Mysie modele picia w rozwoju farmakoterapii alkoholizmu: picie w ciemności i wybór dwóch butelek

Ogólnym celem tego paradygmatu jest ocena skuteczności potencjalnego leku przeciwalkoholowego przy użyciu modeli zaburzeń związanych z używaniem alkoholu u gryzoni. Zaburzenia związane z używaniem alkoholu stanowią poważny kryzys zdrowia publicznego. Obecne metody leczenia są nieskuteczne i potrzebne są ciągłe badania przedkliniczne.

Nasz protokół pozwala nam ocenić bezpieczeństwo i użyteczność potencjalnego leczenia, a także przyjrzeć się neurobiologii leżącej u podstaw samego zaburzenia. Rozpocznij procedurę od podgrzania noża uniwersalnego na palniku Bunsena. Za pomocą tego noża odetnij około cala od górnego i dolnego końca plastikowej pipety serologicznej o pojemności 18 mililitrów.

Następnie ogrzej pipetę pod opalarką. Włóż rurkę wtryskową z łożyskiem kulkowym do dolnego końca pipety. Następnie za pomocą dostępnego w handlu pistoletu do folii termokurczliwej uszczelnij rurkę sipper na miejscu folią termokurczliwą.

Zakryj drugi otwór silikonowym korkiem. W celu przyzwyczajenia zwierząt, po przyjeździe, każda mysz powinna być umieszczona pojedynczo w standardowej klatce z poliwęglanu z pościelą, jedzeniem i wodą oraz metalową siatką. Począwszy od czwartego dnia jednotygodniowej aklimatyzacji w pojedynczym pomieszczeniu, mierz i rejestruj dzienną masę ciała i pokarmu myszy.

Zmierz pobór wody za pomocą wytrawień wzdłuż odwróconej butelki, aby zarejestrować najwyższy punkt menisku. Gdy spożycie wody ustabilizuje się na poziomie plus minus 10% zmienności w stosunku do średniej z ostatnich trzech dni, rozpocznij dostęp do etanolu za pomocą TBC lub DID. Aby przeprowadzić TBS, przygotuj 10% roztwór etanolu w 1 000 mililitrów, dodając 105,3 mililitra etanolu 190 proof grain do 894,7 mililitrów wody, a następnie dokładnie nim wstrząśnij.

Biorąc pod uwagę, że etanol szybko odparowuje, roztwór należy wymieniać dwa razy w tygodniu. Pierwszego dnia TBC w każdej klatce opróżnij jedną z dwóch butelek z wodą i napełnij ją po brzegi świeżo przygotowanym roztworem etanolu. Biorąc pod uwagę, że etanol i wodę trudno jest wizualnie odróżnić, wyraźnie oznacz butelki odpowiednią zawartością.

W razie potrzeby dodaj więcej roztworu do butelki z wodą. Następnie umieść butelkę z powrotem w klatce, upewniając się, że nakrętka jest dobrze zamknięta i pozbawiona pęcherzyków powietrza lub wycieków z dziobka. Usuń wszelkie pęcherzyki powietrza, po prostu stukając w butelkę, aby powietrze mogło uciec z butelki.

Zmieniaj pozycję butelki co drugi dzień, aby skorygować wpływ na picie związany z preferencjami dotyczącymi miejsca. Zapisz poziom spożycia etanolu i przeanalizuj 10% spożycie etanolu i stosunek preferencji. Gdy tylko spożycie etanolu ustabilizuje się, należy podać każdej myszy pojedyncze kontrolne wstrzyknięcie dootrzewnowe podczas codziennej procedury pomiarowej, aby przyzwyczaić mysz do wstrzyknięcia.

Po przywróceniu linii bazowej etanolu o niskiej zmienności podziel myszy na grupy kontrolne i eksperymentalne, używając wartości spożycia etanolu, tak aby wszystkie grupy miały mniej więcej podobne średnie wartości spożycia etanolu. Rozpocznij codzienne dawkowanie leku, na ostry lub wielodniowy okres. Aby przeprowadzić DID, w każdym dniu zaplanowanego dostępu do etanolu należy rejestrować pomiary objętości wody, spożycia pokarmu i masy ciała oraz wykonywać dawkowanie leków.

Wykonaj to we wcześniej wybranym czasie podczas cyklu świetlnego, który jest wybrany zgodnie z farmakokinetyką leku, tak aby związek zbliżał się do maksymalnego stężenia w mózgu w okresie picia. Następnie przygotuj 20% roztwór etanolu w 1 000 mililitrów, dodając 210,5 mililitra etanolu ze 190 zbóż 190 do 789,5 mililitrów wody. Następnie dokładnie nim wstrząśnij.

Napełnij butelkę etanolem przed rozpoczęciem sesji picia, tak aby zaraz po rozpoczęciu DID butelkę na wodę można było po prostu wymienić na butelkę z alkoholem. Podczas całej sesji DID używaj reflektora z czerwonym światłem, aby nie przeszkadzać zwierzęciu. Na początku sesji picia DO, która ma rozpocząć się trzy godziny po rozpoczęciu cyklu ciemności przed cyklem światła, zapisz objętość wody dla każdej myszy.

Następnie zastąp każdą butelkę wodą butelką z 20% roztworem etanolu i zapisz początkową objętość etanolu. Przeczytaj i zapisz ostateczną objętość etanolu dwie godziny później pod koniec sesji picia w dniach od pierwszego do trzeciego i cztery godziny później w czwartym dniu. Następnie przeanalizuj spożycie 20% etanolu.

Następnie zastąp butelkę etanolu butelką na butelkę z wodą i zapisz objętość wody. Rysunek ten przedstawia ocenę wpływu ostrej dawki moksydektyny w dawce pięciu miligramów na kilogram na spożycie etanolu i preferencje. Pojedyncza dawka moksydektyny znacznie zmniejszyła spożycie alkoholu o ponad 45% w porównaniu z wstrzyknięciami przed moksydektyną, a preferencje dotyczące spożycia etanolu przekraczające 30%10% pozostają znacznie niższe niż w przypadku soli fizjologicznej w dniu następującym bezpośrednio po leczeniu MOX.

W tym przypadku upijanie się było modelowane przy użyciu procedury DID. Myszom podawano sól fizjologiczną w dniach od pierwszego do czwartego z wyjściowym 20% etanolem ustalonym w czwartym dniu. W dniach od pierwszego do trzeciego drugiego cyklu tygodniowego wszystkie myszy otrzymywały kolejne codzienne wstrzyknięcie soli fizjologicznej.

Wartości spożycia etanolu od trzeciego dnia wykorzystano następnie do podzielenia myszy na dwie grupy, które następnie otrzymały albo jedno wstrzyknięcie moksydektyny w dawce pięciu miligramów na kilogram, albo sól fizjologiczną w czwartym dniu. W następnym tygodniu wszystkie myszy otrzymywały codzienne zastrzyki z soli fizjologicznej w dniach od pierwszego do czwartego, a spożycie etanolu mierzono ponownie w czwartym dniu. Przeanalizowano ostre podawanie MOX i stwierdzono, że znacznie zmniejszyło spożycie alkoholu o ponad 54% w porównaniu z zastrzykami przed podaniem leku.

Należy pamiętać, że przyszłe eksperymenty z wykorzystaniem tego protokołu muszą być przeprowadzone w celu oceny mechanizmu, dawkowania i toksyczności potencjalnego leku, a także w celu oceny jego skuteczności w odniesieniu do obecnych opcji leczenia.