Ilościowy PCR bakteriofaga T7 z biopanowania

Metoda ta może pomóc w rozwiązaniu kluczowych problemów w dziedzinie wirusologii i mikrobiologii związanych z liczeniem bakteriofagów ze złożonych próbek oraz diagnostyką i terapią opartą na bakteriofagach. Główną zaletą tej techniki jest to, że umożliwia ona efektywne czasowo i dokładne oznaczanie ilościowe dużej liczby próbek z eksperymentów biopanoramowania z wyświetlaczem fagów, które nie są możliwe w przypadku tradycyjnych testów. Procedurę zademonstrują Rashmi Mohanty i Jasmim Leal, doktorantki z mojego laboratorium.

Po zaprojektowaniu starterów i stworzeniu stężenia podstawowego należy uzyskać referencyjne DNA faga T7 w stężeniu 0,1 mikrograma na mikrolitr. Używając ultraczystej wody, seryjnie rozcieńcz to DNA dziesięciokrotnie, od miliona femtogramów na mikrolitr do jednego femtograma na mikrolitr w 0,2 mililitrowych probówkach PCR. Przygotuj 20 mikrolitrów każdego stężenia, pamiętając o zmianie końcówek pipet i wirowaniu probówek między każdym etapem rozcieńczania.