Mysi model częściowej niedrożności jelit

Ogólnym celem tej procedury chirurgicznej jest niezawodne i konsekwentne wytwarzanie niedrożności jelit u myszy, które ułatwiają badanie zmian molekularnych i fenotypowych w tkance przewodu pokarmowego, które występują w odpowiedzi na niedrożności. Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie przewodu pokarmowego dotyczące mechanizmów komórkowych leżących u podstaw zmian fenotypowych, które wynikają z niedrożności jelit. Główną zaletą tej techniki jest to, że jest niezawodna, powtarzalna i opłacalna.

Implikacje tej techniki rozciągają się w kierunku terapii niedrożności jelit, ponieważ naśladują one warunki fenotypowe obserwowane w ludzkich patologiach spowodowanych niedrożnością jelit. Procedurę tę zademonstrują Se Eun Ha, doktorantka i Lai Wei, doktorantka, oboje z naszego laboratorium. Po potwierdzeniu braku reakcji na uszczypnięcie palca u nogi nałóż maść na oczy zwierzęcia i umieść mysz na podkładce rozgrzewającej.

Usuń włosy z brzucha za pomocą kremu do depilacji i oczyść odsłoniętą skórę 70% etanolem. Zdezynfekuj miejsce operacyjne roztworem jodu powidonu i obłóż zwierzę sterylnym papierem o wymiarach 25 na 50 centymetrów z otworem o wymiarach 2,5 na 2,5 centymetra na obszar operacyjny. Zabezpiecz serwetę sterylnymi paskami na granicach otworu i skóry i użyj ostrza skalpela numer 15, aby wykonać trzycentymetrowe podłużne nacięcie skóry.

Za pomocą kleszczy i nożyczek chirurgicznych ostrożnie oddziel skórę od warstwy mięśniowo-otrzewnowej bez nacinania tkanki i zlokalizuj kresę białą. Następnie za pomocą mikrokleszczyków i nożyczek przeciąć dwa centymetry wzdłuż kresy białej, aby odsłonić jamę wewnątrzotrzewnową i ostrożnie zlokalizować jelito ślepe. Za pomocą mikrokleszczyków powoli i delikatnie przesuwaj jelito ślepe, proksymalną okrężnicę i jelito kręte z jamy śródotrzewnowej na sterylną serwetę i natychmiast zwilż tkankę jelitową 0,9% sterylną gazą nasączoną solą fizjologiczną.

Zlokalizuj krezkę między jelitem krętym a bliższą okrężnicą i wykonaj jednocentymetrowe nacięcie w krezce równolegle do i tuż pod jelitem krętym, uważając, aby nie przeciąć naczyń krwionośnych. Przetnij wzdłużnie, aby otworzyć naczynie krezkowe i użyj mikrokleszczyków, aby otworzyć autoklawowany, sterylizowany silikonowy pierścień o odpowiedniej wielkości. Włóż jeden koniec pierścienia przez nacięcie i doprowadź koniec pierścienia do kontaktu z pierwszym końcem, aby przywrócić instrument do pierwotnego kształtu.

Upewnij się, że pierścień całkowicie otacza jelito kręte i zamknij pierścień szwem. Nacięcia w krezce powinny być na tyle duże, aby zmieścił się pierścień, ale na tyle małe, aby nie doszło do nacięcia naczyń krwionośnych. Upewnij się również, że pierścień jest umieszczony na jelicie krętym, a nie na okrężnicy.

Ostrożnie przywróć jelita do ich pierwotnego położenia anatomicznego i użyj wchłanialnego szwu w prostym ciągłym ściegu, aby zamknąć warstwę mięśniowo-otrzewnową wzdłuż kresy białej. Oczyść krwawienie 0,9% sterylną gazą nasączoną solą fizjologiczną i użyj nowego nylonowego szwu i prostego ciągłego szwu, aby zamknąć skórę. Następnie zdezynfekuj miejsce rany jodonem powidonu i wstrzyknij antybiotyki przed umieszczeniem zwierzęcia w bramie grzewczej z monitorowaniem aż do pełnego leżenia.

W tym eksperymencie jelito cienkie było częściowo wypełnione i rozdęte po ośmiu dniach od operacji częściowej niedrożności oraz w pełni wypełnione i rozdęte po 13 dniach po operacji częściowej niedrożności w porównaniu z kontrolnymi zwierzętami pozorowanymi. Co więcej, tworzenie się osadów kałowych w okrężnicy w ósmym i 13 dniu po operacji częściowej niedrożności myszy było zmniejszone w porównaniu ze zwierzętami kontrolnymi. Warstwa mięśni gładkich jelita krętego tuż przed pierścieniem uległa przerostowi po ośmiu dniach od operacji częściowej niedrożności, a dalszy przerost zaobserwowano w 13 dniu.

Komórki mięśni gładkich rosły w coraz szybszym tempie we wszystkich trzech warstwach tkanki po ośmiu i 13 dniach od operacji częściowej niedrożności, co oceniono za pomocą analizy immunochemicznej, podczas gdy komórki śródmiąższowe Cajala ulegały degeneracji w warstwach wewnątrz- i międzymięśniowych. Podzbiory komórek alfa-dodatnich receptora płytkowego czynnika wzrostu, znane również jako komórki alfa PDGFR, były dynamicznie przebudowywane w warstwach międzymięśniowych myszy z częściową niedrożnością, których wzrost obserwowano osiem dni po operacji, które uległy degeneracji do 13 dnia. Ponadto komórki neuronalne zostały również znacznie utracone w obszarach międzymięśniowych i śródmięśniowych myszy z częściową niedrożnością zarówno w ósmym, jak i trzynastym dniu po operacji.

Po opanowaniu tej techniki należy ją wykonać w ciągu 30 minut, aby zapewnić przetrwanie myszy. Podczas wykonywania tej procedury ważne jest, aby leczyć tkankę szybko i delikatnie. Po tej procedurze można wykonać inne metody, takie jak badanie trendów żołądkowo-jelitowych, aby odpowiedzieć na dodatkowe pytania dotyczące tego, jak niedrożność zmienia perystaltykę jelit.

Po jej opracowaniu technika ta utorowała drogę naukowcom zajmującym się badaniami żołądkowo-jelitowymi do zbadania konsekwencji niedrożności jelit u myszy. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak szybko i prawidłowo umieścić pierścień wokół jelita krętego myszy w celu stworzenia częściowej niedrożności jelit. Nie zapominaj, że praca z narzędziami chirurgicznymi i igłami może być bardzo niebezpieczna, więc podejmij odpowiednie środki ostrożności.

Pamiętaj również, aby nosić sterylne rękawiczki i ćwiczyć techniki aseptyczne podczas wykonywania tej procedury.