Systematyczna ocena dobrostanu myszy przed zabiegami ze względu na znieczulenie ogólne

Ogólnym celem tego protokołu jest ocena dobrostanu myszy po poddaniu ich zabiegom, w tym znieczuleniu ogólnemu, oraz dostarczenie naukowo uzasadnionych danych wspierających klasyfikację ciężkości zgodnie z dyrektywą UE 2010/63. Protokół ten może pomóc w znalezieniu odpowiedzi na kluczowe pytania dotyczące dobrostanu zwierząt w dziedzinie nauk o zwierzętach laboratoryjnych, takie jak stopień stresu spowodowanego procedurami obejmującymi znieczulenie ogólne. Główną zaletą tego protokołu jest to, że dobrostan każdej myszy z osobna jest oceniany w sposób naukowy oparty na zwierzętach, a protokół ten można łatwo dostosować i zintegrować z innymi planowanymi badaniami.

Po raz pierwszy wpadliśmy na pomysł tego protokołu, gdy spekulowaliśmy, że jeśli powtarzające się znieczulenie spowoduje większy stres u myszy laboratoryjnych niż pojedyncza ekspozycja, zabraknie danych naukowych. W tym kroku przygotuj szklane pudełko o powierzchni podłogi około 220 milimetrów na 290 milimetrów i wysokości 390 milimetrów. Przykryj podłogę około 0,5 centymetra materiału pościelowego.

Następnie rozrzuć garść zużytego materiału pościelowego z domowej klatki na wierzchu nowego materiału pościelowego, aby zmniejszyć stres spowodowany nowym środowiskiem. Zaopatrz w jedzenie i wodę. Delikatnie przenieś mysz do klatki obserwacyjnej i pozwól myszy przyzwyczaić się do nowego środowiska przez co najmniej 30 minut.

Aby uzyskać skalę grymasu myszy, użyj aparatu o wysokiej rozdzielczości do fotografowania. Rób nieprzerwanie około 30 do 40 zdjęć dla każdego punktu czasowego w ciągu jednej do dwóch minut. Aby przetestować zachowanie podczas kopania według Deacona i Jirkofa, przygotuj nory, umieszczając 140 gramów granulek żywności w standardowej, nieprzezroczystej plastikowej butelce na wodę.

Następnie umieść plastikową butelkę na wodę wypełnioną granulkami żywności równolegle do tylnej ściany klatki obserwacyjnej. Po dwóch godzinach zważ granulki pokarmu pozostałe w norze. Wykonaj test dwa razy dwa dni przed zabiegiem jako punkt odniesienia.

Na tym etapie należy przygotować klatkę z nowym materiałem ściółkowym na 24-godzinny okres obserwacji, w którym myszy są trzymane indywidualnie. 24-godzinny okres obserwacji rozpoczyna się po skalowaniu grymasu myszy i zachowaniu zakopywania się. Czas przebywania w jednym pomieszczeniu jest ograniczony do minimum.

W międzyczasie mierzy się aktywność klatki domowej, spożycie pokarmu, zachowania związane z budowaniem gniazd oraz poziomy metabolitów kortykosteronu w kale. Następnie rozrzuć garść zużytego materiału ściółkowego bez kału z klatki domowej na wierzchu nowego materiału, aby zmniejszyć stres. Zapewnić znormalizowane kwadratowe gniazdo bawełniane o określonej wadze wyłącznie w celu wzbogacenia środowiska.

Następnie zamontuj czujnik podczerwieni na górze klatki, aby zmierzyć aktywność klatki domowej. Zapewnij standardowe granulki pokarmowe i wodę ad libitum i umieść mysz w klatce. Następnego ranka oceń gniazdo zgodnie z pięciopunktową skalą naliczoną przez Deacona około dwie godziny po włączeniu światła.

Ponadto należy zważyć każdy nierozerwany fragment gniazda, który stanowi co najmniej 5% początkowej masy gniazda. Następnie umieść górną część klatki z siatką w klatce pod kątem 45 stopni do dłuższego boku klatki. Uruchom minutnik i monitoruj lub nagrywaj wideo myszy przez 10 minut z odległości około 1.5 metra.

Zanotuj wszystkie momenty, w których mysz wspina się na górę klatki ze wszystkimi czterema łapami na górze klatki lub opuszcza górę klatki z jedną lub więcej łapami na podłodze klatki, po czym następuje analiza. Pojedyncze doświadczenie znieczulenia, jak również wielokrotne znieczulenie, zwiększyły różnice w skali grymasu myszy w porównaniu z grupą kontrolną 30 minut po ekspozycji. Po 150 minutach od ostatniego znieczulenia różnice w skali grymasu myszy wszystkich myszy powróciły do poziomów kontrolnych.

W przypadku zachowań związanych z kopaniem tylko powtarzające się znieczulenie znacznie zmniejszyło procent masy granulek pokarmu, które myszy usunęły z nory w porównaniu z kontrolą. W przypadku zachowań związanych z budowaniem gniazd nie było istotnych różnic w wynikach gniazda między pojedynczym doświadczeniem znieczulenia, powtarzanym znieczuleniem i kontrolą. W paradygmacie swobodnej eksploracji wielokrotne znieczulenie znacznie zmniejszyło liczbę eksploracji w porównaniu z grupą kontrolną i całkowity czas trwania eksploracji w porównaniu z pojedynczym znieczuleniem jeden dzień po ostatnim znieczuleniu.

Osiem dni po ostatnim znieczuleniu nie było już różnic między badanymi grupami. Próbując tego protokołu, ważne jest, aby pamiętać o obchodzeniu się z myszami metodą tunelową i/lub bańkowaniem. Chwytanie myszy za ogon może wywoływać stres i niepokój, co z kolei wpływa na samopoczucie, a także może wpływać na wyniki protokołu.

Protokół ten można łatwo dostosować i zintegrować z planowanymi badaniami w celu oceny wpływu procedury na dobrostan myszy. W zależności od procedury i projektu badania należy wybrać najbardziej odpowiedni test tego protokołu. Po obejrzeniu tego filmu będziesz miał dobre zrozumienie, jak ocenić samopoczucie myszy poddanych zabiegowi znieczulenia ogólnego.

Protokół pomaga sklasyfikować powagę procedury w sposób naukowy oparty na zwierzętach.