Name: Prosta chirurgiczna indukcja przewodzeniowego ubytku słuchu z weryfikacją za pomocą wizualizacji otoskopu i behawioralnej reakcji na oklaski u szczurów (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-10-26T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 s
Description: Poznaj metodę chirurgicznego wywoływania przewodzeniowego ubytku słuchu u szczurów poprzez nakłucie błony bębenkowej z weryfikacją otoskopową i behawioralną. Ten protokół umożliwia badanie zaburzeń słuchowych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była częściowo wspierana przez Hong Kong Research Grants Council, Early Career Scheme, Project #21201217 do C. L., dla projektu Brain mapping guided electrophysiology with applications in hearing and noise pollution research. Dziękujemy Posgrado en Ciencias Biomédicas, Instituto de Neurobiología Universidad Nacional Autónoma de México (UNAM), Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACyT) México za stypendium dla absolwentów 578458 FAM Manno.

Obecne badanie i procedury zostały zatwierdzone przez komisje etyczne ds. badań na zwierzętach Uniwersytetu Miejskiego w Hongkongu, Uniwersytetu w Hongkongu oraz Departamentu Zdrowia Specjalnego Regionu Administracyjnego Hongkongu.
1. Zwierzęta
<ol>
	<li>Stosować szczury Sprague-Dawley (SD) w wieku dwóch miesięcy (N = 90, 200-250 g). 
	UWAGA: Gryzonie zostały dostarczone przez akredytowaną Jednostkę Zwierząt Laboratoryjnych Uniwersytetu w Hongkongu.</li>
	<li>Utrzymuj szczury w stałej temperaturze 25 °C i wilgotności 60-70% w Zakładzie Badań nad Zwierzętami Laboratoryjnymi.</li>
	<li>Kurnik trzyma się kurnika w 12/12-godzinnych cyklach światła/ciemności z dostępem do pożywienia i wody pitnej, ad libitum.</li>
	<li>Aklimatyzować gryzonie w środowisku inwentarskim przez co najmniej jeden dzień przed zabiegiem CHL.</li>
	<li>Podnieś gryzonia za kark i znieczul go koktajlem ketaminy i ksylazyny (odpowiednio 80-100 mg/kg: 5-10 mg/kg) poprzez wstrzyknięcie dootrzewnowe (połącz 1,0 ml ketaminy z 0,5 ml ksylazyny jako końcowe stężenie). 
	UWAGA: Użyj 1 ml strzykawki z igłą 23-25G. Wstrzyknąć około 0,2 ml na 100 g masy ciała szczura przez 30 minut znieczulenia.</li>
	<li>Wykonaj uszczypnięcie palca u nogi, aby sprawdzić odczuwanie bólu i potwierdzić prawidłowe znieczulenie. Reakcja na głębokie uszczypnięcie palca u nogi (poprzez wycofanie kończyny tylnej) wskazuje na niewystarczające znieczulenie.</li>
</ol>
2. Konfiguracja chirurgiczna
<ol>
	<li>Wysterylizuj cały sprzęt w autoklawie lub sterylizatorze z gorącymi szklanymi kulkami przed rozpoczęciem operacji. Oczyść obszar operacyjny 70% etanolem.</li>
	<li>Przed rozpoczęciem zabiegu należy użyć rękawiczek lateksowych i fartucha laboratoryjnego.</li>
	<li>Umieść sterylną serwetę chirurgiczną na czystej ławce (<silna klasa="xfig">Rysunek 1A).</li>
	<li>Wysterylizuj mikronożyczki i otoskop przed zabiegiem, aby zminimalizować infekcję ucha (<silna klasa="xfig">Ryc. 1B).</li>
	<li>Umieść mikronożyczki i otoskop w sterylnym miejscu.</li>
	<li>Umieść gryzonia w polu operacyjnym i w jednej linii z chirurgiem.</li>
	<li>Kontynuuj chirurgiczną indukcję CHL.</li>
</ol>
3. Chirurgiczna indukcja przewodzeniowego ubytku słuchu
<ol>
	<li>Ułóż ogon i głowę gryzonia w pozycji leżącej, głowa najbliżej chirurga.</li>
	<li>Wizualizuj lewe i prawe ucho gryzonia pod otoskopem, aby zapewnić zdrową błonę bębenkową (<silna klasa = "xfig">Rysunek 2a). Oceń zarówno prawe, jak i lewe ucho każdego gryzonia, aby zweryfikować stan zdrowia przed indukcją CHL.</li>
	<li>Chwyć helisę ucha i rozszerz zewnętrzny przewód słuchowy (tj. przewód słuchowy, zewnętrzny przewód słuchowy, w tym przypadku przewód słuchowy), aby wnętrze zostało zasłonięte i poczerniałe przez głębokość. W tym przypadku kanał słuchowy jest prostopadły do powierzchni TM. 
	UWAGA: Upewnij się, że puszka słuchowa jest teraz bezpośrednio równoległa, a TM tworzy kąt prosty z osią wkładania mikronożyczek. Zostanie to zwizualizowane jako tuba bez światła. Czasami przewód słuchowy musi być przechylony pod niewielkim kątem, około 15° do płaskiej powierzchni czaszki. Dzięki temu ręka chirurga jest prostopadła do powierzchni stawu skroniowo-oddechowego.</li>
	<li>Wprowadź mikronożyczki w środek przewodu słuchowego, zwracając uwagę, aby nie ślizgać się ani nie nacinać tkanki przewodu słuchowego i postępuj nieznacznie, około ≈5 mm od środka ciemności, delikatnie popychając do przodu przez środek TM. 
	UWAGA: Przebicie TM może być potwierdzone trzaskiem, gdy końcówki mikronożyczek przebijają TM. Trzaskający dźwięk można usłyszeć na filmie po około ≈ 2 minutach i 52 sekundach. To nie jest dźwięk nożycowy; jest to dźwięk przebicia TM. Zgodnie z pomiarem po analizie, "pop" jest o około ≈ 20 dB SPL większy niż dźwięk tła zarejestrowany przez mikrofon wysokiej częstotliwości. Nie ma potrzeby weryfikowania dźwięku "trzasku" w takim zakresie, wystarczy wizualizacja otoskopu. Badacz może być zmuszony do przećwiczenia upewnienia się, że podczas każdej procedury CHL słychać "trzask".</li>
	<li>Natychmiast otwórz sprężynowe mikronożyczki i obróć je trzy razy po przebiciu TM, aby zapewnić przemieszczenie głowy młoteczka z dala od TM (tylko wtedy, gdy pożądane jest przemieszczenie młoteczka).</li>
	<li>Wyjmij mikronożyczki i umieść gryzonia pod otoskopem w celu wizualizacji. 
	UWAGA: Należy pamiętać, że po zabiegu chirurgicznym nie powinno dojść do znacznego krwawienia. Poddaj gryzonia eutanazji i nie przystępuj do oceny behawioralnej, jeśli wystąpi krwawienie.</li>
	<li>Wywołaj obustronną CHL, postępując jak powyżej w przeciwległym uchu.</li>
</ol>
4. Wizualizacja otoskopu
<ol>
	<li>Potwierdź udaną operację CHL za pomocą otoskopu przy użyciu wziernika o małej średnicy, aby uwidocznić środkowe ucho gryzonia.</li>
	<li>Oceń każdego gryzonia przed i po zabiegu chirurgicznym CHL pod otoskopem. Upewnij się, że TM jest normalna (<silna klasa="xfig">Rysunek 2a) i uszkodzona TM po indukcji CHL (<silna klasa="xfig">Rysunek 2b).</li>
	<li>Opieka pooperacyjna nad gryzoniem
	<ol>
		<li>Umieść gryzonia w domowej klatce pod ciepłą lampą.</li>
		<li>Obserwuj gryzonia po indukcji CHL, aż gryzoń się poprawi.</li>
		<li>Wstrzyknij gryzoniu surowicę glukozy (dekstroza/sól fizjologiczna), aby odzyskać przytomność i umieścić gryzonia w klatce domowej w celu wyzdrowienia. 
		UWAGA: Użyj igły 23G ze strzykawką 10 ml, aby wstrzyknąć 5 ml soli fizjologicznej po operacji CHL.</li>
		<li>Wstrzyknąć gryzoniu domięśniowo przeciwbakteryjną enrofloksacynę 0,05 mg/kg dwa razy w ciągu 24-godzinnego okresu rekonwalescencji.</li>
		<li>Regularnie obserwuj gryzonia pod kątem bólu, zachowania lub objawów po operacji.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
5. Ocena behawioralna (walidacja indukcji CHL) - reakcja na zaskoczenie klaskaniem
<ol>
	<li>Potwierdź CHL (po potwierdzeniu otoskopem) 24 godziny po operacji z oceną behawioralną składającą się z testu klaśnięcia-przerażenia.</li>
	<li>Umieść szczura indukowanego CHL obok normalnego szczura w dwóch oddzielnych sąsiednich klatkach.</li>
	<li>Umieść gryzonie w cichym pomieszczeniu.</li>
	<li>Stań w odległości około 0,5 m od gryzoni i zacznij klaskać w równych odstępach czasu kilka razy (wybrano 5 klaśnięć w odstępach ponad 1 sekundy). 
	UWAGA: Zaskoczenie klaskaniem wywołane klaskaniem w dłonie mierzyło ≈ 40 dB SPL większe niż dźwięk tła nagrany przez mikrofon wysokiej częstotliwości.</li>
</ol>

<ol><li>Shargorodsky, J., Curhan, S. G., Curhan, G. C., Eavey, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Change+in+prevalence+of+hearing+loss+in+US+adolescents%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+American+Medical+Association%22%5BJournal%5D)">Change in prevalence of hearing loss in US adolescents.</a> The Journal of the American Medical Association. 304 (7), 772-778 (2010).</li>
<li>Lucas, J. W., Schiller, J. S., Benson, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Summary+health+statistics+for+U.S.+adults%3A+National+health+interview+survey%2C+2001%5BTitle%5D)+AND+%22National+Center+for+Health+Statistics.+Vital+and+health+statistics%22%5BJournal%5D)">Summary health statistics for U.S. adults: National health interview survey, 2001.</a> National Center for Health Statistics. Vital and health statistics. 10 (218), 1-134 (2004).</li>
<li>Gaffney, M., Green, D. R., Gaffney, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Newborn+hearing+screening+and+follow-up%3A+Aare+children+receiving+recommended+services%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Public+Health+Reports%22%5BJournal%5D)">Newborn hearing screening and follow-up: Aare children receiving recommended services?</a> Public Health Reports. 125 (2), 199-207 (2010).</li>
<li>Xu, H., Kotak, V. C., Sanes, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conductive+hearing+loss+disrupts+synaptic+and+spike+adaptation+in+developing+auditory+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Conductive hearing loss disrupts synaptic and spike adaptation in developing auditory cortex.</a> The Journal of Neuroscience. 27 (35), 9417-9426 (2007).</li>
<li>Buran, B. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+sensitive+period+for+the+impact+of+hearing+loss+on+auditory+perception%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A sensitive period for the impact of hearing loss on auditory perception.</a> The Journal of Neuroscience. 34 (6), 2276-2284 (2014).</li>
<li>Finck, A., Sofouglu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auditory+sensitivity+of+the+Mongolian+gerbil%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Auditory+Research%22%5BJournal%5D)">Auditory sensitivity of the Mongolian gerbil.</a> The Journal of Auditory Research. 6, 313-319 (1966).</li>
<li>Finck, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auditory+sensitivity+of+the+Mongolian+Gerbil+%28Merionesunguiculatus%29%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+Acoustical+Society+of+America%22%5BJournal%5D)">Auditory sensitivity of the Mongolian Gerbil (Merionesunguiculatus).</a> The Journal of the Acoustical Society of America. 41 (60), 1579(1967).</li>
<li>Finck, A., Schneck, C. D., Hartman, A. F. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+auditory+function+in+the+Mongolian+gerbil%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+Acoustical+Society+of+America%22%5BJournal%5D)">Development of auditory function in the Mongolian gerbil.</a> The Journal of the Acoustical Society of America. 46 (1A), 107(1969).</li>
<li>Ryan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hearing+sensitivity+of+the+Mongolian+gerbil%2C+Meriones+Unguiculatis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+Acoustical+Society+of+America%22%5BJournal%5D)">Hearing sensitivity of the Mongolian gerbil, Meriones Unguiculatis.</a> The Journal of the Acoustical Society of America. 59, 1222-1226 (1976).</li>
<li>Dallos, P., Harris, D., Ozdamar, O., Ryan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral%2C+compound+action+potential%2C+and+single+unit+thresholds%3A+relationship+in+normal+and+abnormal+ears%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+Acoustical+Society+of+America%22%5BJournal%5D)">Behavioral, compound action potential, and single unit thresholds: relationship in normal and abnormal ears.</a> The Journal of the Acoustical Society of America. 64 (1), 151-157 (1978).</li>
<li>Kelly, J. B., Potash, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directional+responses+to+sounds+in+young+gerbils+%28Meriones+unguiculatus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Psychology%22%5BJournal%5D)">Directional responses to sounds in young gerbils (Meriones unguiculatus.</a> Journal of Comparative Psychology. 100 (1), 37-45 (1986).</li>
<li>Heffner, H. E., Koay, G., Heffner, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+assessment+of+hearing+in+mice--conditioned+suppression%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Behavioral assessment of hearing in mice--conditioned suppression.</a> Current Protocols in Neuroscience. , Chapter 8, Unit 8.21D (2006).</li>
<li>Heffner, R. S., Koay, G., Heffner, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Audiograms+of+five+species+of+rodents%3A+implications+for+the+evolution+of+hearing+and+the+perception+of+pitch%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">Audiograms of five species of rodents: implications for the evolution of hearing and the perception of pitch.</a> Hearing Research. 157 (1-2), 138-152 (2001).</li>
<li>Lupo, E. J., Koka, K., Thornton, J. L., Tollin, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+experimentally+induced+conductive+hearing+loss+on+spectral+and+temporal+aspects+of+sound+transmission+through+the+ear%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">The effects of experimentally induced conductive hearing loss on spectral and temporal aspects of sound transmission through the ear.</a> Hearing Research. 272 (1-2), 30-41 (2011).</li>
<li>Liberman, M. C., Liberman, L. D., Maison, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+conductive+hearing+loss+leads+to+cochlear+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Chronic conductive hearing loss leads to cochlear degeneration.</a> PLoS One. 10 (11), e0142341(2015).</li>
<li>Tucci, D. L., Cant, N. B., Durham, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conductive+hearing+loss+results+in+a+decrease+in+central+auditory+system+activity+in+the+young+gerbil%5BTitle%5D)+AND+%22Laryngoscope%22%5BJournal%5D)">Conductive hearing loss results in a decrease in central auditory system activity in the young gerbil.</a> Laryngoscope. 109, 1359-1371 (1999).</li>
<li>Tucci, D. L., Cant, N. B., Durham, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+conductive+hearing+loss+on+gerbil+central+auditory+system+activity+in+silence%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">Effects of conductive hearing loss on gerbil central auditory system activity in silence.</a> Hearing Research. 155, 124-132 (2001).</li>
<li>Cook, R. D., Hung, T. Y., Miller, R. L., Smith, D. W., Tucci, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+conductive+hearing+loss+on+auditory+nerve+activity+in+gerbil%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">Effects of conductive hearing loss on auditory nerve activity in gerbil.</a> Hearing Research. 164, 127-137 (2002).</li>
<li>Albuquerque, A. A., Rossato, M., Oliveira, J. A., Hyppolito, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+anatomy+of+ears+from+guinea+pigs+and+rats+and+its+use+in+basic+otologic+research%5BTitle%5D)+AND+%22Brazilian+Journal+of+Otorhinolaryngology%22%5BJournal%5D)">Understanding the anatomy of ears from guinea pigs and rats and its use in basic otologic research.</a> Brazilian Journal of Otorhinolaryngology. 75, 43-49 (2009).</li>
<li>Li, P., Gao, K., Ding, D., Salvi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristic+anatomical+structures+of+rat+temporal+bone%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Otology%22%5BJournal%5D)">Characteristic anatomical structures of rat temporal bone.</a> Journal of Otology. 10, 118-124 (2015).</li>
<li>Judkins, R. F., Li, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+anatomy+of+the+rat+middle+ear%5BTitle%5D)+AND+%22Otolaryngology-Head+and+Neck+Surgery%22%5BJournal%5D)">Surgical anatomy of the rat middle ear.</a> Otolaryngology-Head and Neck Surgery. 117, 438-447 (1997).</li>
<li>Hellström, S., Salén, B., Stenfors, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy+of+the+rat+middle+ear.+A+study+under+the+dissection+microscope%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Anatomica+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Anatomy of the rat middle ear. A study under the dissection microscope.</a> Acta Anatomica (Basel). 112, 346-352 (1982).</li>
<li>Albiin, N., Hellström, S., Salén, B., Stenfors, L. E., Wirell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vascular+supply+of+the+rat+tympanic+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22The+Anatomical+Record%22%5BJournal%5D)">The vascular supply of the rat tympanic membrane.</a> The Anatomical Record. 212, 17-22 (1985).</li>
<li>Li, P., Ding, D., Gao, K., Salvi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardized+surgical+approaches+to+ear+surgery+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Otology%22%5BJournal%5D)">Standardized surgical approaches to ear surgery in rats.</a> Journal of Otology. 10, 72-77 (2015).</li>
<li>Johansson, U., Hellström, S., Anniko, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Round+window+membrane+in+serous+and+purulent+otitis+media.+Structural+study+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Otology%2C+Rhinology+%26+Laryngology%22%5BJournal%5D)">Round window membrane in serous and purulent otitis media. Structural study in the rat.</a> Annals of Otology, Rhinology & Laryngology. 102, 227-235 (1993).</li>
<li>Magnuson, K., Hellström, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+structural+changes+in+the+rat+tympanic+membrane+during+pneumococcal+otitis+media%5BTitle%5D)+AND+%22European+Archives+of+Oto-Rhino-Laryngology%22%5BJournal%5D)">Early structural changes in the rat tympanic membrane during pneumococcal otitis media.</a> European Archives of Oto-Rhino-Laryngology. 251, 393-398 (1994).</li>
<li>Hellström, S., Salén, B., Stenfors, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+site+of+initial+production+and+transport+of+effusion+materials+in+otitis+media+serosa.+A+study+on+rat+middle+ear+cavity%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Oto-Laryngologica%22%5BJournal%5D)">The site of initial production and transport of effusion materials in otitis media serosa. A study on rat middle ear cavity.</a> Acta Oto-Laryngologica. 93, 435-440 (1982).</li>
<li>Shen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scaffolds+for+tympanic+membrane+regeneration+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+A%22%5BJournal%5D)">Scaffolds for tympanic membrane regeneration in rats.</a> Tissue Engineering Part A. 19, 657-668 (2013).</li>
<li>Wang, A. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+model+of+chronic+tympanic+membrane+perforation%3A+Ventilation+tube+with+mitomycin+C+and+dexamethasone%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+PediatricOtorhinolaryngology%22%5BJournal%5D)">Rat model of chronic tympanic membrane perforation: Ventilation tube with mitomycin C and dexamethasone.</a> International Journal of PediatricOtorhinolaryngology. 80, 61-68 (2016).</li>
<li>Stenfeldt, K., Johansson, C., Hellström, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+collagen+structure+of+the+tympanic+membrane%3A+collagen+types+I%2C+II%2C+and+III+in+the+healthy+tympanic+membrane%2C+during+healing+of+a+perforation%2C+and+during+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Otolaryngology--Head+%26+Neck+Surgery%22%5BJournal%5D)">The collagen structure of the tympanic membrane: collagen types I, II, and III in the healthy tympanic membrane, during healing of a perforation, and during infection.</a> Archives of Otolaryngology--Head & Neck Surgery. 132, 293-298 (2006).</li>
<li>Zhao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporary+conductive+hearing+loss+in+early+life+impairs+spatial+memory+of+rats+in+adulthood%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Temporary conductive hearing loss in early life impairs spatial memory of rats in adulthood.</a> Brain and Behavior. 8, e01004(2018).</li>
</ol>

Autorzy deklarują brak finansowych lub niefinansowych konfliktów interesów.

Opisujemy prostą chirurgiczną indukcję CHL z weryfikacją za pomocą wizualizacji otoskopu i behawioralnej reakcji na zaskoczenie klaskaniem u szczurów. Tutaj demonstrujemy metodę na szczurach, a wcześniej metoda ta była stosowana do myszoskoczków i myszy. Metodę można łatwo zastosować do innych gryzoni. Indukcja CHL pozwala na badanie subtelnej formy ubytku słuchu, która objawia się zmianami w korze słuchowej i psychofizycznymi objawami behawioralnymi 4,5,16,17,18.</su...

Częstość występowania ubytku słuchu u dzieci i dorosłych wynosi około 19,5%1 i 15,2%2. Jednak około 39,3% wszystkich noworodków z nieprawidłowym badaniem przesiewowym słuchu nie otrzymuje leczenia naprawczego, jak podaje Centers for Disease Control3. Ubytek słuchu jest szeroko badanym schorzeniem, a gryzoń jest solidnym modelem do badania prawidłowego słuchu i zaburzeń związanych ze słuchem4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15. Zaburzenia słuchu, takie jak przewodzeniowy ubytek słuchu (CHL), prowadzą do wzrostu krótkotrwałej depresji synaptycznej w korze słuchowej4, co skutkuje płytszymi nachyleniami psychometrycznymi związanymi z progami wykrywania modulacji częstotliwości5. Przewodzeniowe modele ubytku słuchu polegające na chirurgicznym usunięciu/przemieszczeniu młoteczka, nakłuciu błony bębenkowej (TM) lub zatyczce do uszu są łatwe do zastosowania i umożliwiają szybką indukcję modelu ubytku słuchu5,14,15,16,17,18. Celem niniejszego protokołu i metody jest zademonstrowanie prostego i powtarzalnego modelu CHL u gryzoni.
Obecny protokół jest tani (≈$$300 ze wszystkimi narzędziami) i łatwo go dostosować do różnych poszukiwań badawczych. Szczur został poddany szczegółowym ocenom anatomii ucha środkowego19,20,21,22,23, surgical approaches24, modele w zapaleniu ucha środkowego25,26,27 i regeneracja po przebiciu TM16,17,18,28,29,30, co czyni go idealnym modelem do badania ubytku słuchu. Tutaj opisano prostą procedurę indukcji CHL z weryfikacją za pomocą otoskopu i oceną behawioralną z reakcją na klaskanie w przerażenie u szczurów, która następnie może być wykorzystana do zbadania dodatkowych następstw ubytku słuchu. Zabieg CHL jest wywoływany przez chirurgiczne nakłucie stawu skroniowo-żuchwowego. Weryfikacja procedury CHL odbywa się za pomocą wizualizacji otoskopowej w celu określenia braku TM. Ocena behawioralna jest przeprowadzana przez klaskanie w dłonie przy wysokim poziomie ciśnienia akustycznego (dB) (SPL). Metoda ta była już wcześniej stosowana u różnych gryzoni. Jest łatwa do odtworzenia, powoduje silne różnice psychometryczne i zmiany w neuronalnych reakcjach fizjologicznych4,5,16,17,18.

<table><tbody><tr><td>Rękawice lateksowe, poliwinylowe lub nitrylowe</td><td>AMMEX</td><td></td><td>Używaj rękawic niepudrowanych 8-milowe</td></tr><tr><td>Nożyczki Micro sprężynowe (patrz rys. 1b)</td><td>RWD Life Science</td><td>S11035-08</td><td>o długości całkowitej 8,0 cm, z krawędzią tnącą 3,5 mm lub podobnymi mikrokleszkami. Wystarczą standardowe pęsety z mechanizmem sprężynowym</td></tr><tr><td>Otoscope mini 3000</td><td>HEINE&nbsp;</td><td>D-008.70.120M</td><td>Wystarczy standardowy otoskop LED</td></tr><tr><td>Laboratoria</td><td></td> JAX dla<td>szczurów lub myszy</td><td>Każdy mały gryzoń&nbsp;</td></tr><tr><td>Mała klatka dla gryzoni</td><td>Tecniplast</td><td>1284L</td><td>Potrzebujesz dwóch klatek, aby oddzielić gryzonia CHL od gryzonia słyszącego. Jeśli gryzonie są ze sobą w bezpośrednim kontakcie, będą się nawzajem przestraszyć. Wymiary klatki 365 x 207 x 140 mm, powierzchnia podłogi: 530 cm2/82.15 in2</td></tr></tbody></table>

prosta chirurgiczna indukcja przewodzeniowego ubytku słuchu z weryfikacją za pomocą wizualizacji otoskopu i behawioralnej reakcji na oklaski u szczurów

Simple Surgical Induction of Conductive Hearing Loss with Verification Using Otoscope Visualization and Behavioral Clap Startle Response in Rat

Przewodzeniowy ubytek słuchu (CHL) jest powszechnym ubytkiem słuchu u ludzi. Celem protokołu jest opisanie prostej procedury chirurgicznej indukcji CHL u gryzoni. Protokół demonstruje CHL przez nakłucie błony bębenkowej. Weryfikacja operacji CHL polegała na badaniu otoskopowym i ocenie behawioralnej na podstawie reakcji na zaskoczenie, zarówno powtarzalne, jak i wiarygodne, i są prostymi metodami wykazującymi, że wystąpił ubytek słuchu. Prosta procedura CHL jest korzystna ze względu na jej powtarzalność i elastyczność w różnych dziedzinach badań nad ubytkiem słuchu. Ograniczenia związane z wywołaniem CHL za pomocą podejścia chirurgicznego są związane z krzywą uczenia się wykonywania zabiegu chirurgicznego i pewnością badania audiologicznego. Wywołanie upośledzenia słuchu przez CHL pozwala łatwo badać objawy neuronalne i behawioralne skutki ubytku słuchu.

Prostą procedurę CHL przeprowadzono na 90 szczurach, z czego u 2 osobników wystąpiły istotne krwawienia, a 2 nie wykazały utraty słuchu następnego dnia w ocenie behawioralnej reakcji na klaśnięcie. Te cztery szczury zostały odrzucone. Szczury powinny zostać odrzucone z powodów opisanych w dyskusji w związku z powikłaniami. Wywołanie perforacji błony bębenkowej i/lub przemieszczenie/usunięcie młoteczka (Rycina 2B) wywołuje CHL, co objawia się behawioralnie (tz...

Tutaj prezentujemy protokół do ustalenia powtarzalnej indukcji przewodzeniowego ubytku słuchu poprzez chirurgiczne nakłucie błony bębenkowej i weryfikację za pomocą wizualizacji otoskopu oraz oceny behawioralnej za pomocą zaskoczenia klaskania.

Prosta chirurgiczna indukcja przewodzeniowego ubytku słuchu z weryfikacją za pomocą wizualizacji otoskopu i behawioralnej reakcji na oklaski u szczurów

Conductive hearing loss (CHL) is a prevalent hearing impairment in humans. The goal of the protocol is to describe a simple surgical procedure for ...

Ogólnym celem tego badania jest ustalenie wiarygodnej indukcji ubytku słuchu poprzez chirurgiczne nakłucie błony bębenkowej i weryfikację za pomocą wizualizacji otoskopu i oceny behawioralnej za pomocą klaśnięcia. Celem naszego ćwiczenia jest opracowanie modelu zaburzeń przewodzenia słuchu u człowieka. Pokazujemy w praktyce przewodzeniowy zabieg chirurgiczny ubytku słuchu, który jest uproszczeniem w usuwaniu młoteczka, metodę weryfikacji przewodzeniowego ubytku słuchu za pomocą wizualizacji otoskopu oraz proste behawioralne zaskoczenie klaskaniem, które potwierdzają, że wystąpił przewodzeniowy ubytek słuchu.Główną zaletą opisanej przez nas procedury są zabiegi nieinwazyjne, weryfikacja przewodzeniowego ubytku słuchu za pomocą otoskopu oraz walidacja metodą clap startle. Niniejsze badanie i procedury zostały zatwierdzone przez komisję etyczną ds. badań na zwierzętach oraz Uniwersytet Miejski w Hongkongu, Uniwersytet w Hongkongu oraz Departament Zdrowia Specjalnego Regionu Administracyjnego Hongkongu. Do obecnego protokołu wybieramy szczury, ale Ty możesz wybrać dowolnego gryzonia.Zważ zwierzęta, aby zapewnić odpowiednie znieczulenie do wstrzyknięcia IP. W przypadku znieczulenia ważne jest, aby zwierzęta miały odpowiednią dawkę. Podnieś swojego szczura za kark.Upewnij się, że dawka ketaminy i ksylazyny jest prawidłowa do wstrzykiwań IP, a następnie wstrzyknij. Upewnij się, że wykonałeś szczypanie palca u nogi, aby sprawdzić, czy nie ma uczucia bólu. Do chirurgii konfiguracja składa się ze znieczulonego szczura, mikronożyczek i otoskopu.Proszę dokładnie oczyścić obszar operacyjny etanolem. Umieść serwetę chirurgiczną na oczyszczonej ławce. Następnie wprowadź nożyczki, otoskop i szczura.Rozmiar twoich nożyczek będzie zależał od wielkości twojego gryzonia. Pod otoskopem uwidocznij lewe i prawe ucho szczura, aby zapewnić zdrową błonę bębenkową. Chwyć spiralę i rozszerz zewnętrzny kanał słuchowy, aby stał się zasłonięty i poczerniały.Tutaj przedstawisz mikronożyczki. Wprowadź mikronożyczki do środka przewodu słuchowego, zwracając szczególną uwagę, aby nie naciąć tkanki. Posłuchaj trzasku, a następnie przekręć, aby zapewnić przemieszczenie młoteczka.Potwierdzenie udanej operacji przewodzeniowego ubytku słuchu powinno być wykonane za pomocą otoskopu. Oceń każde ucho szczura przed i po operacji za pomocą otoskopu ze wziernikiem o małej średnicy. Podczas wizualizacji za pomocą otoskopu należy zbadać różnice między normalną błoną bębenkową a przebitą błoną bębenkową.W tym przypadku normalna błona bębenkowa po lewej stronie ma głowę młoteczka na miejscu i drastycznie różni się od przebitej błony bębenkowej po prawej stronie. Z przebitej błony bębenkowej, po operacji przewodzeniowego ubytku słuchu, doszło do przemieszczenia młoteczka i pęknięcia pars tensa z całkowitym brakiem baldachimka młoteczka i głowy. Opieka pooperacyjna gryzoni.Umieść gryzonia w domowej klatce pod ciepłą lampą i wstrzyknij środki przeciwbakteryjne i glukozę. Potwierdź łączny ubytek słuchu za pomocą behawioralnego klaskania. Szczur CHL jest umieszczany obok normalnego szczura w dwóch sąsiednich klatkach.Są one umieszczone w cichym pomieszczeniu. Stań w odległości pół metra i klaszcz w równych odstępach czasu określoną liczbę razy. Tutaj wybieramy pięć.Tutaj nasze reprezentatywne wyniki behawioralne. Zauważ, że szczur na dole nie skacze na głośny dźwięk klaskania. Szczur u góry ekranu jest zaskoczony tymi głośnymi dźwiękami klaskania.Proszę przestudiować różnicę przed i po klaśnięciu dla tych dwóch szczurów. Brak wywołania przewodzeniowego ubytku słuchu. Brak indukcji przewodzeniowego ubytku słuchu może być spowodowany krwawieniem w jednym lub obu uszach.W takim przypadku gryzoń powinien zostać poddany eutanazji. Wskazywałoby to, że nożyczki nie miały kontaktu z błoną bębenkową. Brak trzaskającego dźwięku podczas zabiegu.Brak trzaskającego dźwięku wskazywałby, że procedura przewodzeniowego ubytku słuchu była słaba i nieczysta. Brak trzaskającego dźwięku oznaczałby, że twoje mikronożyczki nie miały bezpośredniego kontaktu z błoną bębenkową. Wizualizacja otoskopowa.Jeśli podczas wizualizacji za pomocą otoskopu błona bębenkowa wydaje się normalna, oznaczałoby to, że nie wystąpiła CHL. Odpowiedź na test głośnego dźwięku klaskania. Wskazywałoby to, że nie wystąpiła CHL, a gryzoń nie ma przewodzeniowego ubytku słuchu.Dzieje się tak, gdy szczur skacze lub jest zaskoczony głośnym dźwiękiem klaskania. Główną zaletą opisanego przez nas zabiegu są zabiegi nieinwazyjne, weryfikacja przewodzeniowego ubytku słuchu za pomocą otoskopu oraz walidacja za pomocą klaśnięcia. Po odbyciu czynności praktycznych możesz wywołać przewodzeniowy ubytek słuchu w modelu gryzoni i zbadać behawioralne i psychofizyczne objawy tego zaburzenia słuchu.

simple-surgical-induction-conductive-hearing-loss-with-verification

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neuronauka

Opisano zastosowanie klasycznego behawioralnego paradygmatu warunkowania lękowego w badaniach nad protezami słuchowymi u szczurów. Paradygmat ten umożliwia identyfikację zarówno detekcji, jak i rozróżniania między odmiennymi bodźcami akustycznymi i elektrycznymi, wykorzystując tętno jako miernik wyniku.

Behawioralne określenie dyskryminacji par bodźców słuchowych, akustycznych i elektrycznych z zastosowaniem warunkowania klasycznego i analizy tętna

Opisano szybką i niedrogą metodę behawioralnego wyznaczania parametrów słuchowych, takich jak progi słyszalności, zaburzenia słuchu czy percepcje fantomowe (subiektywny szum uszny). Metoda ta wykorzystuje hamowanie wstępne (pre-pulse inhibition) reakcji przestrachu akustycznego i może być łatwo zaimplementowana w komputerze osobistym przy użyciu programowalnego przetwornika AD/DA oraz czujnika piezoelektrycznego.

Tani układ do behawioralnej audiometrii u gryzoni

Ten film demonstruje metodę rejestrowania słuchowych reakcji pnia mózgu (ABR) u szczurzych szczeniąt. Przedstawiono w nim etapy umieszczania elektrod, stosowania bodźców dźwiękowych i analizy przetwarzania sygnału w pniu mózgu w celu oceny odpowiedzi neuronalnych.

Rejestrowanie słuchowych reakcji pnia mózgu u szczeniaka szczura

Ten film pokazuje procedurę wszczepienia urządzenia ślimakowego ogłuszonej myszy i zastosowania bodźców elektrycznych do rejestrowania słuchowych reakcji pnia mózgu. Procedura ta umożliwia zrozumienie podstawowych mechanizmów elektrycznego słyszenia i może przyczynić się do postępu w technologii implantów ślimakowych i neurobiologii słuchowej.

Rejestrowanie wywołanych elektrycznie reakcji słuchowych pnia mózgu u głuchej myszy

Różne powłoki elektrod wpływają na wydajność rejestracji neuronowej poprzez zmiany właściwości elektrochemicznych, chemicznych i mechanicznych. Porównanie elektrod in vitro jest stosunkowo proste, jednak porównanie odpowiedzi in vivo jest zwykle skomplikowane ze względu na różnice w odległości między elektrodami a neuronami oraz między zwierzętami. Ten artykuł zawiera solidną metodę porównywania elektrod do rejestracji neuronowej.

Metoda systematycznej oceny elektrochemicznej i elektrofizjologicznej elektrod rejestrujących działanie neuronów

Implanty ślimakowe (CI) umożliwiają słyszenie poprzez bezpośrednią stymulację elektryczną nerwu słuchowego. Jednak słaba rozdzielczość częstotliwości i intensywności ogranicza jakość słyszenia w przypadku implantów ślimakowych. W tym miejscu opisujemy optogenetyczną stymulację nerwu słuchowego u myszy jako alternatywną strategię badań słuchowych i rozwoju przyszłych implantów ślimakowych.

Optogenetyczna stymulacja nerwu słuchowego

Prezentujemy technikę miejscowego podawania leków drogą przezbębenkową do ślimaka. Podawanie leków tą drogą nie kolidowałoby ze skutecznością przeciwnowotworową leków stosowanych w chemioterapeutykach, takich jak cisplatyna.

Podawanie leków przezbębenkowych w leczeniu ototoksyczności

Ten protokół opisuje metody rejestrowania słuchowej odpowiedzi pnia mózgu u pourodzonych szczurzych szczeniąt. Aby zbadać rozwój funkcjonalny zewnętrznych komórek rzęsatych, opisano krok po kroku eksperymentalną procedurę rejestracji klamry krosowej całej komórki w izolowanych zewnętrznych komórkach rzęsatych.

Rejestracja słuchowej odpowiedzi pnia mózgu i zewnętrznego zacisku krosowego całych komórek rzęsatych u szczurów po urodzeniu

Ten protokół opisuje chirurgiczną labiryntektomię szczura, która jest użyteczną metodą do badania układu przedsionkowego.

Chirurgiczna labiryntektomia szczura w celu zbadania układu przedsionkowego

Zwierzęce modele implantów ślimakowych mogą poszerzyć wiedzę na temat technologicznych podstaw leczenia trwałego odbiorczego ubytku słuchu za pomocą stymulacji elektrycznej. W badaniu przedstawiono protokół chirurgiczny ogłuszenia i implantacji ślimakowej zestawu elektrod u myszy, a także ocenę funkcjonalną z odpowiedzią słuchową pnia mózgu.

Operacja wszczepienia implantu ślimakowego i elektrycznie wywołane nagrania słuchowej odpowiedzi pnia mózgu u myszy C57BL/6

Tutaj prezentujemy protokół dla mysiego modelu ubytku słuchu wywołanego hałasem (NIHL). Aby wywołać NIHL, opracowaliśmy nowe i proste urządzenie wykorzystujące tekturę falistą, klatkę pułapkę na szczury i głośnik. Odpowiedź słuchowa pnia mózgu i obrazowanie immunofluorescencyjne zostały wykorzystane do oceny odpowiednio funkcji słuchu i uszkodzenia zewnętrznych komórek rzęsatych.

Zmodyfikowane warunki eksperymentalne dla ubytku słuchu wywołanego hałasem u myszy oraz ocena funkcji słuchu i uszkodzenia zewnętrznych komórek rzęsatych

Poznaj metodę chirurgicznego wywoływania przewodzeniowego ubytku słuchu u szczurów poprzez nakłucie błony bębenkowej z weryfikacją otoskopową i behawioralną. Ten protokół umożliwia badanie zaburzeń słuchowych.

Prosta chirurgiczna indukcja przewodzeniowego ubytku słuchu z weryfikacją za pomocą wizualizacji otoskopu i behawioralnej reakcji na oklaski u szczurów (Wideo) | JoVE Journal

Prosta chirurgiczna indukcja przewodzeniowego ubytku słuchu z weryfikacją za pomocą wizualizacji otoskopu i behawioralnej reakcji na oklaski u szczurów

Przeglądaj więcej filmów