Name: Automatyczne, szybkie, iteracyjne badanie ujemnej geotaksji do analizy zachowania wspinaczy u dorosłych w modelu Drosophila neurodegeneracji (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-12T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 52 s
Description: Poznaj zautomatyzowaną metodę badania ujemnej geotaksji u dorosłych muszek Drosophila w modelu neurodegeneracji. Technika umożliwia precyzyjną analizę deficytów wspinaczkowych związanych z chorobami neurodegeneracyjnymi.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dziękujemy Bloomington Stock Center oraz Vienna Drosophila RNAi Center za szczepy much. Patent na aparat RING należy do Shanghai Advanced Research Institute, Chińskiej Akademii Nauk. Wnioski o oprogramowanie RflyDetection należy kierować do Fu-de Huang (patrz lista autorów). Praca ta została wsparta grantami z Narodowego Programu Badań Podstawowych Chin (Program 973 2013CB945602) oraz Narodowej Fundacji Nauk Przyrodniczych Chin (31270825 i 31171043). Dziękujemy członkom laboratorium Ho za dyskusję i uwagi.

1. Kolekcja much
<ol>
	<li>Utrzymuj muchy na standardowym pokarmie na 25 °C, 70% wilgotności i 12 h/12 h cyklu światło/ciemność.</li>
	<li>Zbieraj dziewicze muchy UAS-Dicer2; DDC-GAL4 pod znieczuleniem dwutlenkiem węgla (CO2).</li>
	<li>Skrzyżuj te dziewicze samice z 2-dniowymi dorosłymi samcami o następujących genotypach: UAS-mCD8GFP (kontrolne), auxR16182 (aux RNAi), auxGFP (aux przelew), i auxR16182; auxGFP (ratunek), przy stosunku samiec: samica 1:2.</li>
	<li>Oddzielnie zbieraj nowo wylęgające się samce i samice w 3 pojemnikach dla każdej grupy na doświadczenie, umieszczając 10 much w każdym zwykłym pojemniku z pokarmem standardowym w 25 °C.</li>
	<li>W zależności od eksperymentu, trzymaj zebrane muchy do 35 dni i używaj ich do zautomatyzowanej analizy RING w dniu 5, 15, 25 i 35.</li>
</ol>
2. Zautomatyzowany test RING
<ol>
	<li>Przenieś 10 zebranych much (unisex) na pojedynczy genotyp do każdego pojemnika, a następnie zabezpiecz pojemnik śrubą. Analizuj muchy kontrolne i muchy z różnymi genotypami razem dla każdego zestawu eksperymentów (do 10 pojemników jednocześnie, 10 much w każdym pojemniku).</li>
	<li>Włącz cyfrową kamerę umieszczoną przed urządzeniem i zacznij nagrywać, gdy wszystkie muchy są załadowane i gotowe.</li>
	<li>Po pozwoleniu na 1 min. na osiedlenie się much w pojemnikach, włącz kontroler krokowy, który steruje sterownikiem krokowym; to napędza mały silniczek elektryczny do sterowania dźwignią, aby kolejno podnosiła się i stukała w urządzenie 4 razy w 2 s. Zobacz Rysunek 1.
	<ol>
		<li>Po stukaniu zauważ, że muchy zaczynają wspinać się po ścianie. Upewnij się, że nagrywanie trwa nadal.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Powtórz synchronizację zgodnie z opisem w punkcie 2.3 w odstępach 60 s na 3 do 5 kolejnych prób.</li>
	<li>Powtórz eksperyment dla much w wieku 5, 15, 25 i 35 dni. Przeprowadź co najmniej 3 niezależne eksperymenty dla każdej grupy, każdy eksperyment z co najmniej 30 zebranymi muchami (3 pojemniki).</li>
</ol>
3. Analiza danych
<ol>
	<li>Zaimportuj nagranie do komputera.</li>
	<li>Zrób zrzut ekranu z nagrania 6 s po stukaniu, dla każdej próby.</li>
	<li>Zaimportuj obraz zrzutu do oprogramowania RflyDetection (zobacz Rysunek 2), używając menu "Plik".</li>
	<li>Ustaw górną i dolną linię bazową pojemnika precyzyjnie, używając ikony linii bazowej na pasku narzędziowym, a następnie używając kursora do zaznaczenia górnej i dolnej linii bazowej na obrazie.</li>
	<li>Wprowadź liczbę much na pojemnik (np. 10 tutaj) do pola "Muchy w prostokącie" i długość pojemnika (np. 14 cm tutaj) w polu "Wysokość rury" w pasku ustawień.
	<ol>
		<li>Zwróć uwagę, że położenia pojedynczych much są wykrywane i oznakowane kropkami na ekranie dla każdego pojemnika. 
		UWAGA: Rysunek 2 wskazuje położenia wszystkich kliknięć przycisków menu.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Zwróć uwagę, że oprogramowanie automatycznie określa odległość wspinaczki dla każdej muchy i wyświetla wartości średnie z 10 much w każdym pojemniku w tabeli na prawej panelu. (Zobacz Rysunek 2)</li>
	<li>Przetwórz liczbę wspinaczy za pomocą oprogramowania statystycznego (np. Prism) do dalszej analizy statystycznej.</li>
	<li>Przedstaw dane jako średnia ± SEM.</li>
	<li>Oblicz wartości p znaczącości (wskazane gwiazdkami, * p < 0,05, ** p < 0,01, *** p < 0,001) przy użyciu jednokierunkowej ANOVA z testem wielokrotnych porównań Bonferroniego.</li>
</ol>

<ol><li>Ali, Y. O., Escala, W., Ruan, K., Zhai, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assaying+locomotor%2C+learning%2C+and+memory+deficits+in+Drosophila+models+of+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Assaying locomotor, learning, and memory deficits in Drosophila models of neurodegeneration.</a> J Vis Exp. (49), (2011).</li>
<li>Nichols, C. D., Becnel, J., Pandey, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+assay+Drosophila+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Methods to assay Drosophila behavior.</a> J Vis Exp. (61), (2012).</li>
<li>Madabattula, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+Analysis+of+Climbing+Defects+in+a+Drosophila+Model+of+Neurodegenerative+Disorders%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Quantitative Analysis of Climbing Defects in a Drosophila Model of Neurodegenerative Disorders.</a> J Vis Exp. (100), e52741(2015).</li>
<li>Podratz, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+automated+climbing+apparatus+to+measure+chemotherapy-induced+neurotoxicity+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Fly+%28Austin%29%22%5BJournal%5D)">An automated climbing apparatus to measure chemotherapy-induced neurotoxicity in Drosophila melanogaster.</a> Fly (Austin). 7 (3), 187-192 (2013).</li>
<li>Gargano, J. W., Martin, I., Bhandari, P., Grotewiel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+iterative+negative+geotaxis+%28RING%29%3A+a+new+method+for+assessing+age-related+locomotor+decline+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Rapid iterative negative geotaxis (RING): a new method for assessing age-related locomotor decline in Drosophila.</a> Exp Gerontol. 40 (5), 386-395 (2005).</li>
<li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+rapid+iterative+negative+geotaxis+assay+and+its+use+in+a+genetic+screen+for+modifiers+of+Abeta%2842%29-induced+locomotor+decline+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Bull%22%5BJournal%5D)">Automated rapid iterative negative geotaxis assay and its use in a genetic screen for modifiers of Abeta(42)-induced locomotor decline in Drosophila.</a> Neurosci Bull. 31 (5), 541-549 (2015).</li>
<li>Shen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SH2B1+is+Involved+in+the+Accumulation+of+Amyloid-beta42+in+Alzheimer%27s+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Alzheimers+Dis%22%5BJournal%5D)">SH2B1 is Involved in the Accumulation of Amyloid-beta42 in Alzheimer's Disease.</a> J Alzheimers Dis. 55 (2), 835-847 (2017).</li>
<li>Song, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxilin+Underlies+Progressive+Locomotor+Deficits+and+Dopaminergic+Neuron+Loss+in+a+Drosophila+Model+of+Parkinson%27s+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Auxilin Underlies Progressive Locomotor Deficits and Dopaminergic Neuron Loss in a Drosophila Model of Parkinson's Disease.</a> Cell Rep. 18 (5), 1132-1143 (2017).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Downregulation+of+RBO-PI4KIII%CE%B1+Facilitates+A%CE%B242+Secretion+and+Ameliorates+Neural+Deficits+in+A%CE%B242-Expressing+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Downregulation of RBO-PI4KIIIα Facilitates Aβ42 Secretion and Ameliorates Neural Deficits in Aβ42-Expressing Drosophila.</a> J Neurosci. 37 (19), 4928-4941 (2017).</li>
<li>Riemensperger, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+dopamine+pathway+underlies+progressive+locomotor+deficits+in+a+Drosophila+model+of+Parkinson+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">A single dopamine pathway underlies progressive locomotor deficits in a Drosophila model of Parkinson disease.</a> Cell Rep. 5 (4), 952-960 (2013).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Opisany tutaj zautomatyzowany test RING umożliwia wysokowydajną analizę zachowania gelotaktycznego muchy na dużą skalę dla setek much jednocześnie. Wcześniej istniejące strategie analizy wspinaczki dorosłych much obejmowały obserwacje pojedynczej muchy w pojedynczej probówce, a pozycja muchy była manualnie wykrywana gołym okiem. Ten dość żmudny proces mógł czasami powodować niewłaściwe odczytywanie lub błędne interpretowanie danych, a także pracochłonną pracę. Nasz zautomatyzowany test RING rozpoczyna się od prostego kli...

A variety of protocols and methods have been developed for analyzing Drosophila adult climbing behavior. Rather laborious, the traditional analysis mostly involves putting a single fly into an individual vial and uses a manual force to tap flies down for synchronization1,2,3,4. It is tedious and time consuming, unsuitable for large high-throughput studies, and has potential variations of the manual force used to tap down the flies as well as other limitations. To improve the assay, a Rapid Iterative Negative Geotaxis (RING) assay was developed which allows high-throughput analysis over numerous flies at the same time5. However, the assay still requires a manually exerting force to synchronize fly action. Our version of the RING assay, revised upon the previous assay, includes a metal base hosting multiple fly-containing vials automatically controlled by an electric motor to drive fly synchronization6. Upon recording, the fly climbing immediately after synchronization is recorded then analyzed using a self-designed software. Our automated RING assay has eliminated the tedious and labor-intensive process in collecting data from a single fly, one at a time, and enabled the data acquisition process to be more efficient. In addition, the automated RING assay has been employed in a number of studies to elucidate the mechanism underlying Alzheimer's and Parkinson's Disease, validating the approach with high efficiency7,8,9.
In this article, we demonstrate the automated RING assay using the DDC-Gal4 driven RNAi flies. DDC-Gal4 is a Gal4 line specifically expressing in dopaminergic (DA) and serotonergic neurons, thus representing a great tool for analyzing the target gene effects associated with locomotor deficits accompanying neurodegeneration10. In addition, we incorporate UAS-Dicer2, a fly line that enhances RNAi efficiency, to generate the UAS-Dicer2; DDC-Gal4 tool line. The RNAi flies we choose to use is the auxilin (aux) RNAi v16182 (auxR16182), a gene that we have previously identified to exhibit an effect on fly locomotor activity8. auxGFP flies are also prepared for analyzing effects upon aux overexpression. We will show how to use the automated RING assay to measure fly negative geotaxis, present the results, and discuss any implications acquired from the results.

<table><tbody><tr><td>Forma Environmental Chamber</td><td>Thermo</td><td>3949</td><td></td></tr><tr><td>Carbon dioxide cylinders</td><td>FuLian GAS Technology</td><td>GB/T6052</td><td></td></tr><tr><td>HDR-Camcorder</td><td>SONY</td><td>HDR-CX220E</td><td></td></tr><tr><td>Binocular stereomicroscope</td><td>Xin Zhen</td><td>SMZ-168BL</td><td></td></tr><tr><td>Electronic scales</td><td>MinQiao</td><td>SL1002N</td><td></td></tr><tr><td>Refrigerator</td><td>Haier</td><td>SC-350</td><td></td></tr><tr><td>Agar-agar powder</td><td>Sinopharm</td><td>10000561</td><td></td></tr><tr><td>Glucose</td><td>Sinopharm</td><td>10010518</td><td></td></tr><tr><td>Corn meal</td><td>Sinopharm</td><td>5464654</td><td></td></tr><tr><td>Brown sugar</td><td>LiuCaiYuan</td><td>45467936</td><td></td></tr><tr><td>Instant dry yeast</td><td>AB MAURI</td><td>20886</td><td></td></tr><tr><td>AuxR16182</td><td>VDRC</td><td>7187</td><td></td></tr><tr><td>UAS-Dicer2</td><td>Bloomington</td><td>24650</td><td></td></tr><tr><td>UAS-mCD8GFP</td><td>Bloomington</td><td>32185</td><td></td></tr><tr><td>DDC-Gal4</td><td></td><td></td><td>Prezent od Fude Huang</td></tr><tr><td>AuxGFP</td><td></td><td></td><td>Prezent od Henry Chang</td></tr></tbody></table>

automatyczne, szybkie, iteracyjne badanie ujemnej geotaksji do analizy zachowania wspinaczy u dorosłych w modelu drosophila neurodegeneracji

An Automated Rapid Iterative Negative Geotaxis Assay for Analyzing Adult Climbing Behavior in a Drosophila Model of Neurodegeneration

Choroby neurodegeneracyjne są często związane z postępującą utratą zdolności ruchowych, skróceniem życia i neurodegeneracją zależną od wieku. Aby zrozumieć mechanizm tych zjawisk komórkowych i ich przyczynowo-skutkowe relacje, Drosophila melanogaster, dzięki swoim wyrafinowanym narzędziom genetycznym i różnorodnym cechom behawioralnym, jest wykorzystywana jako model chorobowy do oceny fenotypów neurodegeneracyjnych. Opisujemy tu metodę wysoko-przepustową do analizy zachowania ujemnej geotaksji u dorosłych muchówek Drosophila, jako wskaźnik możliwych defektów ruchowych związanych z neurodegeneracją. Zbudowano i opracowano zautomatyzowaną maszynę do synchronizacji much za pomocą początkowego impulsu elektrycznego, umożliwiając później rejestrowanie zachowania ujemnej geotaksji w ciągu sekund do kilku minut. Zdjęcia z nagranego cyfrowo wideo są następnie przetwarzane za pomocą samodzielnie zaprojektowanego oprogramowania RflyDetection do manipulacji danymi statystycznymi. W odróżnieniu od ręcznie kontrolowanego testu ujemnej geotaksji opartego na pojedynczej muszce, ten precyzyjny, szybki i wysoko-przepustowy protokół umożliwia pozyskiwanie danych z ponad setek much jednocześnie, zapewniając wydajne podejście do poszerzenia naszego zrozumienia dla mechanizmu leżącego u podstaw deficytów ruchowych związanych z neurodegeneracją.

Niniejszy artykuł demonstruje zastosowanie zautomatyzowanego testu RING w ocenie zachowania ujemnej geotaksji u much. W przeciwieństwie do poprzedniego testu RING, nasz test obejmuje zautomatyzowany aparat, który dostarcza siłę elektryczną do synchronizacji działania much i analizuje jednocześnie nawet setki much (Rycina 1). Analiza much Dicer2; DDC>auxR16182 wykazała wiek-zależny spadek w odległości wspinaczki w 6-sekundowym przedziale cz...

Ten krok po kroku protokół analizuje zachowanie Drosophila w ujemnej geotaksji za pomocą zautomatyzowanego systemu wielocylindrowego, który pomieści setki much i synchronizuje ich działania za pomocą silnika elektrycznego. Po synchronizacji zachowanie ujemnej geotaksji much jest badane, nagrywane cyfrowo i analizowane za pomocą oprogramowania RflyDetection.

Automatyczne, szybkie, iteracyjne badanie ujemnej geotaksji do analizy zachowania wspinaczy u dorosłych w modelu Drosophila neurodegeneracji

Neurodegenerative diseases are frequently associated with a progressive loss of movement ability, reduced life span, and age-dependent neurodegeneration. ...

Głównym celem tego zautomatyzowanego szybkiego iteracyjnego testu negatywnej geotaksji jest analiza niedoborów wspinaczkowych dorosłych Drosophila związanych z neurodegeneracją. Ta metoda może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie neurologii, takie jak mechanizm niedoborów lokomocyjnych związanych z neurodegeneracją. Główną zaletą tej techniki jest to, że aktywność wspinaczkowa much może być analizowana w sposób zautomatyzowany i o wysokiej precyzji.Zastosowanie tej techniki rozciąga się na terapię i diagnozę neurodegeneracji, ponieważ choroby neurodegeneracyjne są często związane z postępującą utratą zdolności ruchowych i zmniejszonym czasem życia oraz neurodegeneracją zależną od wieku. Po raz pierwszy mieliśmy pomysł na tę metodę. Chcieliśmy mierzyć aktywność lokomotywną dorosłych Drosophila w bardziej dokładny sposób.Aby przeprowadzić kolekcjonowanie much, należy początkowo utrzymywać je na standardowym pokarmie na 25 stopniach Celsjusza, 70% wilgotności i w cyklu 12 godzin światła, 12 godzin ciemności. Zbieraj dziewicze samice UAS-Dicer2 DDC-GAL4 pod znieczuleniem dwutlenkiem węgla. Skojarz dziewice z dwu dniowymi dorosłymi samcami o następujących genotypach, z proporcją samiec/samica jedno-do-dwóch.Oddzielnie zbieraj nowo wyklutych samców i samice w trzy pojemniki na każdą grupę na eksperyment, umieszczając 10 much w każdym zwykłym pojemniku na muchy z standardowym pokarmem. Następnie ustaw pojemniki na 25 stopni Celsjusza. Aby przeprowadzić zautomatyzowany test RING, przenieś 10 zebranych much każdego genotypu do każdego pojemnika.Następnie zabezpiecz pojemnik za pomocą śruby. Analizuj muchy kontrolne i muchy o różnych genotypach razem dla każdego zestawu eksperymentów. Włącz cyfrową kamerę umieszczoną przed urządzeniem i gdy muchy są załadowane i gotowe, zacznij nagrywać.Kamera powinna być umieszczona poziomo, a kamerę w odpowiedniej odległości od urządzenia RING, aby uchwycić pozycje we wszystkich muchach w stosunkowo dokładnych miejscach. Po pozwoleniu jednej minucie na osiedlenie się much w pojemnikach, włącz kontroler krokowy, który steruje sterownikiem krokowym. To napędza mały silnik elektryczny do sterowania podłączonym dźwigniem, tak aby kolejno wspinały się i stukały w urządzenie cztery razy w ciągu dwóch sekund.Po stuknięciu urządzenia, zauważ, że muchy zaczynają wspinać się po ścianie. Przy nadal włączonym nagrywaniu, powtórz synchronizację tak jak właśnie pokazano, w 60-sekundowych odstępach przez trzy do pięciu kolejnych prób. Powtórz eksperyment dla 5, 15, 25 i 35-dniowych much.Przeprowadź co najmniej trzy niezależne eksperymenty dla każdej grupy dla każdego eksperymentu, z co najmniej 30 zebranymi muchami lub trzema pojemnikami. Aby analizować dane, zaimportuj nagranie wideo do komputera. Dla każdej próby, weź zrzut ekranu z wideo sześć sekund po stuknięciu.W oprogramowaniu R-fly detection, użyj menu pliku, aby zaimportować obraz zrzutu ekranu. Następnie, używając ikony linii bazowej na pasku narzędziowym, precyzyjnie ustaw górną i dolną linię bazową pojemnika, a następnie użyj kursora, aby zaznaczyć górną i dolną linie bazowe na obrazie. W pasku Ustawienia, w polu Flies in Rect, wprowadź liczbę much na pojemnik, a w polu Tube Height, wprowadź długość pojemnika.Indywidualne pozycje much są wykrywane i oznaczane punktami na ekranie dla każdego pojemnika. Zauważ, że w tabeli na prawej panelu, oprogramowanie automatycznie określa odległość wspinaczki dla każdej muchy i wyświetla wartości średnie z 10 much w każdym pojemniku. Prezentuj dane jako średnia plus minus SEM.Oblicz wartości P istotności przy użyciu jednoczynnikowej analizy wariancji z testem wielokrotnego porównania Bonferroniego. Analiza much Dicer2 przy użyciu zautomatyzowanego testu RING przedstawionego w tym filmie wykazała wiek zależny spadek odległości wspinaczki w sześciosekundowym przedziale czasowym zarówno dla samców, jak i samic, sugerując, że ekspresja aux w dopaminergicznych lub DA neuronach jest kluczowa dla aktywności lokomocyjnej much. Zdolność wspinaczkowa nie wydaje się być wpłynięta na nadmierną ekspresję auxGFP w neuronach DA i współwystępowanie auxR i auxGFP w neuronach DA ratowanych od fenotypu RNAi.Po opanowaniu, można to wykonać w dwóch do trzech godzin, jeśli jest wykonywane poprawnie. Posiadanie tego rozwoju jest teraz sposobem dla naukowców w dziedzinie neurologii na badanie neurodegeneracji w Drosophila melanogaster. Nie zapominaj, że praca z elektrycznym urządzeniem RING może być niezwykle niebezpieczna, a każde potwierdzenie powinno być mocno zaciśnięte i starannie sprawdzone przed przeprowadzeniem tej procedury.

an-automated-rapid-iterative-negative-geotaxis-assay-for-analyzing

Research

JoVE Journal

Behavior

Zachowanie

Testy behawioralne służące do pomiaru funkcji lokomocyjnych, zdolności uczenia się i pamięci u Drosophila.

Ocena deficytów motorycznych, uczenia się i pamięci w modelach neurodegeneracji u Drosophila

Drosophila melanogaster to genetycznie i behawioralnie podatny system modelowy, który od ponad wieku jest wykorzystywany do zrozumienia molekularnych i komórkowych podstaw wielu ważnych procesów biologicznych 1. Drosophila została szeroko wykorzystana w celu uzyskania wglądu w genetyczne podstawy zachowania much.

Metody oceny zachowania Drosophila

Ten film opisuje prostą metodę ilościowego oznaczania lokomocji muchy i pokazuje przeprowadzony test wspinaczki. Test wspinaczki muchowej jest ogólnym testem funkcji motorycznych, który opiera się na negatywnej odpowiedzi geotaksji.

Test wspinaczki muchowej: metoda testowania ogólnej lokomocji u Drosophila melanogaster

Tu opisujemy dwa testy, które zostały opracowane w celu badania związanej z wiekiem neurodegeneracji neuronów dopaminergicznych (DA) w Drosophila: test ujemnej geotaksji indukowanej wspinaczkami/skurczem, który pozwala badać efekty funkcjonalne zwyrodnienia neuronów DA oraz immunobarwienie na hydroksylazę tyrozyny, które jest używane do identyfikacji i liczenia neuronów DA w całych preparatach mózgu.

Ocena fenotypow neurodegeneracyjnych w Drosophila neuronach dopaminergicznych poprzez testy wspinaczkowe i immunobarwienie całego mózgu

Drosophila melanogaster są przydatne w badaniu manipulacji genetycznych lub środowiskowych, które wpływają na zachowania takie jak spontaniczna aktywność lokomotoryczna. Tutaj opisujemy protokół, który wykorzystuje monitory z wiązkami podczerwieni i oprogramowanie do analizy danych do ilościowego określania spontanicznej aktywności lokomotorycznej.

Oznaczanie spontanicznej aktywności lokomotorycznej u Drosophila melanogaster

Przedstawiamy zoptymalizowany, niedrogi i wiarygodny test negatywnej geotaksji u Drosophila melanogaster jako model zaburzeń neurodegeneracyjnych. Będąc bardziej wrażliwym na łagodne wady narządu ruchu, test ten pomoże w badaniach przesiewowych pod kątem potencjalnych interakcji genetycznych i celów leków.

Analiza ilościowa wad wspinaczkowych w modelu Drosophila zaburzeń neurodegeneracyjnych

Test wyspowy jest stosunkowo nowym, opłacalnym testem, który może być użyty do oceny podstawowego zachowania lokomotorycznego Drosophila melanogaster. W tym manuskrypcie opisano algorytmy automatycznego przetwarzania danych i obiektywnej kwantyfikacji danych z testów wyspowych, dzięki czemu test ten jest czułym, wysokowydajnym odczytem dla dużych badań genetycznych lub farmakologicznych.

Wysokoprzepustowa analiza zachowań lokomotorycznych w teście na wyspie Drosophila

Prezentujemy protokół wykorzystujący zaawansowane podejście genetyczne do badań przesiewowych w kierunku mutantów wykazujących neurodegenerację u Drosophila melanogaster. Obejmuje on test wspinaczkowy, analizę histologiczną, mapowanie genów i sekwencjonowanie DNA, aby ostatecznie zidentyfikować nowe geny związane z procesem neuroprotekcji.

Genetyczne badania przesiewowe in vivo w celu identyfikacji nowych genów neuroprotekcyjnych u Drosophila melanogaster

Obecny protokół ocenia aktywność lokomotoryczną Drosophila poprzez śledzenie i analizowanie ruchu much na ręcznie wykonanej arenie za pomocą oprogramowania typu open source Fiji, kompatybilnego z wtyczkami do segmentacji pikseli każdej klatki na podstawie nagrania wideo w wysokiej rozdzielczości w celu obliczenia parametrów prędkości, odległości itp.

Prosta technika oznaczania aktywności lokomotorycznej u Drosophila

Protokół przedstawia wysokoprzepustową, opłacalną metodę oceny neurotoksyczności u muszki owocowej poprzez kwantyfikację dysfunkcji lokomotorycznej jako alternatywę dla tradycyjnych modeli ssaków. Ma na celu ocenę neurotoksycznego wpływu związków farmaceutycznych, czynników środowiskowych lub modyfikacji genetycznych przy użyciu czułego, powtarzalnego i etycznie korzystnego modelu.

Analiza behawioralna dysfunkcji narządu ruchu u Drosophila melanogaster jako odczyt neurotoksyczności

Poznaj zautomatyzowaną metodę badania ujemnej geotaksji u dorosłych muszek Drosophila w modelu neurodegeneracji. Technika umożliwia precyzyjną analizę deficytów wspinaczkowych związanych z chorobami neurodegeneracyjnymi.

Automatyczne, szybkie, iteracyjne badanie ujemnej geotaksji do analizy zachowania wspinaczy u dorosłych w modelu Drosophila neurodegeneracji (Wideo) | JoVE Journal

Automatyczne, szybkie, iteracyjne badanie ujemnej geotaksji do analizy zachowania wspinaczy u dorosłych w modelu Drosophila neurodegeneracji

Przeglądaj więcej filmów