Name: Identyfikacja markerów wirulencji Mycobacterium abscessus do replikacji wewnątrzkomórkowej w fagocytach (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-27T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 34 s
Description: Odkryj metody badania interakcji między fagocytami a Mycobacterium abscessus przy użyciu biblioteki mutantów transposonowych i sekwencjonowania RNA. Poznaj adaptacje genomowe ułatwiające przetrwanie bakterii wewnątrzkomórkowe.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bardzo dziękujemy Pr. E.J. Rubinowi (Harvard Medical School, Boston, USA) za cenny dar biblioteki mutantów oraz Dr. Benowi Marshallowi (Wydział Lekarski, University of Southampton, Wielka Brytania) za poprawki manuskryptu. Serdecznie dziękujemy Francuskiemu Stowarzyszeniu Pacjentów z Mukowiscydozą "Vaincre la Mucoviscidose" i "L'Association Gregory Lemarchal" za ich wsparcie finansowe (RF20150501377). Dziękujemy również Narodowej Agencji Badawczej (program ANR DIMIVYR (ANR-13-BSV3-0007-01)) oraz Région Ile-de-France (Domaine d'Intérêt Majeur Maladies Infectieuses et Emergentes) za ufundowanie stypendium podoktorskiego dla V.L-M. L. L. jest doktorantem w "Ministère de L'Enseignement Supérieur et de la Recherche".

<ol><li>Qvist, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparing+the+harmful+effects+of+nontuberculous+mycobacteria+and+Gram+negative+bacteria+on+lung+function+in+patients+with+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cystic+Fibrosis%22%5BJournal%5D)">Comparing the harmful effects of nontuberculous mycobacteria and Gram negative bacteria on lung function in patients with cystic fibrosis.</a> Journal of Cystic Fibrosis. 15 (3), 380-385 (2016).</li>
<li>Roux, A. -L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+distinct+fate+of+smooth+and+rough+Mycobacterium+abscessus+variants+inside+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Open+Biology%22%5BJournal%5D)">The distinct fate of smooth and rough Mycobacterium abscessus variants inside macrophages.</a> Open Biology. 6 (11), 160185(2016).</li>
<li>Castañeda-Sánchez, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defensin+Production+by+Human+Limbo-Corneal+Fibroblasts+Infected+with+Mycobacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Pathogens%22%5BJournal%5D)">Defensin Production by Human Limbo-Corneal Fibroblasts Infected with Mycobacteria.</a> Pathogens. 2 (4), 13-32 (2013).</li>
<li>Bakala N'Goma, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mycobacterium+abscessus+phospholipase+C+expression+is+induced+during+coculture+within+amoebae+and+enhances+M.+abscessus+virulence+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Mycobacterium abscessus phospholipase C expression is induced during coculture within amoebae and enhances M. abscessus virulence in mice.</a> Infection and Immunity. 83 (2), 780-791 (2015).</li>
<li>Ripoll, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non+mycobacterial+virulence+genes+in+the+genome+of+the+emerging+pathogen+Mycobacterium+abscessus%5BTitle%5D)+AND+%22Public+Library+of+Science+One%22%5BJournal%5D)">Non mycobacterial virulence genes in the genome of the emerging pathogen Mycobacterium abscessus.</a> Public Library of Science One. 4 (6), 5660(2009).</li>
<li>Tailleux, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Constrained+intracellular+survival+of+Mycobacterium+tuberculosis+in+human+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Constrained intracellular survival of Mycobacterium tuberculosis in human dendritic cells.</a> Journal of Immunology. 170 (4), 1939-1948 (2003).</li>
<li>Jacquier, N., Aeby, S., Lienard, J., Greub, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discovery+of+new+intracellular+pathogens+by+amoebal+coculture+and+amoebal+enrichment+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Discovery of new intracellular pathogens by amoebal coculture and amoebal enrichment approaches.</a> Journal of Visualized Experiments. (80), e51055(2013).</li>
<li>Adékambi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amoebal+coculture+of+%22Mycobacterium+massiliense%22+sp.+nov.+from+the+sputum+of+a+patient+with+hemoptoic+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Amoebal coculture of "Mycobacterium massiliense" sp. nov. from the sputum of a patient with hemoptoic pneumonia.</a> Journal of Clinical Microbiology. 42 (12), (2004).</li>
<li>Rubin, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+transposition+of+mariner-based+elements+in+enteric+bacteria+and+mycobacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">In vivo transposition of mariner-based elements in enteric bacteria and mycobacteria.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 96 (4), 1645-1650 (1999).</li>
<li>Laencina, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+genes+required+for+Mycobacterium+abscessus+growth+in+vivo+with+a+prominent+role+of+the+ESX-4+locus%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Identification of genes required for Mycobacterium abscessus growth in vivo with a prominent role of the ESX-4 locus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (5), 1002-1011 (2018).</li>
<li>Rowbotham, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+Legionella+pneumophila+from+clinical+specimens+via+amoebae%2C+and+the+interaction+of+those+and+other+isolates+with+amoebae%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Pathology%22%5BJournal%5D)">Isolation of Legionella pneumophila from clinical specimens via amoebae, and the interaction of those and other isolates with amoebae.</a> Journal of Clinical Pathology. 36 (9), 978-986 (1983).</li>
<li>Moffat, J. F., Tompkins, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quantitative+model+of+intracellular+growth+of+Legionella+pneumophila+in+Acanthamoeba+castellanii%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">A quantitative model of intracellular growth of Legionella pneumophila in Acanthamoeba castellanii.</a> Infection and Immunity. 60 (1), 296-301 (1992).</li>
<li>FastQC program. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/">http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/</a> (2018).</li>
<li>Ripoll, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non+mycobacterial+virulence+genes+in+the+genome+of+the+emerging+pathogen+Mycobacterium+abscessus%5BTitle%5D)+AND+%22Public+Library+of+Science+One%22%5BJournal%5D)">Non mycobacterial virulence genes in the genome of the emerging pathogen Mycobacterium abscessus.</a> Public Library of Science One. 4 (6), 5660(2009).</li>
<li>Choo, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+reconnaissance+of+clinical+isolates+of+emerging+human+pathogen+Mycobacterium+abscessus+reveals+high+evolutionary+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Reports%22%5BJournal%5D)">Genomic reconnaissance of clinical isolates of emerging human pathogen Mycobacterium abscessus reveals high evolutionary potential.</a> Science Reports. 4, (2015).</li>
<li>Greub, G., Raoult, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microorganisms+Resistant+to+Free-Living+Amoebae%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Microbiology+Reviews%22%5BJournal%5D)">Microorganisms Resistant to Free-Living Amoebae.</a> Clinical Microbiology Reviews. 17 (2), 413-433 (2004).</li>
<li>Kicka, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+Validation+of+Whole-Cell+Based+Fluorescence+Assays+to+Identify+Anti-Mycobacterial+Compounds+Using+the+Acanthamoeba+castellanii+-+Mycobacterium+marinum+Host-Pathogen+System%5BTitle%5D)+AND+%22Public+Library+of+Science+One%22%5BJournal%5D)">Establishment and Validation of Whole-Cell Based Fluorescence Assays to Identify Anti-Mycobacterial Compounds Using the Acanthamoeba castellanii - Mycobacterium marinum Host-Pathogen System.</a> Public Library of Science One. 9 (1), 87834(2014).</li>
<li>Thomas, V., Loret, J. -F., Jousset, M., Greub, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodiversity+of+amoebae+and+amoebae-resisting+bacteria+in+a+drinking+water+treatment+plant%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Biodiversity of amoebae and amoebae-resisting bacteria in a drinking water treatment plant.</a> Environmental Microbiology. 10 (10), 2728-2745 (2008).</li>
<li>Lamrabet, O., Medie, F. M., Drancourt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acanthamoeba+polyphaga-enhanced+growth+of+mycobacterium+smegmatis%5BTitle%5D)+AND+%22Public+Library+of+Science+One%22%5BJournal%5D)">Acanthamoeba polyphaga-enhanced growth of mycobacterium smegmatis.</a> Public Library of Science One. 7 (1), (2012).</li>
<li>Cosson, P., Soldati, T. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18550419">Eat, kill or die: when amoeba meets bacteria.</a> Current Opinion in Microbiology. 11 (3), 271-276 (2008).</li>
<li>Lelong, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+magnesium+and+a+phagosomal+P-type+ATPase+in+intracellular+bacterial+killing%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+microbiology%22%5BJournal%5D)">Role of magnesium and a phagosomal P-type ATPase in intracellular bacterial killing.</a> Cellular microbiology. 13, November 2010 246-258 (2011).</li>
<li>Ouertatani-Sakouhi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibitors+of+Mycobacterium+marinum+virulence+identified+in+a+Dictyostelium+discoideum+host+model%5BTitle%5D)+AND+%22Public+Library+of+Science+One%22%5BJournal%5D)">Inhibitors of Mycobacterium marinum virulence identified in a Dictyostelium discoideum host model.</a> Public Library of Science One. 12 (7), 0181121(2017).</li>
<li>Trofimov, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimycobacterial+drug+discovery+using+Mycobacteria-infected+amoebae+identifies+anti-infectives+and+new+molecular+targets%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Reports%22%5BJournal%5D)">Antimycobacterial drug discovery using Mycobacteria-infected amoebae identifies anti-infectives and new molecular targets.</a> Science Reports. 8 (1), 3939(2018).</li>
<li>Cardenal-Muñoz, E., Barisch, C., Lefrançois, L. H., López-Jiménez, A. T., Soldati, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((When+Dicty+Met+Myco%2C+a+%28Not+So%29+Romantic+Story+about+One+Amoeba+and+Its+Intracellular+Pathogen%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cellular+and+Infection+Microbiology%22%5BJournal%5D)">When Dicty Met Myco, a (Not So) Romantic Story about One Amoeba and Its Intracellular Pathogen.</a> Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 7, 529(2017).</li>
<li>Delafont, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+evidence+of+amoebae-mycobacteria+association+in+drinking+water+network%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Science+%26+Technology%22%5BJournal%5D)">First evidence of amoebae-mycobacteria association in drinking water network.</a> Environmental Science & Technology. 48 (20), (2014).</li>
<li>Cirillo, J. D., Falkow, S., Tompkins, L. S., Bermudez, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+Mycobacterium+avium+with+environmental+amoebae+enhances+virulence%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Interaction of Mycobacterium avium with environmental amoebae enhances virulence.</a> Infection and Immunity. 65 (9), (1997).</li>
<li>Stamm, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mycobacterium+marinum+escapes+from+phagosomes+and+is+propelled+by+actin-based+motility%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Mycobacterium marinum escapes from phagosomes and is propelled by actin-based motility.</a> Journal of Experimental Medicine. 198 (9), 1361-1368 (2003).</li>
<li>Groschel, M. I., Sayes, F., Simeone, R., Majlessi, L., Brosch, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ESX+secretion+systems%3A+mycobacterial+evolution+to+counter+host+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Microbiology%22%5BJournal%5D)">ESX secretion systems: mycobacterial evolution to counter host immunity.</a> Nature Reviews Microbiology. 14 (11), 677-691 (2016).</li>
<li>Pym, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recombinant+BCG+exporting+ESAT-6+confers+enhanced+protection+against+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Recombinant BCG exporting ESAT-6 confers enhanced protection against tuberculosis.</a> Nature Medicine. 9 (5), 533-539 (2003).</li>
<li>Hsu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+primary+mechanism+of+attenuation+of+bacillus+Calmette-Guerin+is+a+loss+of+secreted+lytic+function+required+for+invasion+of+lung+interstitial+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">The primary mechanism of attenuation of bacillus Calmette-Guerin is a loss of secreted lytic function required for invasion of lung interstitial tissue.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100 (21), 12420-12425 (2003).</li>
<li>Smith, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+pore+formation+in+host+cell+membranes+by+ESX-1-secreted+ESAT-6+and+its+role+in+Mycobacterium+marinum+escape+from+the+vacuole%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Evidence for pore formation in host cell membranes by ESX-1-secreted ESAT-6 and its role in Mycobacterium marinum escape from the vacuole.</a> Infection and Immunity. 76 (12), 5478-5487 (2008).</li>
<li>Schnappinger, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+Adaptation+of+Mycobacterium+tuberculosis.+within+Macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Transcriptional Adaptation of Mycobacterium tuberculosis. within Macrophages.</a> Journal of Experimental Medicine. 198 (5), 693-704 (2003).</li>
<li>Fontan, P., Aris, V., Ghanny, S., Soteropoulos, P., Smith, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+Transcriptional+Profile+of+Mycobacterium+tuberculosis+during+THP-1+Human+Macrophage+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Global Transcriptional Profile of Mycobacterium tuberculosis during THP-1 Human Macrophage Infection.</a> Infection and Immunity. 76 (2), 717-725 (2008).</li>
<li>Miranda-CasoLuengo, A. A., Staunton, P. M., Dinan, A. M., Lohan, A. J., Loftus, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+characterization+of+the+Mycobacterium+abscessus+genome+coupled+with+condition+specific+transcriptomics+reveals+conserved+molecular+strategies+for+host+adaptation+and+persistence%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Functional characterization of the Mycobacterium abscessus genome coupled with condition specific transcriptomics reveals conserved molecular strategies for host adaptation and persistence.</a> BMC Genomics. 17 (1), 553(2016).</li>
</ol>

Zachowanie M. abscessus jest znacznie bardziej podobne do zachowania patogennego SGM, takiego jak M. tuberculosis, niż jakichkolwiek innych prątków należących do RGM2. Kluczowym elementem patogeniczności SGM jest ich zdolność do przetrwania, a nawet namnażania się w komórkach prezentujących antygen, takich jak makrofagi i komórki dendrytyczne.
M. abscessus uzyskał pewne zalety genomowe, o czym świadczy całkowita sekwencja jego genomu<sup class...

Rodzaj Mycobacterium obejmuje różne gatunki, od nieszkodliwych organizmów saprofitycznych po główne ludzkie patogeny. Dobrze znane gatunki chorobotwórcze, takie jak Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium marinum i Mycobacterium ulcerans, należą do podgrupy prątków wolno rosnących (SGM). Natomiast podgrupa szybko rosnących prątków (RGM) charakteryzuje się zdolnością do tworzenia widocznych kolonii w czasie krótszym niż 7 dni na podłożu agarowym. Grupa RGM obejmuje ponad 180 gatunków, głównie niepatogennych prątków saprofitycznych. Badania nad interakcjami RGM z ich gospodarzami koncentrowały się głównie na Mycobacterium smegmatis i pokazują, że prątki te są szybko eliminowane przez bakteriobójcze działanie makrofagów.
Mycobacterium abscessus jest jednym z rzadkich RGM, które są chorobotwórcze dla ludzi i jest odpowiedzialne za szeroki zakres infekcji, począwszy od infekcji skóry i tkanek miękkich, a skończywszy na infekcjach płucnych i rozsianych. M. abscessus jest uważany, wraz z Mycobacterium avium, za główny patogen prątkowy u pacjentów z mukowiscydozą1.
Różne badania przeprowadzone na M. abscessus wskazują, że ten prątek zachowuje się jak wewnątrzkomórkowy patogen, zdolny do przetrwania bakteriobójczej odpowiedzi makrofagów i fibroblastów w płucach i skórze, co zwykle nie jest obserwowane w RGM2,3,4. Analiza genomu M. abscessus zidentyfikowała szlaki metaboliczne zwykle występujące w mikroorganizmach środowiskowych mających kontakt z glebą, roślinami i środowiskami wodnymi, w których często występują wolne ameby5. Wykazali również, że M. abscessus jest obdarzony kilkoma genami wirulencji, których nie ma w saprofitycznym i niepatogennym RGM, prawdopodobnie nabytymi przez horyzontalny transfer genów w niszy sprzyjającej wymianie genetycznej, która może gromadzić różne bakterie oporne na ameby.
Eksperymentalnie, jednym z pierwszych uderzających wyników była obserwacja wewnątrzkomórkowego wzrostu M. abscessus w makrofagach, jak również u M. tuberculosis6. M. abscessus jest również odporny na zakwaszenie fagosomu, apoptozę i autofagię, trzy podstawowe mechanizmy odporności komórkowej na infekcję2. Wykazano nawet, że M. abscessus jest w stanie ustanowić natychmiastową komunikację między fagosomem a cytozolem, środowiskiem bardziej bogatym w składniki odżywcze, które może sprzyjać namnażaniu się bakterii2. Bardzo niewiele wiadomo na temat zalet genomowych, które M. abscessus posiada lub nabył, aby umożliwić przetrwanie w środowisku wewnątrzkomórkowym. Kokultura ameby to skuteczna metoda, która pozwoliła na wyizolowanie wielu nowych bakterii opornych na ameby, takich jak Mycobacterium massiliense7,8. Zaobserwowano zdolność do namnażania się w obrębie ameb w modelu aerozolizacji M. abscessus u myszy, co może powodować zwiększoną zjadliwość M. abscessus4. Jedna z hipotez głosi, że M. abscessus rozwinął cechy genetyczne napotkane w tym środowisku, aby przetrwać w komórkach fagocytarnych, które różnią się od innych niepatogennych RGM. Te nabytki mogą sprzyjać zdolności do rozprzestrzeniania się i jej zjadliwości w ludzkim gospodarzu.
Ten raport opisuje narzędzia i metody podkreślające genomiczne korzyści płynące z przetrwania M. abscessus w środowisku ameb. W tym celu najpierw opisano badania przesiewowe mutantów transpozonu M. abscessus na szczepie typu Acanthamoeba castellanii, co pozwala na identyfikację mutantów wadliwych dla wzrostu wewnątrzkomórkowego. Opisano również drugie badanie przesiewowe makrofagów, aby potwierdzić, czy ta wada utrzymuje się u ludzkiego gospodarza. Po drugie, aby zrozumieć, jakie mechanizmy są wykorzystywane w M. abscessus do przystosowania się do życia w komórkach fagocytarnych i zwiększenia jego zjadliwości w organizmie gospodarza, opracowano metodę specjalnie dostosowaną do M. abscessus, po wspólnej hodowli w obecności ameb, która pozwoliła na ekstrakcję całkowitego RNA z bakterii wewnątrzamebowych. W związku z tym opracowano kompleksowe spojrzenie na geny M. abscessus, które są niezbędne do życia wewnątrzkomórkowego.

<table><tbody><tr><td>Nazwa materiału</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>24-dołkowe płytki</td><td>Thermofisher</td><td>11874235</td><td></td></tr><tr><td>96-dołkowe Thermofisher</td><td></td><td>10687551</td><td></td></tr><tr><td>Beadbeater&nbsp;</td><td>Bioanalizator Bertin</td><td>Precellys 24</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Agilent</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Genepulser Xcell</td><td>Biorad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Spektrofotometr Nanodrop 2000</td><td>Fluorometr Thermofisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>QuBit</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Koraliki cyrkonowe/kulki krzemionkowe</td><td>Produkty Biospec</td><td>11079101Z</td><td>Koraliki</td></tr><tr><td>Nazwa odczynnika/komórek</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acanthamoeba&nbsp; Castellanii&nbsp; </td><td>ATCC</td><td>30010</td><td></td></tr><tr><td>szczep Amikacyna&nbsp;</td><td>Mylan</td><td>150927-A</td><td>w proszku</td></tr><tr><td>B-merkaptoetanol&nbsp;</td><td>Roztwór Sigma-Aldrich</td><td>M6250</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C1016</td><td>>93% granulowany bezwodny</td></tr><tr><td>chloroform&nbsp;</td><td>Fluka</td><td>25666</td><td>roztwór</td></tr><tr><td>ClaI enzym</td><td>New England Biolabs</td><td>R0197S</td><td></td></tr><tr><td>agar Columbia&nbsp;</td><td>Biomerieux</td><td>43041</td><td>90 mm</td></tr><tr><td>D-Glucose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8270&nbsp;</td><td>proszek</td></tr><tr><td>DMEM&nbsp;</td><td>Thermofisher</td><td>11500596</td><td>pożywkę</td></tr><tr><td>wolną od DNaz i RNaz&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>10977-035</td><td>solution</td></tr><tr><td>E.&nbsp; COLI Elektrokompetentny&nbsp;</td><td>Bakterie Thermofisher</td><td>18265017</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E4884</td><td>proszek</td></tr><tr><td>Escherichia coli&nbsp; </td><td>Kliniczny izolat</td><td>osobistych</td><td>bakterii</td></tr><tr><td>zapasowych Fe(NH4)2(SO4)-6H20&nbsp;</td><td>EMS</td><td>15505-40</td><td>roztwór siarczanu 4% wodny</td></tr><tr><td>Płodowa surowica cielęca</td><td>Gibco</td><td>10270</td><td>surowica</td></tr><tr><td>Glicerol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5516</td><td>roztwór</td></tr><tr><td>Tiocyjanian guanidu&nbsp;</td><td>Euromedex</td><td>EU0046-D</td><td>w proszku</td></tr><tr><td>Izopropanol&nbsp;</td><td>Roztwór Sigma-Aldrich</td><td>I9516</td><td></td></tr><tr><td>Makrofagi J774.2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>J774.2</td><td>Szczep</td></tr><tr><td>kanamycyny&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>60615</td><td>proszek</td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P0662</td><td>Monobasic, bezwodny</td></tr><tr><td>płynny LB średni&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>12795-027</td><td>proszek</td></tr><tr><td>Lizozym</td><td>Roche</td><td>10837059001</td><td>proszek</td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>Labosi</td><td>M275</td><td>pur</td></tr><tr><td>Microbank TM (krioprobówki z kulkami)</td><td>Pro-Lab Diagnostic</td><td>PL.170/M</td><td></td></tr><tr><td>Middlebrook 7H11 medium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M0428</td><td>proszek</td></tr><tr><td>Middlebrook 7H9 medium</td><td>Thermofisher</td><td>11753473</td><td>w proszku</td></tr><tr><td>M&uuml; ller-Hinton agar</td><td>Biorad</td><td>3563901</td><td>proszek</td></tr><tr><td>N-laurylo-sarkozyna</td><td>Merck</td><td>S37700 416</td><td>proszek</td></tr><tr><td>Na2HPO4-7H2O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9390</td><td>98-102%</td></tr><tr><td>Fenol/chloroform&nbsp;</td><td>Roztwór Sigma-Aldrich</td><td>77617</td><td></td></tr><tr><td>Proteinaza K</td><td>Thermofisher</td><td>EO0491</td><td>proszek</td></tr><tr><td>pepton proteozy</td><td>BD</td><td>211684</td><td>enzymatyczne trawienie tkanek zwierzęcych</td></tr><tr><td>plazmid pUC19 New</td><td>England Biolabs</td><td>54357</td><td>plazmid</td></tr><tr><td>SDS&nbsp; 20%</td><td>Roztwór 1610418 Biorad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cytrynian sodu</td><td>Calbiochem</td><td>567446</td><td>proszek</td></tr><tr><td>Tiomocznik</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>88810</td><td>proszek</td></tr><tr><td>Tris</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>154563</td><td>proszek</td></tr><tr><td>Trizol&nbsp;</td><td>Thermofisher</td><td>12044977</td><td>rozwiązanie</td></tr><tr><td>Tween 80</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1754&nbsp;</td><td>rozwiązanie</td></tr><tr><td>Ekstrakt drożdżowy&nbsp;</td><td>Zestaw BD</td><td>212750</td><td></td></tr><tr><td>Kit</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>AMBION DNaza&nbsp;</td><td>Zestaw Thermofisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>10792877 Chip DNA Agilent Zestaw Agilent</td><td></td><td>5067-1504</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw GeneJET Plasmid Miniprep&nbsp;</td><td>Zestaw Thermofisher</td><td>K0503</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw do oczyszczania PureLink PCR</td><td>Zestaw</td><td>do K310001</td><td>Invitrogen</td></tr><tr><td>Zestaw do testów Quant-It"</td><td>Zestaw Thermofisher</td><td>Q33140/Q32884</td><td></td></tr><tr><td>Ligaza DNA T4&nbsp;</td><td>Zestaw Invitrogen</td><td>Y90001</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw przygotowawczy TruSeq Stranded RNA LT</td><td>Zestaw</td> <td>do 15032611</td><td>Illumina</td></tr></tbody></table>

identyfikacja markerów wirulencji mycobacterium abscessus do replikacji wewnątrzkomórkowej w fagocytach

Identification of Virulence Markers of Mycobacterium abscessus for Intracellular Replication in Phagocytes

Tym, co odróżnia Mycobacterium abscessus od innych saprofitycznych prątków, jest zdolność do opierania się fagocytozie przez ludzkie makrofagi i zdolność do namnażania się wewnątrz takich komórek. Te cechy wirulencji sprawiają, że M. abscessus jest patogenny, szczególnie u wrażliwych gospodarzy z podstawową strukturalną chorobą płuc, taką jak mukowiscydoza, rozstrzenie oskrzeli lub gruźlica. Nie jest jasne, w jaki sposób pacjenci zarażają się M. abscessus. W przeciwieństwie do wielu prątków, M. abscessus nie występuje w środowisku, ale może znajdować się w amebach, fagocytach środowiskowych, które stanowią potencjalny rezerwuar M. abscessus. Rzeczywiście, M. abscessus jest oporny na fagocytozę amebową, a życie wewnątrz ameby wydaje się zwiększać zjadliwość M. abscessus w eksperymentalnym modelu infekcji. Jednak niewiele wiadomo na temat zjadliwości M. abscessus jako takiej. Aby rozszyfrować geny nadające przewagę wewnątrzkomórkowemu życiu M. abscessus, opracowano badania przesiewowe biblioteki mutantów transpozonów M. abscessus. Równolegle opracowano metodę ekstrakcji RNA z wewnątrzkomórkowych prątków po wspólnej hodowli z amebami. Metoda ta została zwalidowana i pozwoliła na sekwencjonowanie całych transkryptomów M. abscessus wewnątrz komórek; zapewniając po raz pierwszy globalne spojrzenie na adaptację M. abscessus do życia wewnątrzkomórkowego. Oba podejścia dają nam wgląd w czynniki wirulencji M. abscessus, które umożliwiają M. abscessus kolonizację dróg oddechowych u ludzi.

M. abscessus posiada zdolność do opierania się i ucieczki przed odpowiedziami bakteriobójczymi makrofagów oraz pierwotniaków środowiskowych, takich jak ameby. M. abscessus wykazuje ekspresję czynników wirulencji podczas wzrostu w kontakcie z amebami, co zwiększa jego wirulencję u myszy4. Pierwszym celem opisanych metod było zidentyfikowanie genów obecnych w M. abscessus, które umożliwiają jego przeżycie i namnażanie się wewnątrz ameb....

Tutaj prezentujemy dwa protokoły do badania interakcji Phagocyte-Mycobacterium abscessus: badanie przesiewowe biblioteki mutantów transpozonów pod kątem bakteryjnego niedoboru wewnątrzkomórkowego oraz określenie bakteryjnego transkryptomu wewnątrzkomórkowego na podstawie sekwencjonowania RNA. Oba podejścia zapewniają wgląd w zalety genomu i adaptacje transkryptomiczne, poprawiając sprawność bakterii wewnątrzkomórkowych.

Identyfikacja markerów wirulencji Mycobacterium abscessus do replikacji wewnątrzkomórkowej w fagocytach

What differentiates Mycobacterium abscessus from other saprophytic mycobacteria is the ability to resist phagocytosis by human macrophages and the ability ...

Badania przesiewowe bibliotek mutantów i badania transkryptomiczne patogenów wewnątrzkomórkowych mogą pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania dotyczące adaptacji genomicznych i regulacyjnych patogenów będących przedmiotem zainteresowania, które są wykorzystywane do przetrwania wewnątrz gospodarza. Głównymi zaletami tych technik jest to, że są to techniki badawcze na dużą skalę i zapewniają obiektywny wgląd w adaptację do życia wewnątrzkomórkowego. Implikacje tych technik rozciągają się w kierunku terapii Mycobacterium abscessus, które wiążą się z tą chorobą, dając wgląd w potencjalne cele terapii szczepionkowej.Zacznij od hodowli ameby Acanthamoeba castellani, lub Ac, w 30 mililitrach pożywki z drożdżami peptonowymi i glukozą w kolbach do hodowli tkankowych o powierzchni 75 centymetrów kwadratowych w temperaturze pokojowej. Po godzinie użyj pipety o pojemności 25 mililitrów, aby usunąć supernatant i przemyj komórki trzykrotnie 10 mililitrami buforu Ac bez węgla i azotu na pranie. Po ostatnim przepłukaniu odłączyć amebę od dna kolby pojedynczym energicznym wstrząsem i dostosować komórki w probówce Falcona do stężenia pięciokrotnego 10 do 5 ameb na promil w świeżym buforze Ac.Wysiewaj pięć razy po 10 do czterech ameb na dołek w 96-dołkowej płytce. Umieść płytkę w temperaturze 32 stopni Celsjusza na godzinę bez wstrząsania, aby pływające trofo-zoity ameba przylgnęły do studzienek. W międzyczasie podgrzej bakterie na lodzie i dodaj pięć mikrolitrów rozmrożonych bakterii do każdej studzienki pod koniec inkubacji.Po 1,5 godziny w temperaturze 32 stopni Celsjusza wyrzuć supernatant, odwracając płytkę na stos sterylnej gazy w wysterylizowanej metalowej tacy pod wyciągiem. Umyj każdą studzienkę trzy razy 200 mikrolitrami świeżego podłoża Ac na studzienkę. Po ostatnim płukaniu inkubować kokulturę z 20 mikrolitrami świeżej pożywki uzupełnionej amikacyną na dołek, aby wyeliminować wszelkie pozostałe prątki zewnątrzkomórkowe przez dwie godziny.Następnie trzy prania w świeżym podłożu Ac, jak właśnie pokazano. Następnie dodaj 200 mikrolitrów pożywki, uzupełnionej świeżą amikacyną do każdej studzienki, a następnie dodaj pięć razy 10 do siedmiu inaktywowanych termicznie bakterii Escherichia coli. Po 48 godzinach poddać komórki lizie 10 mikrolitrów 10% dodecylosiarczanu sodu na studzienkę przez 30 minut w temperaturze 32 stopni Celsjusza i rozprowadzić pięć mikrolitrów lizatu na płytkach Columbia Agar zawierających 5% krwi owczej.Dalej rozcieńczyć lizaty, dodając 25 mikrolitrów sterylnej wody na każdą kroplę. Gdy wszystkie lizaty zostaną platerowane, uszczelnij płytki plastikową folią parafinową i inkubuj kultury przez trzy do czterech dni w temperaturze 37 stopni Celsjusza. Kiedy kolonie pojawią się na płytkach, sfotografuj kultury i zidentyfikuj mutanty upośledzone pod względem wzrostu wewnątrzkomórkowego przez osady o najmniejszej liczbie kolonii bakteryjnych.W celu ekstrakcji RNA prątków wewnątrzkomórkowych najpierw wyhoduj M.abscessus w pożywce 7H9 uzupełnionej glicerolem i glukozą do środkowej fazy wykładniczej w 50-mililitrowych probówkach przy 120 obr./min. Pod koniec hodowli przemyj bakterie dwa razy 10 mililitrami buforu Ac na pranie i zmierz średnicę 600, aby oszacować stężenie bakterii. Następnie dodaj 8,5 razy 10 do ośmiu prątków do 8,5 razy 10 do sześciu ameb w 10 mililitrach świeżej pożywki Ac na godzinę inkubacji w temperaturze 30 stopni Celsjusza i 80 obr./min.Pod koniec inkubacji zbiera komórki przez odwirowanie i przemłukuje osad trzykrotnie w 10 mililitrach świeżego buforu Ac na przemycie w tych samych warunkach wirówki. Następnie ponownie zawiesić komórki w 10 mililitrach świeżego buforu Ac uzupełnionego amikacyną w celu wyeliminowania wszelkich bakterii zewnątrzkomórkowych i inkubować komórki przez cztery godziny w temperaturze 30 stopni Celsjusza i 80 obr./min, a następnie dwa płukania w świeżym buforze Ac. Po ostatnim płukaniu ponownie zawiesić zainfekowane ameby w czterech mililitrach zimnego roztworu trzy, uzupełnionego 280 mikrolitrami beta merkaptoetanolu, aby rozbić ameby na lodzie przez 10 minut.Pod koniec inkubacji odwirować lizat komórkowy, aby osadzać uwolnione bakterie wewnątrzkomórkowe i ponownie zawiesić osad bakteryjny w jednym mililitrze zimnego roztworu trzy. Ważne jest, aby usunąć cały supernatant, aby uniknąć zanieczyszczenia RNA ameby lub proteazami, które mogły stworzyć próbki. Zbierz uwolnione bakterie za pomocą drugiego wirowania i ponownie zawiesić osad w jednym mililitrze buforu ekstrakcyjnego.Następnie inkubować przez 24 godziny w temperaturze minus 80 stopni Celsjusza. Przenieś roztwór prątków do dwóch mililitrowych probówek śrubowych zawierających kulki cyrkonu do znaku gradacji 500 mikrolitrów i przechowuj probówki przez kolejne 24 godziny w temperaturze ujemnej 80 stopni Celsjusza, aby ułatwić aktywację RNA syn i rozpuszczenie komórek. W dniu analizy rozmrozić próbki na lodzie i poddać komórki lizie za pomocą dwóch rund homogenizacji przy 6000 obr./min przez 25 sekund, a następnie jednej rundy homogenizacji przy 6000 obr./min przez 20 sekund.Pomiędzy każdą rundą homogenizacji próbki należy schłodzić na lodzie przez jedną minutę, aby uniknąć degradacji RNA. Po trzeciej rundzie homogenizacji schłodzić próbki na lodzie przez 20 minut i dodać 200 mikrolitrów chloroformu rozcieńczonego w alkoholu izoamylowym do każdej probówki. Wirować przez jedną minutę, następnie odwirować próbki i dodać 0,8 mililitra zimnego izopropanolu do fazy wodnej na dwie do trzech godzin inkubacji w temperaturze minus 20 stopni Celsjusza.Pod koniec inkubacji ponownie odwirować próbki i umyć granulki w 500 mikrolitrach zimnego 70% etanolu bez mieszania. Następnie natychmiast usuń etanol przez odwirowanie. Odessać supernatant do suszenia granulek w koncentratorze odśrodkowym i ponownie zawiesić granulki w 100 mikrolitrach wody wolnej od DNA/RNA.Ekstrakcja prątkowatego MRNA, jak pokazano, umożliwia ocenę indukowanych i represjonowanych rodzin genów poprzez grupowanie genów zgodnie z ich rolami w reagowaniu na środowisko o ograniczonym źródle składników odżywczych i minerałów lub na środowisko niedotlenione lub kwaśne. W odporności na stres oksydacyjny i nitrozatywny lub w ekspresji czynników wirulencji w odpowiedzi na amebę środowiskową. Podejmując się tych procedur, należy pamiętać o jednoczesnym wykonaniu hodowli i izolacji RNA kontrolowanych i zakażonych próbek, aby uniknąć efektów wsadowych.Zgodnie z tą procedurą można zastosować inne metody, takie jak sekwencjonowanie podwójnego RNA, aby odpowiedzieć na dodatkowe pytania dotyczące interakcji patogenów gospodarza. Po jej opracowaniu, technika ta utorowała drogę naukowcom w dziedzinie mikrobiologii w kierunku zjadliwości prątków w modelu gospodarza ameby. Nie zapominaj, że praca z amebami może być niezwykle niebezpieczna, ponieważ ameby mogą przekształcić się w torbiele, jeśli nie zastosujesz się do kroków opisanych w procedurze.

identification-virulence-markers-mycobacterium-abscessus-for

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia i infekcje

Źródło: Bernut, A. i inni. Rozszyfrowanie i obrazowanie patogenezy oraz układania rdzenia ropnia Mycobacterium absceptus w zarodkach danio dano dano. J. Vis. Exp. (2015)Ten film demonstruje protokół wykorzystujący transgeniczne zarodki danio danio ekspresyjne ekspresujące makrofagi fluorescencyjne i zakażone fluorescencyjnym szczepem Mycobacterium abscessus rough do wizualizacji interakcji żywiciel-patogen. Pokazuje, jak pozakomórkowe przewody umożliwiają unikanie odporności, wspierając...

Obrazowanie na żywo interakcji żywiciel-patogen w zarodkach danio dano zakażonych Mycobacterium abscessus

Source: Dubois, V., et al. Identification of Virulence Markers of Mycobacterium abscessus for Intracellular Replication in Phagocytes. J. Vis. Exp. (2018)This video demonstrates the procedure of co-culturing amoebae with mutant bacterial strains to evaluate their intracellular survival and identify virulence markers through differences in colony counts.

Detecting Bacterial Virulence Using Amoeba as a Host System

Ten film demonstruje test do ilościowego określenia wewnątrzkomórkowego wzrostu pasożytów w makrofagach pochodzących ze szpiku kostnego (BMM). Komórki makrofagów są zakażone ruchliwymi i nieruchliwymi stadiami inwazyjnymi Leishmania, odpowiednio promastigotykami metacyklicznymi i amastigotami. Pasożyty atakują makrofagi, uwewnętrzniając się w parazytoforycznej wakuoli i namnażając się w środku. Wewnątrzkomórkowy wzrost pasożyta określa się ilościowo za pomocą mikroskopu po fluorescencyjnym...

Test in vitro w celu ilościowego określenia wewnątrzkomórkowego wzrostu pasożyta w makrofagach

Opisujemy metodę śledzenia pęknięcia błony wewnętrznej wywołanego przez wewnątrzkomórkowe bakterie Shigella flexneri i Mycobacterium tuberculosis po inwazji komórek gospodarza. Nasz test wykorzystuje CCF4, cytoplazmatyczną sondę FRET gospodarza w żywych lub utrwalonych komórkach. Ten reporter jest degradowany przez aktywność enzymatyczną obecną na powierzchni bakterii.

Pomiary pojedynczych komórek pęknięcia wakuolarnego spowodowanego przez patogeny wewnątrzkomórkowe

Makrofagi od dawna są uznawane za kluczowy składnik wrodzonej i adaptacyjnej odpowiedzi immunologicznej. Niedawna eksplozja wiedzy dotyczącej ewolucyjnych, genetycznych i biochemicznych aspektów interakcji między makrofagami a mikroorganizmami ponownie zwróciła uwagę naukowców na makrofagi. W artykule opisano metodę różnicowania makrofagów od szpiku kostnego myszy.

Produkcja makrofagów pochodzących ze szpiku kostnego

Optycznie przezroczyste embriony danio pręgowanego są szeroko stosowane do badania i wizualizacji w czasie rzeczywistym interakcji między patogennymi mikroorganizmami a wrodzonymi komórkami odpornościowymi. Mikroiniekcja Mycobacterium abscessus, w połączeniu z obrazowaniem fluorescencyjnym, służy do badania podstawowych cech chorobotwórczych, takich jak tworzenie się pępowiny w zarodkach danio pręgowanego.

Rozszyfrowywanie i obrazowanie patogenezy i sznurowania Mycobacterium abscessus w zarodkach danio pręgowanego

Opisujemy tutaj prostą i szybką metodę izolacji fagosomów zawierających Salmonella typhimurium od makrofagów poprzez pokrycie bakterii biotyną i streptawidyną.

Izolacja fagosomów zawierających Salmonella typhimurium od makrofagów

Wszystkie chorobotwórcze gatunki Leishmania rezydują i rozmnażają się wewnątrz makrofagów swoich kręgowców gospodarzy. W tym miejscu przedstawiamy protokół infekowania mysich makrofagów pochodzących ze szpiku kostnego w hodowli Leishmania, a następnie precyzyjne określenie ilościowe kinetyki wzrostu wewnątrzkomórkowego. Metoda ta jest przydatna do badania poszczególnych czynników wpływających na interakcję gospodarz-patogen i zjadliwość Leishmania.

Kwantyfikacja wzrostu wewnątrzkomórkowego wewnątrz makrofagów jest szybką i wiarygodną metodą oceny zjadliwości pasożytów Leishmania

Opisujemy zarówno testy infekcji in vitro, jak i in vivo, które mogą być użyte do analizy aktywności czynników kodujących gospodarza.

Wykorzystanie patogenu bakteryjnego do badania odpowiedzi gospodarza na poziomie komórkowym i organizmowym

Myszy są ogólnie odporne na infekcje Mycobacterium abscessus, co komplikuje odkrycie i opracowanie bardzo potrzebnych antybiotyków przeciwko infekcjom płuc. W tym miejscu opisujemy metodę przygotowania inokulum i zakażenia dotchawiczego, która, jak wykazano, zapewnia trwałą infekcję u myszy immunokompetentnych.

Przygotowanie Mycobacterium abscessus osadzonego w paciorkach agarowych w celu śródtchawiczego inokulacji myszy immunokompetentnych

Przedstawiamy tutaj protokół dotyczący obrazowania intravitalnego zmniejszonej, zatwierdzonej na poziomie BSL-2 Mycobacterium tuberculosis. szczepu w płucach mysich przy użyciu stałego okna płucnego. Takie podejście umożliwia długotrwałą analizę z rozdzielczością pojedynczych komórek wczesnych interakcji gospodarz-patogen, w tym lokalizacji pałeczek, dynamiki naczyń i fagocytozy przez makrofagi w tym samym mikrośrodowisku płuc.

Obrazowanie in vivo zmniejszonego wzrostu Mycobacterium tuberculosis w płucach mysich podczas wczesnej infekcji dokrewnej

Odkryj metody badania interakcji między fagocytami a Mycobacterium abscessus przy użyciu biblioteki mutantów transposonowych i sekwencjonowania RNA. Poznaj adaptacje genomowe ułatwiające przetrwanie bakterii wewnątrzkomórkowe.

Identyfikacja markerów wirulencji Mycobacterium abscessus do replikacji wewnątrzkomórkowej w fagocytach

Przeglądaj więcej filmów