Rutynowa metoda badań przesiewowych na obecność mikrocząstek w transfuzjach płytek krwi

Ogólnym celem tej metody jest scharakteryzowanie transfuzji płytek krwi za pomocą rutynowych testów, które można wykonać w ośrodkach krwiodawstwa lub szpitalnych bankach krwi w celu optymalizacji stosowania tych produktów krwiopochodnych u pacjentów z krwawieniami lub rakiem krwi. Metoda ta może pomóc w znalezieniu odpowiedzi na kluczowe pytania w medycynie transfuzjologicznej, takie jak to, czy transfuzja płytek krwi zawiera płytki aktywowane czy nieaktywowane. Główną zaletą tej techniki jest to, że zapewnia szybkie i dokładne badanie przesiewowe pod kątem zawartości mikrocząstek, które są sprawdzonym wskaźnikiem aktywacji płytek krwi.

Osoby, które są nowicjuszami w tej metodzie, będą musiały nauczyć się pobierać próbki z segmentów rurek worków, ponieważ obecnie nie jest to rutynowo wykonywane. Po raz pierwszy wpadliśmy na pomysł tej metody, gdy zauważyliśmy, że płytki krwi od różnych dawców mają dużą zmienność w stanie aktywacji, co wydaje się mieć wpływ na pacjenta. Istnieją trzy metody uzyskiwania próbki z koncentratu płytek krwi.

Aby pobrać próbkę z torebki, należy dobrze wymieszać zawartość worka płytkowego, delikatnie przesuwając poziomo przez pięć sekund, przechylając się od końca do końca, pięć razy. Otwórz zacisk do woreczka, worek zostanie opróżniony i sam się napełni. Nie jest konieczne całkowite napełnienie torebki, ponieważ do testów dynamicznego rozpraszania światła lub DLS wymagana będzie tylko próbka o pojemności 100 mikrolitrów.

Odłącz woreczek od worka, zgrzewając rurkę łączącą za pomocą zgrzewarki do rurek. W przypadku pobierania próbek z pustego przewodu należy sprawdzić, czy rurka worka z płytkami krwi była przechowywana pusta i czy blok rurki jest nadal na swoim miejscu. Sprawdź wzrokowo rurkę, aby upewnić się, że nie ma w niej koncentratu płytek krwi.

Zamknij ściągacz izolacji na rurce, jak najbliżej bloku rurki, ściskając uchwyty, aby ścisnąć rurkę między rolkami, jednocześnie trzymając ściągacz izolacji w pozycji zamkniętej, zwolnij blok rurki. Powoli pociągnij ściągacz izolacji w dół pustego wężyka, pozwalając, aby rurka powoli wypełniała się za stripperem. Kontynuuj, aż sekcja poniżej ściągacza izolacji zostanie całkowicie napełniona lub do momentu, gdy ściągacz znajdzie się w odległości jednego cala od końca rurki.

Bardzo ważne jest, aby mocno ścisnąć uchwyty ściągacza izolacji i powoli ciągnąć ściągacz w dół rurki. Po osiągnięciu punktu zatrzymania za pomocą ściągacza izolacji, użyj zgrzewarki do rurek, aby uszczelnić rurkę na gorąco jeden cal nad ściągaczem izolacji. Teraz zwolnij uchwyty ręcznego ściągacza izolacji.

Ponownie zgrzewaj na gorąco, od jednego do dwóch cali powyżej poprzedniej uszczelki, aby utworzyć segment testowy. Następnie odciąć segment testowy od jednostki płytek krwi. Ten segment będzie używany do testowania DLS.

W przypadku pobierania próbek z rurki, która nie jest pusta, należy zawiesić worek pionowo i zwolnić blok rurki, jeśli jest na swoim miejscu. Sprawdź wzrokowo rurkę, aby ustalić, czy nie ma znacznych stałych grudek. Jeśli istnieją stałe grudki, zamknij je nad nimi, tak aby nie można było ich wedrzeć do torby.

Następnie zamknij ściągacz izolacji na rurce, jak najbliżej uszczelnionego końca rurki. Zbierz zawartość rurki do torby, ściskając uchwyty, aby ścisnąć rurkę między rolkami. Utrzymując siłę zacisku, przesuń ściągacz izolacji wzdłuż rurki w kierunku worka.

Wyjmij worek płytkowy z haczyka do zawieszania i delikatnie mieszaj worek przez pięć sekund, przechylając go pięciokrotnie od końca do końca, trzymając striptizerkę zamkniętą. Zawieś torbę pionowo, trzymając striptizerkę zamkniętą. Powoli pociągnij ściągacz izolacji w dół pustego wężyka, pozwalając, aby rurka powoli wypełniała się za stripperem.

Kontynuuj, aż sekcja pod ściągaczem izolacji zostanie całkowicie napompowana lub do momentu, gdy ściągacz znajdzie się w odległości jednego cala od końca rurki. Po osiągnięciu punktu zatrzymania za pomocą ściągacza izolacji, użyj zgrzewarki do rurek, aby uszczelnić rurkę na gorąco, jeden cal nad ściągaczem. Po zwolnieniu ściągacza ponownie zgrzej od jednego do dwóch cali powyżej poprzedniego uszczelnienia, aby utworzyć segment testowy.

Odetnij i wyrzuć ostatnią część rurki. Następnie odciąć segment testowy od jednostki płytek krwi. Ten segment będzie używany do testowania DLS.

Używając osłony przeciwbryzgowej i czystych, suchych nożyczek, odetnij jeden koniec rurki woreczka lub segmentu testowego. Natychmiast napełnić kapilatę za pomocą narzędzia do pobierania próbek, aby pobrać próbkę bezpośrednio z otwartego woreczka lub segmentu rurki do kapilary. Uszczelnij spód napełnionej kapilary, delikatnie wciskając ją w uszczelniacz do rurki kapilarnej, jednocześnie delikatnie skręcając i lekko dociskając do tacy.

Następnie odłącz pipetę i końcówkę o stałej objętości 100 mikrolitrów od kapilary, upewniając się, że kapilara pozostaje mocno osadzona w uszczelniaczu rurki kapilarnej. Wyjmij kapilarę z tacki na uszczelniacz rurki kapilarnej i przetrzyj wacikiem nasączonym alkoholem izopropylowym. Upewnij się, że żadne pęcherzyki powietrza nie zostały uwięzione, delikatnie przesuwając dno kapilary.

Na koniec umieść kapilarnę w systemie DLS. Aby rozpocząć, uruchom konsolę, postępuj zgodnie z instrukcjami wyświetlanymi na ekranie dotykowym, aby się zalogować i wybierz opcję testu mikrocząstek lub testu MP, aby zainicjować nowy test DLS do pomiaru zawartości mikrocząstek w próbce płytek krwi. Wprowadź informacje o próbce za pomocą skanera kodów kreskowych lub wprowadź je ręcznie.

Umieść kapilarnę w systemie DLS zgodnie z instrukcją i rozpocznij test. Po zakończeniu testu wyjmij próbkę z uchwytu kapilarnego i odpowiednio zutylizuj materiały eksploatacyjne zgodnie z wytycznymi zakładu. Oznacz worek płytek krwi kolorem odpowiadającym wynikowi.

Na przykład pomarańczowy dla nieaktywowanego i różowy dla aktywnego. Dynamiczne rozpraszanie światła mierzy prędkość cząstek poruszających się w zawieszeniu przez ruchy Browna. W oparciu o różne prędkości, małe cząstki poruszają się szybko, a duże cząstki poruszają się wolno.

Technologia ta określa rozkład wielkości próbki. DLS określają, że ta transfuzja zawiera nieaktywowane płytki krwi na podstawie mniej niż 15% zawartości mikrocząstek. Istotnie. Pod mikroskopem widoczne były głównie dyskoidalne płytki krwi z bardzo małą ilością mikrocząstek.

Jednak inna transfuzja płytek krwi, która gołym okiem wygląda dokładnie tak samo jak pierwsza torebka, zawierała aktywowane płytki krwi, oparte na ponad 15% zawartości mikrocząstek. W tej próbce pod mikroskopem uwidoczniono różne morfologie płytek krwi, małe agregaty i wiele mikrocząstek. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, w jaki sposób nieinwazyjnie pobierasz próbkę z worka płytkowego, napełniasz kapilarnę i testujesz próbkę pod kątem zawartości mikrocząstek, aby umożliwić optymalne wykorzystanie inwentarza płytek krwi.

Podczas próby tej procedury ważne jest, aby dobrze wymieszać worek, aby uzyskać dobrą, reprezentatywną próbkę. Podążając za tą procedurą, można zastosować inne metody, takie jak cytometria przepływowa, aby odpowiedzieć na pytania dotyczące komórkowego pochodzenia mikrocząstek. Po opanowaniu tej techniki można ją wykonać w około dwie i pół minuty.

Wraz z pięciominutowym testem transfuzje płytek krwi można scharakteryzować w czasie krótszym niż osiem minut. Po opracowaniu technika ta pozwoliła szpitalnym bankom krwi na badania przesiewowe zapasów płytek krwi, leczenie pacjentów hematologicznych/onkologicznych wyłącznie nieaktywowanymi płytkami krwi i zaobserwowanie zmniejszenia liczby stosowanych transfuzji płytek krwi. Jak mówimy, najbezpieczniejsza transfuzja to ta, której nie podaje się.

Chociaż metoda ta zapewnia wgląd w charakterystykę płytek krwi przed transfuzją, może być również stosowana do badania osocza bogatopłytkowego bezpośrednio od dawców. Implikacje tej techniki rozciągają się na leczenie pacjentów z rakiem krwi, ponieważ odnoszą oni korzyści z nieaktywowanych transfuzji płytek krwi, które zmniejszają ryzyko wystąpienia oporności.