Kwantyfikacja translacji w całym genomie u pączkujących drożdży za pomocą profilowania rybosomów

Ogólnym celem tej procedury jest określenie, które regiony mRNA ulegają translacji w białka, ilościowy pomiar translacji białek w pączkujących drożdżach Saccharomyces cerevisiae na poziomie całego genomu. Profilowanie rybosomów może być wykorzystywane do monitorowania częstości występowania białek i chorób oraz do badania mechanizmów regulacji translacji. Główną zaletą tej techniki jest to, że dodaje znacznie większą czułość w porównaniu z innymi metodami, a także z pomiarem białek i chorób in vivo w rozdzielczości pojedynczego kontaktu.

Chociaż protokół ten jest specyficzny dla pączkujących drożdży, jest również przydatny dla badaczy, którzy próbują ustalić profilowanie rybosomów w innych systemach modelowych, takich jak komórki i tkanki ssaków. Ekstrakty zostaną przygotowane z komórek drożdży wyhodowanych do połowy fazy logarytmicznej. Użyj zestawu filtrów ze szklanym uchwytem, aby przefiltrować kulturę przez filtry mikromembranowe 0,45.