Name: Cienkowarstwowe kompozytowe elastomery krzemowe do hodowli komórkowych i zastosowań skórnych: produkcja i charakterystyka (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: Poznaj metodę produkcji cienkowarstwowych kompozytowych elastomerów krzemowych o różnej sztywności i grubości do zaawansowanych hodowli komórkowych i zastosowań skórnych. Protokół obejmuje przygotowanie PDMS, pomiary przyczepności oraz hodowlę komórek L929.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Martin Danner jest doceniany za pomoc w przygotowaniu próbek i ustanowieniu procedur hodowli komórkowych. Autorzy pragną podziękować firmie Biesterfeld Spezialchemie GmbH (Hamburg, Niemcy), a w szczególności Robertowi Radsziwillowi za nieustanne wsparcie i dyskusje. Badania, które doprowadziły do uzyskania tych wyników, otrzymały dofinansowanie Europejskiej Rady ds. Badań Naukowych w ramach Siódmego Programu Ramowego Unii Europejskiej (FP/2007-2013) / Umowa o grant ERBN nr 340929.

<ol><li>Lloyd, A. W., Faragher, R. G. A., Denyer, S. P. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11246945">Ocular biomaterials and implants.</a> Biomaterials. 22, 769-785 (2001).</li>
<li>Zhang, M., Wu, J., Wang, L., Xiao, K., Wen, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+fabricating+multi-layer+PDMS+structures+for+3D+microfluidic+chips%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">A simple method for fabricating multi-layer PDMS structures for 3D microfluidic chips.</a> Lab Chip. 10, 1199-1203 (2010).</li>
<li>Kwak, M. K., Jeong, H. E., Suh, K. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rational+design+and+enhanced+biocompatibility+of+a+dry+adhesive+medical+skin+patch%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Mater%22%5BJournal%5D)">Rational design and enhanced biocompatibility of a dry adhesive medical skin patch.</a> Adv. Mater. 23, 3949-3953 (2011).</li>
<li>Gun Park, D., Chul Shin, S., Won Kang, S., Tae Kim, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+flexible+self+adhesive+patch+for+professional+heat+stress+monitoring+service%5BTitle%5D)+AND+%22Conf.+Proc.+IEEE+Eng.+Med.+Biol.+Soc%22%5BJournal%5D)">Development of flexible self adhesive patch for professional heat stress monitoring service.</a> Conf. Proc. IEEE Eng. Med. Biol. Soc. 4, 3789-3792 (2005).</li>
<li>Thomas, X. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/242768448_Silicone_Adhesives_in_Healthcare_Applications">Silicone Adhesives in Healthcare Applications.</a> Dow corning Lit. , (2013).</li>
<li>Fuard, D., Tzvetkova-Chevolleau, T., Decossas, S., Tracqui, P., Schiavone, P. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0167931708001196">Optimization of poly-di-methyl-siloxane (PDMS) substrates for studying cellular adhesion and motility.</a> Microelectron. Eng. 85, 1289-1293 (2008).</li>
<li>Wang, Z., Volinsky, A. A., Gallant, N. D. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/app.41050/abstract">Crosslinking effect on polydimethylsiloxane elastic modulus measured by custom-built compression instrument.</a> J. Appl. Polym. Sci. 131, 41050(2014).</li>
<li>Fischer, S. C. L., Kruttwig, K., Bandmann, V., Hensel, R., Arzt, E. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/mame.201600526/abstract">Adhesion and cellular compatibility of silicone-based skin adhesives.</a> Macromol. Mater. Eng. , 1-11 (2017).</li>
<li>Martina, D., Creton, C., Damman, P., Jeusette, M., Lindner, A. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/2012/sm/c2sm07059f">Adhesion of soft viscoelastic adhesives on periodic rough surfaces.</a> Soft Matter. 8, 5350-5357 (2012).</li>
<li>Brown, X. Q., Ookawa, K., Wong, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+polydimethylsiloxane+scaffolds+with+physiologically-relevant+elastic+moduli%3A+Interplay+of+substrate+mechanics+and+surface+chemistry+effects+on+vascular+smooth+muscle+cell+response%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Evaluation of polydimethylsiloxane scaffolds with physiologically-relevant elastic moduli: Interplay of substrate mechanics and surface chemistry effects on vascular smooth muscle cell response.</a> Biomaterials. 26, 3123-3129 (2005).</li>
<li>Song, F., Ren, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stiffness+of+cross-linked+poly%28dimethylsiloxane%29+affects+bacterial+adhesion+and+antibiotic+susceptibility+of+attached+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Stiffness of cross-linked poly(dimethylsiloxane) affects bacterial adhesion and antibiotic susceptibility of attached cells.</a> Langmuir. 30, 10354-10362 (2014).</li>
<li>Buxboim, A., Rajagopal, K., Brown, A. E. X., Discher, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+deeply+cells+feel%3A+methods+for+thin+gels%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Phys.+Condens.+Matter%22%5BJournal%5D)">How deeply cells feel: methods for thin gels.</a> J. Phys. Condens. Matter. 22, 194116(2010).</li>
<li>Discher, D. E., Janmey, P., Wang, Y. -L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+cells+feel+and+respond+to+the+stiffness+of+their+substrate%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Tissue cells feel and respond to the stiffness of their substrate.</a> Science. 310, 1139-1143 (2005).</li>
<li>Engler, A. J., Sen, S., Sweeney, H. L., Discher, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrix+Elasticity+Directs+Stem+Cell+Lineage+Specification%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Matrix Elasticity Directs Stem Cell Lineage Specification.</a> Cell. 126, 677-689 (2006).</li>
<li>Roth, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface+functionalization+of+silicone+rubber+for+permanent+adhesion+improvement%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Surface functionalization of silicone rubber for permanent adhesion improvement.</a> Langmuir. 24, 12603-12611 (2008).</li>
<li>Thiébaud, P., Lauer, L., Knoll, W., Offenhäusser, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PDMS+device+for+patterned+application+of+microfluids+to+neuronal+cells+arranged+by+microcontact+printing%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens.+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">PDMS device for patterned application of microfluids to neuronal cells arranged by microcontact printing.</a> Biosens. Bioelectron. 17, 87-93 (2002).</li>
<li>Tourovskaia, A., Figueroa-Masot, X., Folch, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation-on-a-chip%3A+a+microfluidic+platform+for+long-term+cell+culture+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Differentiation-on-a-chip: a microfluidic platform for long-term cell culture studies.</a> Lab Chip. 5, 14-19 (2005).</li>
<li>Peterson, S. L., McDonald, A., Gourley, P. L., Sasaki, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poly%28dimethylsiloxane%29+thin+films+as+biocompatible+coatings+for+microfluidic+devices%3A+Cell+culture+and+flow+studies+with+glial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Mater.+Res.+-+Part+A%22%5BJournal%5D)">Poly(dimethylsiloxane) thin films as biocompatible coatings for microfluidic devices: Cell culture and flow studies with glial cells.</a> J. Biomed. Mater. Res. - Part A. 72, 10-18 (2005).</li>
<li>Wan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanotextured+substrates+with+immobilized+aptamers+for+cancer+cell+isolation+and+cytology%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Nanotextured substrates with immobilized aptamers for cancer cell isolation and cytology.</a> Cancer. 118, 1145-1154 (2012).</li>
<li>Ross, A. M., Jiang, Z., Bastmeyer, M., Lahann, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+aspects+of+cell+culture+substrates%3A+Topography%2C+roughness%2C+and+elasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Physical aspects of cell culture substrates: Topography, roughness, and elasticity.</a> Small. 8, 336-355 (2012).</li>
<li>Barreau, V., et al. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/adfm.201600652/abstract">Fibrillar Elastomeric Micropatterns Create Tunable Adhesion Even to Rough Surfaces.</a> Adv. Funct. Mater. 26, 4687-4694 (2016).</li>
<li>Briggs, G. A. D., Briscoe, B. J. <a target="_blank" href="http://iopscience.iop.org/article/10.1088/0022-3727/10/18/010">The effect of surface topography on the adhesion of elastic solids.</a> J. Phys. D. Appl. Phys. 10, 2453-2466 (1977).</li>
<li>Dapp, W. B., Lücke, A., Persson, B. N. J., Müser, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-affine+elastic+contacts%3A+Percolation+and+leakage%5BTitle%5D)+AND+%22Phys.+Rev.+Lett%22%5BJournal%5D)">Self-affine elastic contacts: Percolation and leakage.</a> Phys. Rev. Lett. 108, 1-4 (2012).</li>
<li>Putignano, C., Carbone, G., Dini, D. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0020768315002097">Mechanics of rough contacts in elastic and viscoelastic thin layers.</a> Int. J. Solids Struct. 69, 507-517 (2015).</li>
<li>Laulicht, B., Langer, R., Karp, J. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23112196">Quick-release medical tape.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 109, 18803-18808 (2012).</li>
<li>Kim, T., Park, J., Sohn, J., Cho, D., Jeon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioinspired%2C+Highly+Stretchable%2C+and+Conductive+Dry+Adhesives+Based+on+1D-2D+Hybrid+Carbon+Nanocomposites+for+All-in-One+ECG+Electrodes%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Bioinspired, Highly Stretchable, and Conductive Dry Adhesives Based on 1D-2D Hybrid Carbon Nanocomposites for All-in-One ECG Electrodes.</a> ACS Nano. 10, 4770-4778 (2016).</li>
<li>Adamietz, I. A., et al. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/roi.2970020605/abstract">Effect of self-adhesive, silicone-coated polyamide net dressing on irradiated human skin.</a> Radiat. Oncol. Investig. 2, 277-282 (1994).</li>
<li>White, R. <a target="_blank" href="http://www.woundsinternational.com/media/issues/304/files/content_8935.pdf">Evidence for atraumatic soft silicone wound dressing use.</a> Wounds UK. 1, 104-109 (2005).</li>
<li>Quan, M. B., Edwards, C., Marks, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+in+vivo+techniques+to+differentiate+photodamage+and+ageing+in+human+skin%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Derm.+Venereol%22%5BJournal%5D)">Non-invasive in vivo techniques to differentiate photodamage and ageing in human skin.</a> Acta Derm. Venereol. 77, 416-419 (1997).</li>
<li>Brown, X. Q., Ookawa, K., Wong, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+polydimethylsiloxane+scaffolds+with+physiologically-relevant+elastic+moduli%3A+Interplay+of+substrate+mechanics+and+surface+chemistry+effects+on+vascular+smooth+muscle+cell+response%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Evaluation of polydimethylsiloxane scaffolds with physiologically-relevant elastic moduli: Interplay of substrate mechanics and surface chemistry effects on vascular smooth muscle cell response.</a> Biomaterials. 26, 3123-3129 (2005).</li>
<li>Palchesko, R. N., Zhang, L., Sun, Y., Feinberg, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+Polydimethylsiloxane+Substrates+with+Tunable+Elastic+Modulus+to+Study+Cell+Mechanobiology+in+Muscle+and+Nerve%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Development of Polydimethylsiloxane Substrates with Tunable Elastic Modulus to Study Cell Mechanobiology in Muscle and Nerve.</a> PLoS One. 7, e51499(2012).</li>
<li>Johnston, I. D., McCluskey, D. K., Tan, C. K. L., Tracey, M. C. <a target="_blank" href="http://iopscience.iop.org/article/10.1088/0960-1317/24/3/035017/meta">Mechanical characterization of bulk Sylgard 184 for microfluidics and microengineering.</a> J. Micromechanics Microengineering. 24, 35017(2014).</li>
<li>Persson, B. N. J., Gorb, S. <a target="_blank" href="http://adsabs.harvard.edu/abs/2003JChPh.11911437P">The effect of surface roughness on the adhesion of elastic plates with application to biological systems.</a> J. Chem. Phys. 119, 11437(2003).</li>
<li>Peressadko, A. G., Hosoda, N., Persson, B. N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+surface+roughness+on+adhesion+between+elastic+bodies%5BTitle%5D)+AND+%22Phys.+Rev.+Lett%22%5BJournal%5D)">Influence of surface roughness on adhesion between elastic bodies.</a> Phys. Rev. Lett. 95, 1-4 (2005).</li>
<li>Purtov, J., et al. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s00339-012-7520-3">Measuring of the hardly measurable: adhesion properties of anti-adhesive surfaces.</a> Appl Phys A. 111, 183-189 (2013).</li>
<li>Kroner, E., Blau, J., Arzt, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Note%3A+An+adhesion+measurement+setup+for+bioinspired+fibrillar+surfaces+using+flat+probes%5BTitle%5D)+AND+%22Rev.+Sci.+Instrum%22%5BJournal%5D)">Note: An adhesion measurement setup for bioinspired fibrillar surfaces using flat probes.</a> Rev. Sci. Instrum. 83, 16101(2012).</li>
<li>Sun, S., Li, M., Liu, A. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0143749612001601">A review on mechanical properties of pressure sensitive adhesives.</a> Int. J. Adhes. Adhes. 41, 98-106 (2013).</li>
<li>Webber, R. E., Shull, K. R., Roos, A., Creton, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+geometric+confinement+on+the+adhesive+debonding+of+soft+elastic+solids%5BTitle%5D)+AND+%22Phys.+Rev.+E%22%5BJournal%5D)">Effects of geometric confinement on the adhesive debonding of soft elastic solids.</a> Phys. Rev. E. 68, 21805(2003).</li>
<li>Creton, C., Lakrout, H. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/(SICI)1099-0488(20000401)38:7%3C965::AID-POLB7%3E3.0.CO;2-8/full">Micromechanics of flat-probe adhesion tests of soft viscoelastic polymer films.</a> J. Polym. Sci. Part B Polym. Phys. 38, 965-979 (2000).</li>
<li>Tan, S. H., Nguyen, N. -T., Chua, Y. C., Kang, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxygen+plasma+treatment+for+reducing+hydrophobicity+of+a+sealed+polydimethylsiloxane+microchannel%5BTitle%5D)+AND+%22Biomicrofluidics%22%5BJournal%5D)">Oxygen plasma treatment for reducing hydrophobicity of a sealed polydimethylsiloxane microchannel.</a> Biomicrofluidics. 4, 32204(2010).</li>
<li>Kim, B., Peterson, E. T. K., Papautsky, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+stability+of+plasma+oxidized+PDMS+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Conf.+Proc.+IEEE+Eng.+Med.+Biol.+Soc%22%5BJournal%5D)">Long-term stability of plasma oxidized PDMS surfaces.</a> Conf. Proc. IEEE Eng. Med. Biol. Soc. 7, 5013-5016 (2004).</li>
<li>Briganti, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silicone+based+polyurethane+materials%3A+A+promising+biocompatible+elastomeric+formulation+for+cardiovascular+applications%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mater.+Sci.+Mater.+Med%22%5BJournal%5D)">Silicone based polyurethane materials: A promising biocompatible elastomeric formulation for cardiovascular applications.</a> J. Mater. Sci. Mater. Med. 17, 259-266 (2006).</li>
<li>Regehr, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+implications+of+polydimethylsiloxane-based+microfluidic+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Biological implications of polydimethylsiloxane-based microfluidic cell culture.</a> Lab Chip. 9, 2132(2009).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Projektowanie struktur kompozytowych umożliwia proste dostosowanie właściwości materiału, takich jak moduł Younga czy grubość próbek. Moduł Younga PDMS może być skutecznie zmieniany w szerokim zakresie, zmieniając proporcje mieszania między dwoma składnikami lub wytwarzając mieszanki przy użyciu innego elastomeru silikonowego30,31. Opisane metody nie ograniczają się do PDMS stosowanych w obecnym badaniu, ale przede wszystkim wydajność klejenia zależy w dużym stopniu od konkretnego zastosowanego typu. Kluczowym etapem w ramach tego protokołu jest proces produkcji folii kompozytowych (ilustracja 1). Wykazano, że grubość folii wpływa znacząco na przyczepność folii do różnych podłoży, w tym do skóry (ryc. 5 i ryc. 6). Oprócz grubości powłoki, na właściwości materiału wpływa czas i temperatura podczas procesu utwardzania32. W związku z tym parametry takie jak grubość warstw polimerowych muszą być starannie dostosowane i zweryfikowane.
Analizę właściwości adhezyjnych cienkich warstw przeprowadzono przy pomiarach przyczepności siły normalnej przy użyciu dwóch podłoży szklanych o różnej chropowatości powierzchni do Ra = 0,338 μm (rysunek 3). Ogólnie rzecz biorąc, chropowatość ma znaczący wpływ na przyczepność powierzchni, zwłaszcza materiałów elastycznych 33,34. Chropowatość szkła można łatwo zmieniać poprzez szlifowanie papierem ściernym o różnych rozmiarach nierówności, co pozwala na wytwarzanie podłoży o wyższych wartościach chropowatości21. Ponadto do produkcji podłoży można stosować inne materiały, na przykład żywicę epoksydową15,35. To może być istotna strategia modyfikacji prezentowanego protokołu. Na przykład, jeśli potrzebne są podłoża wykazujące różne swobodne energie powierzchniowe lub wymagana jest określona topografia. W tym przypadku analizowano naprężenia związane z odrywaniem i separację cienkich warstw wykonanych z PDMS i SSA za pomocą specjalnie skonstruowanej konfiguracji (makroskopowe urządzenie do pomiaru przyczepności (MAD, rysunek 4)). 36 Optyczne wyrównanie podłoża i wgłębnika jest kluczowym etapem analizy wyników pomiarów. Dlatego regulacja kąta nachylenia musi być wykonywana za pomocą goniometru, tak precyzyjnie, jak to możliwe. Można to osiągnąć z wystarczającą precyzją, ręcznie doprowadzając podłoże do powierzchni folii, aż do uzyskania kontaktu poziomego.
W obecnym protokole czas podtrzymania był utrzymywany na stałym poziomie jednej sekundy (rysunek 5 i rysunek 7). Zwłaszcza w przypadku badania przyczepności elastycznej folii do szorstkiej powierzchni podłoża, wydłużenie czasu utrzymywania dostarcza dodatkowych informacji. Na przykład odnotowano wzrost naprężeń związanych z odrywaniem wraz ze wzrostem czasu podtrzymania8. Oprócz pomiarów wykonywanych w obecnym protokole można by przeprowadzić inne metody, na przykład testy odrywania, co pozwoliłoby na bardziej kompleksowe badanie przyczepności37.
Określono właściwości adhezyjne folii kompozytowych o różnej grubości warstwy kleju soft skin (ryc. 7). Nasze wyniki są zgodne z opublikowanymi danymi, z których wynika, że zmniejszenie grubości folii prowadzi do wzrostu naprężeń zrywających wraz ze wzrostem uwięzienia, tj. stosunku średnicy podłoża do grubości folii38,39. Na podstawie tych wyników oraz danych przedstawionych na rysunku 7 wnioskujemy, że folie kompozytowe o łącznej grubości ok. 100 μm (grubość warstwy SSA ok. 60 μm nałożona na folię PDMS o grubości ok. 40 μm) wykazują korzystne właściwości adhezyjne na chropowatych powierzchniach.
Następnie przeprowadzono eksperymenty związane z charakterystyką biologiczną na nieskazitelnych foliach kompozytowych i foliach kompozytowych poddanych obróbce plazmowej (ryc. 8). Obróbka plazmowa elastomerów krzemowych jest często stosowaną, wszechstronną techniką w celu zwiększenia właściwości hydrofilowych powierzchni oraz promowania przyczepiania komórkowego i rozprzestrzeniania się komórkowego40,41. Silikony są dobrze znane ze swojej niskiej toksyczności i wysokiej biostabilności, ale mogą zawierać resztkowe monomery lub katalizatory, które mogą wpływać na procesy fizjologiczne, prowadząc również do cytotoksyczności42,43. W przeprowadzonych eksperymentach zaobserwowaliśmy mniej niż 5% cytotoksyczność przy użyciu uwalniania LDH jako wskaźnika i testu wykluczenia błękitu trypanowego. W przedstawionym protokole przeanalizowano całą populację komórkową, w tym agregaty komórkowe oderwane od powierzchni, do analizy proliferacji (ryc. 9B). Modyfikacja protokołu może przynieść bardziej zróżnicowane wyniki. Dla każdej próbki supernatant zawierający oderwane agregaty komórkowe może być przeniesiony do oddzielnej probówki reakcyjnej i nie łączony z komórkami enzymatycznie usuniętymi z powierzchni polimeru. Pozwoliłoby to na dokładną ocenę komórek przyczepionych do powierzchni i ostatecznie ujawniłoby bardziej szczegółowe określenie wpływu polimerów na proces adhezji komórkowej. Oprócz przedstawionych tu metod immunocytochemicznych, komórki mogą być pobierane do badań za pomocą metod immunoblot, co pozwala na szczegółową ilościową ocenę ekspresji białek.
Podsumowując, ustaliliśmy warunki wytwarzania cienkich elastomerowych folii kompozytowych do zastosowań w zaawansowanych badaniach nad kulturami komórkowymi. Dodatkowo te cienkie folie mają wysoką zdolność adaptacji do szorstkości skóry, umożliwiając wyrafinowane projektowanie klejów do skóry.

W tym protokole przedstawione są szczegółowe metody produkcji cienkich folii elastomerowych. Powszechnie dostępna technika rakli została wykorzystana do produkcji cienkich folii kompozytowych. Technika produkcji została wykonana na foliach polietylenowo-jelitowych (PET), co umożliwia późniejszą produkcję tych folii na dużą skalę. Nacisk w tym protokole kładzie się na ocenę odtwarzalności, precyzyjne wytwarzanie różnych warstw folii kompozytowych oraz określenie właściwości biologicznych i adhezyjnych końcowego plastra kompozytowego. Elastomer silikonowy poli-(dimetylosiloksan) (PDMS) jest szeroko stosowany w technologii biomedycznej, w tym w produkcji klejów do skóry, zastosowaniach mikrofluidycznych i dodatkowych dziedzinach badawczych1,2,3,4. Niedawno wprowadzono inną podklasę PDMS, tak zwane kleje do miękkiej skóry (SSA), szczególnie do delikatnego łączenia i rozklejania skóry.
Silikonowe SSA to elastomery funkcjonalizowane winylem, różniące się od analogicznych polimerów brakiem wzmacniającej krzemionki5. Podobnie jak w przypadku innych PDMS, moduł Younga SSA może być dostosowywany w szerokim zakresie, modulując stężenie czynnika sieciującego lub czas utwardzania6,7,8. Ta zmiana modułu elastomerów silikonowych Younga znacząco wpływa na właściwości adhezyjne materiału, a także ma poważne konsekwencje dla komórek prokariotycznych i eukariotycznych hodowanych na powierzchni9,10,11. Na komórkowym poziomie biologicznym wykazano, że komórki eukariotyczne reagują na poziomie transdukcji sygnału na modulację elastyczności matrycy lub grubości powierzchni9,10,12,13,14. W związku z tym istnieje szerokie zainteresowanie zastosowaniami polimerów o regulowanych właściwościach mechanicznych w hodowlach komórkowych. Co ważne, wewnętrznie niska energia powierzchniowa elastomerów na bazie silikonu nie zapewnia optymalnych warunków do hodowli komórkowej komórek eukariotycznych. Obróbka plazmą tlenową jest szeroko stosowaną techniką tymczasowego zwiększania niskiej energii powierzchniowej PDMS, co prowadzi do zwiększenia jego siły zrywania, zmniejszenia adsorpcji powierzchniowej cząsteczek, przy jednoczesnym promowaniu przyczepiania, rozprzestrzeniania się i proliferacji komórek eukariotycznych15,16,17,18.
Oprócz właściwości materiałów, topografia powierzchni znacząco wpływa na adhezję komórkową i interakcję adhezyjną między dwoma materiałami19,20,21,22. Chropowatość powierzchni ma kilka czynników wpływających na powstawanie kontaktu między dwiema powierzchniami: zmniejszenie powierzchni styku, wysoka zmagazynowana energia sprężystości otaczająca nierówności, a także wpływ na propagację pęknięć mogą zmienić siłę klejenia23,24. Przyczepność folii samoprzylepnych do ludzkiej skóry to nowa dziedzina zastosowań, np. opatrunki na rany, mocowanie elektrod EKG lub innych urządzeń elektronicznych do noszenia25,26,27,28. Aby zmierzyć przyczepność klejów samoprzylepnych w odniesieniu do topografii powierzchni, w normalnych pomiarach przyczepności można użyć podłoży szklanych o różnym stopniu chropowatości8,21. W tym przypadku wybrano dwa podłoża szklane w celu zbadania właściwości adhezyjnych folii polimerowych. W pierwszej kolejności scharakteryzowano folie kompozytowe z warstwą nośną PDMS w proporcji mieszania 10 do 1 części wagowych pokrytych PDMS o różnych proporcjach mieszania. W drugim etapie przygotowano warstwę kleju SSA z równą wagą obu składników i o różnej grubości warstwy na wierzchu nośnej folii PDMS.

<table><tbody><tr><td>2-Propanol, 97%</td><td>Stockmeier Chemie</td><td>1000452610000</td><td>Isopropanol</td></tr><tr><td>Ścierna podkładka ręczna z diamnodem</td><td>Bohle</td><td>MO 5007522</td><td>Ziarnistość: 220</td></tr><tr><td>Accutase Capricorn</td><td>Scientific</td><td>ACC-1B</td><td></td></tr><tr><td>Albumin Fraktion V</td><td>Roth</td><td>0163.2</td><td>BSA</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 Phalloidin</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>A12379</td><td>wysoce toksyczny</td></tr><tr><td>Aquamount</td><td>Polysciences</td><td>18606-20</td><td>rozpuszczalne w wodzie podłoże montażowe</td></tr><tr><td>CytoTox-ONE Jednorodny test integralności membrany</td><td>Promega</td><td>G7890</td><td></td></tr><tr><td>DPBS, bez Ca2+, Mg2+</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>14190094</td><td></td></tr><tr><td>Płodowa surowica bydlęca</td><td>złota GE Health Care Life Science</td><td>A15-151</td><td>FBS</td></tr><tr><td>Goniometr OCA35</td><td>Datafizyka</td><td></td><td>do wyznaczania statycznego kąta zwilżania wody</td></tr><tr><td>Hoechst Dye 33342</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B1155-100MG</td><td>trichlorowodorek bisBenzimide H 33342, silnie toksyczny</td></tr><tr><td>mikroskop Axiovert 25</td><td>Mikroskop Zeiss</td><td>używany do dokumentacji hodowli</td><td></td> komórkowych</tr><tr><td>Mikroskop Eclipse LV100ND</td><td>Nikon</td><td></td><td>Mikroskop używany do oznaczania grubości filmu</td></tr><tr><td>Paraformaldehyd, roztwór wodny 16%</td> <td>Mikroskopia elektronowa Sciences</td><td>RT 15710</td><td>mikroskopia elektronowa klasa</td></tr><tr><td>penicyliny i streptomycyny roztwór penicyliny i streptomycyny</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4333-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Phenom XL Skaningowy mikroskop elektronowy (SEM)</td><td>Phenom</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Poly-(alkohol winylowy) 4-88, MW 31000</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>81381-1KG</td><td>Mowiol 4-88</td></tr><tr><td>Poli-dimetylosiloksany, Sylgard 184</td><td>Dow Corning</td><td>(400)000108351397</td><td>PDMS</td></tr><tr><td>RPMI 1640 podłoże podstawowe</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>21875034</td><td></td></tr><tr><td>miękki klej do skóry (SSA)</td><td>Dow Corning</td><td>(400)000108251792</td><td>MG 7-9800 Soft Skin Adhesive (SSA)</td></tr><tr><td>mikser prędkości DAC 600.2 VAC-P</td><td>Hauschild</td><td></td><td></td></tr><tr><td>rysik profilomter</td><td>Zeiss</td><td></td><td>Model: SURFCOM 1500SD3</td></tr><tr><td>Tecan Infinite M200 pro</td><td>Czytnik płytek fluorescencyjnych</td><td>Tecan</td><td></td></tr><tr><td>Triton X 100</td><td>Calbiochem</td><td>648466</td><td></td></tr><tr><td>roztwór błękitu trypanowego</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8154-100ML</td><td>wysoce toksyczny</td></tr><tr><td>roztwór trypsyny/EDTA</td><td>PAN-Biotech</td><td>P10-023500</td><td>0,05% trypsyna, 0,02% EDTA w PBS</td></tr><tr><td>Klej UV</td><td>Bohle</td><td>BO MV76002</td><td>średniej lepkości</td></tr></tbody></table>

cienkowarstwowe kompozytowe elastomery krzemowe do hodowli komórkowych i zastosowań skórnych: produkcja i charakterystyka

Thin Film Composite Silicon Elastomers for Cell Culture and Skin Applications: Manufacturing and Characterization

W tym protokole prezentujemy metody wytwarzania cienkich warstw kompozytowych z elastomeru do zaawansowanych zastosowań w hodowlach komórkowych oraz do rozwoju klejów do skóry. Dwa różne poli-(dimetylosiloksany) (PDMS i miękki klej do skóry (SSA)) zostały wykorzystane do dogłębnego zbadania efektów biologicznych i właściwości adhezyjnych. Folie kompozytowe składają się z elastycznej warstwy nośnej i adhezyjnej powłoki wierzchniej. Obie warstwy zostały wyprodukowane techniką aplikacji rakli. W niniejszym badaniu zbadano adhezyjne zachowanie folii kompozytowych w funkcji grubości warstwy lub zmiany modułu Younga warstwy wierzchniej. Moduł Younga PDMS został zmieniony poprzez zmianę proporcji mieszania zasady do środka sieciującego. Ponadto grubość folii SSA została zróżnicowana od ok. 16 μm do ok. 320 μm. Do pomiarów grubości wykorzystano skaningową mikroskopię elektronową (SEM) i mikroskopię optyczną. Właściwości adhezyjne folii elastomerowych zależą w dużym stopniu od grubości warstwy, modułu Younga polimerów i charakterystyki powierzchni. W związku z tym zbadano normalną przyczepność tych folii do podłoży szklanych o gładkich i chropowatych powierzchniach. Naprężenia związane z odrywaniem i praca separacji zależą od proporcji mieszania elastomerów silikonowych.
Dodatkowo, grubość miękkiego kleju do skóry umieszczonego na podpartej warstwie spodniej została zmieniona w celu uzyskania plastrów do aplikacji na skórę. Przeprowadzono badania cytotoksyczności, proliferacji i adhezji komórkowej mysich fibroblastów L929 na błonach PDMS (stosunek mieszania 10:1) i SSA (stosunek mieszania 50:50). Pokazaliśmy tutaj po raz pierwszy porównanie obok siebie cienkich folii kompozytowych wykonanych z obu polimerów oraz przedstawiamy badania ich właściwości biologicznych i adhezyjnych.

Przedstawiono protokół procesu produkcji polimerowych cienkowarstwowych struktur kompozytowych o różnych modułach lub grubościach Younga. Folie są produkowane do zaawansowanych badań nad kulturami komórkowymi lub jako kleje do skóry.

Cienkowarstwowe kompozytowe elastomery krzemowe do hodowli komórkowych i zastosowań skórnych: produkcja i charakterystyka

In this protocol, we present methods to fabricate thin elastomer composite films for advanced cell culture applications and for the development of skin ...

Ogólnym celem tej procedury jest wytworzenie i scharakteryzowanie polimerowych cienkowarstwowych struktur kompozytowych do zaawansowanych badań kultur komórkowych lub jako kleje do skóry. Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania dotyczące tego, w jaki sposób można wykorzystać kompozyty elastomerowe do uzyskania optymalnego działania klejącego, nawet na nieregularnych powierzchniach. Główną zaletą tych technik jest to, że są proste i mają uniwersalne zastosowanie.Pozwala to na produkcję na dużą skalę z bardzo dużą precyzją. Ogólnie rzecz biorąc, osoby, które dopiero zaczynają korzystać z tej metody, będą miały trudności, ponieważ pomiary przyczepności wymagają intensywnego szkolenia i praktyki, aby osiągnąć niezbędną precyzję. Procedury hodowli komórkowej i aplikacji osocza zademonstruje Angela Rutz, technik z naszego laboratorium.Aby przygotować PDMS, wymieszaj i odgazuj 1,1 grama mieszaniny prepolimerów w mieszalniku prędkości 2350 obr./min w próżni przez trzy minuty. Aby przygotować warstwę podkładową PDMS, należy użyć automatycznie sterowanej maszyny do nakładania rakli. Umieść rakla na kawałku folii PET oczyszczonym w 100% izopropanolem i użyj mikropozycjonujących, aby wyregulować grubość warstwy nośnej.Załaduj PDMS do jednorazowej strzykawki o pojemności 10 mililitrów. Napełnij zbiornik rakla polimerem i rozpocznij ruch rakla z prędkością około 2 milimetrów na sekundę. Gdy kawałek folii PET zostanie pokryty, przenieś folię do piekarnika o temperaturze 95 stopni Celsjusza na godzinę.Aby przygotować wierzchnią warstwę folii kompozytowej, użyj ostrza, aby usunąć cienkie paski z dłuższych boków warstwy nośnej. Aby umożliwić nasunięcie rakla po folii PET, nałóż drugą warstwę PDMS zgodnie z wcześniejszym opisem. Następnie włóż folię do piekarnika.Aby przygotować próbki do pomiarów przyczepności, użyj żyletki, aby pociąć folie na folii PET na cztery centymetry kwadratowe i użyj kleju UV, aby przymocować kawałki do szkiełka podstawowego. Oświetl kawałki światłem UV przez trzy minuty i umieść pierwszą próbkę polimerową na uchwycie próbki. Użyj goniometru, aby wyregulować kąt nachylenia, aż podłoże zetknie się z folią polimerową przy całkowicie równoległym ustawieniu obu powierzchni, jak pokazano na obrazach z kamery.Optyczne wyrównanie podłoża do próbki ma duże znaczenie dla interpretacji wyników pomiarów. Dlatego regulacja kąta nachylenia musi być wykonana tak precyzyjnie, jak to możliwe za pomocą inklinometru. Przesuń wyrównane podłoże na powierzchnię folii polimerowej, aż do uzyskania naprężenia obciążenia wstępnego wynoszącego 13 plus minus pięć kilopaskali i uruchom niestandardowy pakiet oprogramowania napisanego w LabView.Następnie ustaw wymagane parametry pomiarowe, aby zmierzyć właściwości adhezyjne trzech niezależnie wyprodukowanych próbek w sześciu różnych miejscach na każdej powierzchni folii. Aby przygotować filmy do mikroskopii optycznej, za pomocą żyletki pokrój próbkę polimerową na kawałki o powierzchni 0,25 centymetra kwadratowego i przymocuj kawałki do krawędzi szkiełka. Następnie umieść szkiełko w orientacji pionowej pod mikroskopem pionowym i zmierz grubość przekroju folii.Aby przygotować eksperyment z hodowlą komórkową, najpierw użyj skalpela, aby wyciąć około pięciu na pięć milimetrowych kawałków z warstwy nośnej PET i użyj pęsety, aby przenieść kawałki na pojedyncze 12-milimetrowe szklane szkiełka nakrywkowe. Przenieś szkiełka pokrywy do wnętrza komory reakcyjnej urządzenia plazmowego i zamknij pokrywę urządzenia. Opróżnij komorę, aż zostanie osiągnięte ciśnienie 1,6 razy 10 do minus sekundy milibara i traktuj folie plazmą przez trzy minuty.Następnie przewietrzyć komorę reakcyjną i przenieść próbki do indywidualnych dołków 24-dołkowej płytki. Następnie myj 70 do 80% zlewającą się hodowlę komórkową L929 z DPBS bez wapnia i magnezu przez 30 sekund w komorze laminarnej. Następnie następuje pięciominutowa inkubacja z dwoma mililitrami odpowiedniego roztworu proteolitycznego i kolagenolitycznego w temperaturze 37 stopni Celsjusza i 5% CO2.Gdy komórki się odłączą, dodaj osiem mililitrów pożywki uzupełnionej surowicą i przenieś komórki do 15-mililitrowej stożkowej probówki. Następnie, po policzeniu, wysiewaj 60 000 komórek na mililitr pożywki na dołek 24-dołkowej płytki zawierającej próbki polimerowe i umieść płytkę w inkubatorze hodowli komórkowej na trzy dni przed przechwyceniem i utrwaleniem obrazu z kontrastem fazowym. W zależności od grubości warstwy wierzchniej, wraz ze wzrostem grubości folii obserwuje się spadek naprężeń zrywających, niezależnie od tekstury powierzchni podłoża.Praca separacji jest jednak na ogół nieco niższa w przypadku szorstkich powierzchni podłoża w porównaniu z gładkimi. Kiedy rejestrowany jest mechanizm odklejania, na najcieńszych warstwach obserwuje się niewielką kawitację, podczas gdy na grubszych warstwach można zaobserwować pojawienie się pęknięć przypominających palce. Eksperymenty z hodowlami komórkowymi ujawniają, że komórki wysiane na nieskazitelnych polimerach wykazują słabe zachowanie przyczepiania i rozprzestrzeniania się komórkowego, podczas gdy zlewającą się monowarstwę obserwuje się w komórkach hodowanych na powierzchniach poddanych działaniu plazmy.Ogólnie rzecz biorąc, poziomy dehydrogiazy mleczanu są porównywalne dla komórek hodowanych na obu materiałach polimerowych, z cytotoksycznością poniżej 5%. Po opanowaniu produkcja kompozytów polimerowych może zostać zakończona w ciągu około trzech godzin. Chociaż późniejsza analiza za pomocą normalnego testu przyczepności wymaga szkolenia, jest to bardzo potężne narzędzie do badania właściwości adhezyjnych folii.Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak wytwarzać cienkie polimerowe folie kompozytowe i analizować je za pomocą specjalnych testów przyczepności i narzędzi biologicznych komórek. Nie zapominaj, że praca z chemikaliami i materiałami biologicznymi może być bardzo niebezpieczna. Dlatego należy podjąć odpowiednie środki ostrożności, takie jak przestrzeganie obowiązkowych procedur bezpieczeństwa, noszenie środków ochrony osobistej i obchodzenie się z tymi materiałami w szafie bezpieczeństwa.

thin-film-composite-silicon-elastomers-for-cell-culture-skin

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia rozwojowa

Niniejszy artykuł opisuje podejście eksperymentalne do dynamicznej regulacji oddziaływań międzykomórkowych między komórkami adherentnymi w skali mikrometrycznej. Zademonstrowano manipulację komunikacją międzykomórkową pomiędzy hepatocytami a komórkami zrębowymi. Opracowana platforma umożliwia badanie oddziaływań komórka-komórka w różnorodnych procesach biologicznych, w tym w rozwoju i patogenezie.

Krzemowe mikroczipy do manipulowania oddziaływaniami międzykomórkowymi

Przedstawiamy dwa procesy mikrofabrykacji porowatych polimerowych chipów do trójwymiarowej hodowli komórek. Pierwszy z nich to tłoczenie na gorąco w połączeniu z procesem spawania oparami rozpuszczalnika. Drugi wykorzystuje niedawno opracowany proces mikrotermoformowania w połączeniu z technologią śladów jonowych, co prowadzi do znacznego uproszczenia produkcji.

Mikrofabrykacja rusztowań w skali chipa do trójwymiarowej hodowli komórek

W niniejszym protokole prezentujemy proces wytwarzania macierzy mikroaktuatorów z pionowo przesuniętymi słupkami, na której opiera się ta technologia, oraz sposób, w jaki technologia bazowa ta może zostać zmodyfikowana w celu prowadzenia wysokoprzepustowych dynamicznych mechanicznie hodweli komórkowych w dwu- i trójwymiarowych paradygmatach hodowli.

Mikrofabrykowane platformy do mechanicznie dynamicznej hodowli komórek

Niniejszy artykuł przedstawia wszechstronną metodę tworzenia pierścieni tkankowych pochodzenia komórkowego poprzez samoorganizację komórkową. Komórki mięśni gładkich zasiane w pierścieniowatych studzienkach agarozowych agregują i kurczą się, tworząc wytrzymałe tkanki trójwymiarowe (3D) w ciągu 7 dni. Pierścienie tkankowe o skali milimetrowej nadają się do testów mechanicznych i służą jako podstawowe elementy do montażu tkanek.

Kierowana samoorganizacja komórkowa w celu wytwarzania pierścieni tkankowych pochodzenia komórkowego do analiz biomechanicznych i inżynierii tkankowej

Filmy jedwabne stanowią nową klasę biomateriałów, które można łatwo dostosować do szerokiego zakresu zastosowań biomedycznych. Przedstawiony system hodowli na filmach jedwabnych jest wysoce adaptowalny do różnorodnych analiz in vitro. System ten stanowi platformę projektowania biomateriałów, umożliwiającą optymalizację in vitro przed bezpośrednim przejściem do modeli in vivo.

System hodowli na filmach jedwabnych do analiz in vitro i projektowania biomateriałów

Demonstrujemy przygotowanie elastomerów ciekłokrystalicznych (LCE) na bazie siloksanów i epoksydów oraz nanokompozytów LCE. LCE są charakteryzowane pod względem odkształcenia odwracalnego, uporządkowania ciekłokrystalicznego i sztywności. Jako potencjalne zastosowanie demonstrujemy ich zastosowanie jako substratów reagujących na kształt w niestandardowym urządzeniu do aktywnej hodowli komórek.

Otrzymywanie monodomenowych elastomerów ciekłokrystalicznych i nanokompozytów elastomerów ciekłokrystalicznych

To badanie przedstawia metodologię przygotowania 3D, biodegradowalnych, pianopodobnych rusztowań komórkowych opartych na biokompatybilnych elastomerach ciekłokrystalicznych o łańcuchu bocznym (LCE). Eksperymenty z mikroskopią konfokalną pokazują, że podobne do piany LCE pozwalają na przyłączanie komórek, proliferację i spontaniczne ustawianie mioblastów C2C12.

Synteza biokompatybilnych pianek elastomerowych ciekłokrystalicznych jako rusztowań komórkowych do przestrzennych hodowli komórkowych 3D

To badanie opisuje metody syntezy dla zakończonych aminopropylami polidimetylosiloksanów i kopolimerów blokowych polidimetylo-metylo-fenylo-siloksanów oraz dla miękkich elastomerów mocznika (PSU) na bazie polisiloksanu. Przedstawiono w nim zastosowanie zasilaczy jako akomodujących soczewkę wewnątrzgałkową. Opisano również metodę oceny cytotoksyczności in vitro.

Synteza miękkich elastomerów polisiloksanowo-mocznikowych do stosowania wewnątrzgałkowego

Ten protokół opisuje prostą metodę hodowli trójwymiarowego, zrekonstruowanego ludzkiego naskórka w powtarzalny i solidny sposób. Dodatkowo scharakteryzowano zależność struktura-funkcja modelu bariery naskórkowej. Przedstawiono również reakcje biologiczne zrekonstruowanego naskórka ludzkiego na bodźce prozapalne.

Hodowla trójwymiarowego zrekonstruowanego ludzkiego naskórka na dużą skalę

Przedstawiamy tutaj nowatorskie urządzenie, które stosuje fale izotropowe i jednoosiowe odkształcenia na komórkach, wspierając hodowlę na substratach o regulowanej sztywności i konfigurowalnych macierzach białkowych. Ta prosta, ekonomiczna platforma umożliwia badaczom badanie, jak mechaniczne sygnały regulują funkcjonowanie komórek zarówno w badaniach podstawowych, jak i w kontekstach związanych z chorobą.

Nowatorska platforma do rozciągania i obrazowania komórkowego in vitro

Mimo że sztywność macierzy zewnątrzkomórkowej (ECM) jest kluczowym regulatorem zachowania komórkowego, podstawowe mechanizmy wyczuwania i przekazywania sygnałów pozostają niejasne. Aby temu zaradzić, udostępniamy protokoły tworzenia podłoży na bazie poliakryloamidu i silikonu o regulowanej sztywności, aby poszerzyć naszą wiedzę o komunikacji między komórkami a ECM.

Generowanie substratów ekstrakomórkowych z poliakryloamidu i silikonu o określonej sztywności dla zastosowań w biologii komórki

Poznaj metodę produkcji cienkowarstwowych kompozytowych elastomerów krzemowych o różnej sztywności i grubości do zaawansowanych hodowli komórkowych i zastosowań skórnych. Protokół obejmuje przygotowanie PDMS, pomiary przyczepności oraz hodowlę komórek L929.

Cienkowarstwowe kompozytowe elastomery krzemowe do hodowli komórkowych i zastosowań skórnych: produkcja i charakterystyka

Przeglądaj więcej filmów