Name: Techniki chirurgiczne zakładania cewnika i nefrektomii 5/6 w mysich modelach dializy otrzewnowej (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 11 s
Description: Poznaj techniki chirurgiczne zakładania cewnika otrzewnowego i nefrektomii 5/6 u myszy. Ta metoda umożliwia badanie zmian w otrzewnej oraz testowanie strategii terapeutycznych w modelu dializy otrzewnowej.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy dziękują E. Ferrantelliemu i G. Liappasowi za wsparcie w ustanowieniu protokołu nefrektomii 5/6, R. Sánchez-Díaz i P. Martín za pomoc w ocenie azotu mocznikowego oraz E. Hevia i F. Núñez za pomoc w opiece nad myszami. Prace te były wspierane przez dotacje SAF2016-80648R z "Ministerio de Economía y Competitividad"/Fondo Europeo de Desarrollo Regional (MINECO/FEDER) dla Manuela Lópeza-Cabrery oraz PI 15/00598 z funduszy Fondo de Investigaciones Sanitarias (FIS)-FEDER, dla Abelardo Aguilera.

Wszystkie opisane tutaj metody zostały zatwierdzone przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami i Użytkowania Centrum Biologii Molekularnej Severo Ochoa (Madryt, Hiszpania).
Uwaga: Wykorzystano samice myszy C57BL/6J w wieku od 12 do 14 tygodni i ważące około 20 g na początku badania. Wszystkie zwierzęta były trzymane w standardowych warunkach i otrzymywały jedzenie i wodę ad libitum. Stan zdrowia był sprawdzany codziennie. Wymagany materiał, taki jak rękawiczki, obłożnica, cewnik, szewy i igły, powinien być sterylny.
1. Zakładanie cewnika
Uwaga: Jeśli nerki nie zostaną usunięte, pozostają w pełni funkcjonalne, więc nie uwzględnia wpływu mocznicy, co pozwala na badanie ekspozycji na PDF w izolacji. Operacja polega na wprowadzeniu do jamy otrzewnej tylko dystalnego krańca cewnika i umieszczeniu portu dostępowego na grzbiecie zwierzęcia, zapewniając do niego dostęp. Procedura umieszczania cewnika jest następująca:
<ol>
	<li>Umieść mysz w komorze indukcyjnej i zapewnij znieczulenie za pomocą 4% izofluranu i tlenu o natężeniu przepływu 0,4 l/min aż do utraty odruchu prostowania.
	<ol>
		<li>Utrzymuj zwierzę z 2% izofluranem w 100% tlenu o przepływie 0,3 l/min za pomocą rurki nosowej podłączonej do aparatu anestezjologicznego. Potwierdź prawidłowe znieczulenie, oceniając napięcie mięśniowe i reakcję na stymulację.</li>
		<li>Sprawdzaj tempo i głębokość oddychania podczas całego procesu. Używaj maści weterynaryjnej na oczy, aby zapobiec wysuszeniu podczas znieczulenia. Zaleca się, aby zabiegi były wykonywane w komorze przepływowej, aby zapewnić utrzymanie sterylnych warunków podczas operacji.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Ogolić prawy bok i grzbiet zwierząt, aby wykonać operację, a następnie wstrzyknąć płyn do portu wejściowego w czystym miejscu. Umieść zwierzę w pozycji bocznej spoczywającej na lewym boku na stole operacyjnym, z systemem termicznym zapewniającym, że jego temperatura nie spadnie.</li>
	<li>Zdezynfekuj obszar 1% roztworem glukonianu chlorheksydyny. Wykonaj małe nacięcie (0,5 cm) nożyczkami w skórze na prawym boku ciała i ostrożnie oddziel je nożyczkami od sąsiedniej warstwy mięśniowej, tak aby cały obszar grzbietu zwierzęcia był dobrze oddzielony, aby później móc z łatwością wprowadzić port dostępu. Proszę zapoznać się z Rysunek 1, aby zobaczyć materiały wymagane do wykonania procedury.</li>
	<li>Wykonaj małe nacięcie o średnicy około 1 mm przez warstwę mięśniową i wprowadź końcówkę cewnika i pierwszy plastikowy pierścień. Spowodowane uszkodzenie otrzewnej jest minimalne.</li>
	<li>Zszyj ścianę otrzewnej ciasno wokół cewnika, za pomocą niewchłanialnego szwu 5,0 lub 6,0. Jeden plastikowy pierścień znajduje się wtedy wewnątrz jamy otrzewnej, a drugi między mięśniem a skórą. Cewnik jest w ten sposób mocowany, aby zapobiec wyciekaniu płynu do przestrzeni podskórnej.</li>
	<li>Włóż port dostępowy do przestrzeni podskórnej w kierunku ogona myszy, nie przymocowując go do stałej pozycji na skórze, ponieważ może swędzieć, a zwierzęta mogą drapać i gryźć skórę.</li>
	<li>Zamknij ranę skóry niewchłanialnym szwem 5,0 lub 6,0. Usunąć znieczulenie wziewne i pozwolić zwierzęciu odzyskać przytomność. Nie pozostawiaj myszy bez opieki, dopóki nie odzyska wystarczającej przytomności, aby utrzymać pozycję leżącą mostka. Po całkowitym wyzdrowieniu mysz może wrócić do towarzystwa innych zwierząt. 
	Uwaga: Eksperymenty można rozpocząć po 4 do 7 dniach rekonwalescencji pooperacyjnej.</li>
	<li>Zapewnij znieczulenie, rozpuszczając 3 ml ibuprofenu (20 mg/ml) w 250 ml wody pitnej na dzień zabiegu.</li>
	<li>W okresie pooperacyjnym należy codziennie sprawdzać stan zdrowia zwierzęcia, sprawdzając, czy na skórze nie ma zaczerwienionych obszarów, szczeciniastych włosów lub ran.</li>
	<li>Wstrzyknij płyn, trzymając zwierzę (bez znieczulenia) za ogon i chwytając jedną ręką port dostępowy, a drugą igłę. Przed wstrzyknięciem zdezynfekować obszar 1% roztworem glukonianu chlorheksydyny. Interesujące jest użycie specjalnych igieł (igieł Hubera), które są fazowane w celu rozchylenia zamiast przebijania silikonowej przegrody portu dostępowego (<silna klasa = "xfig">Rysunek 1A). Wystarczą dwa zastrzyki dziennie przez 40 dni, aby zaobserwować zmiany w otrzewnej (<silna klasa="xfig">Ryc. 3).</li>
	<li>Po zakończeniu eksperymentu poddaj mysz eutanazji przez uduszenie dwutlenkiem węgla lub zwichnięcie szyjki macicy.</li>
</ol>
2. Wykonanie nefrektomii 5/6 i założenie cewnika
Uwaga: Aby lepiej odwzorować sytuację u pacjentów z chorobą Parkinsona, możliwe jest wykonanie nefrektomii 5/6, co pozwala tylko na szczątkową czynność nerek. W takim przypadku należy pobrać próbki surowicy w celu analizy poziomu mocznika poprzez ekstrakcję 250 μl krwi przez nakłucie żyły twarzowej, co najmniej jeden dzień przed rozpoczęciem operacji, w trakcie leczenia i podczas składania zwierząt w ofierze. Zaleca się, aby zabiegi były wykonywane w komorze przepływowej, aby zapewnić utrzymanie sterylnych warunków podczas operacji.
<ol>
	<li>Znieczulij myszy za pomocą izofluranu, jak w kroku 1.1.</li>
	<li>Środek przeciwbólowy należy podać za pomocą 0,1 mg/kg buprenorfiny, wstrzykniętej podskórnie w szyję zwierzęcia i rozpuszczając 3 ml ibuprofenu (20 mg/ml) w 250 ml wody pitnej na dzień przed i w dniu zabiegu.</li>
	<li>Ogolić boki i grzbiet zwierząt w celu wykonania operacji, a następnie wstrzyknięcia płynu w porcie dostępowym w czystym miejscu.</li>
	<li>Wykonaj nacięcie około 0,5 cm w skórze, po lewej stronie, blisko żeber, aby mieć bezpośredni dostęp do lewej nerki.</li>
	<li>Otwórz małe nacięcie w mięśniu, aby wyjąć lewą nerkę z otrzewnej, usuwając torebkę i nadnercza. Aby usunąć kapsułkę, konieczne jest lepsze utrzymanie nerki poza jamą otrzewnej.</li>
	<li>Spal i przetnij skrajne krawędzie nerki za pomocą kauteryzatora (patrz <silna klasa="xfig">Rysunek 1, aby zapoznać się z potrzebnymi materiałami).</li>
	<li>Ponownie wprowadzić nerkę do jamy otrzewnej i zszyć rany na mięśniu i skórze nierozpuszczalnym szwem 5,0 lub 6,0.</li>
	<li>Następnego dnia całkowicie usuń prawą nerkę i wprowadź cewnik, wykonując to samo nacięcie, co w celu usunięcia nerki. Ponownie znieczulij mysz izofluranem i wstrzyknij podskórnie 0,1 mg/kg buprenorfiny tuż przed zabiegiem chirurgicznym. Rozpuść również 3 ml ibuprofenu (20 mg/ml) w 250 ml wody pitnej dzień przed i w dniu zabiegu.</li>
	<li>Wykonaj nacięcie w skórze o długości około 0,5 cm i za pomocą nożyczek oddziel skórę z tyłu zwierzęcia od mięśnia, aby otworzyć przestrzeń, w której będzie zlokalizowany port dostępowy.</li>
	<li>Wykonaj nacięcie mięśnia (około 0,3-0,4 cm), aby wyjąć prawą nerkę z jamy otrzewnej.</li>
	<li>Usuń kapsułkę i nadnercza, aby mieć lepszy dostęp do nerki. Podwiązać żyłę nerkową, tętnicę i moczowód za pomocą niewchłanialnego szwu 5,0 lub 6,0 i całkowicie usunąć nerkę.</li>
	<li>Zszyj ranę w mięśniu otrzewnej, wprowadzając koniec cewnika tak, aby mięsień pozostał między dwoma plastikowymi pierścieniami, jak wyjaśniono wcześniej (krok 1.5).</li>
	<li>Wprowadzić port dostępowy do przestrzeni podskórnej i zszyć skórę, jak wyjaśniono w krokach 1.6 i 1.7. 
	Uwaga: Myszy powinny odpoczywać przez co najmniej 10 dni po tych operacjach, aby upewnić się, że rany w mięśniu otrzewnej są całkowicie zagojone i nie będzie wycieku do przestrzeni podskórnej podczas wstrzykiwania płynu. Wstrzyknąć płyn jak w kroku 1.10.</li>
	<li>Po zakończeniu eksperymentu poddaj zwierzęta eutanazji przez uduszenie dwutlenkiem węgla lub zwichnięcie szyjki macicy.</li>
</ol>

<ol><li>Meyer, T. W., Hostetter, T. H. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17898101">Uremia.</a> New England Journal of Medicine. 357 (13), 1316-1325 (2007).</li>
<li>Pyper, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+Dialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Ulster+Medical+Journal%22%5BJournal%5D)">Peritoneal Dialysis.</a> Ulster Medical Journal. 17 (2), 179-187 (1948).</li>
<li>Chaimovitz, C. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0085253815584445">Peritoneal dialysis.</a> Kidney International. 45 (4), 1226-1240 (1994).</li>
<li>Aguilera, A., Yanez-Mo, M., Selgas, R., Sanchez-Madrid, F., Lopez-Cabrera, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+to+mesenchymal+transition+as+a+triggering+factor+of+peritoneal+membrane+fibrosis+and+angiogenesis+in+peritoneal+dialysis+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Investigational+Drugs%22%5BJournal%5D)">Epithelial to mesenchymal transition as a triggering factor of peritoneal membrane fibrosis and angiogenesis in peritoneal dialysis patients.</a> Current Opinion in Investigational Drugs. 6 (3), 262-268 (2005).</li>
<li>González-Mateo, G. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+modulation+of+peritoneal+injury+induced+by+dialysis+fluids%3A+is+it+an+option%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology+Dialysis+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Pharmacological modulation of peritoneal injury induced by dialysis fluids: is it an option.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. , (2011).</li>
<li>Mateijsen, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+and+interstitial+changes+in+the+peritoneum+of+CAPD+patients+with+peritoneal+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Vascular and interstitial changes in the peritoneum of CAPD patients with peritoneal sclerosis.</a> Peritoneal Dialysis International. 19 (6), 517-525 (1999).</li>
<li>Williams, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphologic+changes+in+the+peritoneal+membrane+of+patients+with+renal+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Morphologic changes in the peritoneal membrane of patients with renal disease.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 13 (2), 470-479 (2002).</li>
<li>Dobbie, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+peritoneal+fibrosing+syndromes+%28sclerosing+peritonitis%29+in+peritoneal+dialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of peritoneal fibrosing syndromes (sclerosing peritonitis) in peritoneal dialysis.</a> Peritoneal Dialysis International. 12 (1), 14-27 (1992).</li>
<li>Loureiro, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blocking+TGF-beta1+protects+the+peritoneal+membrane+from+dialysate-induced+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Blocking TGF-beta1 protects the peritoneal membrane from dialysate-induced damage.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 22 (9), 1682-1695 (2011).</li>
<li>Aroeira, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+to+mesenchymal+transition+and+peritoneal+membrane+failure+in+peritoneal+dialysis+patients%3A+pathologic+significance+and+potential+therapeutic+interventions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Epithelial to mesenchymal transition and peritoneal membrane failure in peritoneal dialysis patients: pathologic significance and potential therapeutic interventions.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 18 (7), 2004-2013 (2007).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+T+cells%2FT-helper+cell+17+functional+imbalance+in+uraemic+patients+on+maintenance+haemodialysis%3A+A+pivotal+link+between+microinflammation+and+adverse+cardiovascular+events%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology%22%5BJournal%5D)">Regulatory T cells/T-helper cell 17 functional imbalance in uraemic patients on maintenance haemodialysis: A pivotal link between microinflammation and adverse cardiovascular events.</a> Nephrology. 15 (1), 33-41 (2010).</li>
<li>Welten, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+exposure+of+mesothelial+cells+to+glucose+degradation+products+%28GDPs%29+yields+early+advanced+glycation+end-products+%28AGEs%29+and+a+proinflammatory+response%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Single exposure of mesothelial cells to glucose degradation products (GDPs) yields early advanced glycation end-products (AGEs) and a proinflammatory response.</a> Peritoneal Dialysis International. 23 (3), 213-221 (2003).</li>
<li>De Vriese, A. S., Tilton, R. G., Mortier, S., Lameire, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myofibroblast+transdifferentiation+of+mesothelial+cells+is+mediated+by+RAGE+and+contributes+to+peritoneal+fibrosis+in+uraemia%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology+Dialysis+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Myofibroblast transdifferentiation of mesothelial cells is mediated by RAGE and contributes to peritoneal fibrosis in uraemia.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 21 (9), 2549-2555 (2006).</li>
<li>Rodela, H., Yuan, Z., Hay, J., Oreopoulos, D., Johnston, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+lymphatic+drainage+of+dialysate+from+the+peritoneal+cavity+during+acute+peritonitis+in+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Reduced lymphatic drainage of dialysate from the peritoneal cavity during acute peritonitis in sheep.</a> Peritoneal Dialysis International. 16 (2), 163-171 (1996).</li>
<li>Barrell, G. K., McFarlane, R. G., Slow, S., Vasudevamurthy, M. K., McGregor, D. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CAPD+in+sheep+following+bilateral+nephrectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">CAPD in sheep following bilateral nephrectomy.</a> Peritoneal Dialysis International. 26 (5), (2006).</li>
<li>Schambye, H. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bicarbonate-+versus+lactate-based+CAPD+fluids%3A+a+biocompatibility+study+in+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Bicarbonate- versus lactate-based CAPD fluids: a biocompatibility study in rabbits.</a> Peritoneal Dialysis International. 12 (3), 281-286 (1992).</li>
<li>Garosi, G., Gaggiotti, E., Monaci, G., Brardi, S., Di Paolo, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biocompatibility+of+a+peritoneal+dialysis+solution+with+amino+acids%3A+histological+evaluation+in+the+rabbit%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Biocompatibility of a peritoneal dialysis solution with amino acids: histological evaluation in the rabbit.</a> Peritoneal Dialysis International. 18 (6), 610-619 (1998).</li>
<li>Elema, J. D., Hardonk, M. J., Koudstaal, J., Arends, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+enzyme+histochemical+changes+in+the+zona+glomerulosa+of+the+rat+adrenal+cortex.+I.+The+effect+of+peritoneal+dialysis+with+a+glucose+5+percent+solution%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+endocrinologica+%28Oslo%29%22%5BJournal%5D)">Acute enzyme histochemical changes in the zona glomerulosa of the rat adrenal cortex. I. The effect of peritoneal dialysis with a glucose 5 percent solution.</a> Acta endocrinologica (Oslo). 59 (3), 508-518 (1968).</li>
<li>Liard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+sodium+withdrawal+by+a+diuretic+agent+or+peritoneal+dialysis+on+arterial+pressure+in+one-kidney+Goldblatt+hypertension+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Pfl%C3%BCgers+Archives%22%5BJournal%5D)">Influence of sodium withdrawal by a diuretic agent or peritoneal dialysis on arterial pressure in one-kidney Goldblatt hypertension in the rat.</a> Pflügers Archives. 344, 109-118 (1973).</li>
<li>Beelen, R. H., Hekking, L. H., Zareie, M., vanden Born, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+models+in+peritoneal+dilysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology+Dialysis+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Rat models in peritoneal dilysis.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 16 (3), 672-674 (2001).</li>
<li>Sun, Y., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19223683">Treatment of established peritoneal fibrosis by gene transfer of Smad7 in a rat model of PD.</a> American Journal of Nephrology. 30 (1), 84-94 (2009).</li>
<li>Schilte, M. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+dialysis+fluid+bioincompatibility+and+new+vessel+formation+promote+leukocyte-endothelium+interactions+in+a+chronic+rat+model+for+peritoneal+dialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Peritoneal dialysis fluid bioincompatibility and new vessel formation promote leukocyte-endothelium interactions in a chronic rat model for peritoneal dialysis.</a> Microcirculation. 17 (4), 271-280 (2010).</li>
<li>Peng, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+non-uremic+rat+model+of+long-term+peritoneal+dialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Research%22%5BJournal%5D)">A new non-uremic rat model of long-term peritoneal dialysis.</a> Physiological Research. 60 (1), 157-164 (2011).</li>
<li>Stavenuiter, A. W., Farhat, K., Schilte, M. N., Ter Wee, P. M., Beelen, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioincompatible+impact+of+different+peritoneal+dialysis+fluid+components+and+therapeutic+interventions+as+tested+in+a+rat+peritoneal+dialysis+model%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Bioincompatible impact of different peritoneal dialysis fluid components and therapeutic interventions as tested in a rat peritoneal dialysis model.</a> International Journal of Nephrology. 2011, 742196(2011).</li>
<li>Loureiro, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BMP-7+blocks+mesenchymal+conversion+of+mesothelial+cells+and+prevents+peritoneal+damage+induced+by+dialysis+fluid+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology+Dialysis+Transplantation%22%5BJournal%5D)">BMP-7 blocks mesenchymal conversion of mesothelial cells and prevents peritoneal damage induced by dialysis fluid exposure.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 25 (4), 1098-1108 (2010).</li>
<li>Duman, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+enalapril+prevent+peritoneal+fibrosis+induced+by+hypertonic+%283.86%25%29+peritoneal+dialysis+solution%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Does enalapril prevent peritoneal fibrosis induced by hypertonic (3.86%) peritoneal dialysis solution?</a> Peritoneal Dialysis International. 21 (2), 219-224 (2001).</li>
<li>Duman, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraperitoneal+enalapril+ameliorates+morphologic+changes+induced+by+hypertonic+peritoneal+dialysis+solutions+in+rat+peritoneum%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Peritoneal+Dialysis%22%5BJournal%5D)">Intraperitoneal enalapril ameliorates morphologic changes induced by hypertonic peritoneal dialysis solutions in rat peritoneum.</a> Advances in Peritoneal Dialysis. 20, 31-36 (2004).</li>
<li>Duman, S., Sen, S., Duman, C., Oreopoulos, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+valsartan+versus+lisinopril+on+peritoneal+sclerosis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Artificial+Organs%22%5BJournal%5D)">Effect of valsartan versus lisinopril on peritoneal sclerosis in rats.</a> International Journal of Artificial Organs. 28 (2), 156-163 (2005).</li>
<li>González-Mateo, G. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+exposure+of+mouse+peritoneum+to+peritoneal+dialysis+fluid%3A+structural+and+functional+alterations+of+the+peritoneal+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Chronic exposure of mouse peritoneum to peritoneal dialysis fluid: structural and functional alterations of the peritoneal membrane.</a> Peritoneal Dialysis International. 29 (2), 227-230 (2009).</li>
<li>González-Mateo, G. T., et al. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/266213194_Modelos_animales_de_dialisis_peritoneal_relevancia_dificultades_y_futuro">Modelos animales de diálisis peritoneal: relevancia, dificultades y futuro.</a> Nefrología. Supl. 6, 17-22 (2008).</li>
<li>Rodrigues-Diez, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-17A+is+a+novel+player+in+dialysis-induced+peritoneal+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">IL-17A is a novel player in dialysis-induced peritoneal damage.</a> Kidney International. 86 (2), 303-315 (2014).</li>
<li>Gonzalez-Mateo, G. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+modulation+of+peritoneal+injury+induced+by+dialysis+fluids%3A+is+it+an+option%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology+Dialysis+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Pharmacological modulation of peritoneal injury induced by dialysis fluids: is it an option.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 27 (2), 478-481 (2012).</li>
<li>Liappas, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune-Regulatory+Molecule+CD69+Controls+Peritoneal+Fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Immune-Regulatory Molecule CD69 Controls Peritoneal Fibrosis.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 27 (12), 3561-3576 (2016).</li>
<li>Aroeira, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclooxygenase-2+Mediates+Dialysate-Induced+Alterations+of+the+Peritoneal+Membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Cyclooxygenase-2 Mediates Dialysate-Induced Alterations of the Peritoneal Membrane.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 20 (3), 582-592 (2009).</li>
<li>Sandoval, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PPAR-%5Bgamma%5D+agonist+rosiglitazone+protects+peritoneal+membrane+from+dialysis+fluid-induced+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Investigation%22%5BJournal%5D)">PPAR-[gamma] agonist rosiglitazone protects peritoneal membrane from dialysis fluid-induced damage.</a> Laboratory Investigation. 90 (10), 1517-1532 (2010).</li>
<li>Loureiro, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tamoxifen+ameliorates+peritoneal+membrane+damage+by+blocking+mesothelial+to+mesenchymal+transition+in+peritoneal+dialysis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Tamoxifen ameliorates peritoneal membrane damage by blocking mesothelial to mesenchymal transition in peritoneal dialysis.</a> PLoS One. 8 (4), e61165(2013).</li>
<li>Gonzalez-Mateo, G. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paricalcitol+reduces+peritoneal+fibrosis+in+mice+through+the+activation+of+regulatory+T+cells+and+reduction+in+IL-17+production%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Paricalcitol reduces peritoneal fibrosis in mice through the activation of regulatory T cells and reduction in IL-17 production.</a> PLoS One. 9 (10), e108477(2014).</li>
<li>Gonzalez-Mateo, G. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapamycin+Protects+from+Type-I+Peritoneal+Membrane+Failure+Inhibiting+the+Angiogenesis%2C+Lymphangiogenesis%2C+and+Endo-MT%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Rapamycin Protects from Type-I Peritoneal Membrane Failure Inhibiting the Angiogenesis, Lymphangiogenesis, and Endo-MT.</a> BioMed Research International. 2015, 989560(2015).</li>
<li>Liappas, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nebivolol%2C+a+beta1-adrenergic+blocker%2C+protects+from+peritoneal+membrane+damage+induced+during+peritoneal+dialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Nebivolol, a beta1-adrenergic blocker, protects from peritoneal membrane damage induced during peritoneal dialysis.</a> Oncotarget. 7 (21), 30133-30146 (2016).</li>
<li>Ferrantelli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Mouse+Model+of+Peritoneal+Dialysis%3A+Combination+of+Uraemia+and+Long-Term+Exposure+to+PD+Fluid%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Research+International%22%5BJournal%5D)">A Novel Mouse Model of Peritoneal Dialysis: Combination of Uraemia and Long-Term Exposure to PD Fluid.</a> Biomed Research International. 2015, 106902(2015).</li>
<li>Altmann, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+peritoneal+dialysis+reduces+lung+inflammation+in+mice+with+ischemic+acute+kidney+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">Early peritoneal dialysis reduces lung inflammation in mice with ischemic acute kidney injury.</a> Kidney International. 92 (2), 365-376 (2017).</li>
<li>Peters, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+foreign+body+reaction+that+alters+the+submesothelium+and+transperitoneal+transport%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Mouse model of foreign body reaction that alters the submesothelium and transperitoneal transport.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 300 (1), F283-F289 (2011).</li>
<li>Flessner, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+changes+after+exposure+to+sterile+solutions+by+catheter%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Peritoneal changes after exposure to sterile solutions by catheter.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 18 (8), 2294-2302 (2007).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Pierwsze opublikowane dane analizujące zmiany wyładowań niezupełnych przy użyciu techniki "systemu zamkniętego" przeprowadzono w 2009 r.29 . Ten ścisły system oznacza, że całe urządzenie znajduje się wewnątrz ciała, a płyn jest wstrzykiwany igłą przez port dostępowy. Najważniejszym problemem technicznym w długoterminowych modelach zwierzęcych infuzji płynów przez cewnik jest występowanie niedrożności. Możliwe opcje to wykonanie omentektomii lub dodanie heparyny do plików PDF w celu zmniejszenia zr...

Funkcja nerek i choroby nerek
Nerki są niezbędnymi organami zaangażowanymi w homeostazę, filtrację krwi i produkcję hormonów. Istnieją różne stany, które prowadzą do niewydolności nerek i późniejszego wystąpienia mocznicy, która została zdefiniowana jako grupa objawów ogólnoustrojowych spowodowanych nagromadzeniem produktów przemiany materii we krwi zatrzymanych w wyniku zaburzeń czynności nerek1. Ponadto, ponieważ niewydolność nerek jest również zaburzona przez zdolność homeostatyczną, może wystąpić nadciśnienie spowodowane przeciążeniem objętościowym, co jest również niebezpieczne, ponieważ może prowadzić do niewydolności serca1. Gdy wydolność funkcjonalna nerek jest mniejsza niż 10%-15%, pacjent musi przejść jedną z następujących opcji terapeutycznych: hemodializę, dializę otrzewnową (PD) lub przeszczep nerki.
PD to interesująca opcja, która pozwala pacjentom kontynuować leczenie w zaciszu własnego domu lub praktycznie z dowolnego miejsca, unikając w ten sposób konieczności częstych wizyt i pobytów w szpitalu. Technika PD eliminuje małe toksyczne cząsteczki i nadmiar wody wytwarzany przez ciało2 poprzez wkroplenie płynu osmotycznego (płynu do dializy otrzewnowej, PDF) do jamy otrzewnej. To wkroplenie generuje gradient osmotyczny niezbędny do wymiany substancji rozpuszczonych i wody między naczyniami włosowatymi otrzewnej a PDF, proces znany jako ultrafiltracja (UF).
Uraz otrzewnej wywołany dializą otrzewnową
Jama otrzewnej pokryta jest błoną (PM) składającą się z monowarstwy komórek międzybłonka spoczywających na matrycy, w której znajduje się również kilka naczyń krwionośnych, fibroblastów, makrofagów i innych populacji komórek. Niestety, błona otrzewnowa zawsze ulega pewnym zmianom podczas leczenia PD, takim jak apoptoza i utrata komórek międzybłonka, przejście mezenchymalne komórek międzybłonka (MMT) i śródbłonka (end-MT), rekrutacja komórek zapalnych i fibrocytów, zmiany naczyniowe, angiogeneza, limfangiogeneza i/lub zwłóknienie3,4,5,6,7,8,9. Zmiany te są odpowiedzialne za rozwój niewydolności UF class10, co wyklucza kontynuację terapii, wymagając, aby pacjent otrzymał alternatywne leczenie, aby przeżyć (hemodializa lub przeszczep nerki). Dlatego u tych pacjentów konieczne jest opóźnienie lub kontrolowanie rozwoju tych zmian otrzewnej.
Spekuluje się, że sama mocznica może powodować stan zapalny11, ale najważniejszym czynnikiem lokalnym jest bioniezgodność PDF. Większość plików PDF używa glukozy jako środka osmotycznego, który powoduje stan zapalny. Ze względu na czas przechowywania plików PDF i sterylizację glukoza ulega procesowi degradacji i pojawiają się nowe produkty tej reakcji, generując więcej stanów zapalnych, MMT i apoptozy12,13. Ponadto istnieje również możliwość uszkodzeń mechanicznych spowodowanych metodą wkraplania. Wszystkie te czynniki, działając w sposób ciągły, mogą generować uporczywy i nawracający stan zapalny, prowadzący do przewlekłego stanu zapalnego, który prowadzi do pogorszenia błony i ostatecznie do niewydolności UF. W jaki sposób można zmniejszyć te szkody lub ich uniknąć, jest nadal kwestią badań.
Analiza rozwoju zmian chorobowych: od próbek ludzkich do modeli zwierzęcych
Praca z ludzkimi biopsjami jest czynnikiem ograniczającym ze względu na trudności w pobieraniu próbek tkanek. Próbki te można pobrać tylko z operacji wykonanych z powodu nieprawidłowego działania cewnika lub przeszczepu, zwykle po latach leczenia choroby Parkinsona. Podejście to jest przydatne do analizy zmian patologicznych, na które narażona jest błona otrzewnowa narażona na działanie PDF, ale nie jest wystarczające do zbadania rozwoju procesu. Inną możliwością jest analiza komórek odsączonych ze ścieków dializacyjnych, ale to nadal nie zapewnia pełnego scenariusza. Połączenie obu technik jest możliwe tylko w przypadku modeli zwierzęcych. Budowa otrzewnej jest podobna u ssaków, dlatego istnieją modele z różnymi gatunkami zwierząt. Istnieje kilka badań opartych na owcach (Rodela i wsp.14 oraz Barrell et al.15) i rabbit16,17 modeli; Jednak mniejsze zwierzęta są preferowane, ponieważ są łatwiejsze w trzymaniu i utrzymaniu, a także bardziej ekonomiczne. Użycie rats18,19,20,21,22,23,24 oferuje krótszy czas leczenia potrzebny do zaobserwowania zmian morfofunkcjonalnych. Stanowi on bardzo przydatny model do badania różnych zagadnień, takich jak wpływ leków przeciwzwłóknieniowych, takich jak na przykład BMP-7 (białko morfogenne kości-7)25 i RAS (układ renina-angiotensyna) celowanie26,27,28.
Jednak model mysi okazał się idealnym modelem z wieloma zaletami w stosunku do innych. Najciekawszą zaletą jest możliwość wykorzystania genetycznie modyfikowanych myszy do badania molekularnych i komórkowych podstaw uszkodzeń otrzewnej. W rzeczywistości myszy są często wykorzystywane do analizy wielu chorób, ponieważ istnieje wiele różnych szczepów o różnym, dobrze znanym pochodzeniu genetycznym. Inne zalety to zmniejszona przestrzeń wymagana do pomieszczeń, zmniejszone koszty eksperymentów (ze względu na mniejsze rozmiary zwierząt), łatwość obsługi, dostępność odczynników i rosnąca ilość dostępnych informacji na temat różnych szczepów myszy, ponieważ są one najczęściej wykorzystywanymi zwierzętami w badaniach.
Model oparty na myszach wykorzystujący wszczepione urządzenie był ostatnio ustalonym modelem dla PD29,30, i wykazano, że naśladuje pogorszenie stanu otrzewnej, którego doświadczają pacjenci z PD z powodu ekspozycji na PDF. Model ten współpracował w celu zrozumienia procesów patologicznych związanych z 31,32,33. Co więcej, został wykorzystany do walidacji różnych potencjalnych metod leczenia w celu złagodzenia tego pogorszenia za pomocą modulatorów immunologicznych i leków przeciwzapalnych oraz innych środków przeciwzwłóknieniowych i antyangiogennych, takich jak inhibitory COX-2 (cyklooksygenazy-2) <klasa sup = "xref">34, γ PPAR- (agoniści receptora aktywowanego proliferatorem peroksysomów-γ) 35, Tamoksyfen36, Paricalcitol (aktywator receptora witaminy D, który moduluje reakcję immunologiczną)37, Rapamycin38 oraz Nebivolol39.
Rozwijanie modelu myszy z wszczepionym cewnikiem
Celem tego modelu jest jak najbardziej upodobnienie techniki stosowanej u pacjentów z PD u ludzi, co pozwala na przeprowadzanie rozszerzonych terapii PD u małych zwierząt. Do tej pory przetestowano trzy techniki wkraplania płynu dializacyjnego do otrzewnej. Pierwsza z nich, ślepe nakłucie przedniej ściany brzucha, jest kontrowersyjna ze względu na liczne zagrożenia, jakie może ponieść, takie jak uszkodzenie otrzewnej, krwawienie i, jak to się robi na ślepo, nakłucie trzewne. Drugą techniką jest tzw. "otwarty system stały", w którym urządzenie do wstrzykiwania płynu umieszcza się na zewnątrz organizmu. Ta procedura jest najbardziej podobna do tej wykonywanej u ludzi. Nie pozwala jednak na opracowywanie długoterminowych eksperymentów, ponieważ może zwiększyć ryzyko infekcji i generalnie wymaga użycia znieczulenia w celu zakroplenia PDF, co może zakłócić wyniki. Trzecią techniką jest "system zamknięty". Dzięki takiemu podejściu całe urządzenie używane do wkraplania płynów znajduje się w ciele zwierzęcia. Płyn wstrzykuje się za pomocą igły przez port dostępowy, który umieszcza się podskórnie. Zabieg ten zmniejsza ryzyko infekcji otrzewnej i krwawienia, a także konieczność znieczulenia.
Aby zbadać wpływ mocznicy na chorobę Parkinsona, niedawno ustalono również model mysi 40 oparty na modelu infuzji PDF z cewnikiem. Model ten wprowadza nowatorską technikę wykonywania nefrektomii u myszy, zmniejszając w ten sposób czynność nerek. W niniejszym artykule opracowano modyfikację protokołu zastosowanego przez Ferrantelli i in. w 2015 roku40. Ten nowy protokół umożliwia implantację cewnika podczas nefrektomii, zmniejsza długość rany zadanej podczas operacji i ułatwia dostęp do nerek.

<table><tbody><tr><td>Minute Mouse Port 4French z koralikami retencyjnymi i otworami krzyżowymi</td><td>Technologie dostępu</td><td>MMP-4S-061108A Igły punktowe</td><td></td></tr><tr><td>Posi-Grip Huber 25 ga. X 1/2&acute; i ostry; &nbsp;</td><td>Technologie dostępu</td><td>PG25-500</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw do kauteryzacji wysokotemperaturowej</td><td>Bovie</td><td>18010-00</td><td></td></tr><tr><td>Forane</td><td>abbVie</td><td>880393.4 HO</td><td></td></tr><tr><td>niewchłanialny szew 6/0</td><td>Laboratorio Agar&oacute;</td><td>6121</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki&nbsp;</td><td>Kleszcze Fine Science Tools</td><td>14079-10</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Fine Science Tools</td><td>11002-12</td><td></td></tr><tr><td>zacisk</td><td>Fine Science Tools</td><td>13002-10</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfina 0,3 mg/ml</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>produkt farmaceutyczny waciki</td><td></td><td></td> bawełniane <td>produkt farmaceutyczny</td></tr><tr><td>Dalsy (Ibuprofen) 20mg/ml zawiesina doustna</td><td>AbbVie&nbsp; S.R.L.&nbsp;</td><td></td><td>produkt farmaceutyczny</td></tr></tbody></table>

techniki chirurgiczne zakładania cewnika i nefrektomii 5/6 w mysich modelach dializy otrzewnowej

Surgical Techniques for Catheter Placement and 5/6 Nephrectomy in Murine Models of Peritoneal Dialysis

Dializa otrzewnowa (PD) to terapia nerkozastępcza polegająca na podawaniu i odzyskiwaniu płynu hiperosmotycznego w jamie otrzewnej w celu odprowadzenia wody i toksycznych metabolitów, których funkcjonalnie niewystarczające nerki nie są w stanie wyeliminować. Niestety, zabieg ten pogarsza stan otrzewnej. Uszkodzenie tkanki wywołuje początek stanu zapalnego w celu wyleczenia urazu. Jeśli uraz utrzymuje się, a stan zapalny staje się przewlekły, może prowadzić do zwłóknienia, które jest częstym zjawiskiem w wielu chorobach. W chorobie Parkinsona przewlekły stan zapalny i zwłóknienie, wraz z innymi specyficznymi procesami z nimi związanymi, prowadzą do pogorszenia zdolności ultrafiltracji, co oznacza niepowodzenie, a następnie zaprzestanie techniki. Praca z próbkami ludzkimi dostarcza informacji na temat tego pogorszenia, ale przedstawia techniczne i etyczne ograniczenia w uzyskiwaniu biopsji. Modele zwierzęce są niezbędne do zbadania tego pogorszenia, ponieważ przezwyciężają te niedociągnięcia.
W 2008 roku opracowano model przewlekłej infuzji myszy, który korzysta z szerokiej gamy genetycznie modyfikowanych myszy, otwierając możliwość badania zaangażowanych mechanizmów. W tym modelu zastosowano niestandardowe urządzenie przeznaczone dla myszy, składające się z cewnika przymocowanego do portu dostępowego, który jest umieszczony podskórnie z tyłu zwierzęcia. Procedura ta pozwala uniknąć ciągłego nakłuwania otrzewnej podczas długotrwałych eksperymentów, zmniejszając infekcje i stany zapalne spowodowane zastrzykami. Dzięki temu modelowi scharakteryzowano i modulowano uszkodzenia otrzewnej wywołane przewlekłą ekspozycją na płyn PD. Technika ta pozwala na infuzję dużych ilości płynów i może być stosowana do badania innych chorób, w których konieczne jest inokulowanie leków lub innych substancji przez dłuższy czas.
Ten artykuł pokazuje metodę chirurgicznego zakładania cewnika u myszy. Ponadto wyjaśnia procedurę nefrektomii 5/6 w celu naśladowania stanu niewydolności nerek występującego u pacjentów z chorobą Parkinsona.

Rysunek 1 przedstawia wszystkie materiały niezbędne do przeprowadzenia procedur opisanych w sekcji protokołu. W tym przykładzie myszy poddane lub nie nefrektomii (8 zwierząt na grupę) (Rysunek 2) były przez 40 dni (dwa wstrzyknięcia dziennie, z co najmniej 2-godzinną przerwą między nimi) eksponowane na mieszaninę dwóch różnych płynów do dializy otrzewnowej (PDF), powszechnie stosowanych w praktyce klinicznej: Extraneal (PDF na ba...

Ten artykuł pokazuje metodę chirurgicznego umieszczania u myszy cewnika dootrzewnowego podłączonego do portu dostępowego, który znajduje się z tyłu zwierzęcia. Ponadto wyjaśnia procedurę nefrektomii 5/6, aby przypominała stan mocznicowy pacjentów z chorobą Parkinsona.

Techniki chirurgiczne zakładania cewnika i nefrektomii 5/6 w mysich modelach dializy otrzewnowej

Peritoneal dialysis (PD) is a renal replacement therapy consistent on the administration and posterior recovery of a hyperosmotic fluid in the peritoneal ...

Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie dializy otrzewnowej dotyczące zmian otrzewnowych lub ogólnoustrojowych w odpowiedzi na ekspozycję na płyny w warunkach mocznicy lub nie mocznicy. Głównymi zaletami tej techniki jest to, że duże ilości płynu mogą być wstrzykiwane dootrzewnowo przez długi okres leczenia oraz to, że pozwala ona na wykorzystanie zwierząt modyfikowanych genetycznie. Implikacje tej techniki rozciągają się w kierunku terapii i diagnostyki strukturalnego i funkcjonalnego pogorszenia stanu otrzewnej, ponieważ ułatwia potencjalne, terapeutyczne testy strategiczne i ocenę biomarkerów.Po raz pierwszy wpadliśmy na pomysł tej metody, gdy przewidzieliśmy potrzebę wykorzystania genetycznie zmodyfikowanych myszy do uruchomienia sygnałów molekularnych zaangażowanych w uszkodzenie otrzewnej. W przypadku założenia cewnika, po ogoleniu prawych boków i grzbietów każdego zwierzęcia, należy potwierdzić brak reakcji na uszczypnięcie palca u nogi i nałożyć maść na oczy zwierzęcia. Następnie umieść pierwsze zwierzę na lewym boku na stole operacyjnym i zdezynfekuj odsłoniętą skórę 1% roztworem glukonianu chlorheksydyny.Użyj nożyczek, aby wykonać 0,5-centymetrowe nacięcie skóry na prawym boku ciała. Następnie ostrożnie oddziel skórę od sąsiedniej warstwy mięśniowej, aż skóra pokrywająca cały grzbiet zwierzęcia będzie dobrze oddzielona. Wykonaj nacięcie o średnicy jednego milimetra w warstwie mięśniowej przez nacięcie skóry i włóż końcówkę cewnika i pierwszy plastikowy pierścień do nacięcia mięśnia.Zszyj ścianę otrzewnej szczelnie wokół cewnika za pomocą niewchłanialnego szwu 5-0 lub 6-0, z jednym plastikowym pierścieniem wewnątrz jamy otrzewnej, a drugim między mięśniem a skórą. Szwy powinny być przygotowane przed wykonaniem nacięcia, a mięsień nie powinien być zwalniany do czasu wprowadzenia cewnika. W przeciwnym razie, ponieważ nacięcie jest bardzo małe, znalezienie go ponownie może być trudne.Włóż port dostępowy do przestrzeni podskórnej w kierunku ogona myszy i zamknij ranę drugim szwem. Następnie należy umieścić zwierzę z powrotem w klatce po pełnym położeniu mostka. Cztery do siedmiu dni później, aby rozpocząć leczenie dializy otrzewnowej, najpierw załaduj do strzykawki dwa mililitry płynu do dializy otrzewnowej i zdezynfekuj skórę otaczającą port 1% roztworem glukonianu chlorheksydyny.Następnie jedną ręką przytrzymuj zwierzę za ogon i port dostępu, a drugą ręką wstrzyknij płyn do portu za pomocą skośnej igły. W przypadku nefrektomii 5/6 i umieszczenia cewnika, po przygotowaniu zwierząt do operacji, jak pokazano, należy wykonać 0,5 centymetrowe nacięcie skóry po lewej stronie zwierzęcia w pobliżu dolnej części żeber. Otwórz małe nacięcie w mięśniu, aby usunąć lewą nerkę z otrzewnej i usuń kapsułkę oraz nadnercza.Użyj kauteryzatora, aby spalić i przeciąć kończyny nerki i przywrócić nerkę do jamy otrzewnej. Następnie zamknij rany mięśniowe i skórne nierozpuszczalnymi szwami 5-0 lub 6-0 i wróć do klatki, gdy w pełni wyzdrowieje. Następnego dnia wykonaj 0,5-centymetrowe nacięcie skóry po prawej stronie zwierzęcia i oddziel skórę z tyłu zwierzęcia od mięśnia, jak pokazano.Wykonaj nacięcie od 0,3 do 0,4 centymetra w mięśniu i usuń prawą nerkę z jamy otrzewnej. Usuń kapsułkę i nadnercze i użyj niewchłanialnego szwu 5-0 lub 6-0 do podwiązania żyły nerkowej, tętnicy i moczowodu. Teraz całkowicie wyjmij nerkę i włóż cewnik tak, aby mięsień był utrzymywany między dwoma plastikowymi pierścieniami, jak pokazano, przed zamknięciem rany mięśniowej.Wprowadzić port dostępowy do przestrzeni podskórnej i zamknąć skórę, jak pokazano. Następnie należy umieścić zwierzę z powrotem w klatce pod nadzorem aż do całkowitego wyzdrowienia i pozwolić zwierzęciu na powrót do zdrowia przez co najmniej 10 dni przed podaniem płynu hiperosmotycznego, jak pokazano. Mysie tkanki otrzewnej okołootrzewnowej uzyskane z najbardziej odległego obszaru cewnika wykazują zwiększoną grubość i rekrutację komórek podczas dializy, co jest dodatkowo pogarszane u zwierząt poddanych nefrektomii.Komórki nabłonkowe grasicy wykazują również zmienioną morfologię z powodu degradacji zrostu międzykomórkowego wywołanej dializą otrzewnową. Próbki surowicy od myszy poddanych nefrektomii wskazują, że nefrektomia 5/6 wywołuje stan mocznicowy, zwiększając poziom azotu mocznikowego w trakcie eksperymentu w porównaniu z wartością wyjściową. Co więcej, gdy nerki są w pełni funkcjonalne, poziom azotu mocznikowego pozostaje podobny do stanu podstawowego, nawet u myszy narażonych na działanie płynu dializacyjnego otrzewnowego.Techniki te można wykonać w ciągu pięciu do siedmiu minut. Bez nefrektomii od 15 do 20 minut. W przypadku kauteryzacji lewej nerki od 20 do 25 minut.Do prawidłowego usunięcia nerki i umieszczenia cewnika, jeśli jego metodologia jest wykonywana prawidłowo. Po jej opracowaniu technika ta utorowała drogę naukowcom zajmującym się dializą otrzewnową do zbadania możliwości terapeutycznych w zakresie zachowania otrzewnej u pacjentów z nerkami poddawanych dializie otrzewnowej.

surgical-techniques-for-catheter-placement-56-nephrectomy-murine

Research

JoVE Journal

Engineering

Inżynieria

Modele spontanicznej progresji choroby raka nerkowokomórkowego z przerzutami (RCC) mogą być używane do oceny leczenia w klinicznie istotnych warunkach. Protokół ten demonstruje różne procedury ortotopowej implantacji komórek nowotworowych nerki, prawidłowej nefrektomii, a na koniec przedstawia przewodnik po sekcji zwłok do wizualnej i bioluminescencyjnej oceny obciążenia i lokalizacji przerzutów.

Modelowanie spontanicznego przerzutowego raka nerkowokomórkowego (mRCC) u myszy po nefrektomii

Celem tego manuskryptu jest opisanie kroków wymaganych do przeprowadzenia przeszczepu nerki u myszy, zwracając szczególną uwagę na szczegóły zespolenia tętniczego.

Technika przeszczepu nerki u myszy

Ten manuskrypt zawiera szczegółową dwuetapową procedurę chirurgiczną do wykonania mysiej 5/6częściowej nefrektomii (PNx) z podwiązaniem bieguna. Cztery tygodnie po operacji, w porównaniu z myszami operowanymi pozorowanymi, myszy PNx rozwinęły upośledzoną czynność nerek, niedokrwistość, przerost serca, zwłóknienie serca oraz zmniejszoną czynność skurczową i rozkurczową serca.

Mysi model nefrektomii 5/6, który indukuje eksperymentalną kardiomiopatię mocznicową

Inżynierskie konstrukty nerkowe dostarczają rozwiązania na niedobór narządów i szkodliwe skutki dializy. W tym miejscu opisujemy protokół mikropreparacji mysich nerek w celu izolacji segmentów korowo-rdzeniowych. Segmenty te są wszczepiane do konstruktów komórkowych wolnych od rusztowań, tworząc organoidy nerkowe.

Mikrodysekcja pierwotnych segmentów tkanki nerkowej i włączenie do niej nowatorskiej technologii konstrukcji bez rusztowań

Tutaj prezentujemy protokół do mysiego znakowania in vivo białek powierzchniowych komórek kłębuszkowych za pomocą biotyny. Protokół ten zawiera informacje o tym, jak perfuzja nerek myszy, izolowanie kłębuszków nerkowych i przeprowadzanie endogennej immunoprecypitacji białka będącego przedmiotem zainteresowania.

Izolacja kłębuszków nerkowych i znakowanie in vivo białek powierzchniowych komórek kłębuszków nerkowych

Ten protokół przedstawia nową technikę chirurgiczną przeszczepu nerki u myszy, koncentrując się na zmodyfikowanej strategii zespolenia tętniczego. Przedstawiono również technikę zakładania szwów naczyniowych, w tym prostą i bezpieczniejszą metodę zespolenia moczowód-pęcherz moczowy. Modyfikacje te skracają czas operacji i poprawiają wskaźnik powodzenia procedury przeszczepu nerki u myszy.

Zmodyfikowana technika chirurgiczna przeszczepu nerki u myszy

Ten artykuł opisuje modyfikacje procedury wszczepienia cewnika do dializy otrzewnowej w modelu mysim, aby uniknąć poważnych problemów technicznych obserwowanych przy konwencjonalnych technikach.

Podejście do implantacji wstecznej w celu umieszczenia cewnika do dializy otrzewnowej u myszy

Ten protokół szczegółowo opisuje etapy chirurgiczne tworzenia mysiej wspólnej przetoki tętniczo-żylnej. Opracowaliśmy ten model do badania patofizjologii kończyn związanej z dostępem do hemodializy.

Mysi model dysfunkcji ręki związanej z dostępem do hemodializy

Ten manuskrypt wprowadza ustandaryzowany protokół dla nefrektomii 5/6 poprzez ostrą bipolektomię poprzez laparotomię w linii środkowej na modelu szczurzym, mający na celu wywołanie stanu niewydolności nerek poprzez redukcję miąższu nerki z dużą precyzją metodyczną i niskim ryzykiem błędu technicznego.

5/6 Nefrektomia przy użyciu ostrej bipolektomii przez laparotomię w linii środkowej u szczurów

W tym miejscu przedstawiamy protokół wykonywania techniki Seldingera wspomaganej laparoskopowo (LAST) do wprowadzania cewnika do dializy otrzewnowej (PD), podkreślając połączenie minimalnej inwazyjności metody Seldingera z ulepszoną wizualizacją laparoskopii.

Laparoskopowa technika Seldingera do wprowadzania cewnika do dializy otrzewnowej

Protokół ten opisuje procedurę przeżycia dla bezpiecznej i dobrze tolerowanej obustronnej limfadenektomii nerki u myszy.

Grzybicza limfadenektomia nerek u myszy

Poznaj techniki chirurgiczne zakładania cewnika otrzewnowego i nefrektomii 5/6 u myszy. Ta metoda umożliwia badanie zmian w otrzewnej oraz testowanie strategii terapeutycznych w modelu dializy otrzewnowej.

Techniki chirurgiczne zakładania cewnika i nefrektomii 5/6 w mysich modelach dializy otrzewnowej

Przeglądaj więcej filmów