Zmodyfikowany enzym split-TET2 do chemicznie indukowanej hydroksymetylacji DNA i przebudowy epigenetycznej

Ogólnym celem tej serii eksperymentów jest wprowadzenie zmodyfikowanego enzymu rozszczepionego TET2 o nazwie CiDER do komórek ssaków w celu indukowalnej modyfikacji DNA, takiej jak hydroksymetylacja, a także przebudowa epigenetyczna. Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie epigenetyki, takie jak: Główną zaletą tej techniki jest to, że zmodyfikowany enzym rozszczepiony TET2 umożliwia czasową kontrolę utleniania 5-metylocytozyny, a następnie przebudowę stanów epigenetycznych w komórkach ssaków za pomocą dodatków chemicznych. Aby rozpocząć tę procedurę, należy wyhodować przylegającą linię komórkową w DMEM uzupełnioną 10% inaktywowanym termicznie FBS, a także 100 jednostek na mililitr penicyliny i streptomycyny.

Inkubować komórki w temperaturze 37 stopni Celsjusza z 5% CO2. Transfekować komórki plazmidem CiDER zgodnie z opisem w protokole tekstowym. Następnie inkubuj komórki przez noc w temperaturze 37 stopni Celsjusza.