazy należy usunąć monofilamentowe szwy polipropylenowe 7-0 służące do rozsuwania krawędzi mostka.

Użyj mikrochirurgicznego uchwytu na igłę, aby przejść przez prosty szew polipropylenowy 6-0 z monofilamentu od zewnątrz do wnętrza lewej drugiej przestrzeni międzyżebrowej i od wewnątrz na zewnątrz prawej drugiej przestrzeni międzyżebrowej. Użyj uchwytu na igłę Crile-Wood, aby połączyć krawędzie mostka za pomocą monofilamentowego szwu polipropylenowego 6-0. I zamknij skórę za pomocą monofilamentowego polipropylenowego szwu biegowego 5-0 w jednej warstwie za pomocą uchwytu na igłę Crile-Wood.

Następnie umieść zwierzę z powrotem w klatce w pozycji leżącej pod ogrzewaniem z monitorowaniem aż do pełnego wyzdrowienia. Skuteczność indukcji przerostu lewej komory można potwierdzić, porównując stosunek masy serca do masy ciała zwierząt pozorowanych z udziałem zwierząt doświadczalnych w trzecim, siódmym, czternastym i 28 dniu po operacji. Stosunek ten znacznie wzrasta u zwierząt z paskami w porównaniu z grupami pozorowanymi od siódmego dnia po operacji, pozostając znacznie wyższy u zwierząt z ograniczeniami do 28 dnia po operacji.

Zaobserwowany wzrost stosunku masy ciała serca do masy ciała jest spowodowany wyłącznie wzrostem stosunku masy ciała lewej komory, ponieważ stosunek masy ciała prawej komory pozostaje porównywalny między poprzecznym zwężeniem aorty a zwierzętami operowanymi pozorowanymi przez cały okres obserwacji. Ponadto ekspresja mRNA peptydu natriuretycznego w mózgu, pozytywnej kontroli przerostu serca w lewej komorze, jest znacznie wyższa u zwierząt z pasmami aortalnymi w porównaniu ze zwierzętami kontrolnymi operowanymi pozorami w dniu 14, co dodatkowo potwierdza skuteczność techniki. Po opanowaniu tej techniki można ją wykonać w 20 minut, jeśli zostanie wykonana prawidłowo.

Podczas próby wykonania tej procedury ważne jest, aby użyć pomocy do podwiązania i kleszczy do wiązania podobnych do tych stosowanych w naszym protokole. Po opracowaniu technika ta zapewniła wiarygodny i uproszczony model do badania mechanizmów związanych z genezą przerostu lewej komory wywołanego przeciążeniem ciśnieniowym. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak wykonać minimalnie inwazyjne poprzeczne zwężenie aorty u myszy ze szczególnym naciskiem na przejście pod łukiem aorty.

Nie zapominaj, że stworzenie przejścia pod łukiem aorty jest najważniejszym etapem zabiegu, a użycie pomocy do podwiązania i kleszczy wiążących znacznie zmniejsza ryzyko urazu łuku.