Name: Mysi model częściowej niedrożności jelit (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-05T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 33 s
Description: Poznaj chirurgiczną metodę tworzenia częściowej niedrożności jelit u myszy do badania zmian molekularnych i fenotypowych w tkance przewodu pokarmowego. Technika ta jest niezawodna, powtarzalna i opłacalna.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy chcieliby podziękować Benjaminowi J. Weiglerowi, doktorowi nauk medycznych i Waltowi Mandeville'owi, doktorowi medycyny (Animal Resources & Campus Attending Veterinarian, University of Nevada, Reno) za doskonałe usługi dla zwierząt, które świadczyły myszy, a także za ich porady dotyczące procedur chirurgicznych.

Następujący protokół został zatwierdzony przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt (IACUC) na Uniwersytecie Nevada-Reno (UNR) ds. Zasobów Zwierzęcych i jest zgodny ze wszystkimi instytucjonalnymi wytycznymi etycznymi dotyczącymi wykorzystania zwierząt badawczych.
1. Zwierzęta.
<ol>
	<li>Zdobądź dojrzałe (4-6 tygodniowe) myszy C57BL/6 o wadze od 20 do 30 g. Trzymaj kolonię myszy laboratoryjnych w scentralizowanym obiekcie dla zwierząt w UNR Animal Resources.</li>
</ol>
2. Chirurgia częściowej niedrożności
UWAGA: Operacje są wykonywane w pomieszczeniu przeznaczonym do zabiegów chirurgicznych. Wszystkie narzędzia chirurgiczne są sterylizowane w autoklawie przed zabiegiem. Sterylne fartuchy chirurgiczne i rękawiczki powinny być noszone przez cały personel na sali operacyjnej przez cały czas.
<ol>
	<li>Przygotowanie do myszy chirurgicznej
	<ol>
		<li>Sprawdź system podawania środka znieczulającego, aby upewnić się, że dopływ tlenu i izofluranu jest odpowiedni do zabiegu. Włącz dopływ tlenu. Włącz przepływomierz gazu i ustaw go na 500-1000 ml/min. Umieść zwierzę w komorze indukcyjnej i uszczelnij górę.</li>
		<li>Włącz waporyzator izofluranu na 5% i monitoruj zwierzę, aż stanie się leżące. Przełącz system podawania środka znieczulającego na stożek nosowy.</li>
		<li>Przepłukać komorę indukcyjną z resztkowego gazu tlenem, a następnie wyłączyć przewód komory indukcyjnej, pozostawiając otwartą linię stożka nosowego.</li>
		<li>Wyjmij zwierzę z komory i ostrożnie nałóż maść okulistyczną na oczy zwierzęcia.</li>
		<li>Umieść stożek nosowy na podgrzanej ciepłej podkładce, gdy gaz nadal przepływa.</li>
		<li>Zmienić przepływ tlenu na 100-200 ml/min, z 2-3% izofluranem. Jeśli zwierzę zacznie się poruszać, delikatnie przytrzymuj zwierzę ze stożkiem nosowym, aż do całkowitego znieczulenia.</li>
		<li>Monitorować oddech i reakcję na stymulację podczas zabiegu i w razie potrzeby dostosować zawartość procentową izofluranu (2-5%). Poziom znieczulenia zwierząt jest monitorowany przez brak odruchu szczypania palców u nóg przed wykonaniem operacji.</li>
		<li>Lek przeciwbólowy (buprenorfina, 1 μg/g masy ciała) wstrzyknąć dootrzewnowo z dala od miejsca nacięcia.</li>
		<li>Nałóż balsam do depilacji na brzuch za pomocą czystego bawełnianego wacika. Pozostaw balsam na 3-5 minut na myszy, a następnie usuń włosy za pomocą gazy i wacików. Powtarzaj ten krok, aż wszystkie włosy zostaną usunięte z brzucha myszy.</li>
		<li>Oczyść skórę 70% etanolem za pomocą gazy i bawełnianych wacików. Zastosuj pateczki lub roztwór jodu powidonu, aby oczyścić brzuch.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Operacja częściowej niedrożności
	<ol>
		<li>Ułóż pole operacyjne za pomocą sterylnego papieru o wymiarach 25 x 50 cm z otworem o wymiarach 2,5 x 2,5 cm pośrodku na obszar operacyjny. Przymocuj serwetę do zwierzęcia, umieszczając sterylne paski na granicach otworu i skóry.</li>
		<li>Wykonaj nacięcie brzucha o długości ~3,0 cm za pomocą skalpela z ostrzem nr 15, upewniając się, że nacięta jest tylko skóra i unikając w tym czasie nacinania warstwy mięśniowo-otrzewnowej.</li>
		<li>Za pomocą kleszczy i nożyczek chirurgicznych ostrożnie oddziel skórę od warstwy mięśniowo-otrzewnowej, nie powodując nacięcia warstwy mięśniowo-otrzewnowej. Po wystarczającym oddzieleniu warstw (około 1 cm x 4 cm) zidentyfikuj linię białą na warstwie mięśniowo-otrzewnowej i przetnij ~2 cm wzdłuż kresy białej, aby odsłonić jamę wewnątrzotrzewnową za pomocą mikrokleszczy i nożyczek.</li>
		<li>Ostrożnie zlokalizuj i zidentyfikuj jelito ślepe. Powoli i delikatnie wyjmij jelito ślepe z jamy wewnątrzotrzewnowej za pomocą mikrokleszczyków, przenosząc bliższą okrężnicę i jelito kręte z jelitem ślepym na zewnątrz na sterylną zasłonę. Natychmiast zwilżyć tkankę jelitową 0,9 % sterylną gazą nasączoną solą fizjologiczną i utrzymywać odsłoniętą tkankę w stanie zwilżonym przez cały czas, gdy znajduje się ona poza jamą brzuszną.</li>
		<li>Zlokalizuj i zidentyfikuj krezkę między jelitem krętym a bliższą okrężnicą. Wykonaj nacięcie (~1 cm) równolegle do jelita krętego i tuż pod nim w krezce i unikaj przecinania naczyń.</li>
		<li>Weź autoklawowany silikonowy pierścień (6 mm długości, 4 mm średnicy zewnętrznej, 3.5 mm średnicy wewnętrznej). Przetnij wzdłuż, aby otworzyć rurkę i otwórz pierścień za pomocą mikrokleszczyków.</li>
		<li>Przełóż jeden koniec otwartego pierścienia przez nacięcie w tkance krezki. Przywróć pierścień do gotowego kształtu pierścienia, stykając jeden koniec z drugim, przy czym jelito kręte jest otoczone pierścieniem.</li>
		<li>Upewnij się, że silikonowy pierścień całkowicie otacza jelito kręte, zamknij pierścień szwem i ostrożnie umieść jelita z powrotem w jamie wewnątrzotrzewnowej.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Zamknięcie gabinetu
	<ol>
		<li>Wykonaj prosty ciągły szew na warstwie mięśniowo-otrzewnowej wzdłuż linea alba, aby zamknąć ranę mięśniowo-otrzewnową za pomocą wchłanialnego szwu. Po wykonaniu szwu należy oczyścić krwawienie z 0,9% sterylnej gazy nasączonej solą fizjologiczną.</li>
		<li>Aby całkowicie zamknąć ranę, za pomocą oddzielnego nylonowego szwu, wykonaj prosty ciągły szew na skórze.</li>
		<li>Po wykonaniu obu szwów oczyść ranę nowym szpacikiem lub jodowidonem.</li>
		<li>Dootrzewnowo wstrzyknąć antybiotyki (gentamycyna, 150 μl na mysz w przeliczeniu na 20-30 g masy ciała).</li>
		<li>Po zakończeniu zabiegu należy wyłączyć parownik izofluranu i pozwolić zwierzęciu oddychać tylko płynącym tlenem, aż zacznie odzyskiwać przytomność.</li>
		<li>Gdy zwierzę się obudzi, umieść je w oddzielnym obszarze odzyskiwania ze wsparciem termicznym, aż w pełni wyzdrowieje.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Obserwacja pooperacyjna.
<ol>
	<li>Po zakończeniu operacji przenieś zwierzęta do inkubatora w pomieszczeniu pooperacyjnym, w którym regulowana jest temperatura i wilgotność. Monitoruj zwierzęta po operacji co 15 minut przez pierwszą godzinę, a następnie co 30 minut przez drugą godzinę, gdy zwierzęta znajdują się w inkubatorze.</li>
	<li>Jak tylko zalecana obserwacja zostanie zakończona, przenieś zwierzęta do ich indywidualnej klatki i monitoruj je codziennie pod kątem klinicznych oznak bólu18 oraz upewnij się, że rana pooperacyjna goi się prawidłowo, bez żadnych oznak powikłań (rozejścia się).</li>
</ol>

<ol><li>Millat, B., Guillon, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiopathology+and+principles+of+intensive+care+in+intestinal+obstructions%5BTitle%5D)+AND+%22Rev+Prat%22%5BJournal%5D)">Physiopathology and principles of intensive care in intestinal obstructions.</a> Rev Prat. 43, 667-672 (1993).</li>
<li>Tonelli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+developments+in+Crohn%27s+disease%3A+solution+of+doctrinal+mysteries+and+reinstatement+as+a+surgically+treatable+disease.+1.+The+process+is+not+a+form+of+enteritis+but+lymphedema+contaminated+by+intestinal+contents%5BTitle%5D)+AND+%22Chir+Ital%22%5BJournal%5D)">New developments in Crohn's disease: solution of doctrinal mysteries and reinstatement as a surgically treatable disease. 1. The process is not a form of enteritis but lymphedema contaminated by intestinal contents.</a> Chir Ital. 52, 109-121 (2000).</li>
<li>Limsrivilai, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meta-analytic+Bayesian+model+for+differentiating+intestinal+tuberculosis+from+Crohn%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Meta-analytic Bayesian model for differentiating intestinal tuberculosis from Crohn's disease.</a> Am J Gastroenterol. 112, 415-427 (2017).</li>
<li>Dvorak, D., Adamova, Z., Bar, T., Slovacek, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Internal+hernia+as+a+cause+of+small+bowel+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Rozhl+Chir%22%5BJournal%5D)">Internal hernia as a cause of small bowel obstruction.</a> Rozhl Chir. 96, 34-36 (2017).</li>
<li>Massani, M., Capovilla, G., Ruffolo, C., Bassi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gastrointestinal+stromal+tumour+%28GIST%29+presenting+as+a+strangulated+inguinal+hernia+with+small+bowel+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22BMJ+Case+Rep%22%5BJournal%5D)">Gastrointestinal stromal tumour (GIST) presenting as a strangulated inguinal hernia with small bowel obstruction.</a> BMJ Case Rep. , (2007).</li>
<li>Chen, J., Chen, H., Sanders, M., Perrino, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+SRF%2FCArG-dependent+gene+transcription+during+chronic+partial+obstruction+of+murine+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterol+Motil%22%5BJournal%5D)">Regulation of SRF/CArG-dependent gene transcription during chronic partial obstruction of murine small intestine.</a> Neurogastroenterol Motil. 20, 829-842 (2008).</li>
<li>Chang, I. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+interstitial+cells+of+Cajal+and+development+of+electrical+dysfunction+in+murine+small+bowel+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Loss of interstitial cells of Cajal and development of electrical dysfunction in murine small bowel obstruction.</a> J Physiol. 536 (Pt 2), 555-568 (2001).</li>
<li>Liu, D. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Voltage+dependent+potassium+channel+remodeling+in+murine+intestinal+smooth+muscle+hypertrophy+induced+by+partial+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Voltage dependent potassium channel remodeling in murine intestinal smooth muscle hypertrophy induced by partial obstruction.</a> PLoS One. 9 (2), e86109(2014).</li>
<li>Guo, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Down-regulation+of+hydrogen+sulfide+biosynthesis+accompanies+murine+interstitial+cells+of+Cajal+dysfunction+in+partial+ileal+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Down-regulation of hydrogen sulfide biosynthesis accompanies murine interstitial cells of Cajal dysfunction in partial ileal obstruction.</a> PLoS One. 7, e48249(2012).</li>
<li>Yang, J., Zhao, J., Chen, P., Nakaguchi, T., Grundy, D., Gregersen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interdependency+between+mechanical+parameters+and+afferent+nerve+discharge+in+hypertrophic+intestine+of+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol-Gastr+L%22%5BJournal%5D)">Interdependency between mechanical parameters and afferent nerve discharge in hypertrophic intestine of rats.</a> Am J Physiol-Gastr L. 310, G376-G386 (2016).</li>
<li>Zhao, J., Liao, D., Yang, J., Gregersen, H. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2857539/">Biomechanical remodeling of obstructed guinea pig jejunum.</a> J Biomech. 43, 1322-1329 (2010).</li>
<li>Bowen, E. J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22129371">Duodenal Brunner's glade adenoma causing chronic small intestinal obstruction in a dog.</a> J Small Anim Pract. 53, 136-139 (2012).</li>
<li>Bettini, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypertrophy+of+intestinal+smooth+muscle+in+cats%5BTitle%5D)+AND+%22Res+Vet+Sci%22%5BJournal%5D)">Hypertrophy of intestinal smooth muscle in cats.</a> Res Vet Sci. 75, 43-53 (2003).</li>
<li>Macdonald, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smooth+muscle+phenotypic+plasticity+in+mechanical+obstruction+of+the+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurogastroenterol+Motil%22%5BJournal%5D)">Smooth muscle phenotypic plasticity in mechanical obstruction of the small intestine.</a> J Neurogastroenterol Motil. 20, 737-740 (2008).</li>
<li>Ha, S. E., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28806761">Transcriptome analysis of PDGFRα+ Cells identifies T-types Ca2+ channel CACNA1G as a new pathological marker for PDGFRα+ cell hyperplasia.</a> PLoS One. 12, e0182265(2017).</li>
<li>Park, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serum+response+factor+is+essential+for+prenatal+gastrointestinal+smooth+muscle+development+and+maintenance+of+differentiated+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurogastroenterol+Motil%22%5BJournal%5D)">Serum response factor is essential for prenatal gastrointestinal smooth muscle development and maintenance of differentiated phenotype.</a> J Neurogastroenterol Motil. 21, 589-602 (2015).</li>
<li>Spencer, N. J., Sanders, K. M., Smith, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migrating+motor+complexes+do+not+require+electrical+slow+waves+in+the+mouse+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Migrating motor complexes do not require electrical slow waves in the mouse small intestine.</a> J Physiol. 553, 881-893 (2003).</li>
<li>Langford, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coding+of+facial+expressions+of+pain+in+the+laboratory+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Coding of facial expressions of pain in the laboratory mouse.</a> Nat Methods. 7, 447-449 (2010).</li>
<li>Terez, S. D., Notari, L., Sun, R., Zhao, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+smooth+muscle+responses+to+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterol+Motil%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of smooth muscle responses to inflammation.</a> Neurogastroenterol Motil. 24, 802-811 (2012).</li>
<li>Chen, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smooth+muscle+hyperplasia%2Fhypertrophy+is+the+most+prominent+histological+change+in+Crohn%27s+fibrostenosing+bowel+strictures%3A+A+semiquantitative+analysis+by+using+a+novel+histological+grading+scheme%5BTitle%5D)+AND+%22J+Crohns+Colitis%22%5BJournal%5D)">Smooth muscle hyperplasia/hypertrophy is the most prominent histological change in Crohn's fibrostenosing bowel strictures: A semiquantitative analysis by using a novel histological grading scheme.</a> J Crohns Colitis. 11, 92-104 (2017).</li>
<li>Huizinga, J. D., Chen, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interstitial+Cells+of+Cajal%3A+Update+on+Basic+and+Clinical+Science%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Gastroenterol+Rep%22%5BJournal%5D)">Interstitial Cells of Cajal: Update on Basic and Clinical Science.</a> Curr Gastroenterol Rep. 16, 363(2014).</li>
<li>Jirkof, P., Touvieille, A., Cinelli, P., Arras, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Buprenorphine+for+pain+relief+in+mice%3A+repeated+injections+vs+sustained-release+depot+formulation%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">Buprenorphine for pain relief in mice: repeated injections vs sustained-release depot formulation.</a> Lab Animal. 49, 177-187 (2015).</li>
<li>Spencer, N. J., Dinning, P. J., Brookes, S. J., Costa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+into+the+mechanisms+underlying+colonic+motor+patterns%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Insights into the mechanisms underlying colonic motor patterns.</a> J Physiol. 594, 4099-4116 (2016).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Wykazaliśmy, że myszy poddawane operacji PO jelita konsekwentnie i powtarzalnie rozwijają przerost mięśni gładkich jelit, który naśladuje ludzką niedrożność jelit. Operacje niedrożności jelit zostały opracowane dla różnych zwierząt, w tym myszy7, szczurów10, świnek morskich11, psów12 i kotów13. Mysi model niedrożności jelit ma przewagę czasową, kosztową, rozmiarową i fenotypową nad innymi większymi mode...

Niedrożność jelit to częściowa lub całkowita blokada w jelicie cienkim lub grubym, która uniemożliwia przemieszczanie się strawionego pokarmu, płynów i gazów przez jelita1. Z powodu niedrożności, blokada powoduje pogrubienie ścian jelita, zwężając lumen2. Niedrożność jelit może wystąpić w wyniku operacji jamy brzusznej lub miednicy, które powodują tworzenie się tkanki adhezyjnej w jamie brzusznej lub z zaburzeń przewodu pokarmowego, takich jak choroby zapalne jelit (choroba Leśniowskiego-Crohna), zapalenie uchyłków, przepukliny, skręt jelit, zwężenie, wgłobienie, zaparcia, zaklinowanie kału, pseudo-niedrożność, nowotwory i nowotwory3,4,5. Niedrożność jelit w tych przypadkach często prowadzi do przerostu tuniki mięśniowej jelita6.
PO światła wywołuje wzdęcie jelit i zwiększa grubość warstwy mięśni gładkich wokół przeszkody w odpowiedzi na potrzebę kontynuowania perystaltyki funkcjonalnej7,8,9,10,11,12,13. Modele zwierzęce jelitowego PO zostały opracowane do badania przerostu mięśni gładkich u myszy7, rats10, świnki morskie11, dogs12, oraz cats13, u których konsekwentnie rozwija się podobny przerost w warstwach mięśni jelitowych.
Mysi model jelitowego PO jest najbardziej opłacalnym sposobem generowania i badania niedrożności jelit in vivo. Niedrożność jelita cienkiego przeprowadza się u myszy za pomocą silikonowego pierścienia chirurgicznie umieszczonego wokół jelita krętego. Myszy PO wykazały wczesny wzrost liczby komórek (hiperplazja) i wzrost grubości warstwy mięśniowej (hipertrofia) po operacji PO8,15. SMC są pierwotnymi komórkami plastikowymi, które rosną w warstwach mięśni gładkich w odpowiedzi na warunki przerostowe14, ale inne komórki, takie jak komórki ICC i PDGFRα+, które są ściśle związane z SMC, są również ponownie zasiedlane. Wcześniej informowaliśmy, że myszy PO rozwijają przerost w jelicie cienkim, w którym SMC są dedyferencjowane na komórki PDGFRα +, które są wysoce proliferacyjne7,15,16. I odwrotnie, ICC ulegają zwyrodnieniu i utracie w przerośniętych warstwach mięśni gładkich podczas rozwoju niewydolności jelitowej7. Kolejną ważną zaletą modelu PO jest jego zdolność do wywoływania zmian w jelitowym układzie nerwowym i propagowania neurogennych wzorców motorycznych. Głównym rozprzestrzeniającym się neurogennym wzorcem motorycznym w jelicie cienkim myszy jest migrujący kompleks motoryczny (MMC), który jest neurogenny i nie wymaga ICC ani elektrycznych fal wolnoobrotowych17. Model PO może dostarczyć jasnego wglądu w to, w jaki sposób MMC i nerwy jelitowe są przebudowywane przez częściową niedrożność.
Tutaj proponujemy mysi protokół do operacji PO jelita za pomocą silikonowego pierścienia. Myszy poddawane operacji PO niezawodnie wytwarzają przerost w osłonce mięśniowej jelita cienkiego. W obrębie mięśni przerostowych SMC, ICC, PDGFRα + i komórki neuronalne ulegają dramatycznej przebudowie.

<table><tbody><tr><td>Serweta chirurgiczna</td><td>Artykuły medyczne i weterynaryjne</td><td>SMS40</td><td>40" X100 jardów</td></tr><tr><td>Podkład, econ, pro plus</td><td>Artykuły medyczne i weterynaryjne</td><td>MSC281224</td><td>17x24"</td></tr><tr><td>Nożyczki do tęczówki</td><td>Braintree scientific, Inc</td><td>SC-i-130</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki do tęczówki</td><td>Vantage</td><td>V95-304</td><td></td></tr><tr><td>Pęseta elektroniczna i jubilerska Dumont</td><td></td><td>Dumont 98-180-3</td><td></td></tr><tr><td>Pleciony wchłanialny szew</td><td>Covidien polysorb</td><td>SL-5687G</td><td>5-0, poliglaktyna</td></tr><tr><td>Nylon niewchłanialny monofilament</td><td>AD chirurgiczny</td><td>S-N618R13</td><td>6-0, nylon</td></tr><tr><td>Ostrze chirurgiczne</td><td>Dynarex</td><td></td><td>No.15</td></tr><tr><td>Uchwyt igły</td><td>Jacobson mikronaczyniowy</td><td>36-1342TC</td><td>8,5 cala</td></tr><tr><td>Rękojeść skalpela</td><td>Flinn scientific</td><td>AB1049</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki mikrochirurgiczne</td><td>WPI</td><td>503305</td><td></td></tr><tr><td>Wazelina maść okulistyczna</td><td>Puralube VET</td><td></td><td>3,5 g</td></tr><tr><td>Fluriso (izofluran)</td><td>Vetone</td><td>V1 502017</td><td>250 ml</td></tr><tr><td>Zamknięcie ze skórą wzmocnioną paskiem Steri-strip</td><td>3M</td><td>R1547</td><td></td></tr><tr><td>Rękawice chirurgiczne</td><td>Medline</td><td>MSG2270</td><td></td></tr><tr><td>Maska na twarz z pętlą na uszy</td><td>Strefa bezpieczeństwa</td><td>RS700</td><td></td></tr><tr><td>Gąbki włókninowe z gazy Avant</td><td>PRM25444</td><td></td><td>pielęgnacyjny</td></tr><tr><td></td><td>Admiral&nbsp; craft OYC-2</td><td>725-A42</td><td>2,5 uncji</td></tr><tr><td>wacika</td><td>ChloraPrep</td><td>260103</td><td>2% w/v chlorheksydyny&nbsp; Glukonian (CHG) i 70% v/v Alkohol izopropylowy (IPA)</td></tr><tr><td>Aplikator z bawełnianą końcówką</td><td>Puritan</td><td>806-WC</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfina</td><td>Zoo pharm</td><td>BZ8069317</td><td>1 mg/ml</td></tr><tr><td>Siarczan gentamycyny</td><td>Vetone</td><td>G-6336-04</td><td>100 mg/ml</td></tr><tr><td>Szybko działający żelowy zmywacz w kremie</td><td>Veet</td><td>8111002</td><td></td></tr><tr><td>Strzykawka</td><td>AHS</td><td>AH01T2516</td><td>1 ml z igłą</td></tr><tr><td>Pierścień silikonowy</td><td>VWR</td><td>60985-720</td><td>o długości 6 mm, średnica zewnętrzna 4 mm, średnica wewnętrzna 3,5 mm</td></tr><tr><td>myszy C57BL/6</td><td>The Jackson Laboratory</td><td></td><td>4-6 tygodni</td></tr></tbody></table>

mysi model częściowej niedrożności jelit

A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

Niedrożność jelit, która utrudnia lub blokuje ruchy perystaltyczne, może być spowodowana przez zrosty brzuszne i większość chorób przewodu pokarmowego, w tym narośla nowotworowe. Jednak mechanizmy przebudowy komórkowej zaangażowane w niedrożność jelit i spowodowane przez nią są słabo poznane. Opracowano kilka zwierzęcych modeli niedrożności jelit, ale model mysi jest najbardziej efektywny pod względem kosztów i czasu. Model mysi wykorzystuje chirurgiczną implantację częściowej niedrożności jelit (PO), która ma wysoki wskaźnik śmiertelności, jeśli nie zostanie wykonana prawidłowo. Ponadto myszy poddawane operacji PO nie rozwijają przerostu, jeśli odpowiednia blokada nie jest używana lub nie jest prawidłowo umieszczona. W tym miejscu opisujemy szczegółowy protokół operacji PO, który powoduje wiarygodne i powtarzalne niedrożności jelit o bardzo niskiej śmiertelności. Protokół ten wykorzystuje chirurgicznie umieszczony silikonowy pierścień otaczający jelito kręte, który częściowo blokuje ruchy trawienne w jelicie cienkim. Częściowa blokada powoduje rozszerzenie jelita z powodu zatrzymania ruchu trawiennego. Rozszerzenie jelita wywołuje przerost mięśni gładkich po stronie jamy ustnej pierścienia, który stopniowo rozwija się przez 2 tygodnie, aż spowoduje śmierć. Chirurgiczny mysi model PO oferuje model in vivo przerostowej tkanki jelitowej przydatny do badania patologicznych zmian komórek jelitowych, w tym komórek mięśni gładkich (SMC), komórek śródmiąższowych Cajala (ICC), PDGFRα + i komórek neuronalnych podczas rozwoju niedrożności jelit.

Częściową niedrożność (PO) wywołano chirurgicznie u miesięcznych myszy poprzez umieszczenie pierścienia silikonowego wokół jelita krętego w pobliżu zwieracza krzyżowo-krętkowego. Pierścień ten spowodował częściową blokadę w jelicie krętym. Przeprowadzono również operacje pozorowane (SO) bez zastosowania pierścienia u myszy o tym samym wieku i płci; myszy te nie wykazały żadnych objawów podobnych do tych stwierdzonych u myszy z PO. Myszy szybko doszły do siebie po operacji PO w ciągu kilku...

Niedrożność jelit to częściowe lub całkowite zablokowanie jelita, które może powodować silne bóle brzucha, nudności, wymioty i uniemożliwiać oddawanie stolca. Ta procedura tworzenia częściowych zatkań jelit u myszy jest wiarygodna w badaniu mechanizmów leżących u podstaw patologicznego wzrostu i śmierci komórek w jelicie.

Mysi model częściowej niedrożności jelit

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including ...

Ogólnym celem tej procedury chirurgicznej jest niezawodne i konsekwentne wytwarzanie niedrożności jelit u myszy, które ułatwiają badanie zmian molekularnych i fenotypowych w tkance przewodu pokarmowego, które występują w odpowiedzi na niedrożności. Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie przewodu pokarmowego dotyczące mechanizmów komórkowych leżących u podstaw zmian fenotypowych, które wynikają z niedrożności jelit. Główną zaletą tej techniki jest to, że jest niezawodna, powtarzalna i opłacalna.Implikacje tej techniki rozciągają się w kierunku terapii niedrożności jelit, ponieważ naśladują one warunki fenotypowe obserwowane w ludzkich patologiach spowodowanych niedrożnością jelit. Procedurę tę zademonstrują Se Eun Ha, doktorantka i Lai Wei, doktorantka, oboje z naszego laboratorium. Po potwierdzeniu braku reakcji na uszczypnięcie palca u nogi nałóż maść na oczy zwierzęcia i umieść mysz na podkładce rozgrzewającej.Usuń włosy z brzucha za pomocą kremu do depilacji i oczyść odsłoniętą skórę 70% etanolem. Zdezynfekuj miejsce operacyjne roztworem jodu powidonu i obłóż zwierzę sterylnym papierem o wymiarach 25 na 50 centymetrów z otworem o wymiarach 2,5 na 2,5 centymetra na obszar operacyjny. Zabezpiecz serwetę sterylnymi paskami na granicach otworu i skóry i użyj ostrza skalpela numer 15, aby wykonać trzycentymetrowe podłużne nacięcie skóry.Za pomocą kleszczy i nożyczek chirurgicznych ostrożnie oddziel skórę od warstwy mięśniowo-otrzewnowej bez nacinania tkanki i zlokalizuj kresę białą. Następnie za pomocą mikrokleszczyków i nożyczek przeciąć dwa centymetry wzdłuż kresy białej, aby odsłonić jamę wewnątrzotrzewnową i ostrożnie zlokalizować jelito ślepe. Za pomocą mikrokleszczyków powoli i delikatnie przesuwaj jelito ślepe, proksymalną okrężnicę i jelito kręte z jamy śródotrzewnowej na sterylną serwetę i natychmiast zwilż tkankę jelitową 0,9% sterylną gazą nasączoną solą fizjologiczną.Zlokalizuj krezkę między jelitem krętym a bliższą okrężnicą i wykonaj jednocentymetrowe nacięcie w krezce równolegle do i tuż pod jelitem krętym, uważając, aby nie przeciąć naczyń krwionośnych. Przetnij wzdłużnie, aby otworzyć naczynie krezkowe i użyj mikrokleszczyków, aby otworzyć autoklawowany, sterylizowany silikonowy pierścień o odpowiedniej wielkości. Włóż jeden koniec pierścienia przez nacięcie i doprowadź koniec pierścienia do kontaktu z pierwszym końcem, aby przywrócić instrument do pierwotnego kształtu.Upewnij się, że pierścień całkowicie otacza jelito kręte i zamknij pierścień szwem. Nacięcia w krezce powinny być na tyle duże, aby zmieścił się pierścień, ale na tyle małe, aby nie doszło do nacięcia naczyń krwionośnych. Upewnij się również, że pierścień jest umieszczony na jelicie krętym, a nie na okrężnicy.Ostrożnie przywróć jelita do ich pierwotnego położenia anatomicznego i użyj wchłanialnego szwu w prostym ciągłym ściegu, aby zamknąć warstwę mięśniowo-otrzewnową wzdłuż kresy białej. Oczyść krwawienie 0,9% sterylną gazą nasączoną solą fizjologiczną i użyj nowego nylonowego szwu i prostego ciągłego szwu, aby zamknąć skórę. Następnie zdezynfekuj miejsce rany jodonem powidonu i wstrzyknij antybiotyki przed umieszczeniem zwierzęcia w bramie grzewczej z monitorowaniem aż do pełnego leżenia.W tym eksperymencie jelito cienkie było częściowo wypełnione i rozdęte po ośmiu dniach od operacji częściowej niedrożności oraz w pełni wypełnione i rozdęte po 13 dniach po operacji częściowej niedrożności w porównaniu z kontrolnymi zwierzętami pozorowanymi. Co więcej, tworzenie się osadów kałowych w okrężnicy w ósmym i 13 dniu po operacji częściowej niedrożności myszy było zmniejszone w porównaniu ze zwierzętami kontrolnymi. Warstwa mięśni gładkich jelita krętego tuż przed pierścieniem uległa przerostowi po ośmiu dniach od operacji częściowej niedrożności, a dalszy przerost zaobserwowano w 13 dniu.Komórki mięśni gładkich rosły w coraz szybszym tempie we wszystkich trzech warstwach tkanki po ośmiu i 13 dniach od operacji częściowej niedrożności, co oceniono za pomocą analizy immunochemicznej, podczas gdy komórki śródmiąższowe Cajala ulegały degeneracji w warstwach wewnątrz- i międzymięśniowych. Podzbiory komórek alfa-dodatnich receptora płytkowego czynnika wzrostu, znane również jako komórki alfa PDGFR, były dynamicznie przebudowywane w warstwach międzymięśniowych myszy z częściową niedrożnością, których wzrost obserwowano osiem dni po operacji, które uległy degeneracji do 13 dnia. Ponadto komórki neuronalne zostały również znacznie utracone w obszarach międzymięśniowych i śródmięśniowych myszy z częściową niedrożnością zarówno w ósmym, jak i trzynastym dniu po operacji.Po opanowaniu tej techniki należy ją wykonać w ciągu 30 minut, aby zapewnić przetrwanie myszy. Podczas wykonywania tej procedury ważne jest, aby leczyć tkankę szybko i delikatnie. Po tej procedurze można wykonać inne metody, takie jak badanie trendów żołądkowo-jelitowych, aby odpowiedzieć na dodatkowe pytania dotyczące tego, jak niedrożność zmienia perystaltykę jelit.Po jej opracowaniu technika ta utorowała drogę naukowcom zajmującym się badaniami żołądkowo-jelitowymi do zbadania konsekwencji niedrożności jelit u myszy. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak szybko i prawidłowo umieścić pierścień wokół jelita krętego myszy w celu stworzenia częściowej niedrożności jelit. Nie zapominaj, że praca z narzędziami chirurgicznymi i igłami może być bardzo niebezpieczna, więc podejmij odpowiednie środki ostrożności.Pamiętaj również, aby nosić sterylne rękawiczki i ćwiczyć techniki aseptyczne podczas wykonywania tej procedury.

a-mouse-model-of-intestinal-partial-obstruction

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Pooperacyjny niedrożność jelit (POI) jest powikłaniem operacji w obrębie jamy brzusznej, prowadzącym do zwiększonej zachorowalności i przedłużonego pobytu w szpitalu. Ze względu na brak strategii profilaktycznych lub terapeutycznych konieczne są intensywne badania. W związku z tym opracowaliśmy zstandaryzowany i wykonalny model mysi, aby zbadać patofizjologię POI oraz przestudiować potencjalne opcje terapeutyczne.

Funkcjonalna ocena motywności jelit i stanu zapalnego ściany jelita u gryzoni: analizy w zestandaryzowanym modelu manipulacji jelitowej

Ten film demonstruje generowanie modelu pętli jelita krętego do badania przepuszczalności jelit w modelu mysim. Metoda ta zapewnia żywy model do zrozumienia funkcji bariery nabłonkowej i wynikającej z niej odpowiedzi immunologicznej.

Model pętli jelita krętego myszy: model chirurgiczny do badania przepuszczalności jelit u myszy

W tym filmie opisujemy procedurę chirurgiczną polegającą na generowaniu pętli proksymalnej okrężnicy myszy lub segmentu pcLoop, po której następuje doświetlna iniekcja markerów fluorescencyjnych do segmentu w celu zbadania przepuszczalności nabłonka jelitowego.

Generowanie mysiego modelu pętli proksymalnej jelita grubego: procedura chirurgiczna mająca na celu wygenerowanie pętli proksymalnej jelita grubego i pomiar przepuszczalności jelit poprzez wykrycie markerów fluorescencyjnych w surowicy po wstrzyknięciu doświetlnym

Tutaj prezentujemy częściowe podwiązanie dróg żółciowych jako chirurgiczny model uszkodzenia i regeneracji wątroby u gryzoni.

Częściowe podwiązanie dróg żółciowych u myszy: kontrolowany model zlokalizowanej cholestazy obturacyjnej

Mysia kolostomia dystalna, nowy model dywersyjnego zapalenia jelita grubego u myszy C57BL / 6

Nieszczelność zespolenia lub awaria po operacji jest główną przyczyną zachorowalności i śmiertelności pooperacyjnej. Nasz zabieg chirurgiczny do tworzenia zespolenia jelita grubego jest wiarygodną i powtarzalną metodą badania mechanizmów gojenia się zespoleń.

Tworzenie zespolenia okrężnicy u myszy

Rozregulowana funkcja bariery nabłonkowej jelit i reakcje immunologiczne są cechami charakterystycznymi nieswoistego zapalenia jelit, które pozostają słabo zbadane z powodu braku modeli fizjologicznych. W tym miejscu opisujemy model pętli jelitowej myszy, który wykorzystuje dobrze unaczyniony i zewnętrzny odcinek jelita do badania przepuszczalności błony śluzowej i rekrutacji leukocytów in vivo.

Funkcjonalna ocena przepuszczalności jelit i migracji przeznabłonkowej neutrofili u myszy przy użyciu standaryzowanego modelu pętli jelitowej

Opisujemy, jak wygenerować powszechnie stosowany model chirurgiczny uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego jelit (IRI) u gryzoni. Zabieg polega na zamknięciu tętnicy krezkowej górnej, a następnie przywróceniu przepływu krwi. Model ten jest przydatny w badaniach nad okluzyjnymi przyczynami jelitowego IRI zarówno w medycynie weterynaryjnej, jak i ludzkiej.

Model gryzoni uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego jelit poprzez niedrożność tętnicy krezkowej górnej

Jednoczęściowe obejście dwunastnicy i jelita krętego (SADI-S) to nowa procedura bariatryczna o ważnych efektach metabolicznych. W tym artykule przedstawiamy wiarygodny i powtarzalny model SADI-S u myszy.

Pomostowanie dwunastnicy i jelita krętego z pojedynczym zespoleniem z rękawowym modelem resekcji żołądka u myszy

Opisujemy mysi model pooperacyjnej niedrożności jelit generowany przez manipulację jelitową. Funkcję pasażu pokarmowego, zmiany patologiczne i aktywację komórek odpornościowych oceniano 24 godziny po zabiegu.

Pooperacyjny model mysiej niedrożności jelit

Poznaj chirurgiczną metodę tworzenia częściowej niedrożności jelit u myszy do badania zmian molekularnych i fenotypowych w tkance przewodu pokarmowego. Technika ta jest niezawodna, powtarzalna i opłacalna.

Mysi model częściowej niedrożności jelit

Przeglądaj więcej filmów