Name: Elastyczny, niedrogi system hydroponiczny do oceny reakcji roślin na małe cząsteczki w sterylnych warunkach (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-25T13:30:00.000+00:00
Duration: 11 min 27 s
Description: Poznaj elastyczny system hydroponiczny do oceny reakcji roślin na małe cząsteczki w sterylnych warunkach. Metoda umożliwia skuteczną absorpcję chemikaliów przez korzenie Arabidopsis thaliana w badaniach molekularnych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez Fundację Badawczą São Paulo (FAPESP; Grant 12/19561-0) oraz Towarzystwa Maxa Plancka. Elias F. Araújo (FAPEMIG 14/30594), Carolina C. Monte-Bello (FAPESP; Grant 14/10407-3), Valéria Mafra (FAPESP; Grant 14/07918-6) i Viviane C. H. da Silva (CAPES/CNPEM 24/2013) są wdzięczni za stypendium. Autorzy dziękują Christianowi Meyerowi z Instytutu Jean Pierre Bourgin (INRA, Wersal, Francja) za hojne dostarczenie przeciwciał przeciwko RPS6. Autorzy dziękują RTV UNICAMP i Edowi Paulo Aparecido de Souza Manoelowi za wsparcie techniczne podczas nagrywania dźwięku.

1. Przygotowanie płynnych i stałych pożywek hodowlanych
<ol>
	<li>Przygotować płynną pożywkę, używając pożywki Murashige i Skoog (MS) o połowie mocy z witaminami [0,0125 mg/L pięciowodnego chlorku kobaltu(II), 0,0125 mg/l pięciowodnego siarczanu miedzi(II), 18,35 mg/l etylenodiaminotetraoctanu żelaza sodu, 3,10 mg/l kwasu borowego, 0,415 mg/l jodku potasu, 8,45 mg/l jednowodnego siarczanu manganu, 0,125 mg/l dwuwodnego molibdenianu sodu, 4,30 mg/L siarczanu siedmiowodnego, 166,01 mg/L chlorku wapnia, 85 mg/L diwodorofosforanu potasu, 950 mg/L azotanu potasu, 90,27 mg/L siarczanu magnezu, 825 mg/L azotanu amonu, 1 mg/L glicyny, 50 mg/L mio-inozytolu, 0,25 mg/L kwasu nikotynowego, 0,25 mg/L chlorowodorku pirydoksyny, i 0,05 mg/l chlorowodorku tiaminy] uzupełnione 0,25 g/l MES i dostosować pH do 5,8 za pomocą 10 M KOH.</li>
	<li>Dodać 10 g/l agaru, aby uzyskać pożywkę MS-solid o połowie mocy. Przed użyciem należy sterylizować pożywkę w autoklawie w temperaturze 121 °C przez 20 minut.</li>
</ol>
2. Montaż systemu hydroponicznego
UWAGA: Te kroki powinny być skrupulatnie przestrzegane, aby zbudować system hydroponiczny.
<ol>
	<li>Sterylizacja materiału
	<ol>
		<li>Zapakuj w torbę do autoklawu stojaki na końcówki do pipet (bez osłon), które będą używane jako minizbiorniki. Autoklawuj stojaki w temperaturze 121 °C przez 20 min, 15 psi. 
		UWAGA: Używany przez nas polipropylenowy stojak na końcówki do pipet miał następujące wymiary: 120 mm (długość) x 89 mm (szerokość) x 55 mm (wysokość). Płaska powierzchnia końcówki pipety musi mieć miejsce na dodanie pożywki hodowlanej. Można użyć innych stojaków na końcówki (patrz tabela materiałów). 
		UWAGA: Podczas całej procedury montażu systemu hydroponicznego konieczne jest użycie okapu z przepływem laminarnym, który przed użyciem należy wyczyścić i zdezynfekować 70% etanolem. Eksperymentator musi nosić fartuch laboratoryjny, umyć ręce i odsłoniętą skórę oraz zdezynfekować je 70% etanolem. Rękawice są opcjonalne, z wyjątkiem aplikacji leków.</li>
		<li>Wyczyść wszystkie opisane powyżej akcesoria (jednorazowe plastikowe pudełka, taśmę klejącą, pipety, nożyczki i pęsetę) 70% etanolem przed wejściem do okapu z przepływem laminarnym. Jeśli okap na to pozwala, włącz światło UV na 10 minut przed montażem systemu hydroponicznego, aby odkazić miejsce pracy.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Montaż minizbiornika
	<ol>
		<li>Uszczelnij górną powierzchnię końcówki pipety na płasko taśmą samoprzylepną (Rysunek 1B). Jeśli to możliwe, pozostaw go w świetle UV na 10 minut.</li>
		<li>Dodaj 180 μl stopionej pożywki hodowlanej MS (lekko ciepłej) do każdej studzienki za pomocą pipety wielokanałowej (<silna klasa="xfig">Rysunek 1C). 
		UWAGA: Przygotowując wiele zbiorników, użyj płyty grzejnej, aby zapobiec zestaleniu się podłoża MS.</li>
		<li>Pozostaw podłoże do całkowitego zestalenia się (przez około 30 minut). 
		UWAGA: W okresie krzepnięcia można włączyć światło UV.</li>
		<li>Całkowicie napełnij stojak na końcówki pipet płynnym podłożem hodowlanym MS (<silna klasa="xfig">Rysunek 1D) i upewnij się, że istnieje bliski kontakt między ciałem stałym a płynnym medium.</li>
		<li>Usuń taśmy samoprzylepne z górnej powierzchni końcówki pipety na płasko i ostrożnie przymocuj ją do stojaka. System hydroponiczny jest teraz gotowy do przyjęcia wysterylizowanych nasion.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Sterylizacja nasion
<ol>
	<li>Umieść 500 nasion Arabidopsis w mikroprobówce o pojemności 1,5 ml. Użyj tylu mikroprobówek, ile to konieczne, w zależności od liczby roślin wymaganych do eksperymentu.</li>
	<li>Umyj nasiona 70% etanolem przez 2 minuty z delikatnym mieszaniem. Pozwól nasionom się uspokoić, a następnie ostrożnie usuń etanol.</li>
	<li>Dodać 1 ml 10% roztworu podchlorynu sodu zawierającego 2 μl detergentu polisorbatowego 20. Mieszać roztwór przez 5 minut. Ostrożnie usuń roztwór.</li>
	<li>Opłucz nasiona sterylną wodą destylowaną, aż wszystkie pozostałości wybielacza zostaną całkowicie usunięte (około 5x). 
	UWAGA: Po sterylizacji powierzchniowej nasiona zanurzono w sterylnej wodzie destylowanej i rozwarstwiono w temperaturze 4 °C w ciemności przez 5 dni, aby zsynchronizować kiełkowanie. 
	UWAGA: Nasiona Setaria viridis (akces A10.1) były wstępnie inkubowane w stężonym kwasie siarkowym przez 15 minut (w celu przerwania fizycznego spoczynku), dokładnie umyte w sterylnej wodzie destylowanej, a następnie odynczone 5% roztworem podchlorynu sodu zawierającym 0,1% polisorbatu 20 przez 5 minut z delikatnym mieszaniem21. Pozostałe etapy sterylizacji były identyczne z tymi opisanymi dla nasion rzodkiewnika.</li>
</ol>
4. Aplikacja nasion
<ol>
	<li>Lekko odetnij koniec końcówki o pojemności 200 μl za pomocą sterylnego skalpela.</li>
	<li>Odpipetować nasiona rzodkiewnika do stałej pożywki hodowlanej na górnej powierzchni końcówki pipety płasko. Uważaj, aby podłoże nie poluzowało się z mieszkania; w przeciwnym razie nasiona będą zacienione, a sadzonki nie będą rosły prawidłowo (<silna klasa="xfig">Rysunek 1E). 
	UWAGA: Użyj sterylnej pęsety do nasion Setaria (z zarodkiem skierowanym do góry).</li>
	<li>Przechowuj jak najwięcej minizbiorników w jednorazowym plastikowym pudełku, aby utrzymać wysoką wilgotność i chronić środowisko przed mikroorganizmami (<silna klasa = "xfig" >Rysunek 1F).</li>
	<li>Dokładnie zamknij jednorazowe plastikowe pudełko za pomocą taśmy klejącej, aby uniknąć zanieczyszczenia.</li>
	<li>Umieść systemy hydroponiczne w komorze wzrostowej o odpowiednich warunkach wzrostu dla interesującej Cię rośliny. 
	UWAGA: W pracy wykorzystano następujące warunki: 75% wilgotności i 150 μmol m-2 s-1 natężenia promieniowania oraz warunki równonocne 12 h światła (21 °C)/12 h ciemności (19 °C) dla Arabidopsis, lub 300 μmol m-2 s-1 natężenia promieniowania i 12 h światła (28 °C)/12 h ciemności (25 °C) dla Setarii (<silna klasa="xfig">Rysunek 1G i 1H).</li>
</ol>
5. Walidacja użycia tego systemu hydroponicznego do hamowania celu kinazy rapamycynowej
Uwaga: Ten system hydroponiczny został początkowo opracowany, aby ułatwić podawanie chemikaliów roślinom, które, ogólnie rzecz biorąc, są bardzo drogie do zastosowania w eksperymentach na dużą skalę. Jako dowód słuszności koncepcji, inhibitor kompetycyjny ATP AZD-8055, o którym wiadomo, że jest specyficznie ukierunkowany na miejsce wiązania ATP kinazy białkowej TOR 22, został wykorzystany do śledzenia tłumienia aktywności TOR w siewkach A. thaliana Columbia-0 (The Nottingham Arabidopsis Stock Centre, NASC ID: N22681). W tym miejscu pokrótce opisano zastosowany protokół.
<ol>
	<li>Nasiona uprawiać hydroponicznie do etapu 1.04 zgodnie z BBCH scale23 (przez około 11 dni) w warunkach klimatycznych opisanych powyżej. Zastąp pożywkę świeżą pożywką zawierającą 0,05% DMSO (kontrola), 2 μM AZD-8055 (inhibitor TOR) rozcieńczoną w DMSO lub bez leczenia (imitacja), pod koniec nocy (EN).</li>
	<li>Po zabiegu zbierz kilka sadzonek w różnych punktach czasowych i podziel je na korzenie i pędy. Próbki należy zamrozić w ciekłym azocie, zmielić na drobny proszek w młynku automatycznym (patrz tabela materiałów) i przechowywać proszek w temperaturze -80 °C do momentu użycia.</li>
	<li>Immunoblot przeciwko ufosforylowanym i nieufosforylowanym formom białka rybosomalnego 40S S6 (RPS6) według Dobrenel i wsp.24.</li>
	<li>Wybielaj nienaruszone sadzonki w celu depigmentacji próbki, umyj je w wodzie destylowanej, zanurz w roztworze jodu na 5 min25 i sfotografuj sadzonki w mikroskopie stereoskopowym (obiektyw 0,63x, przybliżenie 20x i magnituda 7,5x) w celu jakościowej oceny zawartości skrobi.</li>
	<li>Określ ilościowo skrobię po enzymatycznej degradacji i pomiarze uwolnionej glukozy spektrofotometrycznie, sprzężając ją z redukcją NADP+ do NADPH26,27.</li>
	<li>Wykonaj ekstrakcję całkowitego RNA, syntezę cDNA i ilościowe testy RT-PCR zgodnie z opisem Caldana i wsp.28, aby ocenić poziom ekspresji genów związanych z różnymi rodzajami stresu.</li>
	<li>Opcjonalnie sadzonki należy uprawiać na podłożu ogrodniczym w plastikowych doniczkach o pojemności 0,1 l w podobnych warunkach klimatycznych [60 % wilgotności, 150 μmol m-2 s-1 natężenia promieniowania i warunkach równonocy 12 h światła (21 °C)/12 h ciemności (19 °C)] w celu porównania ich z sadzonkami uprawianymi hydroponicznie. 
	UWAGA: Geny docelowe użyte do testów ekspresji genów to ABF3 (At4g34000), ASN1 (At3g47340) i TPS5 (At4g17770), a ich poziomy ekspresji zostały znormalizowane przy użyciu metody delta-Ct29 przy użyciu ACT2 (At3g18780) lub PDF2 (At4g04890) jako wewnętrznych genów odniesienia, przy założeniu 100% skuteczności amplifikacji PCR we wszystkich próbkach. Pary oligonukleotydów użyte do ilościowej reakcji PCR to: ABF3 (GTTCTCAACCTGCAACACAGTGC; TCCAGGAGATACTGCTGCAACC), ASN1 (AGGTGCGGACGAGATCTTTG; GTGAAGAGCCTTGATCTTGC), TPS5 (CTGCTCTGATGCTCCTTCTTCC; AAGCTGGTTTCCAACGATGATG), ACT2 (CGTACAACCGGTATTGTGCTGG; CTCTCTCTGTAAGGATCTTCATG) oraz PDF2 (TAACGTGGCCAAAATGATGC; GTTCTCCACAACCGCTTGGT).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Ta zoptymalizowana struktura hydroponiczna umożliwia udaną hodowlę roślin in vitro. Nasiona dobrze kiełkują na stałym podłożu na płaskiej powierzchni końcówki pipety, co stanowi znaczny zysk w porównaniu z systemami, w których nasiona są moczone w pożywce. Dużą zaletą tego systemu jest to, że podczas rozwoju sadzonek korzenie mają bezpośredni kontakt z płynnym podłożem bez konieczności przenoszenia. Co więcej, obróbkę chemiczną można łatwo zastosować w płynnym medium w zmniejszonej objętości. Wilgotność jest utr...

Zalety uprawy roślin przy użyciu hydroponiki zostały powszechnie uznane w produkcji dużych i jednolitych roślin, umożliwiając powtarzalne eksperymenty1,2,3. W tym systemie skład pożywki może być odpowiednio kontrolowany i poddawany recyklingowi na wszystkich etapach wzrostu i rozwoju roślin. Ponadto korzenie nie są narażone na stresy abiotyczne, które mogą wystąpić w przypadku roślin uprawianych w glebie, takie jak głód składników odżywczych i niedobór wody4. Ponieważ rośliny uprawiane hydroponicznie wykazują cechy morfologiczne i fizjologiczne dość podobne do tych hodowanych w glebie, system ten jest szeroko stosowany w badaniach, ponieważ umożliwia monitorowanie wzrostu korzeni/pędów i ich zbioru bez urazów2,5.
Ze względu na możliwość zmiany składu i stężenia roztworu odżywczego, przeprowadzono większość badań z wykorzystaniem warunków hydroponicznych w celu scharakteryzowania funkcji mikro- i makroelementów1,3,6,7,8. Jednak system ten okazał się bardzo przydatny w szerokim zakresie zastosowań w biologii roślin, takich jak wyjaśnienie funkcji hormonów i substancji chemicznych w roślinach. Na przykład, odkrycie strigolaktonów jako nowej klasy hormonów9 i fenotyp przyspieszonego wzrostu wywołany aplikacją brasinosteroidów10 przeprowadzono w warunkach hydroponicznych. Co więcej, system ten umożliwia eksperymenty z izotopami znakowanymi (np. 14N/15N i 13CO2 )11,12 w celu oceny ich włączenia do białek i metabolitów za pomocą spektrometrii mas.
Biorąc pod uwagę znaczenie tego systemu w badaniach roślin, w ciągu ostatnich kilku lat zaprojektowano dużą liczbę kultur hydroponicznych, w tym systemy wykorzystujące (i) przenoszenie sadzonek z płytek do pojemników hydroponicznych3,13; (ii) wełna mineralna, która ogranicza dostęp do wczesnych etapów rozwoju korzeni2,14,15; (iii) granulat polietylenu jako ciało pływające, co utrudnia jednorodne stosowanie małych cząsteczek/zabiegów16; lub (iv) zmniejszona liczba roślin9,17. Objętość zbiorników hydroponicznych opisana w wielu z tych protokołów jest zwykle duża (małe objętości od 1 do 5 litrów, do 32 litrów)18, co sprawia, że stosowanie chemikaliów jest niezwykle drogie. Chociaż niewiele badań opisuje uprawę hydroponiczną w warunkach aseptycznych8,19, montaż systemu jest zwykle dość pracochłonny, polegający na idealnym dopasowaniu siatek nylonowych do plastikowych lub szklanych pojemników5,8,17,20.
Ze względu na znaczenie Arabidopsis thaliana jako rośliny modelowej, większość systemów hydroponicznych została zaprojektowana dla tego gatunku1,2,8,14,18,19,20. Niemniej jednak istnieje kilka badań opisujących hydroponiczne cechy wzrostu innych gatunków roślin ze wstępnym traktowaniem nasion w celu poprawy ich szybkości kiełkowania i synchronizacji in vitro8,16. Aby pracować na dużą skalę, opracowaliśmy protokół tworzenia prostego i taniego w utrzymaniu systemu hydroponicznego, który umożliwia sterylne warunki uprawy roślin, w tym A. thaliana i innych gatunków, takich jak trawa Setaria viridis. Opisana tutaj metoda jest odpowiednia dla różnych eksperymentów, ponieważ wzrost sadzonek można zmaksymalizować, zsynchronizować i łatwo monitorować. Ponadto system ten ma wiele zalet, ponieważ: (i) jego montaż jest prosty, a jego elementy można ponownie wykorzystać; (ii) umożliwia łatwe nakładanie różnych substancji chemicznych do ciekłego medium; (iii) siewki kiełkują i rosną bezpośrednio w pożywce hodowlanej bez konieczności przenoszenia do systemu hydroponicznego; (iv) rozwój/wzrost pędów i korzeni może być ściśle nadzorowany, a siewki są zbierane bez uszkodzeń; oraz (v) umożliwia pracę na dużą skalę, przy zachowaniu warunków fizjologicznych.

<table><tbody><tr><td>Etanol</td><td>Merck</td><td>100983</td><td></td></tr><tr><td>Roztwór podchlorynu sodu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>425044</td><td></td></tr><tr><td>Polisorbat 20&nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2287</td><td></td></tr><tr><td>Murashige and Skoog (MS) pożywka zawierająca witaminy&nbsp;</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>M0222</td><td></td></tr><tr><td>Kwas 2-(N-morfolino)etanosulfonowy (MES) monohydrat</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>M1503</td><td></td></tr><tr><td>Agar&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7921</td><td></td></tr><tr><td>Wodorotlenek potasu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>484016</td><td></td></tr><tr><td>Okap z przepływem laminarnym</td><td>Telstar</td><td>BH-100</td><td></td></tr><tr><td>Płyta grzejna</td><td>AREC</td><td>F20510011</td><td></td></tr><tr><td>Komora wzrostowa</td><td>Weiss Technik</td><td>HGC 1514</td><td></td></tr><tr><td>Szklana szalka Petriego (150 mm x 25 mm)</td><td>Uniglass</td><td>189.006</td><td></td></tr><tr><td>200 & mu; L stojaki na końcówki do pipet&nbsp;</td><td>Kasvi</td><td>K8-200-5 *</td><td></td></tr><tr><td>300 &mu; L pipeta wielokanałowa</td><td>Eppendorf</td><td>3122000060</td><td></td></tr><tr><td>300 &mu; L końcówki do pipet</td><td>Eppendorf</td><td>30073088</td><td></td></tr><tr><td>200 &mu; Pipeta L&nbsp;</td><td>Eppendorf</td><td>3120000054</td><td></td></tr><tr><td>200 &mu; L końcówki do pipet</td><td>Eppendorf</td><td>30000870</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki</td><td>Tramontina</td><td>25912/108</td><td></td></tr><tr><td>Pęseta</td><td>ABC Instrumentos</td><td>702915</td><td></td></tr><tr><td>Ostrze skalpela</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2771</td><td></td></tr><tr><td>Taśma samoprzylepna przezroczysta (45mm x 50m)</td><td>Scotch 3M</td><td>5803</td><td></td></tr><tr><td>Jednorazowe pudełka plastikowe, wymiary zewnętrzne: 353 mm (dł.) x 178 mm (szer.) x 121 mm ( H)</td><td>Maxipac</td><td>32771</td><td></td></tr></tbody></table>

elastyczny, niedrogi system hydroponiczny do oceny reakcji roślin na małe cząsteczki w sterylnych warunkach

A Flexible Low Cost Hydroponic System for Assessing Plant Responses to Small Molecules in Sterile Conditions

Szeroki zakres badań z zakresu biologii roślin jest przeprowadzany przy użyciu kultur hydroponicznych. W niniejszej pracy przedstawiono hydroponiczny system wzrostu in vitro przeznaczony do oceny reakcji roślin na chemikalia i inne substancje będące przedmiotem zainteresowania. System ten jest bardzo skuteczny w uzyskiwaniu jednorodnych i zdrowych sadzonek modelowych gatunków C3 i C4 odpowiednio Arabidopsis thaliana i Setaria viridis. Sterylna uprawa pozwala uniknąć zanieczyszczenia glonami i mikroorganizmami, które są znanymi czynnikami ograniczającymi normalny wzrost i rozwój roślin w hydroponice. Ponadto system ten jest skalowalny, co umożliwia zbiór materiału roślinnego na dużą skalę z niewielkimi uszkodzeniami mechanicznymi, a także zbiór poszczególnych części rośliny w razie potrzeby. Dostarczony jest szczegółowy protokół pokazujący, że system ten ma łatwy i tani montaż, ponieważ wykorzystuje stojaki na pipety jako główną platformę do uprawy roślin. Wykonalność tego systemu została zweryfikowana przy użyciu sadzonek rzodkiewnika w celu oceny działania leku AZD-8055, chemicznego inhibitora docelowego kinazy rapamycyny (TOR). Hamowanie TOR zostało skutecznie wykryte już po 30 minutach od zabiegu AZD-8055 w korzeniach i pędach. Co więcej, rośliny poddane działaniu AZD-8055 wykazywały oczekiwany fenotyp nadmiaru skrobi. Zaproponowaliśmy ten system hydroponiczny jako idealną metodę dla badaczy roślin, którzy chcą monitorować działanie induktorów lub inhibitorów roślin, a także oceniać przepływy metaboliczne za pomocą związków znakujących izotopy, co generalnie wymaga użycia drogich odczynników.

Kinaza TOR jest głównym regulatorem, który integruje sygnały dotyczące składników odżywczych i energii w celu promowania proliferacji i wzrostu komórek u wszystkich eukariotów. Próby wyjaśnienia funkcji TOR u roślin obejmują tworzenie transgenicznych linii Arabidopsis zawierających warunkową represję TOR poprzez interferencję RNA lub sztuczne mikroRNA28,30,31, ze względu na letalny dla e...

Prosty, wszechstronny i tani system hydroponiczny in vitro został pomyślnie zoptymalizowany, umożliwiając eksperymenty na dużą skalę w sterylnych warunkach. System ten ułatwia stosowanie substancji chemicznych w roztworze i ich efektywne wchłanianie przez korzenie do badań molekularnych, biochemicznych i fizjologicznych.

Elastyczny, niedrogi system hydroponiczny do oceny reakcji roślin na małe cząsteczki w sterylnych warunkach

A wide range of studies in plant biology are performed using hydroponic cultures. In this work, an in vitro hydroponic growth system designed for ...

Prosty, wszechstronny i tani system hydroponiczny in vitro został z powodzeniem zoptymalizowany, umożliwiając przeprowadzanie eksperymentów na dużą skalę w sterylnych warunkach. System ten ułatwia aplikację substancji chemicznych w roztworze i ich efektywne wchłanianie przez korzenie do badań molekularnych, biochemicznych i fizjologicznych. Wykazaliśmy, że system ten był bardzo skuteczny w uzyskiwaniu jednorodnych siewek na początku rozwoju, a także w oddzielaniu korzeni i pędów za pomocą nasion rzodkiewnika pospolitego.Następujące elementy są niezbędne do zbudowania systemu hydroponicznego i uprawy roślin w sterylnych, kontrolowanych warunkach: 7% etanol, 10% roztwór wybielacza, polisorbat 20, pożywka MS wraz z witaminami. MES monohydrat, agar, wodorotlenek potasu.Okap z przepływem laminarnym, płyta grzejna, komora wzrostowa. Jednorazowe plastikowe pudełka, sterylne szklane szalki Petriego, taśma klejąca, sterylne końcówki do pipet o pojemności 200 i 300 mikrolitrów, nożyczki, pipeta wielokanałowa 300 mikrolitrów, pipeta 200 mikrolitrów, ostrze skalpela, pęseta i stojaki na końcówki do pipet o pojemności 200 mikrolitrów. Bardzo ważne jest, aby płaska końcówka pipety miała obszar,

a-flexible-low-cost-hydroponic-system-for-assessing-plant-responses

Research

JoVE Journal

Environment

Środowisko

Przedstawiono prostą metodę umożliwiającą szybką ekstrakcję i analizę wielu hormonów roślinnych z niewielkich próbek tkanek. Procedura wykorzystuje ekstrakcję w fazie gazowej jako jedyny etap oczyszczania. Próbki analizuje się za pomocą GC/MS z jonizacją chemiczną, która generuje głównie jony (M+1)+.

Monitorowanie hormonów roślinnych podczas odpowiedzi na stres

Źródło: Nathoo, N., et al. Hydroponiczny system kouprawy do jednoczesnej i systematycznej analizy interakcji molekularnych roślina/mikroorganizm oraz sygnalizacji. J. Vis. Exp. (2017).Ten film przedstawia hydroponiczny system wspólnej uprawy do badania interakcji między roślinami a bakteriami w sterylnych warunkach. Sadzonki roślin przenosi się do sterylnego, kwaśnego podłoża wzrostowego, inkubuje i sprawdza pod kątem zanieczyszczenia przed zaszczepieniem Agrobacterium. Aktywowane bakterie...

System wspólnej uprawy do badania reakcji molekularnych gospodarzy roślinnych i bakterii oddziałujących na siebie

Tutaj prezentujemy łatwy do naśladowania protokół, który pozwala stworzyć udany system hydroponiczny do badań nad odżywianiem roślin. Protokół ten został szeroko przetestowany na Arabidopsis i może być łatwo dostosowany do innych gatunków roślin w celu zbadania określonych wymagań żywieniowych lub wpływu nieistotnych składników na wzrost i rozwój roślin.

Hydroponika: wszechstronny system do badania alokacji składników odżywczych i reakcji roślin na dostępność składników odżywczych i narażenie na pierwiastki toksyczne

Przedstawiona tutaj jest prosta technika konfokalnego obrazowania poklatkowego o wysokiej rozdzielczości rozwoju korzeni i hipokotylu przez okres do 3 dni przy użyciu obiektywów o dużej aperturze numerycznej i perfluorodekaliny jako medium immersyjnego.

Prosta komora do długoterminowego obrazowania konfokalnego rozwoju korzeni i hipokotylu

Opisany system kouprawy hydroponicznej wspiera nienaruszone rośliny za pomocą metalowych siatek i współhoduje je z bakteriami. Tkanki roślinne, bakterie i wydzielane cząsteczki mogą być następnie oddzielnie zbierane do dalszych analiz, co jednocześnie pozwala na zbadanie odpowiedzi molekularnych zarówno gospodarzy roślinnych, jak i oddziałujących na siebie mikroorganizmów lub mikrobiomów.

Hydroponiczny system wspólnej uprawy do jednoczesnej i systematycznej analizy interakcji molekularnych między roślinami a mikroorganizmami oraz sygnalizacji

Ten artykuł pokazuje, jak hodować siewki Arabidopsis thaliana w dwuwarstwowej platformie mikroprzepływowej, która ogranicza główny korzeń i włośniki do jednej płaszczyzny optycznej. Platforma ta może być wykorzystywana do obrazowania optycznego w czasie rzeczywistym drobnej morfologii korzeni, a także do obrazowania w wysokiej rozdzielczości za pomocą innych środków.

Obrazowanie morfologii włośnika siewek rzodkiewnika w dwuwarstwowej platformie mikroprzepływowej

Tutaj opisujemy hydroponiczny test wzrostu roślin, aby określić ilościowo obecność gatunków i zobrazować przestrzenne rozmieszczenie bakterii podczas początkowej kolonizacji korzeni roślin i po ich przeniesieniu do różnych środowisk wzrostu.

Monitorowanie kolonizacji i utrzymania kolonizacji bakteryjnej korzeni Arabidopsis thaliana w pływającym systemie hydroponicznym

Udostępniamy metodę identyfikacji modulatorów transpiracji dolistnej poprzez zakrojone na szeroką skalę badania przesiewowe biblioteki złożonej.

Identyfikacja nowych regulatorów transpiracji roślin za pomocą wielkoskalowych badań termowizyjnych u Helianthus annuus

Używamy prostych narzędzi laboratoryjnych do badania architektury systemu korzeniowego (RSA) Arabidopsis i Medicago. Sadzonki są uprawiane hydroponicznie na siatce i rozprowadzane za pomocą pędzla artystycznego, aby odsłonić RSA. Obrazy są wykonywane za pomocą skanowania lub kamery o wysokiej rozdzielczości, a następnie analizowane za pomocą ImageJ w celu zmapowania cech.

Prosty protokół mapowania cech architektury systemu korzeniowego roślin

Przedstawiamy protokół dla opartego na szkle, półhydroponicznego systemu eksperymentalnego, wspierającego wzrost różnych filogenetycznie odrębnych roślin z mikrobami lub bez. System jest kompatybilny z różnymi podłożami wzrostowymi i umożliwia nieniszczące pobieranie próbek wysięku korzeniowego do dalszej analizy.

Wszechstronny system szklanych słoików do półhydroponicznego profilowania wysięku korzeniowego

Poznaj elastyczny system hydroponiczny do oceny reakcji roślin na małe cząsteczki w sterylnych warunkach. Metoda umożliwia skuteczną absorpcję chemikaliów przez korzenie Arabidopsis thaliana w badaniach molekularnych.

Elastyczny, niedrogi system hydroponiczny do oceny reakcji roślin na małe cząsteczki w sterylnych warunkach

Przeglądaj więcej filmów