Name: Wyprowadzanie i różnicowanie mezenchymalnych komórek macierzystych jajnika psów (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-12-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 41 s
Description: Poznaj metodę izolacji, ekspansji i różnicowania mezenchymalnych komórek macierzystych z jajników psów. Technika ta umożliwia badania nad biologią komórek macierzystych w weterynarii.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Autorzy dziękują programowi sterylizacji psów w UNESP-FCAV za uprzejme dostarczenie jajników. Prace te były wspierane przez granty z FAPESP (nr procesu 2013/14293-0) i CAPES.

Ten eksperyment został przeprowadzony na jajnikach czterech kundli, które zostały oddane po planowej operacji w programie sterylizacji psów. Eksperyment ten został zatwierdzony przez Komitet Etyki ds. Wykorzystywania Zwierząt UNESP-FCAV (protokół nr 026991/13).
1. Przygotowanie do eksperymentu
<ol>
	<li>Przygotuj lub kup 500 ml sterylnego roztworu soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (DPBS) firmy Dulbecco bez wapnia i magnezu.</li>
	<li>Przygotować roztwór podstawowy kolagenazy I, mieszając 40 μg enzymu w 1 ml DPBS. Przefiltrować za pomocą filtra strzykawkowego 0,2 μm i przechowywać 2 ml porcji w temperaturze -20 °C.</li>
	<li>Przygotuj pożywkę hodowlaną ze zmodyfikowanej pożywki Eagle's Medium (DMEM) firmy Dulbecco o niskiej zawartości glukozy z 10% surowicy płodowej i 1% antybiotyków.</li>
	<li>Zbierz sterylne materiały: nożyczki i kleszcze, kolbę do hodowli tkankowych, naczynia, probówki oraz pipety o pojemności 10 ml i 5 ml.</li>
	<li>Stosować standardowe wyposażenie laboratorium w hodowle komórkowe: komorę bezpieczeństwa biologicznego (BSC), inkubator do hodowli komórkowych ustawiony na 5% CO2 i temperaturze 38 °C oraz wirówkę.</li>
	<li>Wyczyść BSC: rękami w rękawiczkach wysterylizuj go 70% EtOH za pomocą lamp UV.</li>
</ol>
2. Izolacja mezenchymalnych komórek macierzystych z jajnika
<ol>
	<li>Po operacji jajniki w PBS należy przechowywać na lodzie w stożkowej rurce, aż do ich przybycia do laboratorium.</li>
	<li>Napełnij dwie szalki Petriego o średnicy 100 mm 10 ml PBS.</li>
	<li>Wyjąć jajniki z probówki i przenieść je na pierwszą szalkę Petriego z PBS. Umyj je ruchami mieszającymi.</li>
	<li>Delikatnie wyjmij jajnik i umieść go w innym naczyniu. Za pomocą sterylnej pęsety i nożyczek zmiel tkankę na bardzo małe kawałki o wielkości około 1 mm.</li>
	<li>Przenieś tkankę jajnika na szalkę Petriego o średnicy 35 mm i dodaj 2 ml kolagenazy. Zmiel tkankę trochę więcej.</li>
	<li>Umieścić szalkę Petriego w inkubatorze w temperaturze 38 °C na 3 godziny i delikatnie wstrząsać szalką Petriego okrężnymi ruchami co 20 minut.</li>
	<li>Po 3 godzinach wyjąć szalkę Petriego z inkubatora.</li>
	<li>Przenieść zawartość naczynia do probówki o pojemności 15 ml. Dodać 5 ml pożywki ekspansywnej.</li>
	<li>Delikatnie odwróć probówkę przed odwirowaniem. Odwirować probówkę o masie 2100 x g przez 7 minut. Usunąć supernatant i ponownie zawiesić osad z 3 ml podłoża rozprężnego.</li>
	<li>Przenieść granulat do butelki T25. Umieścić butelkę w inkubatorze z 5% CO2 w temperaturze 38 °C przez 3 godziny 
	UWAGA: Najważniejszą częścią zabiegu jest zmiana pożywki po 3 godzinach inkubacji.</li>
	<li>Wyjąć butelkę z inkubatora i usunąć pożywkę wraz z pozostałą tkanką. Do butelki dodać 3 ml świeżej pożywki eksplatacyjnej.</li>
	<li>Zmieniaj pożywkę co 48 godzin i obserwuj butelkę pod kątem zbiegu komórkowego. 
	UWAGA: Główne kroki procedury można zaobserwować w Rysunek 1.</li>
</ol>
3. Ekspansja mezenchymalnych komórek macierzystych z jajnika
<ol>
	<li>Przejście komórkowe
	<ol>
		<li>Gdy komórki osiągną zbieżność, usuń pożywkę z butelki.</li>
		<li>Umyj butelkę 3 ml PBS. Usuń PBS.</li>
		<li>Dodać 1,5 ml trypsyny i umieścić butelkę w inkubatorze w temperaturze 38 °C na 3 minuty. Delikatnie postukać w butelkę, aby komórki się odłączyły. 
		UWAGA: Komórki powinny osiągnąć zbieg około 5 - 7 dni po wstępnym posiewie.</li>
		<li>Dodać 3 ml pożywki eksplatacyjnej i przenieść zawartość do stożkowej probówki.</li>
		<li>Odwirować probówkę o sile 2100 x g przez 7 minut. Usunąć supernatant i dodać 1 ml pożywki eksplatacyjnej.</li>
		<li>Delikatnie ujednorodnić zawartość probówki.</li>
		<li>Pobrać podwielokrotność 10 μl próbki, aby przeprowadzić liczenie komórek i umieścić probówkę z komórkami z powrotem w inkubatorze.</li>
		<li>Umieścić 10 μl mieszaniny w hemocytometrze.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Liczenie komórek
	<ol>
		<li>Użyj obiektywu mikroskopu 10X i skup się na liniach siatki hemocytometru.</li>
		<li>Policz komórki w pięciu małych kwadratach (<silna klasa="xfig">Rysunek 2).</li>
		<li>Pomnóż zliczoną liczbę przez 50 000, aby oszacować liczbę komórek na mililitr.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. Różnicowanie mezenchymalnych komórek macierzystych z jajnika
UWAGA: Testy różnicowania zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi ustalonymi w sprawie Hill et al.9.
<ol>
	<li>Wysiew 1,0 x 104 komórki na studzienkę, w trzech powtórzeniach, przy użyciu 4-dołkowej płytki hodowlanej.</li>
	<li>Dodać 1 ml pożywki ekspansywnej.</li>
	<li>Delikatnie poruszaj naczyniem okrężnymi ruchami.</li>
	<li>Po 24 godzinach zastąpić pożywkę hodowlaną pożądaną pożywką różnicującą.</li>
	<li>W przypadku różnicowania kościościennego, adipogennego i chondrogennego należy inkubować komórki z pożywką indukcyjną przez 30 dni, z wymianą pożywki co 3 dni. Do każdego z tych testów użyto specjalnych zestawów różnicujących.</li>
	<li>W celu różnicowania linii neurogennych inkubuj komórki przez 10 dni w pożywce indukcyjnej, z wymianą pożywki co 3 dni. Zastosowane tutaj podłoże zawierało DMEM o niskiej zawartości glukozy, 2 mM kwasu walproinowego, 1 μM hydrokortyzonu, 10 μM forskoliny, 5 mM chlorku potasu, 5 μg/ml insuliny i 200 μM butylowanego hydroksyanizolu.</li>
	<li>W przypadku prekursorów endodermy inkubować przez 5 dni w pożywce endodermalnej zgodnie z instrukcjami producenta odczynnika.</li>
	<li>W celu różnicowania pierwotnej linii komórek rozrodczych należy inkubować komórki w pożywce indukcyjnej przez 14 dni, z wymianą pożywki co 3 dni. Zastosowane tutaj podłoża zawierały DMEM, 10% FBS, 1 mM pirogronianu sodu, 10 ng/ml LIF, 1 mM aminokwasów endogennych, 2 mM L-glutaminy, 5 μg/ml insuliny, 0,1 mM β-merkaptoetanolu, 60 μM putrescyny, 20 μg/ml transferyny, 10 ng/ml mysiego naskórkowego czynnika wzrostu, 1 ng/ml ludzkiego podstawowego czynnika wzrostu fibroblastów, 40 ng/ml czynnika neurotroficznego pochodzącego z ludzkiej linii komórek glejowych i 15 mg/l penicyliny.</li>
</ol>

<ol><li>Gazit, Z., Pelled, G., Sheyn, D., Kimelman, N., Gazit, D. Mesenchymal stem cells. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGazit%2C+Z+%22Handbook+of+Stem+Cells+%282nd+Edition%29%22">Handbook of Stem Cells (2nd Edition)</a>. Atala, A., Lanza, R. , Academic Press. 513-527 (2013).</li>
<li>Zipori, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nature+of+stem+cells%3A+state+rather+than+entity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Genetics%22%5BJournal%5D)">The nature of stem cells: state rather than entity.</a> Nature Reviews Genetics. 5 (11), 873-878 (2004).</li>
<li>Auersperg, N., Wong, A. S., Choi, K. C., Kang, S. K., Leung, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+surface+epithelium%3A+biology%2C+endocrinology%2C+and+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrine+Reviews%22%5BJournal%5D)">Ovarian surface epithelium: biology, endocrinology, and pathology.</a> Endocrine Reviews. 22 (2), 255-288 (2001).</li>
<li>Ahmed, N., Thompson, E. W., Quinn, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial-mesenchymal+interconversions+in+normal+ovarian+surface+epithelium+and+ovarian+carcinomas%3A+an+exception+to+the+norm%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Epithelial-mesenchymal interconversions in normal ovarian surface epithelium and ovarian carcinomas: an exception to the norm.</a> Journal of Cellular Physiology. 213 (3), 581-588 (2007).</li>
<li>Bukovsky, A., Svetlikova, M., Caudle, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oogenesis+in+cultures+derived+from+adult+human+ovaries%5BTitle%5D)+AND+%22Reproductive+Biology+and+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Oogenesis in cultures derived from adult human ovaries.</a> Reproductive Biology and Endocrinology. 3 (1), 17(2005).</li>
<li>Gong, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+stem+cell-like+cells+established+by+culture+of+adult+ovarian+cells+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Fertility+and+Sterility%22%5BJournal%5D)">Embryonic stem cell-like cells established by culture of adult ovarian cells in mice.</a> Fertility and Sterility. 93 (8), 2594-2601 (2010).</li>
<li>Johnson, J., Canning, J., Kaneko, T., Pru, J. K., Tilly, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Germline+stem+cells+and+follicular+renewal+in+the+postnatal+mammalian+ovary%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Germline stem cells and follicular renewal in the postnatal mammalian ovary.</a> Nature. 428 (6979), 145(2004).</li>
<li>Deans, R. J., Moseley, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells%3A+biology+and+potential+clinical+uses%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Hematology%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells: biology and potential clinical uses.</a> Experimental Hematology. 28 (8), 875-884 (2000).</li>
<li>Trinda Hill, A. B. T., Therrien, J., Garcia, J. M., Smith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal-like+stem+cells+in+canine+ovary+show+high+differentiation+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Proliferation%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal-like stem cells in canine ovary show high differentiation potential.</a> Cell Proliferation. 50 (6), 12391(2017).</li>
<li>Dominici, M. L. B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimal+criteria+for+defining+multipotent+mesenchymal+stromal+cells.+The+International+Society+for+Cellular+Therapy+position+statement%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement.</a> Cytotherapy. 8, 4315-4317 (2006).</li>
<li>Friedenstein, A. J., Piatetzky-Shapiro, I. I., Petrakova, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteogenesis+in+transplants+of+bone+marrow+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Osteogenesis in transplants of bone marrow cells.</a> Development. 16 (3), 381-390 (1966).</li>
<li>Kuznetsov, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-colony+derived+strains+of+human+marrow+stromal+fibroblasts+form+bone+after+transplantation+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Single-colony derived strains of human marrow stromal fibroblasts form bone after transplantation in vivo.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 12 (9), 1335-1347 (1997).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

W niniejszym artykule przedstawiamy dowody na to, że MSCs można wyizolować z tkanki jajnika psów, która jest uważana za odpad biologiczny po wycięciu jajników. Ze względu na fakt, że w jajniku można znaleźć wiele typów komórek, zaproponowaliśmy protokół selekcji MSCs na podstawie ich szybkiego przylegania do plastiku, który z powodzeniem wyselekcjonował komórki, które rosły w monowarstwie o morfologii podobnej do fibroblastów. 
Pierwsze doniesienie dotyczące pochodzenia MSCs ze szpiku kostnego...

Liczba opublikowanych badań, które koncentrują się na komórkach macierzystych, znacznie wzrosła w ciągu ostatniej dekady, wysiłek badawczy, który był napędzany przez wspólny cel odkrycia skutecznych terapii medycyny regeneracyjnej. Komórki macierzyste mają dwa podstawowe markery definiujące: samoodnowę i różnicowanie. Mezenchymalne komórki macierzyste są odpowiedzialne za regularny obrót tkanek i mają bardziej ograniczoną zdolność różnicowania w porównaniu z embrionalnymi komórkami macierzystymi1. Ostatnio wiele badań wykazało szeroki zakres różnicowania MSCs, a tematem dyskusji jest to, czy różnice między embrionalnymi i dorosłymi komórkami macierzystymi w ogóle istnieją2.
Nabłonek powierzchniowy jajnika to niezaangażowana warstwa komórek, stosunkowo mniej zróżnicowana, która wyraża zarówno markery nabłonkowe, jak i mezenchymalne3, zachowując zdolność do różnicowania się w różne typy komórek w odpowiedzi na sygnały środowiskowe4. Dokładna lokalizacja komórek macierzystych w jajniku nie jest dobrze znana; Zaproponowano jednak, że bipotencjalne komórki progenitorowe w osłonce białawej dają początek komórkom rozrodczym<klasa SUP='xref'>5. Badania immunologiczne wysunęły hipotezę, że komórki te mają pochodzenie zrębowe6 lub są zlokalizowane w lub proksymalnie powierzchni jajnika7. Ponieważ mezenchymalne komórki macierzyste wyrażają liczne receptory, które odgrywają ważną rolę w adhezji komórek8, zaprojektowano eksperyment mający na celu przetestowanie hipotezy, że wybór populacji komórek o szybkiej adhezji wyizoluje populację komórek, które można wyraźnie scharakteryzować jako mezenchymalne w naturze. Niedawno nasza grupa poinformowała o wyprowadzeniu MSCs z tkanki jajnika na podstawie ich zdolności adhezji do plastycznej powierzchni szalki hodowlanej w ciągu pierwszych 3 godzin hodowli, w celu uzyskania oczyszczonej populacji komórek wykazujących szybką adhezję9. W niniejszej pracy opisano opracowaną metodę izolacji mezenchymalnych komórek macierzystych z tkanki jajnika.

<table><tbody><tr><td>DPBS&nbsp;</td><td>Thermo Fisher</td><td>14190144</td><td></td></tr><tr><td>Kolagenaza I</td><td>Termo Fisher</td><td>17100017</td><td></td></tr><tr><td>Termos do tkanek</td><td>Corning</td><td>CLS3056</td><td></td></tr><tr><td>DMEM o niskiej zawartości glukozy</td><td>Thermo Fisher</td><td>11054020</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Thermo Fisher</td><td>12484-010</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE express</td><td>Thermo Fisher</td><td>12604021</td><td></td></tr><tr><td>StemPro Zestaw do różnicowania adipogenezy</td><td>Thermo Fisher</td><td>A1007001</td><td></td></tr><tr><td>StemPro Zestaw do różnicowania chondrogenezy</td><td>Thermo Fisher</td><td>A1007101</td><td></td></tr><tr><td>StemPro Zestaw do różnicowania osteogenezy</td><td>Thermo Fisher</td><td>A1007201</td><td></td></tr><tr><td>STEMdiff Definitive Endoderm Kit</td><td>StemCell</td><td>5110</td><td></td></tr><tr><td>Penicylina-Streptomycyna</td><td>Thermo Fisher</td><td>15070063</td><td></td></tr><tr><td>CD45</td><td>AbD Serotec</td><td>MCA 2035S</td><td></td></tr><tr><td>CD34</td><td>AbD Serotec</td><td>MCA 2411GA</td><td></td></tr><tr><td>CD90</td><td>AbD Serotec</td><td>MCA 1036G</td><td></td></tr><tr><td>CD44</td><td>AbD Serotec</td><td>MCA 1041</td><td></td></tr><tr><td>Nestin</td><td>Milipore</td><td>MAB353</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-Tubulina&nbsp;</td><td>Milipore</td><td>MAB1637</td><td></td></tr><tr><td>DDX4</td><td>Invitrogen</td><td>PA5 -23378</td><td></td></tr><tr><td>IgG- FITC</td><td>AbD Serotec</td><td>STAR80F</td><td></td></tr><tr><td>IgG- FITC</td><td>AbD Serotec</td><td>STAR120F</td><td></td></tr></tbody></table>

wyprowadzanie i różnicowanie mezenchymalnych komórek macierzystych jajnika psów

Derivation and Differentiation of Canine Ovarian Mesenchymal Stem Cells

Zainteresowanie mezenchymalnymi komórkami macierzystymi (MSC) wzrosło w ciągu ostatniej dekady ze względu na łatwość ich izolacji, ekspansji i hodowli. Ostatnie badania wykazały szeroką zdolność różnicowania, jaką posiadają te komórki. Jajnik jest obiecującym kandydatem do terapii komórkowych ze względu na fakt, że jest bogaty w MSCs i że często jest wyrzucany po operacjach wycięcia jajników jako odpad biologiczny. W artykule opisano procedury izolacji, ekspansji i różnicowania MSCs pochodzących z jajnika psa, bez konieczności stosowania technik sortowania komórek. Protokół ten stanowi ważne narzędzie dla medycyny regeneracyjnej ze względu na szerokie zastosowanie tych wysoce zróżnicowanych komórek w badaniach klinicznych i zastosowaniach terapeutycznych.

Izolacja mezenchymalnych komórek macierzystych z jajnika psa:
Procedura izolacji MSC z jajnika została podsumowana na Rysunku 1. Po przeprowadzeniu operacji, rozdrobnieniu tkanki, trawieniu kolagenazą oraz zmianie pożywki 3 h po rozpoczęciu hodowli, z tkanki jajnika psa pomyślnie wyizolowano domniemaną populację MSC o szybkich właściwościach przylegania do tworzywa...

Tutaj opisujemy metodę izolacji, ekspansji i różnicowania mezenchymalnych komórek macierzystych z tkanki jajnika psów.

Wyprowadzanie i różnicowanie mezenchymalnych komórek macierzystych jajnika psów

Interest in mesenchymal stem cells (MSCs) has increased over the past decade due to their ease of isolation, expansion, and culture. Recently, studies ...

Ogólnym celem tej procedury jest wyizolowanie, rozszerzenie i zróżnicowanie mezenchymalnych łodyg pochodzących z tkanki jajnika psów. Eksperyment ten przeprowadzono na jajnikach czterech kundli suk oddanych po planowej operacji w programie sterylizacji psów. Eksperyment ten został zatwierdzony przez Komisję Etyki ds. Wykorzystywania Zwierząt Uniwersytetu Stanowego w Sao Paulo, FVAC.Reprezentatywne wyniki. Dyskusja.Wniosek.

derivation-differentiation-canine-ovarian-mesenchymal-stem

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia rozwojowa

Niniejszy protokół szczegółowo opisuje proces otrzymywania transplantowalnych hematopoetycznych komórek macierzystych z mysich embrionalnych komórek macierzystych (ESC) oraz ich późniejszą iniekcję do letalnie napromieniowanych myszy biorców. W skrócie, ESC są różnicowane do postaci ciał embroidalnych, które następnie są infekowane retrowirusem HoxB4 i współhodowane z komórkami zrębowymi OP9 oraz cytokinami hematopoetycznymi.

Wytwarzanie komórek macierzystych krwi z mysich embrionalnych komórek macierzystych

Zdolność ludzkich embrionalnych komórek macierzystych do samoodnawiania oraz różnicowania się we wszystkie typy komórek organizmu sprawia, że stanowią one ogromną obietnicę zarówno w zastosowaniach medycznych, jak i jako narzędzie badawcze służące do odpowiedzi na fundamentalne pytania dotyczące rozwoju i chorób. W niniejszym materiale przedstawiamy zwięzły, szczegółowy protokół izolacji ludzkich embrionalnych komórek macierzystych z embrionów poprzez immunosurgicalną izolację masy komórkowej...

Wytwarzanie ludzkich embrionalnych komórek macierzystych metodą immunochirurgii

Opisujemy protokół oparty na małych cząsteczkach służący do różnicowania mysich embrionalnych komórek macierzystych w komórki prekursorowe oligodendrocytów (OPC). Protokół ten pozwala na wysokowydajne generowanie komórek OPC Olig2+NG2+ w ciągu 30 dni różnicowania. Opisujemy również metodę generowania „spiking” OPC, które są zdolne do generowania potencjałów czynnościowych.

Różnicowanie embrionalnych komórek macierzystych w prekursory oligodendrocytów

W ostatnich latach tworzenie komórek rozrodczych przy użyciu metod hodowli in vitro zostało zademonstrowane przy użyciu kilku różnych typów somatycznych komórek macierzystych. W tym artykule wizualnie przedstawimy różnicowanie nowonarodzonych komórek macierzystych pochodzących od myszy do wczesnych komórek podobnych do oocytów.

Różnicowanie komórek macierzystych pochodzących ze skóry nowonarodzonych myszy w komórki rozrodcze podobne do komórek rozrodczych in vitro

W tym protokole zostanie zilustrowane pochodzenie komórek progenitorowych serca zarówno z mysich, jak i ludzkich embrionalnych komórek macierzystych. Główną strategią w tym protokole jest wzbogacenie komórek progenitorowych serca za pomocą cytometrii przepływowej przy użyciu fluorescencyjnych reporterów zmodyfikowanych w embrionalnych liniach komórek macierzystych.

Wyprowadzenie komórek progenitorowych serca z embrionalnych komórek macierzystych

Testy sferyczne in vitro są powszechnie używane do identyfikacji komórek macierzystych raka. Tutaj porównujemy testy sferyczne pojedyncze i wielokomórkowe. Bardziej pracochłonne testy jednokomórkowe lub suplementacja metylocelulozą dają dokładniejsze wyniki, podczas gdy testy wielokomórkowe wykonywane w płynnym podłożu mogą mieć duży wpływ na gęstość komórek.

Ocena właściwości komórek macierzystych w ludzkich komórkach raka jajnika przy użyciu wielo- i jednokomórkowych testów sferycznych

Mezenchymalne komórki macierzyste są zwykle pozyskiwane ze szpiku kostnego i wymagają hodowli ekspansywnej. Gdy próbki krzepną przed przetworzeniem, można zastosować protokół z użyciem (enzymatycznej) urokinazy leku trombolitycznego w celu degradacji skrzepu. W ten sposób komórki są uwalniane i dostępne do hodowli ekspansyjnej. Protokół ten stanowi szybką i niedrogą alternatywę dla ponownego próbkowania.

Enzymatyczna metoda ratowania mezenchymalnych komórek macierzystych z zakrzepłych próbek szpiku kostnego

Ten protokół opisuje metodologię izolowania i identyfikacji mezenchymalnych komórek macierzystych pochodzących z tkanki tłuszczowej (MSC) od szczurów Sprague Dawley.

Izolacja i identyfikacja mezenchymalnych komórek macierzystych pochodzących z tkanki tłuszczowej szczurów Sprague Dawley

Ten protokół opisuje i porównuje dwie reprezentatywne metody różnicowania hiPSC na mezenchymalne komórki zrębu (MSC). Metoda jednowarstwowa charakteryzuje się niższym kosztem, prostszą obsługą i łatwiejszym różnicowaniem osteogennym. Metoda ciał zarodkowych (EBs) charakteryzuje się mniejszym zużyciem czasu.

Porównanie dwóch reprezentatywnych metod różnicowania ludzkich indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych w mezenchymalne komórki zrębu

Ten protokół przedstawia różnicowanie ludzkich osteoklastów od indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych (iPSC) i opisuje metody charakterystyki osteoklastów i prekursorów osteoklastów.

Różnicowanie i charakterystyka osteoklastów z ludzkich indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych

Poznaj metodę izolacji, ekspansji i różnicowania mezenchymalnych komórek macierzystych z jajników psów. Technika ta umożliwia badania nad biologią komórek macierzystych w weterynarii.

Wyprowadzanie i różnicowanie mezenchymalnych komórek macierzystych jajnika psów

Przeglądaj więcej filmów