Techniki chirurgiczne zakładania cewnika i nefrektomii 5/6 w mysich modelach dializy otrzewnowej

Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie dializy otrzewnowej dotyczące zmian otrzewnowych lub ogólnoustrojowych w odpowiedzi na ekspozycję na płyny w warunkach mocznicy lub nie mocznicy. Głównymi zaletami tej techniki jest to, że duże ilości płynu mogą być wstrzykiwane dootrzewnowo przez długi okres leczenia oraz to, że pozwala ona na wykorzystanie zwierząt modyfikowanych genetycznie. Implikacje tej techniki rozciągają się w kierunku terapii i diagnostyki strukturalnego i funkcjonalnego pogorszenia stanu otrzewnej, ponieważ ułatwia potencjalne, terapeutyczne testy strategiczne i ocenę biomarkerów.

Po raz pierwszy wpadliśmy na pomysł tej metody, gdy przewidzieliśmy potrzebę wykorzystania genetycznie zmodyfikowanych myszy do uruchomienia sygnałów molekularnych zaangażowanych w uszkodzenie otrzewnej. W przypadku założenia cewnika, po ogoleniu prawych boków i grzbietów każdego zwierzęcia, należy potwierdzić brak reakcji na uszczypnięcie palca u nogi i nałożyć maść na oczy zwierzęcia. Następnie umieść pierwsze zwierzę na lewym boku na stole operacyjnym i zdezynfekuj odsłoniętą skórę 1% roztworem glukonianu chlorheksydyny.

Użyj nożyczek, aby wykonać 0,5-centymetrowe nacięcie skóry na prawym boku ciała. Następnie ostrożnie oddziel skórę od sąsiedniej warstwy mięśniowej, aż skóra pokrywająca cały grzbiet zwierzęcia będzie dobrze oddzielona. Wykonaj nacięcie o średnicy jednego milimetra w warstwie mięśniowej przez nacięcie skóry i włóż końcówkę cewnika i pierwszy plastikowy pierścień do nacięcia mięśnia.

Zszyj ścianę otrzewnej szczelnie wokół cewnika za pomocą niewchłanialnego szwu 5-0 lub 6-0, z jednym plastikowym pierścieniem wewnątrz jamy otrzewnej, a drugim między mięśniem a skórą. Szwy powinny być przygotowane przed wykonaniem nacięcia, a mięsień nie powinien być zwalniany do czasu wprowadzenia cewnika. W przeciwnym razie, ponieważ nacięcie jest bardzo małe, znalezienie go ponownie może być trudne.

Włóż port dostępowy do przestrzeni podskórnej w kierunku ogona myszy i zamknij ranę drugim szwem. Następnie należy umieścić zwierzę z powrotem w klatce po pełnym położeniu mostka. Cztery do siedmiu dni później, aby rozpocząć leczenie dializy otrzewnowej, najpierw załaduj do strzykawki dwa mililitry płynu do dializy otrzewnowej i zdezynfekuj skórę otaczającą port 1% roztworem glukonianu chlorheksydyny.

Następnie jedną ręką przytrzymuj zwierzę za ogon i port dostępu, a drugą ręką wstrzyknij płyn do portu za pomocą skośnej igły. W przypadku nefrektomii 5/6 i umieszczenia cewnika, po przygotowaniu zwierząt do operacji, jak pokazano, należy wykonać 0,5 centymetrowe nacięcie skóry po lewej stronie zwierzęcia w pobliżu dolnej części żeber. Otwórz małe nacięcie w mięśniu, aby usunąć lewą nerkę z otrzewnej i usuń kapsułkę oraz nadnercza.

Użyj kauteryzatora, aby spalić i przeciąć kończyny nerki i przywrócić nerkę do jamy otrzewnej. Następnie zamknij rany mięśniowe i skórne nierozpuszczalnymi szwami 5-0 lub 6-0 i wróć do klatki, gdy w pełni wyzdrowieje. Następnego dnia wykonaj 0,5-centymetrowe nacięcie skóry po prawej stronie zwierzęcia i oddziel skórę z tyłu zwierzęcia od mięśnia, jak pokazano.

Wykonaj nacięcie od 0,3 do 0,4 centymetra w mięśniu i usuń prawą nerkę z jamy otrzewnej. Usuń kapsułkę i nadnercze i użyj niewchłanialnego szwu 5-0 lub 6-0 do podwiązania żyły nerkowej, tętnicy i moczowodu. Teraz całkowicie wyjmij nerkę i włóż cewnik tak, aby mięsień był utrzymywany między dwoma plastikowymi pierścieniami, jak pokazano, przed zamknięciem rany mięśniowej.

Wprowadzić port dostępowy do przestrzeni podskórnej i zamknąć skórę, jak pokazano. Następnie należy umieścić zwierzę z powrotem w klatce pod nadzorem aż do całkowitego wyzdrowienia i pozwolić zwierzęciu na powrót do zdrowia przez co najmniej 10 dni przed podaniem płynu hiperosmotycznego, jak pokazano. Mysie tkanki otrzewnej okołootrzewnowej uzyskane z najbardziej odległego obszaru cewnika wykazują zwiększoną grubość i rekrutację komórek podczas dializy, co jest dodatkowo pogarszane u zwierząt poddanych nefrektomii.

Komórki nabłonkowe grasicy wykazują również zmienioną morfologię z powodu degradacji zrostu międzykomórkowego wywołanej dializą otrzewnową. Próbki surowicy od myszy poddanych nefrektomii wskazują, że nefrektomia 5/6 wywołuje stan mocznicowy, zwiększając poziom azotu mocznikowego w trakcie eksperymentu w porównaniu z wartością wyjściową. Co więcej, gdy nerki są w pełni funkcjonalne, poziom azotu mocznikowego pozostaje podobny do stanu podstawowego, nawet u myszy narażonych na działanie płynu dializacyjnego otrzewnowego.

Techniki te można wykonać w ciągu pięciu do siedmiu minut. Bez nefrektomii od 15 do 20 minut. W przypadku kauteryzacji lewej nerki od 20 do 25 minut.

Do prawidłowego usunięcia nerki i umieszczenia cewnika, jeśli jego metodologia jest wykonywana prawidłowo. Po jej opracowaniu technika ta utorowała drogę naukowcom zajmującym się dializą otrzewnową do zbadania możliwości terapeutycznych w zakresie zachowania otrzewnej u pacjentów z nerkami poddawanych dializie otrzewnowej.