Name: Ocena anoreksji opartej na aktywności u myszy (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 26 s
Description: Poznaj metodę oceny anoreksji opartej na aktywności u myszy, aby badać neurobiologię zaburzeń odżywiania. Technika ta pozwala analizować mechanizmy neuronalne niedostępne w badaniach na ludziach.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca została sfinansowana przez NARSAD Independent Investigator Award oraz IMHRO Rising Star Depression Research Award in Memory of George Largay dla SCD.

Wszystkie opisane tutaj metody zostały zatwierdzone przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami i Użytkowania (IACUC) Uniwersytetu Kalifornijskiego w San Diego.
1. Myszy
<ol>
	<li>Wybierz odpowiednią odmianę myszy do badania.</li>
	<li>Kup myszy od dostawcy lub wzmocnij linię, aby uzyskać odpowiednie liczby eksperymentalne.</li>
	<li>Grupowy zakupił myszy w obiekcie dla zwierząt przez co najmniej 1 tydzień przed rozpoczęciem badania, aby umożliwić długi okres aklimatyzacji.</li>
	<li>Rozpocznij fazę aklimatyzacji przedeksperymentalnej, gdy myszy mają 8 tygodni.</li>
</ol>
2. Mieszkalnictwo
<ol>
	<li>Wybierz klatki, które są wystarczająco duże, aby pomieścić niezakłócone koło do biegania, pojemnik na żywność i butelkę z wodą.</li>
	<li>Reguluj temperaturę i wilgotność w pomieszczeniu, aby uzupełnić testowaną hipotezę. 
	UWAGA: Wyższe temperatury ograniczą rozwój ABA28.</li>
</ol>
3. Koła jezdne
<ol>
	<li>Wybierz kółka z komunikacją bezprzewodową, aby uniknąć potencjalnego rozproszenia uwagi i zaplątania się w klatkę, patrz Tabela materiałów dla example.</li>
</ol>
4. Butelki na wodę
<ol>
	<li>Wybierz butelkę na wodę, która nie będzie konkurować o miejsce z kółkiem do biegania lub pojemnikiem na żywność w klatce domowej.</li>
	<li>Jeśli prowadzisz leczenie farmakologiczne w wodzie pitnej, przyklej butelkę taśmą klejącą, aby stworzyć środowisko wrażliwe na światło.</li>
</ol>
5. Jedzenie
<ol>
	<li>Wybierz niskotłuszczową karmę odpowiednią do testowanej hipotezy (np. Envigo's Rodent Diet 8604). 
	UWAGA: Diety bogate w tłuszcze i cukier mogą zmniejszyć rozwój ABA29.</li>
	<li>Użyj małego szklanego słoika, aby przygotować karmę o średnicy około 65 cm x wysokości 50 cm. 
	UWAGA: Zamiast szklanego słoika można użyć automatycznego podajnika, co może zmniejszyć stres, ograniczając ingerencję badacza. Może to być najkorzystniejsze w przypadku wykonywania badań ABA z manipulacjami lekami.</li>
</ol>
6. Faza aklimatyzacji przedeksperymentalnej
<ol>
	<li>Skonfiguruj obszar eksperymentalny, wybierając stojak na klatkę w pobliżu laptopa i piast kół. Ograniczy to problemy z transmisją danych.</li>
	<li>Włącz laptopa i koncentratory bezprzewodowe.</li>
	<li>Otwórz oprogramowanie do zarządzania kierownicą na laptopie.
	<ol>
		<li>Spójrz na oprogramowanie, aby upewnić się, że oba koncentratory są aktywne.</li>
		<li>Otwórz "narzędzia" i wybierz "usuń koła". Powtórz ten krok 5 razy.</li>
		<li>Zamknij oprogramowanie, a następnie otwórz je ponownie.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Umieść 3 baterie AAA w zestawie baterii podstawy osi.
	<ol>
		<li>Podłącz przewody akumulatora do osprzętu podstawy osi. Zostanie on odłączony przed użyciem. Zamknij akumulator w podstawie osi.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Sprawdź oprogramowanie, aby upewnić się, że rozstaw osi jest wymieniony z identyfikatorem "1" pod odpowiednim koncentratorem bezprzewodowym. Jeśli baza nie jest wymieniona jako ID "1", odczep akumulator i zacznij od kroku 6.2.</li>
	<li>Zmień identyfikator koła z "1" na identyfikator myszy w kolumnie nazwy.</li>
	<li>Przyklej podstawę koła jezdnego do dolnej części klatki za pomocą taśmy klejącej, aby zapewnić stabilność. Nie pozwól, aby jakakolwiek taśma wystawała, ponieważ myszy będą żuć odsłoniętą taśmę.</li>
	<li>Wybierz tarczę koła jezdnego bez skorodowanego elementu magnetycznego.</li>
	<li>Umieść koło na podstawie i obróć je, aby sprawdzić odstęp od ścian klatki i kraty.</li>
	<li>Zakręć tarczą o określoną liczbę obrotów, aby upewnić się, że oprogramowanie do obsługi kół prawidłowo zlicza obroty.</li>
	<li>Nie dopuść do zagubienia kawałków karmy w pościeli lub zamoczenia, przyklejając spód słoika z jedzeniem taśmą do podłogi klatki, z dala od koła jezdnego i butelki z wodą. 
	UWAGA: Mokra karma zwiększa spożycie pokarmu w porównaniu do suchej karmy 30.</li>
	<li>Umieść 5 sztuk zupy w słoiku. 
	UWAGA: Karma w fazie przedeksperymentalnej jest dostępna ad libitum i nie musi być ważona. Narażenie na koła jezdne w okresie aklimatyzacji może się nasilić ABA21,31.</li>
	<li>Umieść pełną butelkę z wodą w klatce i podawaj wodę ad libitum.</li>
	<li>Powtarzaj, aż wszystkie klatki będą miały bezprzewodowo połączone koło jezdne, jedzenie i wodę.</li>
	<li>Pojedynczo umieść myszy w odpowiednich klatkach.</li>
	<li>W oprogramowaniu do zarządzania kołem przejdź do "plik" i kliknij "rozpocznij pobieranie".</li>
	<li>Obserwuj aktualizację oprogramowania, aby upewnić się, że obroty kół są zliczane, a system działa prawidłowo.</li>
	<li>Przyzwyczajaj myszy do eksperymentalnych warunków utrzymania przez łącznie 2 dni.</li>
	<li>Oceń myszy w tej fazie, aby upewnić się, że są wystarczająco zdrowe, aby poradzić sobie z eksperymentem ABA.</li>
	<li>Każdego dnia sprawdzaj klatki pod kątem zalania butelkami z wodą. Jeśli butelki zostały zalane, wymień starą klatkę na nową i powtórz niezbędne kroki, aby bez przeszkód przykleić kółka i żywność do klatki.</li>
	<li>W dniu 2 sprawdź klatki pod kątem poziomu pokarmu. Jeśli jedzenia jest mało, uzupełnij je 2 kawałkami karmy. Zrób to, nie przeszkadzając myszom. 
	UWAGA: Jeśli podczas fazy aklimatyzacji przedeksperymentalnej jakakolwiek mysz wykazuje hipofagię lub ma niedowagę, należy usunąć mysz z badania.</li>
</ol>
7. Eksperymentalna faza bazowa - Dzień 1
<ol>
	<li>Wybierz "koniec", a następnie "rozpocznij akwizycję" w oprogramowaniu do zarządzania kołami.</li>
	<li>Odmierz 9 g karmy w małej plastikowej zlewce na skali o czułości 0,00 g. Zapisz dokładną wagę.</li>
	<li>Delikatnie wyjmij mysz i zważ ją w dużej plastikowej zlewce na wadze o czułości 0,0 g. Rekordowa waga. 
	UWAGA: Bardzo ważne jest, aby ograniczyć stres myszy podczas obsługi, dlatego należy obchodzić się z nimi cierpliwie.</li>
	<li>Wyrzuć całą żywność aklimatacyjną.</li>
	<li>Wyszukaj w pościeli żywność, która mogła zostać wyjęta ze słoika i również ją wyrzuć.</li>
	<li>Pozostaw butelkę z wodą na miejscu, ale upewnij się, że jest odpowiednio napełniona.</li>
	<li>Zabrudzone koła jezdne czyścić 70% izopropanolem i ręcznikami papierowymi.</li>
	<li>Jeśli konieczne było czyszczenie, po wyschnięciu izopropanolu umieść mysz z powrotem w klatce i umieść klatkę na stojaku.</li>
	<li>Powtarzaj te kroki, aż każda mysz zostanie zważona, a 9 g jedzenia zostanie odmierzone i umieszczone w klatkach.</li>
</ol>
8. Eksperymentalna faza bazowa - dni 2 - 7
<ol>
	<li>Wróć do obiektu dla zwierząt codziennie o tej samej porze. Nie różnij się w wykonywaniu pomiarów o więcej lub poniżej 10 minut.</li>
	<li>Odmierz 9 g karmy w małej plastikowej zlewce na skali o czułości 0,00 g. Zapisz dokładną wagę.</li>
	<li>Delikatnie wyjmij mysz i zważ ją w dużej plastikowej zlewce na wadze o czułości 0,0 g. Rekordowa waga.</li>
	<li>Wyciągnij słoik z jedzeniem z klatki i wrzuć całe jedzenie do małej zlewki na skali 0,00 g.
	<ol>
		<li>Jeśli kał i ściółka znajdują się w słoiku z jedzeniem, wybierz całą ściółkę i kał. Za pomocą małego sitka wetrzyj sproszkowaną żywność do zlewki wagowej. Usuń kał przed zrobieniem tego pęsetą (jeśli to konieczne). 
		UWAGA: Pościel nie rozpadnie się na mniejsze kawałki, aby zmieścić się w sitku.</li>
		<li>Poszukaj resztek jedzenia w klatce i dodaj je do zlewki, która ma zostać zważona. Zapisz ilość pozostałego jedzenia. 
		UWAGA: Jeśli konieczne jest przeszukanie ściółki i klatki, najlepiej zrobić to, gdy mysz znajduje się w zlewce wagowej lub klatce transferowej, aby zmniejszyć stres.</li>
		<li>Wyrzuć całe jedzenie.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Wytrzyj słoik do czysta i włóż z powrotem do klatki. W razie potrzeby wymień taśmę.</li>
	<li>Umieść wcześniej odmierzone 9 g nowej żywności w słoiku.</li>
	<li>Zabrudzone koła jezdne oczyść 70% izopropanolem, a następnie wysusz koła. Rób to po jednej klatce na raz i nie zmieniaj przypadkowo kół.</li>
	<li>Zakończ i wznawiaj akwizycję w programie do uruchamiania kół co drugi dzień.</li>
	<li>Powtarzaj te kroki aż do rozpoczęcia fazy ograniczenia.</li>
</ol>
9. Faza Eksperymentalnych Ograniczeń - Dzień 1
<ol>
	<li>Zakończ i rozpocznij akwizycję w oprogramowaniu do zarządzania kołami.</li>
	<li>Waż myszy, stare i nowe pokarmy zgodnie z protokołem podstawowym.</li>
	<li>Nie czyść teraz kół. Może to rozpraszać myszy podczas ich ograniczonego okresu karmienia.</li>
	<li>Pozwól na dostęp do nowego pokarmu, 9 g karmy, przez 6 godzin. Rejestruj czas podawania jedzenia. 
	UWAGA: Czas podczas cyklu świetlnego, w którym żywność jest dostępna, będzie miał wpływ na rozwój ABA. Ponieważ myszy zwykle śpią podczas cyklu światła, zapewnienie dostępu do pożywienia w tym czasie zaostrza rozwój ABA, ponieważ myszy zwykle nie spożywają w tym czasie większości swojego dziennego pokarmu. I odwrotnie, myszy, które mają dostęp do pożywienia podczas ciemnego cyklu, rozwijają ABA wolniej32. Dostosowanie czasu dostępu do pożywienia spowoduje wydłużenie lub skrócenie czasu przeżycia (<silna klasa="xfig">Rysunek 2). Aktywność antycypacyjna żywności (FAA) to nadpobudliwość, która występuje bezpośrednio przed podaniem jedzenia32,33,34. FAA może wpływać na rozwój ABA, ponieważ wykazano, że odmowa dostępu do ruchu koła podczas FAA poprawia zachowanie ABA32.
	<ol>
		<li>Usuń jedzenie dokładnie 6 godzin później dla każdej myszy i zmierz pozostałą ilość. Rejestruj czas wyjmowania żywności.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Wyczyść teraz koła, jeśli to konieczne, i spróbuj to zrobić, nie spóźniając się z wyciąganiem jedzenia z kolejnych klatek.</li>
	<li>Zważ jedzenie i oblicz różnicę w jedzeniu, aby określić ilość jedzenia zjedzonego na mysz.</li>
	<li>Oblicz wagę rezygnacji dla każdej myszy. 
	UWAGA: Waga dropout to sytuacja, w której mysz musi zostać usunięta z eksperymentu, gdy osiągnie 75% końcowego pomiaru wyjściowej masy ciała. Na przykład, jeśli mysz waży 20 g na początku fazy restrykcji, gdy osiągnie 15 g, musi zostać usunięta z eksperymentu.</li>
	<li>Przechowuj pod ręką kopię odważników do wyrzucania w pomieszczeniu dla zwierząt. 
	UWAGA: Można próbować eksperymentów oceniających powrót do zdrowia po ABA; Pokarm jest dostarczany ad libitum lub koła są blokowane w celu zbadania procesu, w którym myszy wracają do zdrowej masy ciała34.</li>
</ol>
10. Faza eksperymentalnych ograniczeń - dni od 2 do 14
<ol>
	<li>Powtórz wszystkie kroki pomiaru w protokole Ograniczenia dnia 1. Nie wznawiaj ponownie pobierania koła.</li>
	<li>Jeśli mysz osiągnie wagę upuszczenia (75% jej wyjściowej masy ciała), wyjmij koło i słoik z jedzeniem z klatki i zapewnij wystarczającą ilość jedzenia na dnie klatki, a następnie kontynuuj z innymi myszami. Gdy wszystkie klatki zostaną opuszczone, poddaj eutanazji wszystkie myszy, które osiągnęły upuszczoną wagę.</li>
	<li>Pozostaw kółko włączone dla każdej myszy na czas trwania eksperymentu.</li>
	<li>Codziennie sprawdzaj każdą mysz pod kątem obrażeń. W razie potrzeby obcinaj uszkodzone paznokcie u stóp, lecz rany itp. Poproś personel zajmujący się opieką nad zwierzętami o poradę, jeśli nie masz pewności, jak postępować z urazem.</li>
</ol>
11. Zakończenie badania
<ol>
	<li>Jeśli badanie trwało 14 dni, zważ wszystkie myszy w dniu 15. Ograniczenie Waga dnia 1 jest uważana za masę wyjściową. 
	UWAGA: Czas trwania badania może być modyfikowany w celu uwzględnienia testowanej hipotezy. Dłuższe okresy dostępu do żywności mogą być wykorzystane do wydłużenia czasu trwania badania.</li>
	<li>W razie potrzeby poddaj myszy eutanazji.</li>
	<li>Zanieś brudny sprzęt do odpowiednich pomieszczeń.</li>
	<li>Zakończ pobieranie liczby kół w 15 dniu, aby uzyskać dane z 10 pełnych dni.</li>
	<li>Wyłącz bezprzewodowe piasty kół.</li>
	<li>Wyodrębnianie danych.</li>
	<li>Analizowanie danych.</li>
</ol>

<ol><li>Hall, J. F., Hanford, P. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity+as+a+function+of+a+restricted+feeding+schedule%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Physiol+Psychol%22%5BJournal%5D)">Activity as a function of a restricted feeding schedule.</a> J Comp Physiol Psychol. 47 (5), 362-363 (1954).</li>
<li>Hall, J. F., Smith, K., Schnitzer, S. B., Hanford, P. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevation+of+activity+level+in+the+rat+following+transition+from+ad+libitum+to+restricted+feeding%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Physiol+Psychol%22%5BJournal%5D)">Elevation of activity level in the rat following transition from ad libitum to restricted feeding.</a> J Comp Physiol Psychol. 46 (6), 429-433 (1953).</li>
<li>Routtenberg, A., Kuznesof, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-starvation+of+rats+living+in+activity+wheels+on+a+restricted+feeding+schedule%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Physiol+Psychol%22%5BJournal%5D)">Self-starvation of rats living in activity wheels on a restricted feeding schedule.</a> J Comp Physiol Psychol. 64 (3), 414-421 (1967).</li>
<li>Taksande, B. G., Chopde, C. T., Umekar, M. J., Kotagale, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agmatine+attenuates+hyperactivity+and+weight+loss+associated+with+activity-based+anorexia+in+female+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Biochem+Behav%22%5BJournal%5D)">Agmatine attenuates hyperactivity and weight loss associated with activity-based anorexia in female rats.</a> Pharmacol Biochem Behav. 132, 136-141 (2015).</li>
<li>Boulton, A. A., Baker, G. B., Iverson, M. T. -M. Activity anorexia. <a target="_blank" href="https://www.amazon.com/Animal-Models-Psychiatry-Neuromethods-v/dp/0896031985">Neuromethods, 18, Animal Models in Psychiatry</a>. 1, Humana Press. Totowa, NJ. 267-311 (1991).</li>
<li>Klenotich, S. J., Dulawa, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+activity-based+anorexia+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">The activity-based anorexia mouse model.</a> Methods Mol Biol. 829, 377-393 (2012).</li>
<li>Kron, L., Katz, J. L., Goryzynski, G., Weiner, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperactivity+in+anorexia+nervosa%3A+a+fundamental+clinical+feature%5BTitle%5D)+AND+%22Compr+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Hyperactivity in anorexia nervosa: a fundamental clinical feature.</a> Compr Psychiatry. 19 (5), 433-440 (1978).</li>
<li>Hebebrand, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperactivity+in+patients+with+anorexia+nervosa+and+in+semistarved+rats%3A+evidence+for+a+pivotal+role+of+hypoleptinemia%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Hyperactivity in patients with anorexia nervosa and in semistarved rats: evidence for a pivotal role of hypoleptinemia.</a> Physiol Behav. 79 (1), 25-37 (2003).</li>
<li>Birmingham, C. L., Su, J., Hlynsky, J. A., Goldner, E. M., Gao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mortality+rate+from+anorexia+nervosa%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Eat+Disord%22%5BJournal%5D)">The mortality rate from anorexia nervosa.</a> Int J Eat Disord. 38 (2), 143-146 (2005).</li>
<li>Walsh, B. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluoxetine+after+weight+restoration+in+anorexia+nervosa%3A+a+randomized+controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Fluoxetine after weight restoration in anorexia nervosa: a randomized controlled trial.</a> JAMA. 295 (22), 2605-2612 (2006).</li>
<li>Kaye, W. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Double-blind+placebo-controlled+administration+of+fluoxetine+in+restricting-+and+restricting-purging-type+anorexia+nervosa%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Double-blind placebo-controlled administration of fluoxetine in restricting- and restricting-purging-type anorexia nervosa.</a> Biol Psychiatry. 49 (7), 644-652 (2001).</li>
<li>Jagielska, G., Kacperska, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outcome%2C+comorbidity+and+prognosis+of+anorexia+nervosa%5BTitle%5D)+AND+%22Psychiatr+Pol%22%5BJournal%5D)">Outcome, comorbidity and prognosis of anorexia nervosa.</a> Psychiatr Pol. 51 (2), 205-218 (2017).</li>
<li>Murray, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+eating%2C+exercise%2C+shape%2C+and+weight+related+symptomatology+in+males+with+muscle+dysmorphia+and+anorexia+nervosa%5BTitle%5D)+AND+%22Body+Image%22%5BJournal%5D)">A comparison of eating, exercise, shape, and weight related symptomatology in males with muscle dysmorphia and anorexia nervosa.</a> Body Image. 9 (2), 193-200 (2012).</li>
<li>Nieuwoudt, J. E., Zhou, S., Coutts, R. A., Booker, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Symptoms+of+muscle+dysmorphia%2C+body+dysmorphic+disorder%2C+and+eating+disorders+in+a+nonclinical+population+of+adult+male+weightlifters+in+Australia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Strength+Cond+Res%22%5BJournal%5D)">Symptoms of muscle dysmorphia, body dysmorphic disorder, and eating disorders in a nonclinical population of adult male weightlifters in Australia.</a> J Strength Cond Res. 29 (5), 1406-1414 (2015).</li>
<li>Griffiths, S., Mond, J. M., Murray, S. B., Touyz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positive+beliefs+about+anorexia+nervosa+and+muscle+dysmorphia+are+associated+with+eating+disorder+symptomatology%5BTitle%5D)+AND+%22Aust+N+Z+J+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Positive beliefs about anorexia nervosa and muscle dysmorphia are associated with eating disorder symptomatology.</a> Aust N Z J Psychiatry. 49 (9), 812-820 (2015).</li>
<li>Achamrah, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+differences+in+response+to+activity-based+anorexia+model+in+C57Bl%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Sex differences in response to activity-based anorexia model in C57Bl/6 mice.</a> Physiol Behav. 170, 1-5 (2017).</li>
<li>Perez-Leighton, C. E., Grace, M., Billington, C. J., Kotz, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+spontaneous+physical+activity+in+prediction+of+susceptibility+to+activity+based+anorexia+in+male+and+female+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Role of spontaneous physical activity in prediction of susceptibility to activity based anorexia in male and female rats.</a> Physiol Behav. 135, 104-111 (2014).</li>
<li>Pirke, K. M., Broocks, A., Wilckens, T., Schweiger, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Starvation-induced+hyperactivity+in+the+rat%3A+the+role+of+endocrine+and+neurotransmitter+changes%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Biobehav+Rev%22%5BJournal%5D)">Starvation-induced hyperactivity in the rat: the role of endocrine and neurotransmitter changes.</a> Neurosci Biobehav Rev. 17 (3), 287-294 (1993).</li>
<li>Doerries, L. E. Gender differences in activity anorexia: predictable, paradoxical, or enigmatic. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDoerries%2C+LE+%22Activity+anorexia%3A+Theory%2C+research%2C+and+treatment%22">Activity anorexia: Theory, research, and treatment</a>. Epling, W. F., Pierce, W. D. , Erlbaum. Mahwah, NJ. 69-77 (1996).</li>
<li>Woods, D. J., Routtenberg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%22Self-starvation%22+in+activity+wheels%3A+developmental+and+chlorpromazine+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Physiol+Psychol%22%5BJournal%5D)">"Self-starvation" in activity wheels: developmental and chlorpromazine interactions.</a> J Comp Physiol Psychol. 76 (1), 84-93 (1971).</li>
<li>Pare, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+food+consumption+and+running+activity+on+the+activity-stress+ulcer+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Dig+Dis%22%5BJournal%5D)">The influence of food consumption and running activity on the activity-stress ulcer in the rat.</a> Am J Dig Dis. 20 (3), 262-273 (1975).</li>
<li>Boakes, R. A., Mills, K. J., Single, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+differences+in+the+relationship+between+activity+and+weight+loss+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Sex differences in the relationship between activity and weight loss in the rat.</a> Behav Neurosci. 113 (5), 1080-1089 (1999).</li>
<li>Pjetri, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identifying+predictors+of+activity+based+anorexia+susceptibility+in+diverse+genetic+rodent+populations%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Identifying predictors of activity based anorexia susceptibility in diverse genetic rodent populations.</a> PLoS One. 7 (11), (2012).</li>
<li>Gelegen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Difference+in+susceptibility+to+activity-based+anorexia+in+two+inbred+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Neuropsychopharmacol%22%5BJournal%5D)">Difference in susceptibility to activity-based anorexia in two inbred strains of mice.</a> Eur Neuropsychopharmacol. 17 (3), 199-205 (2007).</li>
<li>Shimizu, N., Oomura, Y., Kai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress-induced+anorexia+in+rats+mediated+by+serotonergic+mechanisms+in+the+hypothalamus%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Stress-induced anorexia in rats mediated by serotonergic mechanisms in the hypothalamus.</a> Physiol Behav. 46 (5), 835-841 (1989).</li>
<li>Siegfried, Z., Berry, E. M., Hao, S., Avraham, Y. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12818708">Animal models in the investigation of anorexia nervosa.</a> Physiol Behav. 79 (1), 39-45 (2003).</li>
<li>Kim, S. F. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22465439">Animal models of eating disorders.</a> Neuroscience. 211, 2-12 (2012).</li>
<li>Gutierrez, E., Cerrato, M., Carrera, O., Vazquez, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat+reversal+of+activity-based+anorexia%3A+implications+for+the+treatment+of+anorexia+nervosa%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Eat+Disord%22%5BJournal%5D)">Heat reversal of activity-based anorexia: implications for the treatment of anorexia nervosa.</a> Int J Eat Disord. 41 (7), 594-601 (2008).</li>
<li>Brown, A. J., Avena, N. M., Hoebel, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-fat+diet+prevents+and+reverses+the+development+of+activity-based+anorexia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Eat+Disord%22%5BJournal%5D)">A high-fat diet prevents and reverses the development of activity-based anorexia in rats.</a> Int J Eat Disord. 41 (5), 383-389 (2008).</li>
<li>Boakes, R. A., Juraskova, I. The role of drinking in the suppression of food intake by rodent activity. Behav Neurosci. 115 (3), 718-730 (2001).</li>
<li>Boakes, R. A., Dwyer, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Weight+loss+in+rats+produced+by+running%3A+effects+of+prior+experience+and+individual+housing%5BTitle%5D)+AND+%22Q+J+Exp+Psychol%22%5BJournal%5D)">Weight loss in rats produced by running: effects of prior experience and individual housing.</a> Q J Exp Psychol. 50 (2), 129-148 (1997).</li>
<li>Dwyer, D. M., Boakes, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity-based+anorexia+in+rats+as+failure+to+adapt+to+a+feeding+schedule%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Activity-based anorexia in rats as failure to adapt to a feeding schedule.</a> Behav Neurosci. 111 (1), 195-205 (1997).</li>
<li>Beneke, W. M., Schulte, S. E., Vander Tuig, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+analysis+of+excessive+running+in+the+development+of+activity+anorexia%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">An analysis of excessive running in the development of activity anorexia.</a> Physiol Behav. 58 (3), 451-457 (1995).</li>
<li>Dixon, D. P., Ackert, A. M., Eckel, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of%2C+and+recovery+from%2C+activity-based+anorexia+in+female+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Development of, and recovery from, activity-based anorexia in female rats.</a> Physiol Behav. 80 (2-3), 273-279 (2003).</li>
<li>Klenotich, S. J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22395732">Olanzapine, but not fluoxetine, treatment increases survival in activity-based anorexia in mice.</a> Neuropsychopharmacology. 37 (7), 1620-1631 (2012).</li>
<li>Ho, E. V., Klenotich, S. J., McMurray, M. S., Dulawa, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity-Based+Anorexia+Alters+the+Expression+of+BDNF+Transcripts+in+the+Mesocorticolimbic+Reward+Circuit%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Activity-Based Anorexia Alters the Expression of BDNF Transcripts in the Mesocorticolimbic Reward Circuit.</a> PLoS ONE. 11 (11), 0166756(2016).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Eksperyment ABA może być modyfikowany przez eksperymentatorów w celu przetestowania różnych szczepów, wieku, leków i różnych innych zmiennych AN. Biorąc pod uwagę zmienność genetyczną, dostosowanie koła do biegania lub okresu dostępu do pożywienia zwiększyłoby lub zmniejszyłoby nasilenie objawów i wskaźnik rezygnacji. Może to służyć do wydłużenia lub skrócenia czasu trwania eksperymentu, w zależności od interesującego pytania eksperymentalnego. 
Dokładny pomiar spożycia pokarmu jest krytyczną ...

Od 1953 roku gryzonie wykazują paradoksalną nadpobudliwość na kółkach do biegania, gdy mają swobodny dostęp do kół podczas dobrowolnego hipofagii, gdy dostępność pożywienia jest ograniczona1. I odwrotnie, gryzonie nie tracą gwałtownie masy ciała, gdy oferuje się im jedzenie zgodnie z harmonogramem bez kół do biegania lub gdy są trzymane z kółkami do biegania i oferują jedzenie ad libitum1,2,3. Model ABA niezawodnie powoduje dramatyczne spadki masy ciała, hipofagię, hipotermię, utratę rui i zwiększoną stymulację osi HPA4. Ostatecznie ABA prowadzi do śmierci, chyba że podmiot zostanie usunięty z paradygmatu5. Paradygmat ABA dostarcza naukowcom zwierzęcego modelu AN, złożonego zaburzenia odżywiania, które charakteryzuje się poważną dysregulacją zachowań związanych z apetytem, dotykającą około 1 na 100 kobiet i mniejszy odsetek mężczyzn6. Pacjenci cierpiący na AN często wykazują nadpobudliwość, składającą się z ekstremalnych ilości ćwiczeń i/lub ogólnego niepokoju7,8. Ze wskaźnikiem śmiertelności wynoszącym około 10%, AN ma najwyższy wskaźnik śmiertelności spośród wszystkich zaburzeń psychicznych9. Obecne leczenie AN ogranicza się do terapii poznawczych, ponieważ nie ma zatwierdzonych metod leczenia farmakologicznego dla osób cierpiących na AN10,11.
AN jest zazwyczaj uważane za zaburzenie dotykające głównie kobiety. Jako diagnoza, która jest 10 razy bardziej prawdopodobna u kobiet niż u mężczyzn, kobiety są tradycyjnie w centrum uwagi w AN12. Należy jednak zwrócić szczególną uwagę na wykluczenie mężczyzn z badań. Podczas gdy diagnoza AN pozostaje niższa u mężczyzn, dysmorfia mięśniowa (MD) jest stanem, który ma wiele podobieństw do AN, w którym obraz ciała jest zniekształcony, a dieta jest często zaburzona. Istnieje poparcie dla poglądu, że MD i AN mogą być klasyfikowane w podobny sposób13,14,15. Może to sugerować, że niektóre przypadki MD reprezentują "męską wersję" AN. W kontekście modeli zwierzęcych niektóre doniesienia sugerują, że mężczyźni są bardziej podatni na paradygmat ABA niż samice. Na przykład niedawne badanie wykazało wyższą śmiertelność i zmniejszone spożycie pokarmu w porównaniu z samicami myszy C57Bl/6 16. Jednym z predyktorów podatności na ABA jest spontaniczna aktywność fizyczna (SPA). Szczury z wyższym lub niższym SPA są bardziej skłonne do utraty wagi w paradygmacie ABA, przy czym samce szczurów wykazują silniejszy efekt niż samice17. I odwrotnie, zaobserwowano, że samice gryzoni ćwiczą więcej niż samce podczas fazy restrykcji ABA18. Ponadto badania na myszach Balb/cJ wykazały odwrotny efekt myszy C57Bl/6, gdzie samice myszy mają wyższy wskaźnik śmiertelności i zmniejszone spożycie pokarmu w porównaniu z samcami (<silna klasa="xfig">Ryc. 1)<klasa sup="xref">6. Ze względu na różne wyniki między płciami w paradygmacie ABA i rosnącą świadomość mężczyzn z zaburzonymi wzorcami żywieniowymi, zarówno mężczyźni, jak i kobiety powinni być testowani.
Oprócz różnic płci w paradygmacie ABA, wiek i szczep muszą być brane pod uwagę przy wyborze tematów. Dorastające myszy mogą dokładniej modelować AN, ponieważ AN zwykle pojawia się w okresie dojrzewania, co zaobserwowano u szczurów i myszy19,20,21,22. Szczepy, które są bardziej aktywne niż inne na poziomie wyjściowym, mają wyższy wskaźnik podatności i nasilenia ABA23. Szczepy, o których wiadomo, że mają wyższy poziom lęku, takie jak DBA/2, mają zwiększoną aktywność podczas biegania na kółkach, co wskazywałoby na szybszy wskaźnik rezygnacji w paradygmacie ABA24. W zależności od projektu eksperymentalnego, wybrany szczep może być dostosowany tak, aby zmaksymalizować czas trwania ABA.
Paradoks ABA nie występuje wyłącznie u myszy. Inne ssaki, w tym szczury, chomiki, myszoskoczki, świnie, wiewiórki i świnki morskie, wykazały to zjawisko6. Zachowanie zjawiska ABA u różnych gatunków ssaków sugeruje, że paradygmat ABA może stanowić narzędzie translacyjne do badania mechanizmów leżących u podstaw zachowań podobnych do anoreksji u ludzi. W szczególności myszy są dobrze przystosowane do badania mechanizmów leżących u podstaw ABA. Myszy mogą być gęsto trzymane, a czas generacji jest stosunkowo krótki. Myszy mają w pełni zsekwencjonowany genom i dostępne są liczne szczepy wsobne, niekrewniacze i specjalne, takie jak kongeny. Wygenerowano ogromną liczbę genetycznie zmanipulowanych linii, co czyni je idealnymi do badań oceniających wpływ genetyki na zaburzenia, takie jak AN. W zależności od pytania, naukowcy mogą manipulować złożonymi obwodami neuronalnymi i/lub ekspresją genów, aby ocenić zachowanie w paradygmacie ABA, potencjalnie odpowiadając na pytania dotyczące wpływu genetycznego, które nie są możliwe podczas badania ludzi.
Obecnie istnieje ograniczona liczba zwierzęcych modeli AN. Modele stresu wywołują hipofagię u gryzoni za pomocą szczypania ogona, hipofagii wywołanej nowością, zimnego pływania i stymulacji mózgu. Wywołując stres, zmiany w osi HPA zmniejszają apetyt, co skutkuje zmniejszeniem masy ciała25. Jednak oś HPA jest również silnie stymulowana przez ABA, który obejmuje również dodatkowe cechy AN, takie jak nadpobudliwość. Innym modelem, który należy wziąć pod uwagę w badaniu AN, jest model przewlekłego ograniczania pokarmu. Ograniczając pokarm do zakresu od 40 do 60% ad libitum, można naśladować fizjologiczną reakcję na niedożywienie26. Chociaż ta metoda jest skuteczna w badaniu skutków nieodpowiedniego żywienia, nie odtwarza podstawowego problemu AN, którym jest dobrowolne ograniczanie żywności. W paradygmacie ABA zwierzęta są pozbawione dostępu do pożywienia na część dnia, ale także dobrowolnie ograniczają spożycie pokarmu, jeśli obecne jest również koło. Modele genetyczne zostały również wykorzystane do zbadania etiologii AN. Naukowcy odkryli czynniki neurochemiczne i genetyczne związane z AN, takie jak gen BDNF i neuroprzekaźniki dopamina i serotonina27. Wykorzystanie modeli genetycznych ma kluczowe znaczenie dla zrozumienia mechanizmów neuronalnych stojących za AN. Jednak badania asocjacyjne całego genomu dla AN nie przyniosły jeszcze znaczących trafień i nie zidentyfikowano żadnych rzadkich wariantów AN. Przyszłe badania powinny łączyć podejście genetyczne z modelem ABA, aby lepiej zrozumieć fenotypy związane z AN.
Opracowanie modeli zwierzęcych dla całych zaburzeń psychicznych jest praktycznie niemożliwe ze względu na złożoność i niejednorodność ludzkich zaburzeń. Jednak poprzez modelowanie specyficznych, dobrze zdefiniowanych elementów zaburzenia psychicznego można uzyskać unikalny wgląd w leżącą u ich podstaw neurobiologię lub patofizjologię. Takie spostrzeżenia biologiczne mogą być następnie wykorzystane do identyfikacji nowych metod leczenia. Paradygmat ABA gryzoni stanowi zatem przedkliniczne narzędzie do badania mechanizmów leżących u podstaw zachowań podobnych do AN, których nie można etycznie badać u ludzi, takich jak skutki manipulacji genetycznych, zaburzenia obwodów nerwowych i konsekwencje niektórych czynników środowiskowych.

<table><tbody><tr><td>Bezprzewodowe niskoprofilowe koła jezdne, koncentratory, oprogramowanie</td><td>Med Associates</td><td>ENV-047</td><td></td></tr><tr><td>Standard Teklad Rodent Chow</td><td>Envigo</td><td>8604</td><td></td></tr><tr><td>8-tygodniowe myszy</td><td>Jackson Laboratories</td><td>Balb/cJ</td><td>Szczep użyty w naszym badaniu - Może używać innych szczepów do oceny ABA</td></tr><tr><td>Scout Pro Scale 200 g</td><td>Ohaus</td><td>SPE202</td><td>Służy do ważenia myszy</td></tr><tr><td>Scout Pro Scale 400 g</td><td>Ohaus</td><td>SPE402</td><td>Służy do ważenia żywności</td></tr></tbody></table>

ocena anoreksji opartej na aktywności u myszy

Assessing Activity-based Anorexia in Mice

Gryzonie rozwijają anoreksję opartą na aktywności (ABA), gdy są narażone na ograniczony harmonogram karmienia i mają swobodny dostęp do koła do biegania. Stany te prowadzą do zagrażającego życiu zmniejszenia masy ciała. Jednak gryzonie narażone tylko na jeden z tych warunków ostatecznie przystosowują się do przywrócenia normalnej masy ciała. Chociaż wzmożone bieganie w połączeniu ze zmniejszeniem dobrowolnego spożycia pokarmu wydaje się paradoksalne w warunkach ABA, zachowanie ABA obserwuje się u wielu gatunków ssaków. 
Paradygmat ABA dostarcza zwierzęcego modelu dla jadłowstrętu psychicznego (AN), zaburzenia odżywiania z poważną dysregulacją apetytu. Obiekty są zakwaterowane pojedynczo z bezpłatnym dostępem do koła do biegania. Każdego dnia pacjentowi oferuje się jedzenie przez ograniczony czas. W trakcie eksperymentu masa ciała osoby badanej zmniejsza się z powodu wysokiej aktywności i niskiego spożycia kalorii. Czas trwania badania różni się w zależności od tego, jak długo jedzenie jest podawane codziennie, rodzaju oferowanego pokarmu, szczepu myszy, tego, czy testowane są narkotyki i czynników środowiskowych.
Brak skutecznych metod leczenia farmakologicznego dla pacjentów z AN, ich niska jakość życia, wysokie koszty leczenia i wysoka śmiertelność wskazują na pilną potrzebę dalszych badań nad AN. Przedstawiamy podstawowy zarys przeprowadzania eksperymentów ABA na myszach, oferując metodę badania zachowań podobnych do AN-u w celu opracowania nowych terapii. Protokół ten jest zoptymalizowany do stosowania u myszy Balb/cJ, ale można nim łatwo manipulować dla innych szczepów, zapewniając dużą elastyczność w pracy z różnymi pytaniami, zwłaszcza związanymi z czynnikami genetycznymi ABA.

czynnik neurotroficzny pochodzenia mózgowego (BDNF), białko przyczyniające się do regulacji odżywiania oraz utrzymania masy ciała, występuje w obniżonym stężeniu w surowicy pacjentów z AN35. W niniejszym eksperymencie oceniono wpływ zaplanowanego karmienia, dostępu do kołowrotka lub obu tych czynników na ekspresję BDNF w hipokampie (HPC), obszarze brzusznym pola nakrywki (VTA), jądrze półleżącym (NAc) oraz przyśrodkowej korze przedczołowej (mPFC). Oceńono również e...

Myszy indywidualnie wyposażone w koło do biegania, podczas gdy mają ograniczony dostęp do jedzenia, zmniejszają spożycie jedzenia i zwiększają aktywność na kole do biegania. To eksperymentalne zjawisko nazywa się anoreksją opartą na aktywności. Paradygmat ten stanowi eksperymentalne narzędzie do badania neurobiologii i zachowań leżących u podstaw jadłowstrętu psychicznego.

Ocena anoreksji opartej na aktywności u myszy

Rodents develop activity-based anorexia (ABA) when exposed to a restricted feeding schedule and allowed free access to a running wheel. These conditions ...

Ogólnym celem tego eksperymentu jest zbadanie neurobiologii i zachowania leżącego u podstaw jadłowstrętu psychicznego. Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie psychiatrii związane z zaburzeniami odżywiania, takie jak to, jakie są neuronalne podstawy jadłowstrętu psychicznego i jakie obwody mózgowe są zaangażowane. Główną zaletą tej techniki jest to, że można ją wykorzystać do badania niektórych mechanizmów leżących u podstaw anoreksji, których nie można ocenić u ludzi.Skonfiguruj obszar eksperymentalny, wybierając stojak na klatkę w pobliżu laptopa i piast kół. Ograniczy to problemy z transmisją danych. Teraz aktywuj połączenie między piastami kół a oprogramowaniem.Najpierw otwórz oprogramowanie do zarządzania kołami, aby upewnić się, że oba koncentratory bezprzewodowe są aktywne. Z poziomu oprogramowania zresetuj domyślne połączenia kół. Otwórz narzędzia i wybierz usuń koła.Powtórz ten krok pięć razy, a następnie zamknij oprogramowanie i otwórz je ponownie. Następnie zapewnij moc kołom. Podłącz przewody akumulatora do osprzętu koła i włóż akumulatory do podstawy kierownicy.Następnie spójrz na oprogramowanie. Rozstaw osi powinien być wymieniony wraz z identyfikatorem jednego z nich w odpowiednim hubie bezprzewodowym. Jeśli nie, odczep akumulator, usuń koło w oprogramowaniu i spróbuj ponownie.Jeśli koło zostanie rozpoznane, zastąp dowód osobisty odpowiednim identyfikatorem zwierzęcia.Następnie przyklej podstawę koła jezdnego do dolnej części klatki za pomocą taśmy klejącej, aby zapewnić stabilność. Nie pozwól, aby jakakolwiek taśma wystawała, ponieważ myszy będą żuć odsłoniętą taśmę. Następnie umieść tarczę koła bieżnego bez skorodowanego magnesu na podstawie i obróć koło, aby sprawdzić odstęp od ścian klatki i kraty.Zakręć dyskiem i sprawdź, czy każdy obrót jest prawidłowo rejestrowany w oprogramowaniu. Następnie użyj taśmy klejącej, aby przymocować słoik z żywnością do klatki. Umieść go z dala od koła jezdnego i butelki z wodą.Następnie umieść dwa kawałki zupy w słoiku, przymocuj pełną butelkę wody do klatki i dodaj ściółkę do dna klatki. Po przygotowaniu wszystkich klatek w ten sposób, pojedynczo umieść myszy w odpowiednich klatkach. Gdy wszystkie myszy znajdą się w swoich klatkach, przejdź do oprogramowania i kliknij plik, a następnie rozpocznij akwizycję.W trakcie eksperymentu rozpocznij nowe przejęcia, aby przerwać fazy próbne. Teraz pozwól myszom przyzwyczaić się do warunków mieszkaniowych przez dwa pełne dni. Podczas tej fazy zdecyduj, czy każda mysz jest wystarczająco zdrowa, aby poradzić sobie z eksperymentem ABA.Trzeciego dnia eksperymentu odmierz około dziewięciu gramów karmy i zapisz wagę z dokładnością do 1/1000 grama. Następnie ostrożnie wyjmij mysz z klatki i zważ ją w dużej plastikowej zlewce do i najbliższej dziesiątej części grama. Zrób to przy minimalnym obciążeniu myszy.Gdy mysz jest poza klatką, wyszukaj i usuń całe jedzenie z klatki. Oprócz wyjmowania jedzenia ze słoika, przejrzyj pościel w poszukiwaniu rozrzuconego jedzenia. Następnie, jeśli to konieczne, wyczyść koło jezdne 70% izopropanolem i ręcznikami papierowymi.Przed powrotem myszy do klatki upewnij się, że izopropanol wysechł. Następnie załaduj mysz i dziewięć gramów karmy do klatki. Następnego dnia wróć do obiektu dla zwierząt w ciągu 10 minut od ostatniej wizyty.Ponownie załaduj dziewięć gramów karmy do małej plastikowej zlewki i zapisz dokładną wagę. Ponownie delikatnie wyjmij mysz i zważ ją przy minimalnym obciążeniu myszy. Teraz wyjmij słoik z jedzeniem z klatki i zbadaj go.Usuń kał pęsetą i użyj sitka nad zlewką, aby usunąć ściółkę. Pokrusz większe kawałki jedzenia, aby przeszły przez filtr, pozostawiając tylko ściółkę w sitku. Następnie przeszukaj ściółkę klatki w poszukiwaniu resztek jedzenia i dodaj je do zlewki.Następnie zapisz masę pokarmu, który pozostał w klatce. Następnie wytrzyj słoik do czysta i włóż go z powrotem do pustej klatki. W razie potrzeby nałóż nową taśmę.Następnie załaduj do słoika przygotowaną dziewięciogramową rację żywnościową. Tak jak poprzednio, wyczyść zabrudzone koła jezdne i włóż je z powrotem do klatek. Resetuj wszystkie klatki w ten sposób codziennie.W piątym, siódmym i dziewiątym dniu uruchom ponownie komputerowe pobieranie danych w programie do uruchamiania koła. Po zebraniu danych bazowych w dniu 11 uruchom ponownie pobieranie danych i rozpocznij fazę ograniczeń. Zasadniczo postępuj zgodnie z protokołem podstawowym z kilkoma zmianami.Po pierwsze, nie usuwaj kół jezdnych podczas zmiany żywności. Po drugie, ogranicz dostęp zwierząt do ich dziewięciogramowej racji żywnościowej do zaledwie sześciu godzin. Okres karmienia może być dzienny lub nocny.Oba wybory są uzasadnione. Po sześciu godzinach zważ żywność pozostałą w słoiku i klatce. W tym momencie, jeśli to konieczne, wyczyść koło, ale zrób to szybko, aby można było szybko zająć się następną klatką.Każdego dnia fazy ograniczeń powtarzaj tę procedurę. Teraz bardzo ważne staje się monitorowanie utraty wagi zwierząt. Jeśli waga myszy spadnie do 75% jej wyjściowej masy ciała, usuń ją z eksperymentu.Zapewnij tym myszom nieograniczoną ilość jedzenia z podłogi klatki i brak dostępu do koła do biegania. Po ocenie wszystkich klatek, upuszczone myszy należy poddać eutanazji, chyba że ma być badane ich powrót do zdrowia. Za pomocą opisanego eksperymentu oceniono grupę myszy z anoreksją opartą na aktywności wraz z trzema grupami kontrolnymi.Zgodnie z opisaną procedurą, pokarm został ograniczony do sześciu godzin dobowych. Kiedy mysz została usunięta z badania z powodu nadmiernej utraty wagi, losowo wybrana mysz kontrolna również została usunięta. Masa ciała uległa zmniejszeniu w dniach od pierwszego do piątego w obu grupach narażonych na zaplanowane karmienie, co logicznie korelowało ze zmniejszonym spożyciem pokarmu.Co ciekawe, utrata wagi nie miała wpływu na aktywność biegową na kółkach. Po badaniu behawioralnym mózgi zostały pobrane i zamrożone do analizy biochemicznej. Jedna z analiz tkanki z brzusznego obszaru nakrywki wykazała, że biegnące koło znacznie zwiększało ekspresję BDNF, podczas gdy ograniczenie pokarmu zwiększało ekspresję NCAM1 MRNA, ale nie zmieniało ekspresji MRNA BDNF.Próbując wykonać tę procedurę, należy pamiętać o ograniczeniu stresu u myszy, konsekwentnym mierzeniu czasu pomiarów, uzbroieniu się w cierpliwość, aby uzyskać dokładne odczyty i konsekwentnym sprawdzaniu oprogramowania do pracy koła pod kątem problemów technicznych. Po tej procedurze można przeprowadzić inne metody, takie jak immunohistochemia i wiązanie radioligandów, na mózgach myszy, aby odpowiedzieć na dodatkowe pytania dotyczące funkcji wirusa w paradygmacie anoreksji.

assessing-activity-based-anorexia-in-mice

Research

JoVE Journal

Behavior

Zachowanie

Kopanie nor, budowanie gniazd i gromadzenie zapasów to typowe dla gatunku czynności, które myszy chętnie wykonują w warunkach laboratoryjnych. Niniejszy artykuł opisuje, w jaki sposób można je w prosty i niedrogi sposób ocenić. Protokoły te są niezwykle wrażliwe na szczep myszy, uszkodzenia mózgu oraz choroby. Co więcej, stanowią one „wzbogacenie środowiskowe” dla myszy i ucieleśniają aspekt „Udoskonalenia” (Refinement) zasady „3R”18.

Ocena kopania nor, budowy gniazd i gromadzenia zapasów u myszy

Aktywność lokomotoryczna (LMA) to prosty i łatwy do wykonania pomiar zachowania u myszy. Sprzężenie oprogramowania do śledzenia wideo (VTS) i LMA pozwala na poprawę swoistości i czułości, zwłaszcza w porównaniu z ręczną metodą analizy LMA polegającą na przekraczaniu linii. Dodatkowo VTS umożliwia długoterminowe śledzenie LMA myszy.

Krótko- i długoterminowa aktywność ruchowa myszy analizowana przez oprogramowanie do śledzenia wideo

Poziomy aktywności w otwartym polu są używane do oceny poziomu aktywności lokomotywy i zachowania. Protokół ten zapewnia dobrze zaprojektowany, ustandaryzowany protokół do stosowania w badaniach przedklinicznych dotyczących zaburzeń nerwowo-mięśniowych.

Pomiary behawioralne i ruchowe z wykorzystaniem otwartego systemu monitorowania aktywności w chorobach mięśni szkieletowych

Tutaj prezentujemy protokół indukowania anoreksji opartej na aktywności (ABA) u samic dorastających myszy. ABA to stan nadpobudliwości wywołany przez nałożenie ograniczenia pokarmowego na gryzonie mające dostęp do koła do biegania. Zjawisko to jest wykorzystywane jako model do badania neurobiologii leżącej u podstaw jadłowstrętu psychicznego.

Wykorzystanie modelu gryzoni anoreksji opartej na aktywności do badania neurobiologicznych podstaw jadłowstrętu psychicznego

Opracowaliśmy protokół oceny samopoczucia myszy podczas zabiegów z użyciem znieczulenia ogólnego. Przeanalizowano szereg parametrów behawioralnych wskazujących na poziom dobrostanu, a także metabolity glikokortykosteroidów. Protokół może służyć jako ogólna pomoc w oszacowaniu stopnia ciężkości w sposób naukowy, skoncentrowany na zwierzętach.

Systematyczna ocena dobrostanu myszy przed zabiegami ze względu na znieczulenie ogólne

Ten protokół opisuje użycie analizatora składu ciała i systemu monitorowania metabolizmu zwierząt do charakteryzowania składu ciała i parametrów metabolicznych u myszy. Jako przykład zastosowania tych technik podaje się model otyłości wywołanej przez żywienie wysokotłuszczowe.

Analiza składu ciała i metabolicznego umieszczania w klatkach u myszy karmionych wysokotłuszczowo

Ten manuskrypt opisuje protokół do pomiaru podstawowej przemiany materii i zdolności oksydacyjnej termogenicznych adipocytów u otyłych myszy.

Określanie podstawowego wydatku energetycznego i zdolności adipocytów termogenicznych do wydatkowania energii u otyłych myszy

Modele gryzoni są cennymi narzędziami do badania podstawowych zachowań związanych z zaburzeniami ze spektrum autyzmu (ASD). W tym artykule wyjaśniamy dwa testy behawioralne do modelowania podstawowych cech ASD u myszy: samopielęgnację, który ocenia powtarzające się zachowanie, oraz trzykomorowy test interakcji społecznych, który dokumentuje upośledzenia społeczne.

Strategie oceny zachowań podobnych do autystycznych u myszy

Poprzez integrację czterech codziennych stresorów społecznych, niniejsze badanie opisuje model wielokrotnego zintegrowanego stresu społecznego (MISS) dla zaburzeń psychicznych u samic myszy C57BL/6J. Po dziesięciu dniach powtarzającej się ekspozycji na MISS myszy rozwinęły fenotypy podobne do depresji i lęku, zapewniając w ten sposób naturalny, oparty na etiologii model zwierzęcy do badania zaburzeń psychicznych u kobiet.

Wieloraki zintegrowany model stresu społecznego dla zaburzeń psychicznych u samic myszy C57BL/6J

Model objadania się został ustalony u myszy korzystających z przerywanego dostępu do M&amp;M's (bardzo smacznego pokarmu składającego się z tłuszczu i cukru). Myszy z przerywanym dostępem do tego wysokotłuszczowego i bogatego w cukier pokarmu wykazywały zachowania podobne do stresu, zwiększone spożycie kalorii i preferencję dla tego pokarmu w stosunku do standardowej karmy w porównaniu z myszami z ciągłym dostępem do pokarmu lub bez niego.

Model przerywanego napadowego spożycia u myszy

Poznaj metodę oceny anoreksji opartej na aktywności u myszy, aby badać neurobiologię zaburzeń odżywiania. Technika ta pozwala analizować mechanizmy neuronalne niedostępne w badaniach na ludziach.

Ocena anoreksji opartej na aktywności u myszy

Przeglądaj więcej filmów