Ocena odpowiedzi Dictyostelium discoideum na ostrą stymulację mechaniczną

Ogólnym celem tej procedury jest zbadanie aktywności różnych składników wewnątrzkomórkowej sieci transdukcji sygnału po krótkich zaburzeniach mechanicznych. Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie migracji komórek, takie jak to, w jaki sposób komórki wyczuwają i kierunkowo migrują w kierunku różnych sygnałów środowiskowych, w tym bodźców mechanicznych. Główną zaletą tej techniki jest to, że pozwala ona na zbadanie początkowej reakcji na bodziec mechaniczny bez mylącego wpływu ruchliwości lub polaryzacji na odpowiedź.

Po raz pierwszy wpadliśmy na pomysł tej metody, gdy przetestowaliśmy odpowiedź komórek adherentnych na chemoatraktant, który był dostarczany z lekkim pobudzeniem i zauważyliśmy silną odpowiedź komórek stymulowanych kontrolą nośnika. Na początek przygotuj Klebsiella aerogenes, zaszczepiając niewielką liczbę komórek z zamrożonego bulionu do pożywki HL5 bez antybiotyków i inkubuj kulturę przez noc. Wzrost Dictyostelium w obecności bakterii Klebsiella aerogenes zmniejszy liczbę makropinosomów, co poprawi reakcję komórek na bodźce zewnętrzne.