Porównanie częstości koniugacji bakteryjnej w wysokiej rozdzielczości

Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie mikrobiologii dotyczące tego, jak często plazmidowe DNA może rozprzestrzeniać się wśród różnych bakterii. Główną zaletą tej techniki jest to, że zmniejszając tło, możemy wykryć niewielkie różnice w częstotliwości koniugacji z wysoką rozdzielczością. Procedurę zademonstruje Kosuke Yanagiya, doktorant z mojego laboratorium.

Aby obliczyć częstość koniugacji za pomocą najbardziej prawdopodobnej liczby, przefiltruj jeden mililitr z nocnej hodowli dawcy z jednym mililitrem z nocnej hodowli biorcy przez 45 minut w temperaturze 30 stopni Celsjusza, jak właśnie pokazano. Podczas inkubacji kokultury należy seryjnie rozcieńczyć pierwotne kultury dawcy i biorcy w celu posiewu w trzech egzemplarzach na bulionie Luria dawcy lub LB plus kanamycyna lub biorcy LB plus gentamycyna w celu uzyskania dwudniowej hodowli w temperaturze 30 stopni Celsjusza. Pod koniec inkubacji ponownie zawiesić hodowlę na filtrze w sterylnym LB zawierającym kanamycynę i gentamycynę do seryjnego rozcieńczania na 96-dołkowej płytce do hodowli komórkowej w poczwórnym powiększeniu.