Zakrzepica żył głębokich wywołana zastojem u myszy monitorowanych za pomocą ultrasonografii wysokiej częstotliwości

Ogólnym celem tej procedury jest wywołanie zakrzepicy żył głębokich u myszy przy użyciu modelu zastoju żyły głównej dolnej oraz monitorowanie skrzeplin za pomocą ultradźwięków o wysokiej częstotliwości. Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie zakrzepicy żylnej dotyczące tego, w jaki sposób czynnik farmakologiczny, gen lub typ komórki może wpływać na tworzenie się skrzepliny lub jej ustąpienie. Główną zaletą tej techniki jest to, że zarówno powstawanie, jak i ustępowanie skrzepliny można nieinwazyjnie określić ilościowo u myszy.

Po raz pierwszy wpadliśmy na pomysł tej metody, gdy badaliśmy, jak denamiować i nieinwazyjnie monitorować tworzenie się skrzepliny w żyle głównej dolnej myszy. Na początek użyj kleszczy, aby podnieść dolną część skóry brzucha ośmio- do 10-tygodniowej myszy C57 black six. I użyj nożyczek chirurgicznych, aby wykonać pionowe nacięcie równoległe do obu stron linea alba od linii środkowej.

Wykonaj poziome nacięcie w górnej części brzucha. Następnie następuje powtórzenie nacięć przez warstwę mięśni brzucha. Odchyl skórę i mięsień od nacięcia, aby odsłonić jamę brzuszną.

I umieść zwilżoną gazę po obu stronach rany. Delikatnie uciskaj obie strony brzucha, aby uzewnętrznić jelita na gazie. I umieść drugą warstwę zwilżonej gazy na uzewnętrznionej tkance.

Pod mikroskopem preparacyjnym odsuń na bok tłuszcz otrzewnowy, aby odsłonić żyłę główną wewnętrzną lub IVC między żyłami nerkowymi i biodrowymi. I zlokalizuj boczne gałęzie IVC. Za pomocą kleszczy delikatnie tępo stępij każdą boczną gałąź, aby przebić się przez powięź bez uszkadzania otaczających naczyń.

Następnie ostrożnie chwyć tłuszcz wokół jednej gałęzi, aby podnieść żyłę. I przełóż kawałek jedwabnego szwu z sześcioma kreskami pod naczyniem. Następnie użyj kleszczy do szwów i standardowej techniki wiązania węzłów chirurgicznych, aby wykonać chirurgiczne podwiązanie z co najmniej trzema rzutami wokół bocznej gałęzi, aby całkowicie zamknąć naczynie.

Alternatywnie użyj Hemoclips. Aby oddzielić aortę od IVC, należy przeprowadzić rozwarstwienie wokół i między obydwoma naczyniami bezpośrednio dystalnie od lewej żyły nerkowej, nie uszkadzając żadnego z naczyń. Gdy między naczyniami zostanie utworzone przezroczyste okienko, przełóż odcinek sześciopunktowego szwu jedwabnego zero pod IVC i aortą brzuszną.

I użyj kleszczy, aby przeciągnąć szew przez okno. Za pomocą kleszczy do szwów podwiązać IVC trzema rzutami bezpośrednio dystalnie do lewej żyły nerkowej, aby uzyskać pełną niedrożność naczynia. Upewnij się, że aorta brzuszna pozostała nieprzerwana.

I że wszystkie boczne gałęzie zostały podwiązane. IVC będzie wyglądał na rozszerzony dystalnie od miejsca podwiązania. I nie będzie widać przepływu krwi.

Zwróć tłuszcz otrzewnowy i jelita do jamy brzusznej. I użyj kleszczyków do szwów i sześciu jedwabnych szwów z zerową kreską, aby oddzielnie zamknąć warstwy mięśni i skóry za pomocą ściegów biegowych. Następnie umieść zwierzę w inkubatorze o temperaturze 34 stopni Celsjusza na co najmniej 30 minut z monitorowaniem aż do pełnego wyzdrowienia.

Umieść butelkę z żelem ultradźwiękowym przez cewki systemu podgrzewania wody, aby podgrzać żel do 37 stopni Celsjusza. 24 godziny po podwiązaniu umieść zwierzę na platformie analitycznej. I nałóż żel elektrodowy na cztery elektrody platformy.

Gdy zwierzę znajduje się w pozycji leżącej, przymocuj łapy do elektrod. I włóż nasmarowany termometr do odbytnicy. Umieść gazę z boku zwierzęcia, aby złapać nadmiar żelu do ultradźwięków.

Następnie nałóż żel na odsłoniętą skórę. I zobrazuj IVC zgodnie ze standardowymi protokołami obrazowania ultrasonograficznego. Korzystając z systemu mikroobrazowania o wysokiej częstotliwości, IVC można zidentyfikować w widoku podłużnym przed podwiązaniem.

Prędkość przepływu można określić za pomocą obrazowania dopplerowskiego falą pulsacyjną. Bezpośrednio po podwiązaniu widoczny jest spadek przepływu krwi. 24 godziny po podwiązaniu gęste skrzepliny można uwidocznić wewnątrz IVC za pomocą ultrasonografii.

Ultrasonografia pozwala również na ilościowe określenie prędkości przepływu krwi w naczyniach. Za pomocą kolorowego Dopplera przed, bezpośrednio po i 24 godziny po podwiązaniu. Po opanowaniu skrzepliny można indukować w ciągu 30 do 45 minut, w zależności od obecności i liczby bocznych gałęzi, jeśli technika jest wykonywana prawidłowo.

Podejmując się tej procedury, należy pamiętać, aby nie spieszyć się i być precyzyjnym, ale delikatnym w ruchach, ponieważ stosunkowo łatwo jest rozerwać naczynia. Po tej procedurze można wykonać inne metody, takie jak analiza immunofluorescencyjna, histologiczna lub cytometria przepływowa, aby odpowiedzieć na dodatkowe pytania dotyczące zawartości komórkowej skrzeplin lub określić ilościowo określone białka będące przedmiotem zainteresowania.