Obrazowanie konfokalne bariery krew-mózg w wysokiej rozdzielczości: obrazowanie, rekonstrukcja 3D i kwantyfikacja transcytozy

Tutaj prezentujemy protokół oparty na mikroskopii do obrazowania w wysokiej rozdzielczości oraz trójwymiarową rekonstrukcję mysiego układu nerwowo-naczyniowego i bariery krew-mózg za pomocą swobodnie pływających odcinków mózgu. Metoda ta pozwala na wizualizację, analizę i kwantyfikację organelli wewnątrzkomórkowych w BBB.

Ogólnym celem tej metody jest zapewnienie opartego na mikroskopii protokołu obrazowania w wysokiej rozdzielczości i trójwymiarowej rekonstrukcji mysiej bariery krew-mózg. Łączy immunofluorescencję swobodnie pływających odcinków z mikroskopią konfokalną w celu analizy organelli subkomórkowych w komórkach śródbłonka mózgu. Metoda ta uczy się przygotowania swobodnie pływających wycinków mózgu, barwienia immunofluorescencyjnego, akwizycji obrazu i analizy parametrów do mikroskopii wysokorozdzielczej bariery krew-mózg. Główną zaletą tej techniki jest to, że pozwala na ilościowe określenie organelli subkomórkowych w komórkach jednostki nerwowo-naczyniowej. Procedurę zademonstruje Roberto Villase