Name: Izolacja i hodowla progenitorów nerwowych, a następnie immunoprecypitacja chromatyny znacznika dimetylacji histonu 3 lizyny 79 (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 9 s
Description: Naucz się izolować i hodować progenitorowe komórki nerwowe z mózgu myszy, a następnie wykonywać ChIP do analizy modyfikacji epigenetycznych H3K79me2. Ta metoda pozwala badać rozwój mózgu.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dziękujemy Henriette Bertemes za pomoc w ustanowieniu protokołu uprawy CGN w laboratorium. Ta praca metodyczna była wspierana przez finansowaną przez DFG CRC992 Medical Epigenetics poprzez finansowanie dla TV. Autorzy dziękują za wsparcie zespołu z Freiburg Galaxy: Pavankumar Videm, Björn Grüning i prof. Rolf Backofen, Bioinformatyk, Uniwersytet we Freiburgu, Niemcy, ufundowane przez Collaborative Research Centre 992 Medical Epigenetics (grant DFG SFB 992/1 2012) oraz niemieckiego Federalnego Ministerstwa Edukacji i Badań (grant BMBF 031 A538A RBC (de. NBI)).

<ol><li>Molyneaux, B. J., Arlotta, P., Menezes, J. R. L., Macklis, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+subtype+specification+in+the+cerebral+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neuronal subtype specification in the cerebral cortex.</a> Nat. Rev. Neurosci. 8, 427-437 (2007).</li>
<li>Kandel, E. R., Squire, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroscience%3A+breaking+down+scientific+barriers+to+the+study+of+brain+and+mind%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Neuroscience: breaking down scientific barriers to the study of brain and mind.</a> Science. 290, 1113-1120 (2000).</li>
<li>Götz, M., Sommer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortical+development%3A+the+art+of+generating+cell+diversity%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Camb.+Engl%22%5BJournal%5D)">Cortical development: the art of generating cell diversity.</a> Dev. Camb. Engl. 132, 3327(2005).</li>
<li>Hirabayashi, Y., Gotoh, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetic+control+of+neural+precursor+cell+fate+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Epigenetic control of neural precursor cell fate during development.</a> Nat. Rev. Neurosci. 11, 377-388 (2010).</li>
<li>Davis, A. A., Temple, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+self-renewing+multipotential+stem+cell+in+embryonic+rat+cerebral+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A self-renewing multipotential stem cell in embryonic rat cerebral cortex.</a> Nature. 372, 263-266 (1994).</li>
<li>Sauvageot, C. M., Stiles, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+controlling+cortical+gliogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms controlling cortical gliogenesis.</a> Curr. Opin. Neurobiol. 12, 244-249 (2002).</li>
<li>McConnell, S. K., Kaznowski, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+cycle+dependence+of+laminar+determination+in+developing+neocortex%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Cell cycle dependence of laminar determination in developing neocortex.</a> Science. 254, 282-285 (1991).</li>
<li>Desai, A. R., McConnell, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+restriction+in+fate+potential+by+neural+progenitors+during+cerebral+cortical+development%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Camb.+Engl%22%5BJournal%5D)">Progressive restriction in fate potential by neural progenitors during cerebral cortical development.</a> Dev. Camb. Engl. 127, 2863-2872 (2000).</li>
<li>Glickstein, M., Strata, P., Voogd, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebellum%3A+history%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Cerebellum: history.</a> Neuroscience. 162, 549-559 (2009).</li>
<li>Marzban, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+commitment+in+the+developing+cerebellum%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Cell.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Cellular commitment in the developing cerebellum.</a> Front. Cell. Neurosci. 8, (2015).</li>
<li>Azevedo, F. A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Equal+numbers+of+neuronal+and+nonneuronal+cells+make+the+human+brain+an+isometrically+scaled-up+primate+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Equal numbers of neuronal and nonneuronal cells make the human brain an isometrically scaled-up primate brain.</a> J. Comp. Neurol. 513, 532-541 (2009).</li>
<li>Machold, R., Fishell, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Math1+is+expressed+in+temporally+discrete+pools+of+cerebellar+rhombic-lip+neural+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Math1 is expressed in temporally discrete pools of cerebellar rhombic-lip neural progenitors.</a> Neuron. 48, 17-24 (2005).</li>
<li>Luger, K., Mäder, A. W., Richmond, R. K., Sargent, D. F., Richmond, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crystal+structure+of+the+nucleosome+core+particle+at+2.8+A+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Crystal structure of the nucleosome core particle at 2.8 A resolution.</a> Nature. 389, 251-260 (1997).</li>
<li>Kouzarides, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromatin+modifications+and+their+function%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Chromatin modifications and their function.</a> Cell. 128, 693-705 (2007).</li>
<li>Zhang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histone+modification+mapping+in+human+brain+reveals+aberrant+expression+of+histone+H3+lysine+79+dimethylation+in+neural+tube+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Dis%22%5BJournal%5D)">Histone modification mapping in human brain reveals aberrant expression of histone H3 lysine 79 dimethylation in neural tube defects.</a> Neurobiol. Dis. 54, 404-413 (2013).</li>
<li>Zhang, Y., Reinberg, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcription+regulation+by+histone+methylation%3A+interplay+between+different+covalent+modifications+of+the+core+histone+tails%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Transcription regulation by histone methylation: interplay between different covalent modifications of the core histone tails.</a> Genes Dev. 15, 2343-2360 (2001).</li>
<li>Sanders, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methylation+of+histone+H4+lysine+20+controls+recruitment+of+Crb2+to+sites+of+DNA+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Methylation of histone H4 lysine 20 controls recruitment of Crb2 to sites of DNA damage.</a> Cell. 119, 603-614 (2004).</li>
<li>Martin, C., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+diverse+functions+of+histone+lysine+methylation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Mol.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The diverse functions of histone lysine methylation.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 6, 838-849 (2005).</li>
<li>Greer, E. L., Shi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histone+methylation%3A+a+dynamic+mark+in+health%2C+disease+and+inheritance%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Genet%22%5BJournal%5D)">Histone methylation: a dynamic mark in health, disease and inheritance.</a> Nat. Rev. Genet. 13, 343-357 (2012).</li>
<li>Ng, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysine+methylation+within+the+globular+domain+of+histone+H3+by+Dot1+is+important+for+telomeric+silencing+and+Sir+protein+association%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Lysine methylation within the globular domain of histone H3 by Dot1 is important for telomeric silencing and Sir protein association.</a> Genes Dev. 16, 1518-1527 (2002).</li>
<li>Kebede, A. F., Schneider, R., Daujat, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+types+and+sites+of+histone+modifications+emerge+as+players+in+the+transcriptional+regulation+contest%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">Novel types and sites of histone modifications emerge as players in the transcriptional regulation contest.</a> FEBS J. 282, 1658-1674 (2015).</li>
<li>Roidl, D., Hacker, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histone+methylation+during+neural+development%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Histone methylation during neural development.</a> Cell Tissue Res. 356, 539-552 (2014).</li>
<li>Mersfelder, E. L., Parthun, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+tale+beyond+the+tail%3A+histone+core+domain+modifications+and+the+regulation+of+chromatin+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">The tale beyond the tail: histone core domain modifications and the regulation of chromatin structure.</a> Nucleic Acids Res. 34, 2653-2662 (2006).</li>
<li>van Leeuwen, F., Gafken, P. R., Gottschling, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dot1p+Modulates+Silencing+in+Yeast+by+Methylation+of+the+Nucleosome+Core%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Dot1p Modulates Silencing in Yeast by Methylation of the Nucleosome Core.</a> Cell. 109, 745-756 (2002).</li>
<li>Jones, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+histone+H3K79+methyltransferase+Dot1L+is+essential+for+mammalian+development+and+heterochromatin+structure%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">The histone H3K79 methyltransferase Dot1L is essential for mammalian development and heterochromatin structure.</a> PLoS Genet. 4, e1000190(2008).</li>
<li>Woo Park, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RE-IIBP+Methylates+H3K79+and+Induces+MEIS1-mediated+Apoptosis+via+H2BK120+Ubiquitination+by+RNF20%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Rep%22%5BJournal%5D)">RE-IIBP Methylates H3K79 and Induces MEIS1-mediated Apoptosis via H2BK120 Ubiquitination by RNF20.</a> Sci. Rep. 5, 12485(2015).</li>
<li>Vlaming, H., van Leeuwen, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+upstreams+and+downstreams+of+H3K79+methylation+by+DOT1L%5BTitle%5D)+AND+%22Chromosoma%22%5BJournal%5D)">The upstreams and downstreams of H3K79 methylation by DOT1L.</a> Chromosoma. , (2016).</li>
<li>Jones, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+histone+H3K79+methyltransferase+Dot1L+is+essential+for+mammalian+development+and+heterochromatin+structure%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">The histone H3K79 methyltransferase Dot1L is essential for mammalian development and heterochromatin structure.</a> PLoS Genet. 4, e1000190(2008).</li>
<li>Feng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+mammalian+erythropoiesis+requires+the+Dot1L+methyltransferase%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Early mammalian erythropoiesis requires the Dot1L methyltransferase.</a> Blood. 116, 4483-4491 (2010).</li>
<li>Cattaneo, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DOT1L-mediated+H3K79me2+modification+critically+regulates+gene+expression+during+cardiomyocyte+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">DOT1L-mediated H3K79me2 modification critically regulates gene expression during cardiomyocyte differentiation.</a> Cell Death Differ. 23, 555-564 (2016).</li>
<li>Zhang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histone+modification+mapping+in+human+brain+reveals+aberrant+expression+of+histone+H3+lysine+79+dimethylation+in+neural+tube+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Dis%22%5BJournal%5D)">Histone modification mapping in human brain reveals aberrant expression of histone H3 lysine 79 dimethylation in neural tube defects.</a> Neurobiol. Dis. 54, 404-413 (2013).</li>
<li>Büttner, N., Johnsen, S. A., Kügler, S., Vogel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Af9%2FMllt3+interferes+with+Tbr1+expression+through+epigenetic+modification+of+histone+H3K79+during+development+of+the+cerebral+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Af9/Mllt3 interferes with Tbr1 expression through epigenetic modification of histone H3K79 during development of the cerebral cortex.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 107, 7042-7047 (2010).</li>
<li>Roidl, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DOT1L+Activity+Promotes+Proliferation+and+Protects+Cortical+Neural+Stem+Cells+from+Activation+of+ATF4-DDIT3-Mediated+ER+Stress+In+Vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dayt.+Ohio%22%5BJournal%5D)">DOT1L Activity Promotes Proliferation and Protects Cortical Neural Stem Cells from Activation of ATF4-DDIT3-Mediated ER Stress In Vitro.</a> Stem Cells Dayt. Ohio. 34, 233-245 (2016).</li>
<li>Robinson, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrative+genomics+viewer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Integrative genomics viewer.</a> Nat. Biotechnol. 29, 24-26 (2011).</li>
<li>Langmead, B., Salzberg, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fast+gapped-read+alignment+with+Bowtie+2%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">Fast gapped-read alignment with Bowtie 2.</a> Nat. Methods. 9, 357-359 (2012).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Model-based+Analysis+of+ChIP-Seq+%28MACS%29%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">Model-based Analysis of ChIP-Seq (MACS).</a> Genome Biol. 9, R137(2008).</li>
<li>Ramírez, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((deepTools2%3A+a+next+generation+web+server+for+deep-sequencing+data+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">deepTools2: a next generation web server for deep-sequencing data analysis.</a> Nucleic Acids Res. 44, W160-W165 (2016).</li>
<li>Roidl, D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRoidl%2C+D+%22Histone+modifications+during+cerebral+cortex+development%22">Histone modifications during cerebral cortex development</a>. , (2015).</li>
<li>Turner, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ChIP+with+Native+Chromatin%3A+Advantages+and+Problems+Relative+to+Methods+Using+Cross-Linked+Material%5BTitle%5D)+AND+%22Mapping+Protein%2FDNA+Interactions+by+Cross-Linking%22%5BJournal%5D)">ChIP with Native Chromatin: Advantages and Problems Relative to Methods Using Cross-Linked Material.</a> Mapping Protein/DNA Interactions by Cross-Linking. , Institut national de la santé et de la recherche médicale. (2001).</li>
<li>Dincman, T. A., Beare, J. E., Ohri, S. S., Whittemore, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+cortical+mouse+oligodendrocyte+precursor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Isolation of cortical mouse oligodendrocyte precursor cells.</a> J. Neurosci. Methods. 209, 219-226 (2012).</li>
</ol>

Autorzy oświadczają, że nie mają konkurencyjnych interesów finansowych

Istnieją dwa główne sposoby przeprowadzania immunoprecypitacji chromatyny w celu wykrycia genomowego zajętości modyfikacji histonów, czynników transkrypcyjnych, czytników kodów histonów, programów zapisujących lub gumek. Jedną z nich jest natywna metoda ChIP wykorzystująca trawioną nukleazą, natywną chromatynę do immunoprecypitacji, a druga to prezentowana metoda wykorzystująca utrwaloną, ścinaną chromatynę utrwaloną PFA, w której nukleosomy i inne białka przyłączone do DNA są kowalencyjnie związane z DNA<sup class="xref...

Funkcje sensoryczne, motoryczne i poznawcze mózgu są bardzo złożone i podatne na zmiany fizyczne i środowiskowe. Mózg składa się z trzech głównych części: tylnej, środkowej i przedniej części mózgu, które są głęboko połączone. W obrębie przodomózgowia kresomózgowie można podzielić na kresomózgowie grzbietowe (DT) i kresomózgowie brzuszne (VT). DT myszy składa się z sześciu warstw korowych, które są utworzone między E11.5 a E18.5 w sposób "na lewą stronę"1. VT obejmuje rozwijające się wypukłości zwojowe, które później tworzą zwoje podstawy2,3. W ośrodkowym układzie nerwowym ssaków można sklasyfikować kilka typów komórek, takich jak neurony, astrocyty lub oligodendrocyty4, które rozwijają się w sposób czasowo-przestrzenny5. Po pierwsze, neuronalne komórki progenitorowe (NPC) dają początek różnym rodzajom neuronów, interneuronów w VT i neuronów projekcyjnych w DT, a następnie komórkom glejowym (np. astrocyty6). Podczas rozwoju kory mózgowej najpierw tworzy się najbardziej powierzchowna warstwa (warstwa I), która zawiera komórki Cajal-Retzius. Następnie, między E12.5 a E14.5, NPC generują głębsze warstwy neuronów (VI, V), podczas gdy między 14,5 a 16,5 progenitorami powstają neurony górnej warstwy (IV-II) 7,8. Tożsamość neuronalna jest określana przez różne czasowo-przestrzenne programy transkrypcyjne indukowane morfogenem oraz dodatkowo przez programy epigenetyczne2.
Móżdżek, który jest zaangażowany w koordynację ruchową, znajduje się w tyłomózgowiu i rozwija się między E10 a mniej więcej P20 u myszy9. Zawiera korę móżdżku i jądra móżdżku10. Dorosła kora móżdżku składa się z trzech warstw, najbardziej zewnętrznej warstwy molekularnej, warstwy komórek Purkinjego i najbardziej wewnętrznej warstwy ziarnistej zawierającej ziarniste neurony10. Komórki ziarniste móżdżku są najmniejszymi neuronami i reprezentują około 80% wszystkich neuronów w mózgu kręgowców11. Rozwijają się z prekursorów znajdujących się w zewnętrznej strefie rozrodczej i migrują przez warstwę komórek Purkinjego do miejsca docelowego12. Podobnie jak w kresomózgowiu, rozwój móżdżku jest regulowany przez kilka ważnych morfogenów, które mają określone funkcje zależne od czasu i przestrzeni oraz inicjują określone programy transkrypcyjne10.
Rozwój warstw korowych i móżdżkowych jest kontrolowany przez transkrypcyjną ekspresję określonych morfogenów, a tym samym przez stan chromatyny DNA. W uproszczonym ujęciu stany chromatyny można podzielić na euchromatynę jako aktywną transkrypcyjnie i heterochromatynę jako obszary ciche transkrypcyjnie. Nukleosom jako podstawowa jednostka chromatyny zawiera dwie kopie każdego histonu rdzeniowego H2A, H2B, H3 i H4, otoczone 147 parami zasad klasy DNA13. Histony są silnie modyfikowane potranslacyjnie przez metylację, acetylację, fosforylację, ubikwitynację, sumoilację, ADP-rybozylację, deaminację i izomeryzację proliny14,15. Metylacja lizyny histonów jest uważana za najbardziej stabilną modyfikację histonów, która kontroluje transkrypcję, replikację, rekombinację16, odpowiedź na uszkodzenie DNA17 i imprinting genomowy18. Lizyny mogą być mono-, di- lub trimetylowane19 i pojawiają się nie tylko na dostępnych ogonach histonów, ale także w domenie globularnej histonów20. Specyficzne metylacje w H3K4 i H3K36 są głównie związane z euchromatyną, specyficzne metylacje w H3K9, H3K27 lub H4K20 występują głównie w regionach heterochromatycznych, chociaż wszystkie reszty znajdują się w ogonie histonowym14,19,21. Metylacja H3K79 znajduje się w domenie globularnej histonów i jest związana z aktywnością transkrypcyjną, ale także z obojętnymi transkrypcyjnie regionami genomu22. Modyfikacja jest ewolucyjnie zachowana, ponieważ zaobserwowano ją u drożdży, grasicy cielęcej, kurczaka i human23. H3K79 mono, di i trimetylacja (H3K79me1, me2, me3) są katalizowane przez metylotransferazy histonowe DOT1L24,25 i Nuclear SET Domain-Containing Protein 2 (Nsd2)26. DOT1L bierze udział w proliferacji, naprawie DNA i przeprogramowaniu komórek27. Utrata Dot1l u myszy prowadzi do śmierci prenatalnej w okolicach etapu rozwojowego E10.528,29. Podczas rozwoju serca i różnicowania miokardiocytów, DOT1L jest niezbędny do regulacji ekspresji genów30. W ośrodkowym układzie nerwowym funkcja DOT1L może być zaangażowana w rozwój cewy nerwowej31, bierze udział w tłumieniu ekspresji Tbr1 podczas rozwoju przodomózgowia32, i może działać w regulacji genów odpowiedzi na stres ER33. Zależne od kontekstu aktywujące lub tłumiące działanie H3K79me, szczególnie w sytuacjach in vivo, takich jak rozwój ośrodkowego układu nerwowego, jest do tej pory tylko częściowo zrozumiałe32. Ponieważ metylacja H3K79 znajduje się w domenie globularnej histonu 3, jest sterycznie mniej dostępna w porównaniu z modyfikacjami elastycznych ogonów histonów23. Aby zrozumieć funkcję metylacji H3K79, potrzebne są wiarygodne i powtarzalne metody analizy w celu określenia jego lokalizacji i środowiska genomowego. W niniejszej pracy przedstawiono metody izolacji różnych neuronalnych komórek progenitorowych (CPC dla kory mózgowej i CGNP dla móżdżku), skuteczne leczenie inhibitorem DOT1L oraz metodę ChIP do analizy metylacji H3K79 za pomocą qPCR lub sekwencjonowania w różnych punktach czasowych rozwoju kory mózgowej i móżdżku. Aby zapoznać się z przeglądem protokołu i jego możliwościami, zobacz Rysunek 1.

<table><tbody><tr><td>Anty-GAPDH</td><td>Abcam</td><td>ab8245</td><td>Kategoria: Przeciwciało Skrót/Komentarz: Rozcieńczenie immunoblot 1:5000</td></tr><tr><td>Anty-H3</td><td>Abcam</td><td>ab1791</td><td>Kategoria: Przeciwciało Skrót/Komentarz: Rozcieńczenie immunoblot 1:3000</td></tr><tr><td>Diagenoda</td> <td>anty-H3K79me2</td><td>pAb-051-050</td><td>Kategoria: Przeciwciało Skrót/Komentarz: Przeciwciało ChIP</td></tr><tr><td>Anti-H3K79me2</td><td>Abcam</td><td>ab-051-050</td><td>Kategoria: Przeciwciało Skrót/Komentarz: Rozcieńczenie immunoblot 1:1000</td></tr><tr><td>Anty-królicze IgG</td><td>Diagenode</td><td>C15410206</td><td>Kategoria: Przeciwciało Skrót/Komentarz: ChIP Ctrl przeciwciało</td></tr><tr><td>Antytubulina alfa</td><td>Abcam</td><td>ab108629</td><td><silny>Kategoria:</silny> Przeciwciało <silny>Skrót/Komentarz:</silny> Rozcieńczenie immunoblot 1:3000</td></tr><tr><td>Apo-Transferyna (1 mg / ml)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T1147</td><td><silny>Kategoria:</silny> Hodowla komórkowa <silny>Skrót/Komentarz:</silny> Dla</td></tr><tr><td>suplementu CCM B27 (50x)</td><td>Life Technologies</td><td>17504044</td><td><silny>Kategoria:</silny> Hodowla komórkowa <silny>Skrót/Komentarz:</silny> Dla CCM</td></tr><tr><td>Bioanalyzer</td><td>Agilent technologies</td><td>G2940CA</td><td>Kategoria: ChIP Skrót/Komentarz: Do analizy chromatyny ścinanej</td></tr><tr><td>Bioruptor NextGen</td><td>Diagenode</td><td>B01020001</td><td>Kategoria: ChIP Skrót/Komentarz: Ultrasonics</td></tr><tr><td>Kwas borowy pH 8,4</td><td>Sigma Aldrich</td><td>B6768</td><td><silny>Kategoria:</silny> Hodowla komórkowa <silny>Skrót/Komentarz:</silny> Do hodowli CPC</td></tr><tr><td>CFX Connect RT PCR System wykrywania</td><td>Bio-Rad</td><td>1855201</td><td><silny>Kategoria:</silny> Analiza ChIP <silny>Skrót/Komentarz:</silny> System detekcji qPCR</td></tr><tr><td>DMEM-F12</td><td>Life Technologies</td><td>11320-033</td><td><silny>Kategoria:</silny> Hodowla komórkowa <silny>Skrót/Komentarz:</silny> Dla CGM</td></tr><tr><td>Dynabeads Protein A</td><td>Invitrogen</td><td>10001D</td><td>Kategoria: ChIP Skrót/Komentarz: Koraliki magnetyczne, do ChIP</td></tr><tr><td>EPZ-5676</td><td>Selleckchem</td><td>S7062</td><td><silny>Kategoria:</silny> Hamowanie DOT1L <silny>Skrót/Komentarz:</silny> Do hamowania DOT1L w hodowli komórkowej</td></tr><tr><td>Kwas etylenodiaminotetraoctowy</td><td>SERVA</td><td>39760.01</td><td><silny>Kategoria:</silny> ChIP <silny>Skrót/Komentarz:</silny></td></tr><tr><td>Płodowa surowica bydlęca EDTA 10% (v / v)</td><td>Gibco</td><td>10082147</td><td><silny>Kategoria:</silny> Hodowla komórkowa <silny>Skrót/Komentarz:</silny> Do izolacji CPC i CGM</td></tr><tr><td>Glukoza</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5767</td><td>Kategoria: Hodowla komórkowa Skrót/Komentarz: Do izolacji CGNP</td></tr><tr><td>Glutation (1,25 mg/ml)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G4251</td><td><silny>Kategoria:</silny> Hodowla komórkowa <silny>Skrót/Komentarz:</silny> Dla CCM</td></tr><tr><td>Glycine</td><td>Carl Roth</td><td>3187</td><td>Kategoria: ChIP Skrót/Komentarz: Do utrwalania komórek</td></tr><tr><td>GoTaq mastermix</td><td>Promega</td><td>A6002</td><td>Kategoria: Analiza ChIP Skrót/Komentarz: Główna mieszanka polimerazy DNA do qPCR</td></tr><tr><td>Hank' s Balanced Salt Solution</td><td>Life Technologies</td><td>14025-100</td><td>Kategoria: Hodowla komórkowa Skrót/Komentarz: HBSS</td></tr><tr><td>L-glutamina (200 mM)</td><td>Life Technologies</td><td>25030081</td><td>Kategoria: Hodowla komórkowa Skrót/Komentarz: Dla CCM</td></tr><tr><td>Laminin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L2020</td><td><silny>Kategoria:</silny> Hodowla komórkowa <silny>Skrót/Komentarz:</silny> Do hodowli CPC</td></tr><tr><td>Chlorek litu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L4408</td><td><silny>Kategoria:</silny> ChIP <silny>Skrót/Komentarz:</silny> Suplement LiCl</td></tr><tr><td>N2</td><td>Life Technologies</td><td>17502048</td><td><silny>Kategoria:</silny> Hodowla komórkowa <silny>Skrót/Komentarz:</silny> Dla CGM</td></tr><tr><td>NanoDrop 3300</td><td>Thermo Fisher</td><td>3300</td><td>Kategoria: ChIP Skrót/Komentarz: Fluorospektrometr do kwantyfikacji DNA</td></tr><tr><td>NEB Next Ultra Zestaw do przygotowania biblioteki dla Illumina</td><td>NEB</td><td>E7645S</td><td>Kategoria: ChIP Analysis Skrót/Komentarz: Zestaw do przygotowania biblioteki</td></tr><tr><td>NEBNext Multiplex Oligos dla Illumina</td><td>NEB</td><td>E7335</td><td>Kategoria: Analiza ChIP Skrót/Komentarz: Oligotypy do przygotowania biblioteki</td></tr><tr><td>Pożywka neuropodstawowa</td><td>Gibco</td><td>21103049</td><td><silny>Kategoria:</silny> Hodowla komórkowa <silny>Skrót/Komentarz:</silny> Dla CCM</td></tr><tr><td>NP-40 Alternatywny</td><td>Calbiochem</td><td>492016</td><td><silny>Kategoria:</silny> ChIP <silny>Skrót/Komentarz:</silny> Dla bufora ChIP</td></tr><tr><td>Paraformaldehyd</td><td>Carl Roth</td><td>335</td><td><silny>Kategoria:</silny> ChIP <silny>Skrót/Komentarz:</silny> PFA, do utrwalania komórek</td></tr><tr><td>Penicylina-Streptomycyna-Neomycyna 1% (v/v)</td><td>Life Technologies</td><td>15640055</td><td><silny>Kategoria:</silny> Hodowla komórkowa <silny>Skrót/Komentarz:</silny> PSN, dla CCM i CGM</td></tr><tr><td>Sól fizjologiczna buforowana fosforanem</td><td>Life Technologies</td><td>10010023</td><td><silny>Kategoria:</silny> Hodowla komórkowa <silny>Skrót/Komentarz:</silny> PBS, do izolacji CPC</td></tr><tr><td>PicoGreen Kit</td><td>Thermo Fisher</td><td>P11496</td><td>< silny>Kategoria:</silny> Analiza ChIP <silny>Skrót/Komentarz:</silny> Wizualizacja barwnika do kwantyfikacji DNA</td></tr><tr><td>Poli-D-lizyna</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6407</td><td><silny>Kategoria:</silny> Hodowla komórkowa <silny>Skrót/Komentarz:</silny> Do izolacji CGNP</td></tr><tr><td>Bromowodorek poli-L-ornityny</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P3655</td><td><silny>Kategoria:</silny> Hodowla komórkowa <silny>Skrót/Komentarz:</silny> Do hodowli CPC</td></tr><tr><td>Chlorek potasu</td><td>Thermo Fisher</td><td>AM9640G</td><td><silny>Kategoria:</silny> Hodowla komórkowa <silny>Skrót/Komentarz:</silny> KCl, dla</td></tr><tr><td>inhibitora proteazy</td> CGM <td>Roche</td><td>4693159001</td><td><silny>Kategoria:</silny> ChIP <silny>Skrót/Komentarz:</silny> Dla Proteinazy</td></tr><tr><td>ChIP K</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>3115879001</td><td><silny>Kategoria:</silny> ChIP <silny>Skrót/Komentarz:</silny> Dla ChIP</td></tr><tr><td>Qiagen MinElute</td><td>Qiagen</td><td>28004</td><td><silny>Kategoria:</silny> ChIP <silny>Skrót/Komentarz:</silny> Zestaw do oczyszczania DNA</td></tr><tr><td>RNAse</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R6513</td><td><silny>Kategoria:</silny> ChIP <silny> Skrót / komentarz: Dla ChIP</td></tr><tr><td>SGC0946</td><td>Selleckchem</td><td>S7079</td><td>Kategoria: Inhibicion DOT1L Skrót/Komentarz: Do hamowania DOT1L w hodowli komórkowej</td></tr><tr><td>Wodorowęglan sodu</td><td>Carl Roth</td><td>8551.1</td><td>Kategoria: ChIP Skrót/Komentarz: dla buforu elucyjnego</td></tr><tr><td>Chlorek sodu</td><td>Carl Roth</td><td>9265</td><td>Kategoria: ChIP Skrót/Komentarz: NaCl, dla buforu ChIP</td></tr><tr><td>Deoksycholan sodu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>30970</td><td>Kategoria: ChIP Skrót/Komentarz: Dla</td></tr><tr><td>ChIP Sodium dodecylosiarczan</td><td>Carl Roth</td><td>183</td><td>Kategoria: ChIP Skrót/Komentarz: SDS, dla ChIP</td></tr><tr><td>Sonic hedgehock (SHH)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SRP6004</td><td>Kategoria: Hodowla komórkowa Skrót/Komentarz: Do izolacji CGNP</td></tr><tr><td>Dysmutaza ponadtlenkowa (1mg/ml)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7571</td><td>Kategoria: Hodowla komórkowa Skrót/Komentarz: Dla CCM</td></tr><tr><td>Tris(hydroxymethyl)aminomethane</td><td>Carl Roth</td><td>9090</td><td>Kategoria: ChIP Skrót/Komentarz: TRIS, dla bufora ChIP</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Carl Roth</td><td>X100</td><td><silny>Kategoria:</silny> ChIP <silny>Skrót/Komentarz:</silny> Dla bufora ChIP</td></tr><tr><td>Trypsyna-EDTA 0,05% (w/v)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>59417C</td><td><silny>Kategoria:</silny> Hodowla komórkowa <silny>Skrót/Komentarz:</silny> Do izolacji CPC</td></tr><tr><td>Tween20</td><td>Carl Roth</td><td>28320</td><td>Kategoria: ChIP Skrót/Komentarz: Do przygotowania koralików</td></tr><tr><td>Inne urządzenia laboratoryjne: Komora licząca Neubauera, Inkubator, Rotator, Wytrząsarka, Zestaw do rozwarstwiania, Kąpiel</td><td></td><td></td><td></td>wodna</tr><tr><td>CCM: Pożywka</td><td></td><td></td><td></td>dla komórek korowych</tr><tr><td>CGM: Pożywka</td><td></td><td></td><td></td> do hodowli komórkowych CGNP</tr></tbody></table>

izolacja i hodowla progenitorów nerwowych, a następnie immunoprecypitacja chromatyny znacznika dimetylacji histonu 3 lizyny 79

Isolation and Cultivation of Neural Progenitors Followed by Chromatin-Immunoprecipitation of Histone 3 Lysine 79 Dimethylation Mark

Rozwój mózgu to złożony proces, który jest kontrolowany w sposób czasowo-przestrzenny przez gradienty morfogenów i różne programy transkrypcyjne. Ponadto modyfikacje chromatyny epigenetycznej, takie jak metylacja histonów, odgrywają ważną rolę w ustalaniu i utrzymywaniu określonych losów komórek w tym procesie. Zdecydowana większość metylacji histonów zachodzi na elastycznym ogonie histonowym, który jest dostępny dla modyfikatorów histonów, gumek i białek czytnika histonów. Natomiast metylacja H3K79 znajduje się w domenie kulistej histonu 3 i bierze udział w różnych funkcjach rozwojowych. Metylacja H3K79 jest ewolucyjnie konserwatywna i można ją znaleźć u wielu gatunków, od Homo sapiens po Saccharomyces cerevisiae. Modyfikacja zachodzi w różnych populacjach komórek w organizmach, w tym w progenitorach nerwowych. Lokalizacja metylacji H3K79 w domenie globularnej histonu 3 utrudnia jego ocenę. W tym artykule przedstawiono metody izolacji i hodowli komórek progenitorowych kory mózgowej (CPC) z embrionalnej tkanki mózgowej kory mózgowej (E11.5-E14.5) lub progenitorów neuronów ziarnistych móżdżku (CGNP) z tkanki postnatalnej (P5-P7) oraz skutecznego immunoprecypitacji H3K79me2 do ilościowego PCR (qPCR) i sekwencjonowania całego genomu.

Ogólny schemat izolacji progenitorów neuronalnych, hodowli, ChIP H3K79me2 oraz metod analizy ChIP: Rysunek 1 przedstawia schemat blokowy przeprowadzania ChIP H3K79me2 w komórkach progenitorowych kory w różnych punktach czasowych podczas embrionalnego rozwoju mózgu lub w progenitorach neuronów ziarnistych móżdżku w etapach postnatalnych. W pierwszym kroku należy wyizolować mózg i pobrać telencefalon (między E11.5 a E14.5) lub móżdżek (P5-P7). ...

Prezentujemy skuteczną i powtarzalną metodę izolacji i hodowli nerwowych komórek progenitorowych z embrionalnej i postnatalnej tkanki mózgowej do immunoprecypitacji chromatyny (ChIP) histonu 3 lizyny 79 dimetylacji (H3K79me2) - znacznika histonowego znajdującego się w domenie globularnej histonu 3.

Izolacja i hodowla progenitorów nerwowych, a następnie immunoprecypitacja chromatyny znacznika dimetylacji histonu 3 lizyny 79

Brain development is a complex process, which is controlled in a temporo-spatial manner by gradients of morphogens and different transcriptional programs. ...

Ogólnym celem tej procedury jest analiza modyfikacji epigenetycznych podczas rozwoju mózgu, zwłaszcza w korze mózgowej i móżdżku. Metoda ta może być wykorzystana do udzielenia odpowiedzi na kluczowe pytania w dziedzinie neurobiologii, takie jak to, w jaki sposób modyfikacje histonów, takie jak metylacja H3K79, mogą wpływać na rozwój warstw korowych i móżdżku. Główną zaletą tej techniki jest to, że możemy badać in vivo modyfikacje histonów, specyficzne dla locus lub całego genomu, w różnych regionach mózgu w określonych punktach czasowych rozwoju.Zacznij od mózgów od P5 do P7 i myszy MRI. Usuń wszystkie opony mózgowe i naczynia krwionośne. Następnie przenieś od trzech do pięciu móżdżku na chip do 15-mililitrowych probówek.Umyj móżdżek glukozą HBSS przed odwirowaniem. Odwirować probówki, aby zebrać tkankę. Po ostatnim płukaniu homogenizuj móżdżek, delikatnie pipetując w górę i w dół dwa do trzech razy pipetą o pojemności jednego mililitra, aż fragmenty osiągną wielkość od 0,5 do jednego milimetra sześciennego.Delikatnie usuń cały płyn, aż pozostanie 2,5 mililitra. Następnie dodaj 0,05% trypsyny do probówki z glukozą HBSS zawierającą móżdżce. I inkubuj tkankę w łaźni wodnej o temperat

isolation-cultivation-neural-progenitors-followed-chromatin

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neuronauka

Heterogeniczność komórkowa tkanki mózgowej stanowi istotne ograniczenie w badaniach nad oznaczeniami epigenetycznymi w chromatynie, ponieważ większość analiz nie zapewnia rozdzielczości na poziomie pojedynczej komórki. Neurony są zazwyczaj przemieszane z glejem i innymi komórkami nieneuronalnymi. Przedstawiamy protokół izolacji i gromadzenia jąder neuronalnych z ludzkiego mózgu.

Izolacja jąder neuronalnych z tkanki mózgowej ludzi pobranej po śmierci

W niniejszej pracy opisujemy sposób wytwarzania, namnażania i immunoznakowania postnatalnych neuralnych komórek progenitorowych (NPCs) hipokampa w kulturze trójwymiarowej (3D). Następnie, wykorzystując hybrydowe technologie wizualizacji, demonstrujemy, w jaki sposób cyfrowe obrazy immunoznakowanych kriosrezy mogą służyć do rekonstrukcji i mapowania położenia przestrzennego komórek immunopozytywnych w całej trójwymiarowej neurosferze.

Lokalizacja białek w trójwymiarowej kulturze komórek macierzystych neuronów: hybrydowa metodologia wizualizacji

Niniejszy protokół demonstruje metody wykorzystywane do tworzenia środowisk 2D i 3D w specjalnie zaprojektowanych komorach elektrotaktycznych, które umożliwiają śledzenie komórek in vivo/ex vivo przy użyciu rejestracji time-lapse na poziomie pojedynczych komórek, w celu zbadania galwanotaksji/elektrotaksji oraz innych odpowiedzi komórkowych na elektryczne pola (EFs) prądu stałego (DC).

Sterowana polem elektrycznym migracja kierunkowa komórek progenitorowych neuronów w środowiskach 2D i 3D

Izolacja embrionalnej grzebieni neuralnej z rurki neuralnej umożliwia zastosowanie metod in vitro do badania migracji, samoodnawiania oraz multipotencji grzebieni neuralnej.

Izolacja i hodowla komórek grzebienia neuronalnego z zarodkowej rurki nerwowej myszy

Źródło: Tagliafierro, L., et al. Platforma wektorów lentiwirusowych do efektywnego dostarczania narzędzi do edycji epigenomu do modeli chorób pochodzących z ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych. J. Vis. Exp. (2019 rok)Ten film pokazuje transdukcję lentiwirusową nerwowych komórek progenitorowych (NPC) w celu ukierunkowanej modyfikacji epigenetycznej alfa-synukleiny, kluczowego białka w chorobie Parkinsona. Protokół umożliwia metylację DNA za pośrednictwem metylotransferazy,...

Transdukcja lentiwirusowa nerwowych komórek progenitorowych w celu epigenetycznej regulacji ekspresji alfa-synukleiny

Ten film demonstruje technikę izolowania indukowanych nerwowych komórek progenitorowych (iNPC) pochodzących z dorosłych ludzkich fibroblastów. Przedstawiono w nim etapy związane z izolacją kolonii iNPC i hodowlą ich w wielodołkowych dołkach płytkowych pokrytych lamininą w obecności odpowiednich pożywek hodowlanych, które ułatwiają ciągłą proliferację i ekspansję populacji iNPC.

Izolowanie indukowanych kolonii nerwowych komórek progenitorowych pochodzących z fibroblastów dorosłego człowieka

Ten film pokazuje izolację i hodowlę komórek progenitorowych móżdżku z móżdżku móżdżku. Progenitorzy neuronów ziarnistości móżdżku są izolowane i oczyszczane poprzez adhezję różnicową, skutecznie usuwając astrocyty. Ci wyhodowani przodkowie następnie różnicują się w neurony ziarniste móżdżku.

Izolowanie i hodowla mysich progenitorów neuronów ziarnistych móżdżku

Źródło: Mendez, F. M.  i inni., Natywna immunoprecypitacja chromatyny przy użyciu mysich neurosfer guza mózgu. J. Vis. Exp. (2018). Ten film pokazuje izolację kompleksów białko-DNA z komórek neurosfery pochodzących z guza mózgu myszy przy użyciu natywnej immunoprecypitacji chromatyny. Szczegółowo opisuje etapy przygotowania chromatyny, immunoprecypitacji, płukania i trawienia białek w celu uwolnienia DNA do dalszej analizy.

Immunoprecypitacja chromatyny natywnej komórek neurosfery

Z zamiarem scharakteryzowania zmian w miRNA na zróżnicowanych ludzkich nerwowych komórkach macierzystych (hNSC) opisujemy różnicowanie hNSC w systemie trójwymiarowym, ocenę zmian w ekspresji mikroRNA za pomocą macierzy miRNA PCR oraz analizę obliczeniową do przewidywania celu miRNA i jego walidacji za pomocą testu podwójnej lucyferazy.

Różnicowanie ludzkiej linii nerwowych komórek macierzystych w hodowlach trójwymiarowych, analiza mikroRNA i przypuszczalnych genów docelowych

Rdzeń kręgowy dorosłego ssaka zawiera nerwowe komórki macierzyste/progenitorowe (NSPC), które mogą być izolowane i rozwijane w hodowli. Protokół ten opisuje pobieranie, izolację, hodowlę i pasażowanie NSPC generowanych z obszaru okołokomorowego dorosłego rdzenia kręgowego od szczura i od dawców narządów po przeszczepie.

Izolacja nerwowych komórek macierzystych/progenitorowych z obszaru okołokomorowego dorosłego szczura i ludzkiego rdzenia kręgowego

Mechanizmy epigenetyczne są często zmieniane w glejaku. Immunoprecypitacja chromatyny może być wykorzystana do badania konsekwencji zmian genetycznych w glejaku, które wynikają ze zmian w modyfikacjach histonów, które regulują strukturę chromatyny i transkrypcję genów. Protokół ten opisuje natywną immunoprecypitację chromatyny na neurosferach mysiego guza mózgu.

Natywna immunoprecypitacja chromatyny przy użyciu mysich neurosfer guza mózgu

Naucz się izolować i hodować progenitorowe komórki nerwowe z mózgu myszy, a następnie wykonywać ChIP do analizy modyfikacji epigenetycznych H3K79me2. Ta metoda pozwala badać rozwój mózgu.

Izolacja i hodowla progenitorów nerwowych, a następnie immunoprecypitacja chromatyny znacznika dimetylacji histonu 3 lizyny 79

Przeglądaj więcej filmów